ISO 24382:2023
(Main)Bee pollen — Specifications
Bee pollen — Specifications
This document specifies the quality requirements, analytical methods, and packaging, labelling, marking, storage and transportation conditions for bee pollen. This document is applicable to bee pollen collected at the entrance of beehives by Apis mellifera and other bees’ species of colonies, as well as dried, frozen and lyophilized bee pollen. It does not apply to crushed powdery bee pollen and products made from bee pollen.
Pollen en pelotes — Spécifications
Le présent document spécifie les exigences de qualité, les méthodes d’analyse, ainsi que les conditions d’emballage, d’étiquetage, de marquage, de stockage et de transport du pollen. Le présent document est applicable aux pelotes de pollen récoltées à l’entrée de ruches, collectées par Apis mellifera et d’autres espèces d’abeilles, ainsi qu’au pollen sec, congelé et lyophilisé. Il ne s’applique pas au pollen collecté par les abeilles broyé en poudre ni aux produits fabriqués à partir de pelotes de pollen.
General Information
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 24382
First edition
2023-10
Bee pollen — Specifications
Pollen en pelotes — Spécifications
Reference number
© ISO 2023
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Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Technical requirements and recommendations . 2
4.1 General . 2
4.2 Chemical requirements . . 2
4.3 Safety and health requirements. 3
5 Test methods . 3
5.1 Reagents . 3
5.2 Sample collection . . . 3
5.3 Transportation from the hive to the factory or laboratory . 3
5.4 Test methods for chemical requirements . 4
6 Packing, labelling, marking, storage and transportation . 4
6.1 Packing . 4
6.2 Labelling of the bee pollen plant taxa . 4
6.3 Marking . 5
6.4 Storage and transportation . 5
Annex A (normative) Determination method of pollen taxa in bee pollen .6
Annex B (normative) Determination of moisture content .12
Annex C (normative) Determination of protein in bee pollen .15
Annex D (normative) Determination of sugars content in bee pollen .18
Annex E (normative) Determination method of lipids .24
Annex F (normative) Determination of pH .29
Annex G (normative) Determination of ash content by gravimetry .31
Bibliography .33
iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use
of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed
patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received
notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are
cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent
database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all
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Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 19,
Bee products.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Introduction
Pollen is the male gametes of seed plant flowers (angiosperms and gymnosperms). Angiosperm pollen
is formed on the stamens as tiny grains. It is a coarse, powdery substance used for transferring haploid
male genetic material from the anther of a single flower to the stigma of another in cross-pollination.
Commercial bee pollen is mainly the pollen collected by the honey bee (Apis spp.) to feed its larvae in
the early stages of development.
Collected flower pollen is accumulated as orbicular pellets in pollen baskets on the rear legs of the
honey bee. When visiting flowers, bees touch the stamens, moisten the pollen with nectar and salivary
substances, and use their hind legs to compress and agglutinate the pollen into the pollen baskets. When
the bees return to the hive, the bee pollen can be harvested at the hive entrance using a specific trap.
Bee pollen is the bees’ primary source of essential nutrients: proteins, carbohydrates, lipids, crude fibre,
minerals and other substances in minor concentrations, namely vitamins, carotenoids and flavonoids.
Bee pollen is composed of all essential amino acids. Thus, bee pollen is harvested as a nutrient-rich food
and tonic for humans, with various healthcare function claims. In addition, bee pollen is a raw material
from which bees produce bee bread, mixed with honey and bee saliva stored in brood cells, and used as
a fermented product rich in proteins and lipids in the bee diet.
This document clarifies the definition of various types of bee pollen (dried, frozen and lyophilized),
establishes their composition indicators and test methods, specifies the storage, packaging,
transportation and labelling requirements, and provides quality standards for the international bee
pollen trade. It is a matter for the parties concerned whether to apply the requirements of this document
to a consignment or a lot of bee pollen. The primary supply of protein and vitamins is necessary for the
secretion of royal jelly during the larval breeding stage of the beehive. Although the bee pollen source
presents a high variability, which results from the various local floral sources in the different countries,
the relatively similar and stable characteristics of nutrients do not affect a beehive’s nutritional
requirements.
v
INTERNATIONAL STANDARD ISO 24382:2023(E)
Bee pollen — Specifications
1 Scope
This document specifies the quality requirements, analytical methods, and packaging, labelling,
marking, storage and transportation conditions for bee pollen.
This document is applicable to bee pollen collected at the entrance of beehives by Apis mellifera and
other bees’ species of colonies, as well as dried, frozen and lyophilized bee pollen.
It does not apply to crushed powdery bee pollen and products made from bee pollen.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 22005, Traceability in the feed and food chain — General principles and basic requirements for system
design and implementation
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
pollen
male gametophytes produced in the anther of the stamen of flower structures in plants (predominantly
angiosperms), which appears as a fine to coarse powder of microscopic grains carried by insects or the
wind
3.2
worker bee
female bee with underdeveloped reproductive abilities that is responsible for different duties, such as
foraging, nursing, safeguarding and cleaning, within the colony of honey bees
3.3
bee pollen
result of the agglutination of flower pollen (3.1) grains with nectar and salivary substances and
collected by worker bees (3.2)
Note 1 to entry: Bee pollens are collected at the hive entrance.
Note 2 to entry: Bee pollen is a raw material from which bees produce bee bread.
3.4
monofloral bee pollen
bee pollen (3.3) where the percentage of pollen (3.1) is linked to the size of the pollen grains
Note 1 to entry: After analysis of the pollens, the size of the pollen grains suspected of being dominant in the
sample shall be checked to see if the percentage by volume is at least 80 % of the total volume of pollen present.
3.5
multifloral bee pollen
bee pollen (3.3) collected by worker bees (3.2) from different flowers but in an insufficient quantity
that none of the pollen (3.1) reaches the percentage of volume required to be considered monofloral bee
pollen (3.4)
3.6
dried bee pollen
bee pollen (3.3) obtained through dehydration to decrease water content under controlled conditions
and a temperature no higher than 40 °C without ultraviolet (UV) light exposure
Note 1 to entry: Field-dried bee pollen shall be obtained without direct sunlight and preliminary treatment
under clean hot air not exceeding 40 °C.
Note 2 to entry: Further addition of storage preservatives, e.g. SO , is not allowed.
Note 3 to entry: Before the drying process, a freezing period of a minimum of 24 h is recommended to kill any
moth eggs or fungi.
3.7
frozen bee pollen
bee pollen (3.3) obtained immediately through a freezing process, at a temperature inferior to −18 °C,
without any dried treatment until consumed
3.8
lyophilized bee pollen
bee pollen (3.3) produced from frozen bee pollen (3.7) after a process of lyophilization
4 Technical requirements and recommendations
4.1 General
The following general requirements and recommendations apply:
a) The bee pollen should be irregular orbicular sphere-like.
b) The bee pollen shall have organoleptic characteristics such as colour, appearance, odour and taste
that vary according to the botanical origin.
c) The bee pollen shall be clean without contaminants from the beehive to the final product (live or
dead insects, larvae, eggs, etc.) and environmental matter (soil, sand, etc.) and shall be free from
any additives. Preserve the bee pollen from the development of other insects and parasites.
4.2 Chemical requirements
The chemical requirements of the product shall meet the criteria specified in Table 1. Regarding
chemical composition, maximum values are established only for moisture content and pH (see Table 1).
The other classes of compounds are in accordance with the botanical origin of the bee pollen. All the
test methods were identified with their protocols. Each of the methods listed in Table 1 and in the
annexes may be adapted or replaced provided that the modifications made can be shown to give similar
results of at least equivalent quality to those of the basic method listed in the annexes.
Table 1 — Chemical requirements for bee pollen and test methods for each characteristic
Min. Requirements
Characteristic or Test method
Type 1 Type 2 Type 3
max.
Determination method of pollen taxa at bee
— Limits only for monofloral bee pollen Annex A
pollen
min. 2 2
Moisture content with % vacuum drying oven
Clause B.1
method, in % mass fraction
max. 8 8
No upper
min. 5 5
Loss on drying content with drying oven and lower
Clause B.2
method, in % mass fraction limits
max. 9 9
defined
min. 3 3
Halogen loss on drying analyser Clause B.3
max. 9 9
Protein content, in % mass fraction min. 10 7,5 10 Annex C
No lower and upper limits
Sugar content, in % mass fraction — Clause D.1
were defined
Total sugar, in % mass fraction min. 15 12 15 Clause D.2
Lipid, in % mass fraction min. 1,3 1 1,3 Annex E
min. 3,3
Determination of pH Annex F
max. 6,30
Ash, in % mass fraction, by gravimetry min. 1 0,7 1 Annex G
Key
Type 1 – Dried bee pollen; Type 2 – Frozen bee pollen; Type 3 – lyophilized bee pollen.
4.3 Safety and health requirements
The limit accepted for toxic substances (pyrrolizidine alkaloids, cannabinoids, grayanotoxins, and
others) naturally present in some plants (Rhododendron spp., Cannabis spp. and others) shall be taken
into consideration.
