ISO 6887-6:2013

NORME ISO
INTERNATIONALE 6887-6
Première édition
2013-03-01
Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l’examen
microbiologique —
Partie 6:
Règles spécifiques pour la préparation
des échantillons prélevés au stade de
production primaire
Microbiology of food and animal feed — Preparation of test
samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological
examination —
Part 6: Specific rules for the preparation of samples taken at the
primary production stage
Numéro de référence
©
ISO 2013
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Diluants et désinfectants . 2
5.1 Diluants pour des besoins particuliers . 2
5.2 Désinfectants pour utilisation pendant l’examen de laboratoire . 3
6 Appareillage et verrerie de laboratoire . 3
7 Types d’échantillons pouvant être envoyés au laboratoire . 3
8 Préparation des échantillons . 3
8.1 Généralités . 3
8.2 Stockage . 4
9 Modes opératoires spécifiques . 4
9.1 Modes opératoires réalisés sur des échantillons prélevés dans un élevage . 4
9.2 Modes opératoires réalisés sur des échantillons prélevés à l’abattoir . 6
9.3 Modes opératoires réalisés sur des échantillons prélevés sur des volailles au couvoir ou
au moment du transport du couvoir à l’élevage . 8
10 Dilutions décimales suivantes . 9
Bibliographie .10
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives
ISO/CEI, Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d’élaborer les Normes internationales. Les projets de
Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote.
Leur publication comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 6887-6 a été élaborée par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires —
Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l’Accord de
coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
L’ISO 6887 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Préparation des échantillons, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen
microbiologique:
— Partie 1: Règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions décimales
— Partie 2: Règles spécifiques pour la préparation des viandes et produits à base de viande
— Partie 3: Règles spécifiques pour la préparation des produits de la pêche
— Partie 4: Règles spécifiques pour la préparation de produits autres que les produits laitiers, les produits
carnés et les produits de la pêche
— Partie 5: Règles spécifiques pour la préparation du lait et des produits laitiers
— Partie 6: Règles spécifiques pour la préparation des échantillons prélevés au stade de production primaire
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NORME INTERNATIONALE ISO 6887-6:2013(F)
Microbiologie des aliments — Préparation des
échantillons, de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue de l’examen microbiologique —
Partie 6:
Règles spécifiques pour la préparation des échantillons
prélevés au stade de production primaire
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 6887 spécifie des règles pour la préparation d’échantillons prélevés à toutes
les étapes depuis l’élevage jusqu’à l’abattoir et leur suspension pour examen biologique lorsque les
échantillons nécessitent une méthode de préparation différente de celles décrites dans l’ISO 6887-1.
L’ISO 6887-1 définit les règles générales pour la préparation de la suspension mère et des dilutions
décimales en vue d’examens microbiologiques.
La présente partie de l’ISO 6687 n’inclut pas la préparation d’échantillons destinés à des méthodes de
recherche et de dénombrement dont les détails concernant la préparation sont spécifiés dans les Normes
internationales appropriées.
La présente partie de l’ISO 6887 est applicable aux divers échantillons prélevés dans un couvoir, un élevage,
un véhicule ou sur les animaux pendant le transport, ou sur les animaux ou leur carcasse à l’abattoir, afin
d’indiquer le statut microbiologique des animaux par rapport à des agents zoonotiques. La présente partie
de l’ISO 6687 ne s’applique pas aux échantillons prélevés pour évaluer l’hygiène de la viande.
La présente partie de l’ISO 6887 ne prend pas en compte les échantillons prélevés dans l’environnement
aquatique (marin ou d’eau douce) au stade de la production primaire. Ceux-ci sont traités dans
l’ISO 6887-3.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l’application du présent document. Pour
les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les références non datées, la dernière édition
du document de référence s’applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218:2007, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 13307, Microbiologie des aliments — Stade de production primaire — Techniques de prélèvement
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
échantillon pour laboratoire
échantillon préparé pour être envoyé au laboratoire et destiné aux essais ou inspections
3.2
prise d’essai
échantillon représentatif mesuré (volume ou masse) prélevé sur l’échantillon pour laboratoire (3.1) pour
servir à la préparation de la suspension mère (3.4)
3.3
échantillon groupé
échantillon composite prélevé sur un nombre déterminé d’animaux différents ou composé de plusieurs
échantillons environnementaux
3.4
suspension mère
première dilution
suspension, solution ou émulsion obtenue après qu’une quantité pesée ou mesurée du produit à analyser
(ou d’un échantillon pour essai préparé à partir de ce produit) a été mélangée avec une quantité de diluant
égale le plus souvent à neuf fois la quantité de produit, en laissant se déposer les grosses particules, s’il y en a
Note 1 à l’article: Parfois, des dilutions mères plus ou moins élevées sont préparées, par exemple, 1 pour 5 ou 1
pour 100 (V → V ).
