ISO 24914:2026

Norme
internationale
ISO 24914
Première édition
Microbiologie de la chaîne
2026-01
alimentaire — Amplification
isotherme à médiation par boucle
(LAMP) pour la détection de micro-
organismes et de marqueurs
génétiques associés — Exigences
générales et définitions
Microbiology of the food chain — Loop-mediated isothermal
amplification (LAMP) for the detection of microorganisms
and associated genetic markers — General requirements and
definitions
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2026
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
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Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3  Termes et définitions . 2
4 Principe. 4
4.1 Généralités .4
4.2 Mode opératoire au laboratoire .4
4.3 Interprétation des données .5
4.4 Critères de performance .5
5 Recommandations générales pour le laboratoire . 5
5.1 Généralités .5
5.2 Configuration du laboratoire .6
5.3 Utilisation de témoins .6
5.3.1 Généralités .6
5.3.2 Témoin positif d’extraction .7
5.3.3 Témoin interne/externe d’amplification .7
6 Réactifs et consommables . 7
7 Équipements . 8
8 Mode opératoire au laboratoire . 8
8.1 Généralités .8
8.2 Préparation de l’échantillon .8
8.3 Extraction de l’acide nucléique . .9
8.4 Amplification isotherme .9
8.5 Détection du signal .9
9 Interprétation des données . 9
9.1 Généralités .9
9.2 Interprétation des témoins.10
9.3 Interprétation des résultats des prises d’essai .10
9.4 Rapport d’essai .10
10 Caractéristiques de performance .11
Annexe A (informative) Principes fondamentaux de la LAMP .12
Bibliographie .18

iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a
été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir
www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité de
tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait pas
reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application. Toutefois,
il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des informations
plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à l’adresse
www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié tout ou partie de
tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie,en collaboration avec le comité technique CEN/TC 463, Microbiologie de la chaîne alimentaire,du
Comité européen de normalisation (CEN) conformément à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le
CEN (Accord de Vienne).
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes se
trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.

iv
Introduction
L’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP, de l’anglais «loop-mediated isothermal
amplification») est utilisée pour la détection de micro-organismes et de marqueurs génétiques associés
(par exemple, gènes de résistance aux antimicrobiens, gènes de virulence) dans la chaîne alimentaire. La
LAMP est une technique robuste d’amplification de l’acide nucléique ayant des exigences minimales en ce qui
[10][11][12][13][14]
concerne l’extraction de l’acide nucléique. Certaines analyses LAMP peuvent être menées sur
des échantillons sans extraction. Pour faciliter leur utilisation, bon nombre d’analyses LAMP sont conçues
pour mener l’extraction et l’analyse dans la même chambre/le même récipient (par exemple, tube). La LAMP
nécessite une instrumentation minimale. Certains instruments LAMP sont alimentés par batterie et peuvent
être utilisés dans des conditions de terrain hors du laboratoire. Le présent document fournit les exigences
générales et des recommandations concernant la mise au point et l’application de méthodes par LAMP pour
la détection de micro-organismes et de marqueurs génétiques associés échantillonnés tout au long de la
chaîne alimentaire (par exemple, ingrédients, aliments destinés à la consommation humaine, aliments pour
animaux, environnement de production). Il couvre la préparation de l’échantillon, l’extraction de l’acide
nucléique, l’amplification isotherme, la détection du signal, l’interprétation des données, la production
de rapport et les critères de performance. Le présent document peut être utilisé par les laboratoires
universitaires, les industriels et les organismes réglementaires afin de mettre au point et d’appliquer des
méthodes par LAMP pour la détection de micro-organismes et de marqueurs génétiques associés dans la
chaîne alimentaire.
v
Norme internationale ISO 24914:2026(fr)
Microbiologie de la chaîne alimentaire — Amplification
isotherme à médiation par boucle (LAMP) pour la détection
de micro-organismes et de marqueurs génétiques associés —
Exigences générales et définitions
AVERTISSEMENT — Pour la santé et la sécurité du personnel de laboratoire et de l’environnement,
il est essentiel que les essais de détection de micro-organismes ne soient entrepris que dans des
laboratoires convenablement équipés et sous la supervision d’un personnel de laboratoire compétent.