5 Test methods
5.1 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise specified.
5.2 Sample collection
Bee pollen is a heterogeneous product; therefore, at least 0,5 % of the batch (minimum 250 g for batches
less than 50 kg and 500 g of sample for batches less than 100 kg) shall be collected. A minimum of
five representative points (a random set of points that optimally represents a distribution of the bee
pollen container) shall be sampled to consider the diversity of the bee pollen. Pack them in a food-grade
hermetic container and store them in a frozen condition.
5.3 Transportation from the hive to the factory or laboratory
Put the sample into the sterile sample bottle, stir sufficiently to mix it evenly and put it aside as the
sample to be tested.
The collected bee pollen shall come to the laboratory to be stored in a freezer as soon as possible. Using
an icebox (with ice inside) for transportation is recommended.
During the harvest, beekeepers shall be aware of the type of packaging material used to transport the
product from the apiary to the processing sector or the laboratory for quality control and thus avoiding:
a) crushing of raw material;
b) contamination with dust;
c) transfer of odours and humidity and high temperatures, which can interfere with the quality of
the product to be processed. Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise
specified.
5.4 Test methods for chemical requirements
Each sample shall represent the collected bee pollen lot.
Bee pollen is very hydrophilic, and its exposure to humidity in the room shall be limited as much as
possible. In this context, airtight containers are recommended until the beginning of the analysis.
Bee pollen collection for laboratory samples shall be made from homogenization containers in sterilized
jars.
For a better homogenization of the sample, the bee pollen should be ground into a fine powder and
stored according to the bee pollen state (dried, frozen and lyophilized).
The sample can be tested in the following different conditions:
— for dried bee pollen, the samples shall be stored at a temperature no higher than 4 °C in a well-
conditioned area for no more than six months;
— for frozen bee pollen, the samples shall be stored at −18 °C for no more than six months;
— for lyophilized bee pollen the samples shall be stored at a temperature no higher than 4 °C in a well-
conditioned area for no more than six months.
For all analytical procedures, the homogenization of bee pollen pellets is done by grinding in the mill
until the bee pollen pellets become a powder (for up to 2 min).
All the test methods are explained in Annexes A to G.
6 Packing, labelling, marking, storage and transportation
6.1 Packing
The bee pollen shall be packed in closed, clean and dry food-grade containers, protected from UV light
and made of a material that does not affect the quality of the bee pollen.
6.2 Labelling of the bee pollen plant taxa
It shall be stated in the labelling that the product is MNBP (monofloral) or MTBP (multifloral) type.
For MNBP monofloral bee pollen, only “monofloral bee pollen” with the name of the dominant plant
shall appear on the face label (local and Latin name).
For MTBP multifloral bee pollen, the name “multifloral bee pollen” shall appear on the face label. It is
optional to include a list of plants on the label (Latin names) for customers to refer to when purchasing.
Nevertheless, the complete list is not required and can be limited to a reduced list of different botanical
origins.
6.3 Marking
The packages of bee pollen information shall be labelled.
At least the following information shall be marked on each package or a label:
a) the name of the product, and trade name or brand name;
b) the name and address of the producer and packer, and country or countries of origin;
c) the type of treatment information needed to obtain a dried, field-dried, frozen and lyophilized
product;
d) the labelling of the plant taxa in 6.2 (for MNBP is mandatory and for MTBP is optional);
e) the net mass;
f) the harvesting years and the “best-before” date;
g) the batch number and the traceable information of the product; ISO 22005 shall be followed to
declare the traceability of bee pollen;
h) nutritional information.
6.4 Storage and transportation
Medium- and long-term storage should be in a shady and cool place or, preferably, within a temperature
range of between +2 °C and +5 °C for dried bee pollen or lyophilized bee pollen. Frozen bee pollen shall
be stored at less than −18 °C. The maximum shelf life of bee pollen as human food is recommended to be
less than 24 months for frozen and lyophilized bee pollen and less than 18 months for dried bee pollen.
Bee pollen produced in different areas and times should be stored separately and given different batch
numbers (in a bottle or a box).
Bee pollen shall be transported by cold-chain conditions, e.g. freezing transport (−22 °C to −18 °C) for
frozen bee pollen, and transport at a temperature of no more than 25 °C (0 °C to 10 °C is recommended)
for dried and lyophilized bee pollen. Transport shall be in sealed containers to avoid moisture pick-up.
Bee pollen shall not be stored and transported with toxic, corrosive materials or materials with a
peculiar odour or that can cause contamination.
Annex A
(normative)
Determination method of pollen taxa in bee pollen
A.1 Determination method of pollen taxa in bee pollen (alternative to Clause A.2)
A.1.1 Principle
The method is for the botanical origin identification and qualitative analysis (relative frequencies) of
pollen taxa in bee pollen samples.
A.1.2 Consumables
A.1.2.1 Microscopic slide.
A.1.2.2 Lamella.
A.1.2.3 Dissection needle.
A.1.2.4 Centrifuge tube (15 ml and 50 ml).
A.1.3 Reagents
A.1.3.1 Ethanol (70 %) or H SO (5 ‰) (optional).
2 4
A.1.3.2 Distilled water.
A.1.3.3 Gelatin (powder) or Kaiser’s glycerol gelatine.
A.1.3.4 Glycerine or Kaiser’s glycerol gelatine.
A.1.3.5 Basic fuchsine (powder) (optional).
A.1.4 Apparatus
A.1.4.1 Hot plate.
A.1.4.2 Vortex.
A.1.4.3 Centrifuge.
A.1.4.4 Light microscope, ×400, ×1 000 magnification with oil lens.
A.1.5 Procedure
A.1.5.1 Preparation of basic fuchsine dye (recommended)
Use the following procedure:
a) Put 1 g powder basic fuchsine in a 100 ml beaker.
b) Add 100 ml ethanol (A.1.3.1) and mix completely.
A.1.5.2 Preparation of glycerine gelatine matrix
Use the following procedure of option 1 or option 2:
a) option 1:
1) Put 7 g of powder gelatine in a 100 ml beaker.
2) Add 50 ml distilled water.
3) It is recommended to melt the gelatine at about 50 °C on the hot plate.
4) After the gelatine melts, add 50 ml glycerine and mix.
5) Add a few drops of basic fuchsine to the gelatine to dye the glycerol gelatine (which should be
dark pink) and mix.
6) After cooling down, store it in a refrigerator at +4 °C in a capped jar.
b) option 2:
1) Melt the Kaiser’s glycerol gelatine at about 60 °C in the glass bottle.
2) Add a few drops of basic fuchsin to the gelatine to dye the glycerol gelatine (which should be
dark pink) and mix.
3) After cooling down, store it in a refrigerator at +4 °C in a capped jar.
A.1.5.3 Preparation of bee pollen slides
Use the following procedure:
a) Weigh 5 g ground bee pollen sample into a 50 ml centrifuge tube and add distilled water up to a
30 ml volume.
b) Keep it at room temperature for 20 min.
c) Adjust the volume to 30 ml with distilled water if necessary.
d) Shake and vortex until the pollen suspension is entirely homogeneous.
e) Immediately after the vortex, transfer 400 µl of this suspension into a new 15 ml tube.
f) 1 ml ethanol or 1 ml H SO 5 ‰ is added and vortexed.
2 4
g) The mixture is kept at room temperature for 10 min to 20 min.
h) The suspension is centrifuged for 10 min at least 1 000g force (3 500 r/min to 4 000 r/min).
i) Supernatant harvesting: washing with 1 ml distilled water to remove H SO 5 ‰; if ethanol has
2 4
been used, this step is not mandatory.
j) Fill distilled water up to 1 ml and vortex well.
k) Immediately after the vortex, a volume necessary for drawing an equal area to the lamella used
is pipetted from the mixture (suspension) (e.g. 17 µl to 20 µl is pipetted if a 20 mm × 20 mm or a
24 mm × 24 mm lamella is used, respectively), heated to 40 °C and left until completely dry. The
slide in this form, heated to 40 °C, is added to the glycerine: gelatine: fuchsine/ Kaiser’s glycerol
gelatine: fuchsine to melt (the fuchsine is optional); and then is covered with a lamella and left
upside down for 1 h before the microscopic analysis. Then, it is examined with a light microscope.
Steps f) to i) are optional.
A.1.5.4 Evaluation of bee pollen slides
Use the following procedure:
a) To identify pollen grains, type, shape and size of the pollen grain, thickness and ornamentation
type of exine, aperture number, place of the apertures on pollen grain, size and type of aperture as
well as pore and cracks properties are examined.
b) The identification and counting of pollen are done using an optical microscope under ×1 000 or
×400 amplifications of at least 600 pollen grains, sweeping the entire surface of the lamella into at
least six lines from top to bottom. On the lamella, count approximately 100 pollens for each line.
c) If a dominant monofloral bee pollen (MNBP) is suspected, the size of the pollen shall be defined.