1 2
3.5
dilutions décimales suivantes
suspension ou solution obtenue en mélangeant un volume mesuré de la suspension mère (3.4) avec neuf fois
le volume de diluant et en répétant cette opération avec chaque dilution préparée de cette façon, jusqu’à
l’obtention d’une série de dilution décimale, appropriée pour l’ensemencement des milieux de culture
4 Principe
La suspension mère (3.4) est préparée de façon à obtenir une répartition aussi uniforme que possible
des micro-organismes contenus dans l’échantillon pour essai, sans réduire leur viabilité.
Une suspension de pré-enrichissement ou d’enrichissement est préparée de la même façon, avec
utilisation du milieu préconisé par la méthode d’analyse concernée, sauf cas particuliers mentionnés
dans chaque paragraphe (chapitre) relatif à un produit de la présente partie de l’ISO 6887.
Si nécessaire, des dilutions suivantes (3.5) sont préparées en vue de réduire le nombre de micro-
organismes par unité de volume pour permettre, après incubation, d’observer leur éventuel
développement (cas des milieux liquides) ou de dénombrer les colonies (en inclusion ou en surface d’une
gélose coulée en boîte), comme précisé dans chaque norme spécifique.
Pour restreindre, si nécessaire, le domaine de dénombrement à un intervalle donné, ou si un nombre élevé
de micro-organismes est attendu, il est possible d’ensemencer uniquement les dilutions appropriées (au
moins deux dilutions successives) selon le mode de calcul décrit dans l’ISO 7218.
5 Diluants et désinfectants
Des diluants d’emploi général sont décrits dans l’ISO 6887-1.
5.1 Diluants pour des besoins particuliers
5.1.1 Agents neutralisants
Le liquide neutralisant, préparé conformément à l’ISO 13307, est utilisé si besoin à une concentration de
10 % dans le volume final de diluant. Le neutralisant est normalement ajouté lorsque l’échantillon est
prélevé, avant transport au laboratoire.
NOTE Si un taux élevé de formol dans les échantillons est suspecté, du L-histidine (0,9 %) peut aussi être
ajouté au bouillon de pré-enrichissement.
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5.2 Désinfectants pour utilisation pendant l’examen de laboratoire
Des exemples de désinfectants sont donnés dans l’ISO 7218:2007, 6.2.4.
6 Appareillage et verrerie de laboratoire
Matériel courant de laboratoire de microbiologie pour usage général (voir l’ISO 6887-1 et l’ISO 7218) et,
en particulier, ce qui suit:
6.1 Homogénéisateurs
6.1.1 Homogénéisateur péristaltique (stomacher).
6.1.2 Homogénéisateur de type rotatif (blender).
6.1.3 Homogénéisateur par vibrations (pulsifier).
6.2 Marteau ou maillet en plastique, stériles.
6.3 Sable, pilon et mortier stériles.
6.4 Pinces, ciseaux, scalpels, spatules et cuillères, stériles.
6.5 Fioles ou flacons à bouchon à vis stériles de capacité appropriée.
6.6 Pipettes stériles graduées à écoulement total et système de pipetage.
7 Types d’échantillons pouvant être envoyés au laboratoire
Les échantillons doivent être prélevés et transportés conformément à l’ISO 7218 et l’ISO 13307.
La liste suivante est donnée à titre d’exemple seulement. Des informations plus détaillées sur les
échantillons nécessaires dans des situations différentes sont données dans l’Article 9:
— des échantillons prélevés à l’élevage;
— dans l’environnement (par exemple chiffonnettes, déchets, matières fécales, poussières, eau);
— sur les animaux (par exemple écouvillons);
— des échantillons prélevés à l’abattoir (par exemple contenu rectal ou cæcal, ganglions lymphatiques
mésentériques);
— des échantillons prélevés au couvoir (par exemple fonds de casiers d’éclosoir, coquilles d’œuf cassées);
— des échantillons prélevés sur des véhicules, des modules ou des caisses pour le transport d’animaux
(par exemple chiffonnettes).
8 Préparation des échantillons
8.1 Généralités
Il est recommandé de réaliser toutes les préparations et les manipulations à l’aide de bonnes techniques
d’asepsie et avec du matériel stérile afin de prévenir la contamination microbiologique des échantillons
par des sources extérieures (voir l’ISO 7218).
Si l’échantillon est transféré dans un autre récipient et que la totalité de l’échantillon pour laboratoire
doit être utilisée, s’assurer que tout l’échantillon est transféré (par exemple lors du transfert de
chaussettes d’un récipient d’origine dans un nouveau récipient, veiller à ce qu’aucun matériau provenant
des chaussettes ne demeure dans l’ancien récipient).
Indiquer dans le rapport le mode opératoire utilisé pour l’analyse s’il est différent du mode opératoire
décrit dans la présente partie de l’ISO 6887.
8.2 Stockage
Les échantillons d
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