Des mesures de précaution appropriées doivent être prises en ce qui concerne l’élimination de
tous les échantillons et matériaux de culture. Les personnes utilisant le présent document doivent
connaître les pratiques courantes de laboratoire en matière de sécurité. Le présent document
ne prétend pas couvrir tous les aspects d’hygiène et de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son
utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques appropriées en matière d’hygiène et de
sécurité.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie les exigences générales et fournit des recommandations concernant la mise au
point et l’application de l’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) pour la détection de micro-
organismes et de marqueurs génétiques associés (par exemple, gènes de résistance aux antimicrobiens,
gènes de virulence) dans la chaîne alimentaire.
Le présent document est applicable à l’ensemble des méthodes par LAMP, des plateformes, et des produits de
la chaîne alimentaire et des laboratoires.
Le présent document ne s’applique pas à l’utilisation de la LAMP à des fins de quantification.
La validation et la vérification des méthodes par LAMP comme méthodes alternatives ou de référence ne
sont pas couvertes dans le présent document. La validation et la vérification des méthodes microbiologiques
sont toutes deux décrites en détail dans la série de normes ISO 16140 et l’ISO 17468.
Les exigences générales applicables aux méthodes isothermes, dont la LAMP, pour l’analyse de biomarqueurs
moléculaires sont données dans l’ISO 22942-1, et les exigences générales et définitions relatives à la réaction
de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection et la quantification de micro-organismes dans la chaîne
alimentaire sont données dans l’ISO 22174.
Le présent document a été conçu pour les micro-organismes rencontrés dans la chaîne alimentaire et
s’applique aux:
— produits destinés à la consommation humaine;
— produits destinés à l’alimentation animale;
— échantillons environnementaux prélevés dans les secteurs de la production et de la distribution des
aliments destinés à la consommation humaine et l’alimentation animale;
— échantillons prélevés au stade de la production primaire des produits susmentionnés.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour

les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Préparation des échantillons, de la
suspension mère et des dilutions décimales en vue de l’examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Exigences générales et recommandations pour les examens
microbiologiques
ISO 16140 (toutes les parties), Microbiologie de la chaîne alimentaire — Validation des méthodes
ISO 20836:2021, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
recherche de micro-organismes — Essais de performance thermique des thermocycleurs
ISO 22118:2011, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection et
la quantification des micro-organismes pathogènes dans les aliments — Caractéristiques de performance
ISO 22174:2024, Microbiologie de la chaîne alimentaire — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
recherche et la quantification de micro-organismes — Exigences générales et définitions
3  Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en normalisation,
consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
amplification isotherme à médiation par boucle
LAMP
technique d’amplification isotherme d’acide nucléique qui repose sur la synthèse d’acide
désoxyribonucléique (ADN) en cycle autonome au moyen d’une ADN polymérase à déplacement de brin (3.3),
de deux amorces internes et de deux amorces externes spécialement conçues pour former une structure
d’ADN tige-boucles lors d’une phase d’initiation, laquelle sert de matériau de départ pour la phase suivante
du cycle de réactions d’amplification LAMP pouvant être accélérée par l’ajout de deux (parfois une) amorces
de boucle
3.2
amplification isotherme à médiation par boucle à transcription inverse
RT-LAMP
méthode consistant en deux réactions, à savoir une transcription inverse (RT) de l’acide ribonucléique (ARN)
en acide désoxyribonucléique complémentaire (ADNc) monocaténaire, suivie d’une amplification isotherme à
médiation par boucle (LAMP) (3.1)
Note 1 à l'article: La RT-LAMP en une étape est réalisée dans un seul tube.