Without scientific reference, the radius shall be evaluated (average of the polar and equatorial axis).
d) The radius shall be calculated based on the average of 10 pollens. The pollen size shall be defined
for all the pollen of less than 20 µm present at least 5 % and the other pollen of more than 20 µm
present at least 1 %.
e) For multifloral bee pollen (MTBP): the list of pollens is recommended to be given according to the
pollen spectrum.
A.1.6 Calculation
Count at least 600 identified pollens in the visual fields. The percentage of the volume of pollen type or
species candidate to be monofloral, V, shall be calculated by using Formula (A.1):
Xr ×
V = ×100 (A.1)
n
Xr ×
()
∑ ii
i
where
X is the relative frequency of pollen type or species candidate to be monofloral;
r is the mean radius of pollen type or species candidate to be monofloral;
X is the relative frequency of each pollen type or species present in bee pollen;
i
r is the mean radius of each pollen type or species present in bee pollen;
i
To be monofloral V ≥ 80 %.
A.1.7 Precision
The relative deviation of two parallel tests shall be no more than 20 %. Only pollen present in
percentages of at least 5% is considered during the calculation of relative deviation.
A.2 Determination method of pollen taxa in bee pollen by acetolysis (alternative
to Clause A.1)
A.2.1 Principle
The method is for the botanical origin identification and quantitative analysis of pollen taxa in bee
pollen samples.
A.2.2 Consumables
A.2.2.1 Microscopic slide.
A.2.2.2 Lamella.
A.2.2.3 Centrifuge tubes (5 ml and 50 ml).
A.2.2.4 Beakers.
A.2.2.5 Glass rod.
A.2.3 Reagents
A.2.3.1 Distilled water.
A.2.3.2 Gelatin (powder).
A.2.3.3 Glycerine (Kaiser’s glycerol gelatine).
A.2.3.4 Glacial acetic acid, analytical grade.
A.2.3.5 Sulfuric acid, 96 %.
A.2.3.6 Acetic anhydride, pure.
A.2.3.7 Glycerol 87 %.
A.2.3.8 Histolac glue or nail lacquer.
A.2.4 Apparatus
A.2.4.1 Hot plate.
A.2.4.2 Vortex.
A.2.4.3 Centrifuge (at least 1 000g).
A.2.4.4 Light microscope ×400, ×1 000 magnification with oil lens.
A.2.4.5 Balance.
A.2.4.6 Water bath.
A.2.5 Procedure
A.2.5.1 Preparation of glycerine gelatine matrix (optional)
Use the following procedure:
a) 7 g of powder gelatine is put in a 100 ml beaker.
b) It is completed to 50 ml with distilled water.
c) It is recommended to melt the gelatine at 50 °C on the hot plate.
d) After the gelatine melts, 50 ml of glycerine is added and mixed.
e) After it cools down, it is stored in a refrigerator at +4 °C in a capped jar.
A.2.5.2 Preparation of acetolysis solution
In a beaker, add nine parts of acetic anhydride to one part of concentrated sulfuric acid, e.g. to make
50 ml solution, slowly add 5 ml of sulfuric acid to 45 ml of acetic anhydride and stir well with a glass
rod.
A.2.5.3 Preparation of glycerol solution (50 %)
In a beaker, add an equal volume of water and glycerol and stir well with a glass rod.
A.2.5.4 Preparation of bee pollen slides with acetolysis
Use the following procedure:
a) Weigh 5 g ground bee pollen sample into a 50 ml centrifuge tube and add distilled water up to
30 ml volume.
b) Keep it at room temperature for 20 min.
c) Adjust the volume to 30 ml with distilled water if necessary.
d) Shake and vortex until the pollen suspension is entirely homogeneous.
e) Immediately after the vortex, transfer 400 µl of this suspension into a new 5 ml tube.
f) Add 2 ml of glacial acetic acid and vortex.
g) Centrifuge at least 1 000g for 10 min and decant.
h) Add 2 ml of the acetolysis solution and vortex well until the pollen disaggregates.
i) Place the tubes in a boiling water bath for 3 min with the lids open or on water bath at 80 °C for
15 min.
j) Add 2 ml of acetic acid for stopping the acetolytic reaction (optional).
k) Centrifuge at least 1 000g for 10 min and decant.
l) Add 2 ml of water and shake well with vortex until the pollen disaggregates. Add another 2 ml of
water and shake.
m) Centrifuge at least 1 000g for 10 min and decant.
n) Add 1 ml of glycerol solution (50 %) and vortex well until the pollen disaggregates.
o) Immediately after the vortex, a volume necessary for drawing an equal area to the lamella used
is pipetted from the mixture (suspension) (e.g. 17 µl to 20 µl is pipetted if a 20 mm × 20 mm or a
24 mm × 24 mm lamella is used, respectively), heated to 40 °C and left until completely dry. Keep
the slide at 40 °C, add the glycerine: gelatine/ Kaiser’s glycerol gelatine to melt; and then cover
it with a lamella and leave upside down for 1 h before the light microscopic analysis. Seal with
histolac glue or lacquer nail. Then, examine the slide with a light microscope.
A.2.5.5 Evaluation of bee pollen slides
Use the following procedure:
a) To identify pollen grains, type, shape and size of the pollen grain, thickness and ornamentation
type of exine, aperture number, place of the apertures on pollen grain, size and type of aperture as
well as pore and cracks properties are examined.
b) The identification and counting of pollen are done using an optic microscope under ×1 000 or
×400 amplifications of 600 pollen grains, sweeping the entire surface of the lamella into six lines
from top to bottom. On the slide, count approximately 100 pollens for each row.
c) If a dominant bee pollen (MNBP) is suspected, the size of the pollen shall be defined. Without
scientific reference, the diameter shall be evaluated (average of the polar and equatorial axis).
d) The diameter shall be calculated based on the average of 10 pollens. The pollen size shall be defined
for all the pollen of less than 40 µm present at least 5 % and the other pollen of more than 40 µm
present at least 1 %.
e) For multifloral bee pollen (MTBP): the list of pollens is recommended to be given according to the
pollen spectrum.
A.2.6 Calculation
Count at least 600 identified pollens in the visual fields. The percentage of the volume of pollen type or
species candidate to be monofloral, V, shall be calculated by using Formula (A.2):
Xd ×
V = ×100 (A.2)
n
Xd ×
()
ii
∑
i
where
X is the relative frequency of pollen type or species candidate to be monofloral;
d is the mean diameter of pollen type or species candidate to be monofloral;
X is the relative frequency of each pollen type or species present in bee pollen;
i
d is the mean diameter of each pollen type or species present in bee pollen;
i
To be monofloral V ≥ 80 %.
NOTE The use of diameter instead of radius will not change the result of the formula.
A.2.7 Precision
The relative deviation of two parallel tests shall be no more than 20 %. Only pollen present in
percentages of at least 5% is considered during the calculation of relative deviation.
Annex B
(normative)
Determination of moisture content
B.1 Vacuum drying oven method (preferred)
B.1.1 Principle
The method determines the moisture content of bee pollen under a vacuum drier with hot circulating
air. The moisture content is determined by a differential weighing before and after drying.
B.1.2 Consumables
B.1.2.1 Weighing dish, height 25 mm to 30 mm, diameter 35 mm to 50 mm.
B.1.3 Apparatus
B.1.3.1 Vacuum drying oven.
B.1.3.2 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,000 1 g.
B.1.4 Procedure
Use the following procedure:
a) Weigh accurately 2 g (precision to 0,000 1 g) of the bee pollen sample.
b) Put into a weighing dish, dry to constant mass, spread evenly and put it in a vacuum drying oven.
c) Vacuum the drying oven (with the approximate pressure between 0,04 MPa and 0,053 MPa), and
dry at 60 °C ± 5 °C for 4 h.
d) Take out the weighing dish and put it in the drying oven or desiccator and weigh after cooling for
30 min.
e) Repeat the drying process for another 2 h, cool for 30 min and weigh.
f) Repeat the procedure until the mass difference between two consecutive measurements is no more
than 2 mg, namely, until a constant mass is achieved.
B.1.5 Calculation
The moisture content in bee pollen, X , given by loss on drying content, in % mass fraction, is calculated
by using Formula (B.1):
mm−
X = ×100 (B.1)
mm−
where
m is the mass of the weighing dish and the sample, in g;
m is the mass of the weighing dish and the sample dried until a constant mass is achieved, in g;
m is the mass of the weighing dish, in g.
B.1.6 Precision
The relative deviation of parallel experiments shall not be more than 5,0 %.
B.2 Loss on drying with oven method
B.2.1 Principle
The method determines the loss on drying content of bee pollen under a drier oven with hot circulating
air. The loss on drying content is determined by a differential weighing before and after drying.
B.2.2 Consumables
B.2.2.1 Weighing dish, height 25 mm to 30 mm, diameter 35 mm to 50 mm.
B.2.3 Apparatus
B.2.3.1 Drying oven.
B.2.3.2 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,000 1 g.
B.2.4 Procedure
Use the following procedure:
a) Weigh accurately 2 g (precision to 0,000 1 g) of the bee pollen sample, put in a weighing dish having
dried to a constant mass, and spread evenly.
b) Put in the drying oven for at least 4 h, and dry at 105 °C ± 5 °C until a constant mass is achieved
precisely, similar to the method in Clause B.1.
B.2.5 Calculation
The moisture content in bee pollen, X , given by loss on drying content, in % mass fraction, is calculated
by using Formula (B.2):
mm−
X = ×100 (B.2)
mm−
where
m is the mass of the weighing dish and the sample, in g;
m is the mass of the weighing dish and the sample dried until a constant mass is achieved, in g;
m is the mass of the weighing dish, in g.
B.2.6 Precision
The relative deviation of parallel experiments shall not be more than 5,0 %.
B.3 Halogen drying
B.3.1 Principle
The method determines the loss on drying content of pollen with halogen drying. This method is a
weighing-drying method in which the samples are dried until a constant mass is achieved using the
halogen radiator principle.
B.3.2 Consumables
B.3.2.1 Weighing dish, height 20 mm to 30 mm, diameter approximately 90 mm (the height and
diameter of the weighing dish should be suitable for the halogen heated moisture analyser use.
B.3.3 Apparatus
B.3.3.1 Moisture analysers with halogen heating.
B.3.4 Procedure
B.3.4.1 Put the weighing dish in the moisture analyser and run the programme (B.3.4.2) while the
weighing dish is empty. Tare the weighing dish on the moisture analyser and weigh accurately 2 g
(precision to 0,001 g) of the bee pollen sample. Spread the homogenized pollen evenly over the surface
of the weighing dish. Run the programme (B.3.4.2).
B.3.4.2 Programme:
— temperature: 105 °C;
— time for constant mass decision.
B.3.4.3 Register the result displayed by the moisture analysers directly after the analysis is finished.
B.3.5 Precision
The relative deviation of parallel experiments shall not be more than 1 %.
Annex C
(normative)
Determination of protein in bee pollen
C.1 Principle
The method determines the total protein content in bee pollen samples.
C.2 Consumables
C.2.1 Digestion tubes: 250 ml.
C.2.2 Titration flask: 500 ml graduated Erlenmeyer flask (for collection and titration of distillate).
C.2.3 Weighing paper: low N.
C.3 Reagents and materials
C.3.1 Concentrated sulfuric acid: (approximately 95 % to 98 %) reagent grade.
C.3.2 Mixed reagent of copper sulfate and potassium sulfate: weigh 0,4 g copper sulfate and 7 g
potassium sulfate, put it in the mortar, mix evenly, and grind finely to use as Kjeldahl tablets free of
mercury and selenium 3,5 g.
C.3.3 Mixed indicator: dissolve 100 mg methyl red in 100 ml methanol and 100 mg bromocresol
green in 100 ml methanol.
C.3.4 Boric acid solution, 4 % (mass/volume): dissolve 40 g boric acid in 0,5 l to 0,6 l hot deionized
water. Mix and add more hot deionized water to a volume of 1 l.
C.3.5 Dilute hydrochloric acid: measure 5,7 ml concentrated hydrochloric acid and dilute to 100 ml
with distilled water.
C.3.6 Hydrochloric acid standard solution (0,1 mol/l): dilute 10 times before using.
C.4 Apparatus
C.4.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 0,000 1 g.
C.4.2 Digestion block: Aluminium alloy block with adjustable temperature device for measuring and
controlling block temperature.
C.4.3 Distillation units: with automatic addition of NaOH and H O, to accept 250 ml digestion tubes
and 500 ml titration flask.
C.5 Digestion
Use the following procedure:
a) Weigh approximately 1 g of bee pollen sample onto a tared, low N weighing paper. Fold the paper
around the material and drop it into a Kjeldahl tube.
b) Add 20 ml sulphuric acid 95 % to 98 % + 2 Kjeldahl tablets.
c) Attach heat side shields to tube rack.
d) Place the fume manifold tightly on the tubes and turn the water aspirator on completely.
e) Set the temperature setting to 40 % and place the tube rack in the block.
f) After 15 min, the temperature setting is brought to 70 %.
g) After 15 min, the temperature setting is brought to 100 %.
h) After about 30 min to 45 min, the heating continues until the samples turn clear green. The burning
process continues for 30 min after the colour change.
i) Then turn off the device and let the tubes cool for 15 min.
j) After 10 min, turn the water aspirator down until acid fumes are just contained within the exhaust
hood.
k) A condensation zone should be maintained within the tubes. After the bulk of the sulfur oxide’s
fumes are produced during the initial stages of digestion, reduce vacuum source to prevent loss of
sulphuric acid.
l) Digest an additional 50 min. The total digestion time is approximately 60 min.
m) Let the tubes cool. Add distilled water to each tube to a total volume of approximately 80 ml.
C.6 Distillation
Use the following procedure:
a) Place 40 % NaOH in the alkali tank of the distillation unit.
b) Adjust the volume dispensed to 50 ml.
c) Attach a digestion tube containing diluted digest to the distillation unit.
d) Place a graduated 500 ml Erlenmeyer titration flask containing 25 ml H BO solution, two drops of
3 3
methyl red solution and three drops of bromocresol green.
e) Steam distil until ≥ 150 ml distillate is collected (5 min) and remove the receiving flask.
f) Alternatively, the distillation is carried out with a distillation unit. The volumes that can be used
are 50 ml H O, 90 ml NaOH, and 60 ml H BO , but they can be changed according to the distillation
2 3 3
unit used.
C.7 Titration
Titrate H BO receiving solution with standard 0,1 mol/l HCl to the violet end point. Record millilitres
3 3
of HCl to at least the nearest 0,05 ml or perform titration using an automatic titrator, using 0,25 M
sulfuric acid for protein-rich matrices, up to a pH of 4,65.
C.8 Calculation
The protein content in bee pollen, N, in % mass fraction, is calculated by using Formula (C.1):
VV− ××M 14,01
()
sb
N = ××56, 100 (C.1)
m×1000
where
V is the volume of standardized acid consumed when the sample is titrated, in ml;
s
V is the volume of standardized acid consumed when blank titration is made, in ml;
b
M is the concentration of the standard acid solution, in mol/l;
14,01 is the atomic mass of N;
m is the mass of the sample, in g;
1 000 is the factor to convert mg/g to %;
5,6 is the factor to convert N to proteins.
C.9 Precision
The relative deviation of parallel experiments shall not be more than 5,0 %.
Annex D
(normative)
Determination of sugars content in bee pollen
D.1 High performance liquid chromatography with refractive index detector
[1]
HPLC-RID method (preferred method)
D.1.1 Principle
The method is the quantitative analysis of fructose, glucose, sucrose, maltose, isomaltose, maltotriose,
erlose and melezitose saccharides at the HPLC-RID system.
D.1.2 Consumables
D.1.2.1 Pipet tips.
D.1.2.2 Glass vials and caps.
D.1.2.3 Sample preparation tubes (centrifuge tubes/15 ml falcons).
D.1.2.4 Polyvinylidene fluoride (PVDF) membrane filter, pore size 0,22 µm.
D.1.2.5 2 ml disposable syringes.
D.1.3 Reagents
D.1.3.1 Ultrapure water.
D.1.3.2 Methanol, HPLC purity or analytical purity > 99,0 %.
D.1.3.3 Acetonitrile, HPLC purity or analytical purity > 99,0 %.
D.1.3.4 Hexane, HPLC purity or analytical purity > 99,0 %.
D.1.3.5 Analytical standards; fructose, glucose, sucrose, maltose, isomaltose, maltotriose, erlose,
melezitose, HPLC purity or analytical purity > 98,0 %.
D.1.3.6 Carrez solution I: 15 g of potassium hexacyanoferrate (II) trihydrate, K Fe(CN) ·3H
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 24382
Première édition
2023-10
Pollen en pelotes — Spécifications
Bee pollen — Specifications
Numéro de référence
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2023
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Exigences et recommandations techniques. 2
4.1 Généralités . 2
4.2 Exigences chimiques . 3
4.3 Exigences d’hygiène et de sécurité . 3
5 Méthodes d’essai . 3
5.1 Réactifs . 3
5.2 Prélèvement des échantillons . 4
5.3 Transport de la ruche à l’usine ou au laboratoire . 4
5.4 Méthodes d’essai pour les exigences chimiques . 4
6 Emballage, étiquetage, marquage, stockage et transport . 5
6.1 Emballage . 5
6.2 Étiquetage des taxons de plantes du pollen. 5
6.3 Marquage . 5
6.4 Stockage et transport . 5
Annexe A (normative) Méthode de détermination des taxons du pollen .7
Annexe B (normative) Détermination du taux d’humidité.14
Annexe C (normative) Dosage des protéines dans le pollen .17
Annexe D (normative) Détermination de la teneur en sucres du pollen .20
Annexe E (normative) Méthode de dosage des lipides .26
Annexe F (normative) Détermination du pH .31
Annexe G (normative) Détermination de la teneur en cendres par gravimétrie .33
Bibliographie .35
iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner
l’utilisation d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et
à l’applicabilité de tout droit de propriété revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent
document, l’ISO n’avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa
mise en application. Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent
document que des informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de
brevets, disponible à l’adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de brevets.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www.iso.org/iso/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 19, Produits apicoles.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
iv
Introduction
Le pollen constitue les gamètes mâles des fleurs de plantes à graines (angiospermes et gymnospermes).