Note 2 à l'article: Les deux réactions de la RT-LAMP en deux étapes peuvent être réalisées l’une après l’autre, dans un
seul tube ou dans deux tubes différents.
[SOURCE: ISO 22174:2024, 3.3.3, modifié — «PCR» a été remplacé par «LAMP» dans l’intitulé du terme, la
définition et les notes à l’article.]

3.3
ADN polymérase à déplacement de brin
polymérase d’acide désoxyribonucléique (ADN) utilisée pour l’amplification d’ADN caractérisée par
une activité polymérasique 5′→3′ dépendant de la matrice et une activité de déplacement de brin à
une seule température élevée (par exemple, entre 60 °C et 65 °C), qui de plus ne présente pas d’activité
exonucléasique 5′→3′
Note 1 à l'article: L’ADN polymérase à déplacement de brin est couramment utilisée pour l’amplification d’ADN par
LAMP.
3.4
témoin positif d’extraction
échantillon dopé en micro-organisme, traité de la même manière que les échantillons pour essai de
l’extraction à l’amplification afin de surveiller le processus d’extraction
[SOURCE: ISO 22174:2024, 3.5.2, modifié — «de processus» a été remplacé par «d’extraction»dans le terme.
«afin de surveiller l’ensemble du processus de la méthode basée sur la réaction de polymérisation en chaîne»
a été remplacé par «de l’extraction à l’amplification afin de surveiller le processus d’extraction» dans la
définition.]
3.5
témoin interne d’amplification
acide nucléique ajouté à chaque réaction de PCR en quantité ou nombre de copies défini et servant de témoin
interne d’amplification
Note 1 à l'article: Cette séquence d’acide nucléique peut être endogène (naturellement présente dans la matrice
soumise à essai) ou exogène (naturellement absente de la matrice soumise à essai).
Note 2 à l'article: Un témoin interne d’amplification exogène peut être homologue (amplifié à l’aide des mêmes amorces
que celles utilisées pour l’amplification de la cible) ou hétérologue (amplifié à l’aide d’amorces différentes de celles
utilisées pour l’amplification de la cible). Un amplicon de témoin interne d’amplification homologue doit pouvoir être
distingué de l’amplicon de la cible microbienne (par exemple, par sa température de fusion).
[SOURCE: ISO 22174:2024, 3.5.5, modifié — «par sa taille ou par l’insertion d’une séquence différente de
liaison à la sonde» a été remplacé par «par sa température de fusion» dans la Note 2 à l’article.]
3.6
témoin positif d’amplification isotherme à médiation par boucle
témoin positif de LAMP
réaction d’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) (3.1) contenant la séquence d’acide
nucléique cible en quantité ou en nombre de copies défini
[SOURCE: ISO 22174:2024, 3.5.7, modifié — «PCR» a été remplacé par «LAMP» dans l’intitulé du terme.
«d’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP)» a été ajouté dans la définition.]
3.7
témoin négatif d’amplification isotherme à médiation par boucle
témoin négatif de LAMP
témoin sans échantillon
NTC (no-template control)
témoin d’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) (3.1) réalisé avec de l’eau (ou un autre
substrat inerte vis-à-vis de la LAMP, tel qu’un tampon d’élution) exempt d’acide nucléique cible et d’inhibiteurs
de LAMP (3.8)
[SOURCE: ISO 22174:2024, 3.5.8, modifié — «PCR» a été remplacé par «LAMP» dans l’intitulé du terme et la
définition. Terme admis ajouté. «de broyage ou» a été supprimé dans la définition.]

3.8
inhibiteur d’amplification isotherme à médiation par boucle
inhibiteur de LAMP
composant de la prise d’essai qui interfère négativement avec l’amplification d’acide nucléique de
l’amplification isotherme à médiation par boucle (LAMP) (3.1) résultant en une absence d’amplification ou en
une amplification partielle de la cible d’acide nucléique, ou qui réduit la génération du signal
EXEMPLE Sels biliaires, chlorure de calcium, acide humique.