Le pollen des angiospermes est présent sur les étamines sous forme de minuscules grains. Il s’agit
d’une substance poudreuse grossière qui sert à transporter le matériel génétique mâle haploïde de
l’anthère d’une fleur au stigmate d’une autre fleur lors d’un processus de pollinisation croisée. Le pollen
disponible dans le commerce est principalement le pollen récolté par l’abeille mellifère (Apis spp.)
pour nourrir ses larves aux premiers stades de leur développement.
Le pollen de fleur récolté est accumulé sous forme de pelotes orbiculaires dans les corbeilles à pollen
situées sur les pattes arrière de l’abeille mellifère. Lorsqu’elles visitent des fleurs, les abeilles touchent
les étamines, humidifient le pollen avec du nectar et leurs substances salivaires et utilisent leurs pattes
arrière pour comprimer et agglomérer le pollen dans leurs corbeilles à pollen. Lorsque les abeilles
retournent à la ruche, le pollen peut être récolté à l’entrée de la ruche en utilisant une trappe spécifique.
Le pollen en pelote est la principale source de nutriments essentiels des abeilles: protéines, glucides,
lipides, fibres brutes, minéraux et autres substances en concentrations mineures, notamment des
vitamines, des caroténoïdes et des flavonoïdes. Le pollen contient tous les acides aminés essentiels.
C’est pourquoi il est récolté en tant qu’aliment riche en nutriments et fortifiant pour les êtres humains,
avec diverses allégations d’effets sur la santé. De plus, le pollen est l’une des matières premières à partir
de laquelle les abeilles produisent le pain d’abeille, c’est-à-dire du pollen mélangé avec du miel et de la
salive des abeilles, stocké dans des cellules de couvain, et utilisé dans le régime des abeilles sous forme
de produit fermenté riche en protéines et en lipides.
Le présent document clarifie la définition de différents types de pollens (sec, congelé et lyophilisé), établit
leurs indicateurs de composition et la méthodologie à suivre pour effectuer les différents essais, spécifie
les exigences relatives au stockage, à l’emballage, au transport et à l’étiquetage, et fournit des critères de
qualité pour le commerce international du pollen. Il revient aux parties concernées de décider ou non
d’appliquer les exigences du présent document à une livraison ou un lot de pollen. L’approvisionnement
primaire en protéines et vitamines est nécessaire pour la sécrétion de gelée royale durant la phase de
développement larvaire de la ruche. Bien que les sources de pollen présentent une forte variabilité, due
aux différentes ressources florales locales dans les différents pays, les caractéristiques relativement
similaires et stables des nutriments n’affectent pas les exigences nutritionnelles d’une ruche.
v
NORME INTERNATIONALE ISO 24382:2023(F)
Pollen en pelotes — Spécifications
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie les exigences de qualité, les méthodes d’analyse, ainsi que les conditions
d’emballage, d’étiquetage, de marquage, de stockage et de transport du pollen.
Le présent document est applicable aux pelotes de pollen récoltées à l’entrée de ruches, collectées par
Apis mellifera et d’autres espèces d’abeilles, ainsi qu’au pollen sec, congelé et lyophilisé.
Il ne s’applique pas au pollen collecté par les abeilles broyé en poudre ni aux produits fabriqués à partir
de pelotes de pollen.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
ISO 22005, Traçabilité de la chaîne alimentaire — Principes généraux et exigences fondamentales
s'appliquant à la conception du système et à sa mise en oeuvre
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
pollen
gamétophyte mâle produit dans l’anthère des étamines des structures florales des végétaux
(principalement des angiospermes), qui se présente sous forme de poudre de grains microscopiques
fins à grossiers transportée par les insectes ou le vent
3.2
abeille ouvrière
ouvrière
abeille femelle ayant des capacités de reproduction sous-développées et assumant différentes fonctions,
notamment celles de butineuse, nourrice, gardienne et nettoyeuse au sein de la colonie d’abeilles
mellifères
3.3
pollen
pollen en pelote
résultat de l’agglomération de grains de pollen (3.1) de fleurs avec du nectar et des substances salivaires,
récolté par les abeilles ouvrières (3.2)
Note 1 à l'article: Les pollens/pollens en pelote sont récoltés à l’entrée de la ruche.
Note 2 à l'article: Le pollen/pollen en pelote est une matière première à partir de laquelle les abeilles produisent
le pain d’abeille.
3.4
pollen monofloral
pollen/pollen en pelote (3.3) dont le pourcentage de pollen (3.1) est lié à la taille des grains de pollen
Note 1 à l'article: Après analyse des pollens, la taille des grains de pollen présumés dominant dans l’échantillon
doit être vérifiée pour déterminer si leur pourcentage en volume est d’au moins 80 % du volume total de pollen
présent.
3.5
pollen multifloral
pollen/pollen en pelote (3.3) récolté par les abeilles ouvrières (3.2) sur différentes fleurs, mais en quantité
insuffisante pour que l’un des pollens (3.1) atteigne le pourcentage en volume requis pour le considérer
comme un pollen monofloral (3.4)
3.6
pollen sec
pollen/pollen en pelote (3.3) obtenu par déshydratation pour diminuer sa teneur en eau en conditions
contrôlées et à une température inférieure ou égale à 40 °C, sans exposition au rayonnement
ultraviolet (UV)
Note 1 à l'article: Le pollen/pollen en pelote séché sur le terrain doit être obtenu sans exposition directe au soleil,
par le biais d’un traitement préliminaire par exposition à un air chaud sans contaminant et à une température
inférieure ou égale à 40 °C.
Note 2 à l'article: L’ajout supplémentaire de conservateurs, par exemple de SO , n’est pas autorisé.
Note 3 à l'article: Avant le processus de séchage, une période de congélation d’au moins 24 h est recommandée
pour détruire tout œuf de papillon de nuit ou champignon.
3.7
pollen congelé
pollen/pollen en pelote (3.3) obtenu immédiatement par un processus de congélation, à une température
inférieure à −18 °C, sans aucun traitement de séchage jusqu’à sa consommation
3.8
pollen lyophilisé
pollen/pollen en pelote (3.3) produit à partir de pollen congelé (3.7) après un processus de lyophilisation
4 Exigences et recommandations techniques
4.1 Généralités
Les exigences et recommandations générales suivantes s’appliquent:
a) il convient que le pollen soit de forme irrégulière, semblable à une sphère orbiculaire;
b) le pollen doit posséder des propriétés organoleptiques telles que la couleur, l’apparence, l’odeur et
le goût qui varient en fonction de son origine botanique;
c) le pollen doit être propre, sans contaminant (insectes vivants ou morts, larves, œufs, etc.) ou
matières issues de l’environnement (sol, sable, etc.) de la ruche jusqu’au produit final et doit être
exempt d’additifs. Protéger le pollen du développement d’autres insectes et parasites.
4.2 Exigences chimiques
Les exigences chimiques du produit doivent satisfaire aux critères spécifiés dans le Tableau 1. En ce
qui concerne la composition chimique, les valeurs maximales sont établies uniquement pour le taux
d’humidité et le pH (voir le Tableau 1). Les autres classes de composés sont fonction de l’origine
botanique du pollen. Toutes les méthodes d’essai ont été identifiées avec leurs protocoles. Chacune des
méthodes énumérées dans le Tableau 1 et dans les annexes peut être adaptée ou remplacée, à condition
de pouvoir démontrer que les modifications apportées donnent des résultats similaires, d’une qualité
au moins équivalente à ceux de la méthode de base décrite dans les annexes.
Tableau 1 — Exigences chimiques relatives au pollen et méthodes d’essai
pour chaque caractéristique
min. Exigences
Méthode
Caractéristique ou
d’essai
Type 1 Type 2 Type 3
max.
Limites uniquement pour
Méthode de détermination des taxons du pollen — Annexe A
le pollen monofloral
Taux d’humidité (en %) avec la méthode de séchage min. 2 2
en four de dessiccation sous vide, en % de la fraction Article B.1
Aucune
max. 8 8
massique
limite
supérieure
min. 5 5
Perte au séchage avec la méthode de séchage en étuve,
Article B.2
ni
en % de la fraction massique
max. 9 9
inférieure
min. 3 3
définie
Perte par séchage en dessiccateur halogène Article B.3
max. 9 9
Teneur en protéines, en % de la fraction massique min. 10 7,5 10 Annexe C
Aucune limite inférieure
Teneur en sucres, en % de la fraction massique — Article D.1
ni supérieure n’a été définie
Teneur totale en sucres, en % de la fraction massique min. 15 12 15 Article D.2
Lipides, en % de la fraction massique min. 1,3 1 1,3 Annexe E
min. 3,3
Détermination du pH Annexe F
max. 6,30
Cendres, en % de la fraction massique, par gravimétrie min. 1 0,7 1 Annexe G
Légende
Type 1 – Pollen sec; Type 2 – Pollen congelé; Type 3 – Pollen lyophilisé.
4.3 Exigences d’hygiène et de sécurité
La limite admissible pour les substances toxiques (alcaloïdes pyrrolizidiniques, cannabinoïdes,
grayanotoxines et autres) naturellement présentes dans certaines plantes (Rhododendron spp.,
Cannabis spp. et autres) doit être prise en compte.
5 Méthodes d’essai
5.1 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.2 Prélèvement des échantillons
Le pollen est un produit hétérogène; par conséquent, au moins 0,5 % du lot (minimum 250 g pour les
lots inférieurs à 50 kg et 500 g d’échantillon pour les lots inférieurs à 100 kg) doit être prélevé. Au moins
cinq points représentatifs (un ensemble aléatoire de points représentant de manière optimale la
distribution du pollen dans le contenant) doivent être échantillonnés pour tenir compte de la diversité
du pollen. Les emballer dans un récipient hermétique de qualité alimentaire et les conserver à l’état
congelé.
5.3 Transport de la ruche à l’usine ou au laboratoire
Placer l’échantillon dans un flacon pour échantillon stérile, agiter suffisamment pour le mélanger
uniformément et le mettre de côté en tant qu’échantillon à soumettre à essai.
Le pollen récolté doit être acheminé jusqu’au laboratoire pour être conservé dans un congélateur
dès que possible. L’utilisation d’une glacière (contenant des pains de glace) est recommandée pour le
transport.
Pendant la récolte, les apiculteurs doivent avoir connaissance du type de matériel d’emballage utilisé
pour transporter le produit du rucher au lieu de conditionnement ou au laboratoire pour le contrôle
qualité et éviter ainsi:
a) le broyage de la matière première;
b) toute contamination par de la poussière;
c) tout transfert d’odeurs et d’humidité ainsi que des températures élevées, susceptibles d’altérer la
qualité du produit à traiter. Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité
analytique reconnue.
5.4 Méthodes d’essai pour les exigences chimiques
Chaque échantillon doit représenter le lot de pollen récolté.
Le pollen est très hydrophile et son exposition à l’humidité dans la pièce doit être limitée autant que
possible. Dans ce contexte, des récipients hermétiques à l’air sont recommandés jusqu’au début de
l’analyse.
Le prélèvement de pollen destiné à des échantillons de laboratoire doit être réalisé à partir de récipients
d’homogénéisation dans des pots stérilisés.
Pour une meilleure homogénéisation de l’échantillon, il convient de broyer le pollen en poudre fine et de
le stocker selon l’état du pollen (sec, congelé ou lyophilisé).
L’échantillon peut être soumis à essai dans les différentes conditions ci-dessous:
— pour le pollen sec, les échantillons doivent être conservés à une température ne dépassant pas 4 °C,
dans une zone conditionnée de manière adéquate, pendant six mois au maximum;
— pour le pollen congelé, les échantillons doivent être conservés à −18 °C pendant six mois au maximum;
— pour le pollen lyophilisé, les échantillons doivent être conservés à une température ne dépassant
pas 4 °C, dans une zone conditionnée de manière adéquate, pendant six mois au maximum.
Pour toutes les méthodes d’analyse, l’homogénéisation des pelotes de pollen est réalisée par broyage
dans un broyeur jusqu’à ce que les pelotes de pollen soient réduites en poudre (pendant 2 min
maximum).
Toutes les méthodes d’essai sont expliquées dans les Annexes A à G.
6 Emballage, étiquetage, marquage, stockage et transport
6.1 Emballage
Le pollen doit être emballé dans des récipients de qualité alimentaire fermés, propres et secs,
protégés du rayonnement UV et fabriqués dans un matériau qui n’affecte pas la qualité du pollen.
6.2 Étiquetage des taxons de plantes du pollen
Il doit être indiqué sur l’étiquette si le produit est de type monofloral (PMN) ou multifloral (PMT).
Pour le pollen monofloral PMN, seul «Pollen monofloral» avec le nom de la plante dominante doit figurer
sur l’étiquette de la face avant (nom local et latin).
Pour le pollen multifloral PMT, la dénomination «Pollen multifloral» doit apparaître sur l’étiquette de la
face avant. Il est facultatif d’inclure une liste de plantes sur l’étiquette (noms latins) pour que les clients
s’y réfèrent lors de l’achat. Néanmoins, la liste complète n’est pas requise et peut se limiter à une liste
réduite de différentes origines botaniques.
6.3 Marquage
Des informations sur le pollen doivent être étiquetées sur les emballages.
A minima, les informations suivantes doivent figurer sur chaque emballage ou étiquette:
a) le nom du produit et l’appellation commerciale ou la marque;
b) le nom et l’adresse du producteur et de l’emballeur, ainsi que le ou les pays d’origine;
c) des informations sur le type de traitement qui a été nécessaire pour obtenir un produit sec,
séché sur le terrain, congelé ou lyophilisé;
d) l’étiquetage des taxons de plantes en 6.2 (pour le PMN, l’étiquetage est obligatoire, pour le PMT,
il est facultatif);
e) la masse nette;
f) les années de récolte et la date de durabilité minimale;
g) le numéro de lot et les informations traçables du produit; l’ISO 22005 doit être suivie pour déclarer
la traçabilité du pollen;
h) les informations nutritionnelles.
6.4 Stockage et transport
Il convient que le stockage à moyen et long terme s’effectue dans un endroit frais et ombragé ou,
de préférence, dans une plage de température comprise entre +2 °C et +5 °C pour le pollen sec ou
lyophilisé. Le pollen congelé doit être stocké à une température inférieure à −18 °C. Il est recommandé
que la durée de conservation maximale du pollen en tant qu’aliment destiné à la consommation humaine
soit inférieure à 24 mois pour le pollen congelé et lyophilisé et inférieure à 18 mois pour le pollen sec.
Il convient de stocker séparément les pollens produits dans des endroits/zones différents et à différentes
périodes et de leur attribuer différents numéros de lot (dans un flacon en verre ou une boîte).
Le pollen doit être transporté dans des conditions respectant la chaîne du froid, par exemple transport
frigorifique (−22 °C à −18 °C) pour le pollen congelé, et transport du pollen sec et lyophilisé à une
température ne dépassant pas 25 °C (température recommandée: 0 °C à 10 °C). Le transport doit
s’effectuer dans des récipients hermétiques afin d’éviter l’absorption d’humidité.
Le pollen ne doit pas être stocké et transporté avec des matériaux toxiques ou corrosifs ou avec des
matériaux ayant une odeur particulière ou susceptibles de provoquer une contamination.
Annexe A
(normative)
Méthode de détermination des taxons du pollen
A.1 Méthode de détermination des taxons du pollen (alternative à A.2)
A.1.1 Principe
Cette méthode a pour but l’identification de l’origine botanique et l’analyse quantitative (fréquences
relatives) des taxons de pollen dans les échantillons de pollen.
A.1.2 Consommables
A.1.2.1 Lame de microscope
A.1.2.2 Lamelle
A.1.2.3 Aiguille à dissection
A.1.2.4 Tube à centrifuger (15 ml et 50 ml).
A.1.3 Réactifs
A.1.3.1 Éthanol (70 %) ou H SO (5 ‰) (facultatif).
2 4
A.1.3.2 Eau distillée
A.1.3.3 Gélatine (poudre) ou glycérol gélatiné selon Kaiser
A.1.3.4 Glycérine ou glycérol gélatiné selon Kaiser
A.1.3.5 Fuchsine basique (en poudre) (facultative).
A.1.4 Appareillage
A.1.4.1 Plaque chauffante
A.1.4.2 Vortex
A.1.4.3 Centrifugeuse
A.1.4.4 Microscope optique, grossissement ×400, ×1 000 avec objectif à immersion dans l’huile.
A.1.5 Mode opératoire
A.1.5.1 Préparation du colorant fuchsine basique (recommandée)
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) mettre 1 g de fuchsine basique en poudre dans un bécher de 100 ml;
b) ajouter 100 ml d’éthanol (A.1.3.1) et mélanger à fond.