3.9
conditions de terrain hors du laboratoire
espace de travail ne bénéficiant ni de conditions maîtrisées concernant la contamination par un aérosol
environnemental, ni d’un appareillage sophistiqué de purification de l’acide nucléique
[SOURCE: ISO 16577:2022, 3.3.42]
4 Principe
4.1 Généralités
Le mode opératoire comprend les étapes consécutives suivantes:
a) préparation de l’échantillon, si nécessaire;
b) extraction de l’acide nucléique, si nécessaire;
c) amplification isotherme;
d) détection du signal;
e) interprétation des données.
4.2 Mode opératoire au laboratoire
L’échantillonnage n’est pas couvert par le domaine d’application du présent document. Pour les instructions
générales relatives à l’échantillonnage, voir l’ISO 7218. Des détails supplémentaires sur l’échantillonnage
de certains produits sont donnés dans des normes spécifiques (par exemple ISO/TS 17728, ISO 17604,
ISO 13307, ISO 18593, ISO 707 | FIL 50 et ISO 6887-3). S’il n’existe pas de Norme internationale spécifique
traitant de l’échantillonnage du produit, il convient que les parties concernées se mettent d’accord à ce sujet.
Préparer la suspension mère conformément à la partie pertinente de la série de normes ISO 6887. Il
convient que le mode opératoire au laboratoire commence par la préparation de l’échantillon, y compris
l’enrichissement ou la concentration des micro-organismes et des marqueurs génétiques associés à partir de
la prise d’essai.
Tout échantillon de la chaîne alimentaire peut être utilisé comme prise d’essai, à condition qu’il soit possible
d’extraire l’acide nucléique (ADN ou ARN, ou les deux) de la prise d’essai s’il est présent et qu’il ait été établi
que la solution d’acide nucléique préparée à partir de la prise d’essai n’inhibe pas de manière significative
l’analyse par LAMP (amplification ou détection). Des témoins appropriés doivent être inclus (voir 5.3).
La préparation de l’échantillon est suivie d’une extraction de l’acide nucléique. Les cellules microbiennes
présentes dans la prise d’essai ou la culture enrichie sont lysées afin de libérer leur acide nucléique (ADN
ou ARN, ou les deux). Si nécessaire, une étape de séparation est réalisée avant la lyse ou une étape de
purification est effectuée après la lyse, ou les deux.
L’amplification LAMP de la séquence cible d’acide nucléique doit être réalisée à l’aide d’amorces spécifiques
avec l’ajout de substrats colorimétriques, de marqueurs fluorescents ou d’autres produits chimiques, dans
des conditions isothermes dans un instrument approprié. La détection de l’amplicon LAMP est réalisée
par une surveillance en temps réel et/ou une évaluation en point final du signal (couleur, fluorescence,

bioluminescence, turbidité, etc.) dans un système de détection optique ou une détection en point final
(par exemple test antigénique, électrophorèse sur gel). Voir l’Annexe A.
NOTE De plus amples détails sur le mode opératoire au laboratoire sont donnés à l’Article 8.
4.3 Interprétation des données
Il convient d’évaluer l’amplification LAMP au moyen du système de détection respectif (changements de
couleur, courbes de fluorescence, courbes de bioluminescence, changements de turbidité, etc.) pour indiquer
si une amplification spécifique de la séquence cible d’acide nucléique a eu lieu. Des témoins appropriés sont
intégrés pour garantir la validité des données.
NOTE De plus amples détails sur l’interprétation des données sont donnés à l’Article 9.
4.4 Critères de performance
Des critères incluant la sensibilité, la spécificité et la robustesse peuvent être utilisés pour évaluer les
performances de la LAMP.
NOTE De plus amples détails sur les caractéristiques de performance sont donnés à l’Article 10.