A.1.5.2 Préparation de la matrice de glycérol gélatiné
Mettre en œuvre l’option 1 ou l’option 2 du mode opératoire ci-dessous:
a) option 1:
1) mettre 7 g de gélatine en poudre dans un bécher de 100 ml;
2) ajouter 50 ml d’eau distillée;
3) il est recommandé de faire fondre la gélatine à environ 50 °C sur la plaque chauffante;
4) une fois la gélatine fondue, ajouter 50 ml de glycérine et mélanger;
5) ajouter quelques gouttes de fuchsine basique à la gélatine pour colorer le glycérol gélatiné
(il convient qu’il soit rose foncé) et mélanger;
6) après refroidissement, stocker au réfrigérateur à +4 °C dans un bocal fermé;
b) option 2:
1) faire fondre le glycérol gélatiné selon Kaiser à environ 60 °C dans le flacon en verre;
2) ajouter quelques gouttes de fuchsine basique à la gélatine pour colorer le glycérol gélatiné
(il convient qu’il soit rose foncé) et mélanger;
3) après refroidissement, stocker au réfrigérateur à +4 °C dans un bocal fermé.
A.1.5.3 Préparation des lames de pollen
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) peser 5 g d’échantillon de pollen broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml et ajouter de l’eau
distillée pour obtenir un volume de 30 ml;
b) maintenir à température ambiante pendant 20 min;
c) ajuster le volume à 30 ml avec de l’eau distillée si nécessaire;
d) agiter et passer au Vortex jusqu’à ce que la suspension de pollen soit entièrement homogène;
e) immédiatement après le passage au Vortex, transvaser 400 µl de cette suspension dans un nouveau
tube de 15 ml;
f) ajouter 1 ml d’éthanol ou 1 ml de H SO à 5 ‰ et passer au Vortex;
2 4
g) le mélange est conservé à température ambiante pendant 10 min à 20 min;
h) la suspension est centrifugée pendant 10 min avec une force d’au moins 1 000g (3 500 r/min à
4 000 r/min);
i) récolte du surnageant: laver avec 1 ml d’eau distillée pour éliminer le H SO à 5 ‰; si de l’éthanol a
2 4
été utilisé, cette étape n’est pas obligatoire;
j) remplir jusqu’à 1 ml avec de l’eau distillée et bien agiter au Vortex;
k) immédiatement après le passage au Vortex, pipeter un volume nécessaire du mélange (suspension)
pour tracer un symbole égal sur la lamelle utilisée (par exemple, 17 µl à 20 µl sont pipetés si une
lamelle de 20 mm × 20 mm ou une lamelle de 24 mm × 24 mm est utilisée, respectivement), chauffer
à 40 °C et laisser sécher complètement. La lame sous cette forme, chauffée à 40 °C, est ajoutée à la
glycérine: gélatine: fuchsine/ glycérol gélatiné selon Kaiser: fuchsine de façon à les faire fondre (la
fuchsine est facultative); recouvrir ensuite d’une lamelle et retourner pendant 1 h avant l’analyse
microscopique. Procéder ensuite à l’examen au microscope optique.
Les étapes f) à i) sont facultatives.
A.1.5.4 Évaluation des lames de pollen
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) pour identifier les grains de pollen, le type, la forme et la taille du grain de pollen, l’épaisseur et
le type d’ornement de l’exine, le nombre d’apertures, l’emplacement des apertures sur le grain de
pollen, la taille et le type d’aperture ainsi que les propriétés des pores et des sillons sont examinés;
b) identification et comptage du pollen à l’aide d’un microscope optique sous un grossissement
de ×1 000 ou ×400 de 600 grains de pollen minimum, en balayant la totalité de la surface de la
lamelle sur au moins six lignes de haut en bas. Sur la lamelle, compter environ 100 pollens pour
chaque ligne;
c) en cas de suspicion d’un pollen monofloral (PMN) dominant, la taille du pollen doit être définie. Sans
référence scientifique, le rayon doit être évalué (moyenne de l’axe polaire et de l’axe équatorial);
d) le rayon doit être calculé sur la base de la moyenne de 10 pollens. La taille du pollen doit être définie
pour tous les pollens de moins de 20 µm, présents à hauteur d’au moins 5 %, et pour les autres
pollens de plus de 20 µm présents à hauteur d’au moins 1 %;
e) pour le pollen multifloral (PMT): il est recommandé de fournir la liste des pollens en fonction du
spectre pollinique.
A.1.6 Calcul
Compter au moins 600 pollens identifiés dans les champs visuels. Le pourcentage en volume du type
de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen monofloral, V, doit être calculé à l’aide de la
Formule (A.1):
Xr ×
V = ×100 (A.1)
n
Xr ×
()
ii
∑
i
où
X est la fréquence relative du type de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen
monofloral;
r est le rayon moyen du type de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen monofloral;
X est la fréquence relative de chaque type ou espèce de pollen présent(e) dans le pollen;
i
r est le rayon moyen de chaque type ou espèce de pollen présent(e) dans le pollen.
i
Pour être monofloral V ≥ 80 %.
A.1.7 Fidélité
L’écart relatif entre deux essais réalisés en parallèle ne doit pas dépasser 20 %. Seuls les pollens
présents à plus de 5 % sont à considérés pour calculer l’écart relatif.
A.2 Méthode de détermination des taxons du pollen par acétolyse
(alternative à A.1)
A.2.1 Principe
Cette méthode a pour but l’identification de l’origine botanique et l’analyse quantitative des taxons de
pollen dans les échantillons de pollen.
A.2.2 Consommables
A.2.2.1 Lame de microscope
A.2.2.2 Lamelle
A.2.2.3 Tubes à centrifuger (5 ml et 50 ml).
A.2.2.4 Béchers
A.2.2.5 Tige en verre
A.2.3 Réactifs
A.2.3.1 Eau distillée.
A.2.3.2 Gélatine (poudre).
A.2.3.3 Glycérine (glycérol gélatiné selon Kaiser).
A.2.3.4 Acide acétique glacial, de qualité analytique.
A.2.3.5 Acide sulfurique, 96 %.
A.2.3.6 Anhydride acétique, pur.
A.2.3.7 Glycérol à 87 %.
A.2.3.8 Histolaque ou vernis à ongles.
A.2.4 Appareillage
A.2.4.1 Plaque chauffante
A.2.4.2 Vortex
A.2.4.3 Centrifugeuse (au moins 1 000g).
A.2.4.4 Microscope optique, grossissement ×400, ×1 000 avec objectif à immersion dans l’huile.
A.2.4.5 Balance
A.2.4.6 Bain-marie
A.2.5 Mode opératoire
A.2.5.1 Préparation de la matrice de glycérol gélatiné (facultative)
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) mettre 7 g de gélatine en poudre dans un bécher de 100 ml;
b) compléter à 50 ml avec de l’eau distillée;
c) il est recommandé de faire fondre la gélatine à 50 °C sur la plaque chauffante;
d) une fois la gélatine fondue, ajouter 50 ml de glycérine et mélanger;
e) après refroidissement, stocker au réfrigérateur à +4 °C dans un bocal fermé.
A.2.5.2 Préparation de la solution d’acétolyse
Dans un bécher, ajouter neuf parties d’anhydride acétique à une partie d’acide sulfurique concentré.
Par exemple, pour une solution de 50 ml, ajouter lentement 5 ml d’acide sulfurique à 45 ml d’anhydride
acétique et bien agiter à l’aide d’une tige en verre.
A.2.5.3 Préparation de la solution de glycérol (50 %)
Dans un bécher, ajouter un volume égal d’eau et de glycérol et bien agiter avec une tige en verre.
A.2.5.4 Préparation des lames de pollen avec acétolyse
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) peser 5 g d’échantillon de pollen broyé dans un tube à centrifuger de 50 ml et ajouter de l’eau
distillée pour obtenir un volume de 30 ml;
b) maintenir à température ambiante pendant 20 min;
c) ajuster le volume à 30 ml avec de l’eau distillée si nécessaire;
d) agiter et passer au Vortex jusqu’à ce que la suspension de pollen soit entièrement homogène;
e) immédiatement après le passage au Vortex, transvaser 400 µl de cette suspension dans un nouveau
tube de 5 ml;
f) ajouter 2 ml d’acide acétique glacial et passer au Vortex;
g) centrifuger à au moins 1 000g pendant 10 min et décanter;
h) ajouter 2 ml de solution d’acétolyse et bien agiter au Vortex jusqu’à ce que le pollen se désagrège;
i) placer les tubes dans un bain-marie bouillant pendant 3 min, avec les couvercles ouverts, ou dans
un bain-marie à 80 °C pendant 15 min;
j) ajouter 2 ml d’acide acétique pour arrêter la réaction d’acétolyse (facultatif);
k) centrifuger à au moins 1 000g pendant 10 min et décanter;
l) ajouter 2 ml d’eau et bien agiter au Vortex jusqu’à ce que le pollen se désagrège. Ajouter encore 2 ml
d’eau et agiter;
m) centrifuger à au moins 1 000g pendant 10 min et décanter;
n) ajouter 1 ml de solution de glycérol (50 %) et bien agiter au Vortex jusqu’à ce que le pollen se
désagrège;
o) immédiatement après le passage au Vortex, pipeter un volume nécessaire du mélange (suspension)
pour tracer un symbole égal sur la lamelle utilisée (par exemple, 17 µl à 20 µl sont pipetés si
une lamelle de 20 mm × 20 mm ou une lamelle de 24 mm × 24 mm est utilisée, respectivement),
chauffer à 40 °C et laisser sécher complètement. Maintenir la lame à 40 °C, ajouter la glycérine:
gélatine/glycérol gélatiné selon Kaiser de façon à les faire fondre; recouvrir ensuite d’une lamelle et
retourner pendant 1 h avant l’analyse au microscope optique. Sceller à l’aide d’Histolaque ou d’un
vernis à ongles. Examiner ensuite la lamelle au microscope optique.
A.2.5.5 Évaluation des lames de pollen
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) pour identifier les grains de pollen, le type, la forme et la taille du grain de pollen, l’épaisseur et
le type d’ornement de l’exine, le nombre d’apertures, l’emplacement des apertures sur le grain de
pollen, la taille et le type d’aperture ainsi que les propriétés des pores et des sillons sont examinés;
b) identification et comptage du pollen à l’aide d’un microscope optique sous un grossissement
de ×1 000 ou ×400 de 600 grains de pollen, en balayant la totalité de la surface de la lamelle sur
six lignes de haut en bas. Sur la lame, compter environ 100 pollens pour chaque ligne;
c) en cas de suspicion d’un pollen dominant (PMN), la taille du pollen doit être définie. Sans référence
scientifique, le diamètre doit être évalué (moyenne de l’axe polaire et de l’axe équatorial);
d) le diamètre doit être calculé sur la base de la moyenne de 10 pollens. La taille du pollen doit être
définie pour tous les pollens de moins de 40 µm, présents à hauteur d’au moins 5 %, et pour les
autres pollens de plus de 40 µm présents à hauteur d’au moins 1 %;
e) pour le pollen multifloral (PMT): il est recommandé de fournir la liste des pollens en fonction du
spectre pollinique.
A.2.6 Calcul
Compter au moins 600 pollens identifiés dans les champs visuels. Le pourcentage en volume du type
de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen monofloral, V, doit être calculé à l’aide de la
Formule (A.2):
Xd ×
V = ×100 (A.2)
n
Xd ×
()
ii
∑
i
où
X est la fréquence relative du type de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen
monofloral;
d est le diamètre moyen du type de pollen ou de l’espèce candidat(e) à l’appellation pollen monofloral;
X est la fréquence relative de chaque type ou espèce de pollen présent(e) dans le pollen;
i
d est le diamètre moyen de chaque type ou espèce de pollen présent(e) dans le pollen.
i
Pour être monofloral V ≥ 80 %.
NOTE L’utilisation du diamètre au lieu du rayon ne modifiera pas le résultat de la formule.
A.2.7 Fidélité
L’écart relatif entre deux essais réalisés en parallèle ne doit pas dépasser 20 %. Seuls les pollens
présents à plus de 5 % sont à considérés pour calculer l’écart relatif.
Annexe B
(normative)
Détermination du taux d’humidité
B.1 Méthode de séchage en four de dessiccation sous vide (privilégiée)
B.1.1 Principe
Cette méthode détermine le taux d’humidité du pollen par un passage dans un four de dessiccation sous
vide avec circulation d’air chaud. Le taux d’humidité est déterminé par pesée différentielle avant et
après le séchage.
B.1.2 Consommables
B.1.2.1 Coupelle de pesée, hauteur de 25 mm à 30 mm, diamètre de 35 mm à 50 mm.
B.1.3 Appareillage
B.1.3.1 Four de dessiccation sous vide
B.1.3.2 Balance analytique, permettant de peser à 0,000 1 g près.
B.1.4 Mode opératoire
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) peser exactement 2 g (à 0,000 1 g près) de l’échantillon de pollen;
b) les mettre dans une coupelle de pesée, sécher jusqu’à obtenir une masse constante,
étaler uniformément et placer dans un four de dessiccation sous vide;
c) faire le vide dans le four de dessiccation (la pression étant approximativement comprise entre
0,04 MPa et 0,053 MPa) et sécher à 60 °C ± 5 °C pendant 4 h;
d) retirer la coupelle de pesée, la placer dans le four de dessiccation ou le dessiccateur et peser après
refroidissement pendant 30 min;
e) répéter le processus de séchage pendant 2 h supplémentaires, laisser refroidir pendant 30 min et
peser;
f) répéter le mode opératoire jusqu’à ce que la différence de masse entre deux mesures consécutives
ne dépasse pas 2 mg, c’est-à-dire jusqu’à ce qu’une masse constante soit obtenue.
B.1.5 Calcul
Le taux d’humidité du pollen, X , donné par la perte au séchage, en % de la fraction massique, est calculé
à l’aide de la Formule (B.1):
mm−
X = ×100 (B.1)
mm−
où
m est la masse de la coupelle de pesée et de l’échantillon, en g;
m est la masse de la coupelle de pesée et de l’échantillon séché jusqu’à obtenir une masse constante,
en g;
m est la masse de la coupelle de pesée, en g.
B.1.6 Fidélité
L’écart relatif entre expériences réalisées en parallèle ne doit pas dépasser 5,0 %.
B.2 Perte au séchage avec la méthode de l’étuve
B.2.1 Principe
Cette méthode détermine la perte au séchage du pollen dans une étuve avec circulation d’air chaud.
La perte au séchage est déterminée par pesée différentielle avant et après le séchage.
B.2.2 Consommables
B.2.2.1 Coupelle de pesée, hauteur de 25 mm à 30 mm, diamètre de 35 mm à 50 mm.
B.2.3 Appareillage
B.2.3.1 Étuve
B.2.3.2 Balance analytique, permettant de peser à 0,000 1 g près.
B.2.4 Mode opératoire
Mettre en œuvre le mode opératoire suivant:
a) peser exactement 2 g (à 0,000 1 g près) de l’échantillon de pollen, les mettre dans une coupelle de
pesée séchée jusqu’à obtenir une masse constante, et étaler uniformément;
b) placer dans l’étuve pendant au moins 4 h et sécher à 105 °C ± 5 °C jusqu’à obtenir une masse
constante avec exactitude, de façon similaire à la méthode décrite en B.1.
B.2.5 Calcul
Le taux d’humidité du pollen, X , donné par la perte au séchage, en % de la fraction massique, est calculé
à l’aide de la Formule (B.2):
mm−
X = ×100 (B.2)
mm−
où
m est la masse de la coupelle de pesée et de l’échantillon, en g;
m est la masse de la coupelle de pesée et de l’échantillon séché jusqu’à obtenir une masse constante,
en g;
m est la masse de la coupelle de pesée, en g.
B.2.6 Fidélité
L’écart relatif entre expériences réalisées en parallèle ne doit pas dépasser 5,0 %.
B.3 Séchage halogène
B.3.1 Principe
Cette méthode détermine la perte au séchage du pollen par séchage halogène. Cette méthode est
une méthode de pesée-séchage dans laquelle les échantillons sont séchés jusqu’à obtenir une masse
constante en utilisant le principe du radiateur halogène.
B.3.2 Consommables
B.3.2.1 Coupelle de pesée, d’une hauteur de 20 mm à 30 mm, d’un diamètre d’environ 90 mm
(il convient que la hauteur et le diamètre de la coupelle de pesée soient adaptés à l’utilisation en
dessiccateur halogène).
B.3.3 Appareillage
B.3.3.1 Dessiccateur halogène.
B.3.4 Mode opératoire
B.3.4.1 Placer la coupelle de pesée dans le dessiccateur et exécuter le programme (B.3.4.2) alors que
la coupelle de pesée est vide. Tarer la coupelle de pesée dans le dessiccateur et peser exactement 2 g
(à 0,001 g près) d’échantillon de pollen. Répartir uniformément le pollen homogénéisé sur la surface de
la coupelle de pesée. Exécuter le programme (B.3.4.2).
B.3.4.2 Programme:
— température: 105 °C;
— durée jusqu’à la décision de masse constante.
B.3.4.3 Enregistrer le résultat affiché par le dessiccateur immédiatement après la fin de l’analyse.
B.3.5 Fidélité
L’écart relatif entre expériences réalisées en parallèle ne doit pas dépasser 1 %.
Annexe C
(normative)
Dosage des protéines dans le pollen
C.1 Principe
Cette méthode détermine la teneur totale en protéines des échantillons de pollen.
C.2 Consommables
C.2.1 Tubes à essai: 250 ml.
C.2.2 Flacon de titrage: Erlenmeyer gradué de 500 ml (pour prélever et titrer le distillat).
C.2.3 Papier de pesée: faible teneur en azote.
C.3 Réactifs et matériels
C.3.1 Acide sulfurique concentré: (environ 95 % à 98 %) de qualité réactif.
C.3.2 Réactif mixte de sulfate de cuivre et de sulfate de potassium: peser 0,4 g de sulfate de cuivre
et 7 g de sulfate de potassium, les mettre dans le mortier, mélanger uniformément et broyer finement
pour une utilisation en tant que comprimés Kjeldahl exempts de mercure et de sélénium de 3,5 g.
C.3.3 I
...
Questions, Comments and Discussion
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