5 Recommandations générales pour le laboratoire
5.1 Généralités
L’ISO 22174:2024, Article 9 et 12.2.2, doit être respectée, avec toutefois deux exceptions (voir 5.3.2 et 5.3.3).
Suivre l’ISO 7218 en ce qui concerne les exigences générales et les recommandations pour les examens
microbiologiques.
La LAMP nécessite une instrumentation minimale. Certains instruments LAMP sont alimentés par batterie
et peuvent être utilisés dans des conditions de terrain hors du laboratoire. De nombreux systèmes LAMP
sont autonomes. Ces systèmes ne sont pas aussi sensibles à la contamination que les systèmes où la réaction
LAMP et la détection du signal nécessitent des étapes séparées qui peuvent exposer les échantillons et
l’environnement de l’espace de travail à des aérosols ou des poussières.
La prévention de la contamination par des échantillons positifs et les amplicons LAMP d’analyses
précédemment réalisées est nécessaire que l’analyse ait lieu en laboratoire ou dans des conditions de terrain
hors du laboratoire. La préparation des réactifs doit être réalisée dans un environnement protégé d’une
contamination par des amplicons LAMP ou des échantillons positifs. Les amplicons LAMP de précédentes
analyses constituent l’un des plus importants risques de contamination accidentelle par de l’acide nucléique,
du fait de poussières ou d’aérosols pouvant contenir des amplicons. Par conséquent, il convient que
l’organisation des étapes analytiques et la disposition des réactifs et des instruments, etc. suivent un flux de
travail unidirectionnel (voir l’ISO 22174:2024, Figure 1). L’élimination des amplicons LAMP doit également
faire l’objet d’une attention particulière. Il convient d’utiliser des consommables à usage unique et des
équipements dédiés (par exemple des supports) dans les espaces de travail après l’amplification LAMP. Il
convient de ne pas ouvrir ou autoclaver les tubes LAMP après l’amplification à proximité des zones utilisées
pour réaliser la LAMP, car une contamination de l’environnement pourrait avoir lieu, laquelle serait ensuite
difficile à éliminer. Si la méthode nécessite d’ouvrir les tubes après l’amplification, il convient de prendre
des précautions supplémentaires et de mettre en œuvre des modes opératoires de décontamination dans
la zone de travail afin de réduire le plus possible le risque de contamination. Les surfaces potentiellement
contaminées par des acides nucléiques doivent être décontaminées à l’aide d’une solution dénaturante pour
les acides nucléiques (par exemple, une solution d’eau de Javel à 10 % suivie d’un rinçage à l’éthanol à 70 %,
une solution d’élimination de l’ADN disponible dans le commerce). Les modes opératoires de nettoyage et
de maintenance doivent être décrits et adaptés au contexte et aux contraintes du laboratoire. Le personnel
chargé du nettoyage et de la maintenance doit être informé des restrictions et des conditions spécifiques du
flux de travail de l’espace du laboratoire.
Les analyses LAMP conçues pour être utilisées dans des conditions hors du laboratoire sont généralement
réalisées dans un appareillage semi-autonome ou plus autonome que celles conçues pour un usage en

laboratoire. Ce type d’appareillage repose souvent sur l’utilisation de récipients à usage unique fermés qui
sont jetés après utilisation. Les réactifs sont généralement préparés et distribués à distance avant réalisation
de l’analyse sur site. Toutefois, il convient que la zone de travail hors du laboratoire soit toujours configurée
de manière à empêcher toute contamination croisée due à la manipulation des échantillons ou entre les
réactifs utilisés dans les réactions, si ceux-ci sont fournis en vrac.
5.2  Configuration du laboratoire
L’ISO 22174:2024, 9.2, doit être respectée.
Une séparation physique ou temporelle entre la préparation de l’échantillon et la réalisation de l’analyse
est essentielle pour une LAMP. Il convient que le laboratoire soit con
...