ISO 3656:2011

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3656
Fourth edition
2011-02-01


Animal and vegetable fats and oils —
Determination of ultraviolet absorbance
expressed as specific UV extinction
Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de
l'absorbance dans l'ultraviolet, exprimée sous la forme d'extinction
spécifique en lumière ultraviolette





Reference number
ISO 3656:2011(E)
©
ISO 2011

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ISO 3656:2011(E)
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ISO 3656:2011(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 3656 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
This fourth edition cancels and replaces the third edition (ISO 3656:2002), which has been technically revised.
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ISO 3656:2011(E)
Introduction
This International Standard describes a method for the determination of the absorbance of light in the
ultraviolet (UV) spectrum by fats and oils. Changes in absorption in the UV region are used as quality, purity,
and authenticity criteria for fats and oils. Refining causes the formation of conjugated dienes and trienes and
increased values of K and K , which then indicate the presence of refined oils. The oxidation of linoleic
232 268
and linolenic acids results in the formation of hydroperoxides in which the double bonds become conjugated.
Furthermore, the formation of either carbon-carbon bonds or carbon-oxygen bonds (α,β-unsaturated carbonyl
compounds) as secondary autoxidation products are observed. These compounds all lead to an increase of
the absorption in the region between 225 nm and 325 nm.
The third edition of this International Standard allowed the determination of the UV absorbance at 232 nm and
268 nm using three different solvents (isooctane, cyclohexane or n-hexane). However, it is known that the
solvents themselves have an effect on the UV absorbance between 260 nm and 276 nm in vegetable oils.
Recent investigations have shown that the measurement of K and K for the same oil in isooctane or in
268 270
cyclohexane give significantly different results. In isooctane, the maxima appear at 267 nm to 268 nm
whereas in cyclohexane, the maxima appear at 268 nm to 269 nm. In the IOC standards for the determination
of the ultraviolet absorbance of (virgin) olive oils, the specified wavelengths are 232 nm and 270 nm.
Taking into account the above, the fourth edition of this International Standard specifies measurement at
268 nm when isooctane is used and measurement at 270 nm when cyclohexane is used. Moreover, the
variation of the specific extinction, ΔΚ, for olive oils has been introduced. Precision data from a new
collaborative trial have also been taken into consideration for this revision.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 3656:2011(E)

Animal and vegetable fats and oils — Determination
of ultraviolet absorbance expressed as specific UV extinction
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the absorbance at ultraviolet
wavelengths of animal and vegetable fats and oils.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
[5]
NOTE The usual policy of ISO/TC 34/SC 11 of using symbols specified in International Standard 80000 is not
followed in this International Standard. The symbols are those used, for example, in Commission Regulation (EEC)
[6]
No 2568/91 .
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
specific extinction (K – K – K )
232 268 270
absorbance of 1 g sample, dissolved in 100 ml isooctane or cyclohexane, measured in a 10 mm cell at the
specific wavelengths 232 nm, 268 nm, and 270 nm
4 Principle
A sample is dissolved in isooctane or cyclohexane and the absorbance is measured spectrophotometrically in
a specified ultraviolet wavelength range. The specific absorbance at 232 nm and 268 nm in isooctane or
232 nm and 270 nm in cyclohexane for a concentration of 1 g per 100 ml in a 10 mm cell is calculated.
5 Reagents
WARNING — Attention is drawn to the regulations which specify the handling of hazardous
substances. Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
5.1 Solvent: isooctane (2,2,4-trimethylpentane) for the measurement at 232 nm and 268 nm or
cyclohexane for the measurement at 232 nm and 270 nm, having an absorbance less than 0,12 at 232 nm
and less than 0,05 at 250 nm against water, measured in a 10 mm cell.
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ISO 3656:2011(E)
6 Apparatus
The glassware used for the determination shall be thoroughly cleaned and rinsed with the solvent (5.1) before
use so that it is free from impurities having an absorbance within the wavelength range of 220 nm to 360 nm.
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
[1]
6.1 One-mark volumetric flasks, capacity 25 ml, ISO 1042 class A.
6.2 Analytical balance, capable of being read to the nearest 0,000 1 g.
6.3 Spectrometer, with quartz cells of pathlength 10 mm, suitable for measurements at ultraviolet
wavelengths (220 nm to 360 nm).
6.3.1 General. Before use it is recommended that the wavelength and absorbance scales of the
spectrometer be checked as specified in 6.3.2 and 6.3.3.
6.3.2 Wavelength scale. Check this using a reference material consisting of an optical glass filter
containing holmium oxide which has distinct absorption bands. The reference material is designed for the
verification and calibration of the wavelength scales of visible and ultraviolet spectrophotometers having
nominal spectral bandwidths of 5 nm or less. The holmium glass filter is measured in the absorbance mode
against an air blank, over the wavelength range 640 nm to 240 nm. For each spectral bandwidth (0,10, 0,25,
0,50, 1,00, 1,50, 2,00, and 3,00), a baseline correction is performed with an empty cell holder. The
1)
wavelengths of the spectral bandwidth are listed in the certificate of the reference material .
6.3.3 Absorbance scale. This may be checked using a reference material consisting of four solutions of
potassium dichromate in perchloric acid sealed in far UV quartz cells to measure the linearity and photometric
accuracy reference in the UV. The potassium dichromate filled cells (40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml and
100 mg/ml) are measured against a perchloric acid blank (see Reference [7]). The net absorbance values are
1)
listed in the certificate of the reference material .
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
[2]
is given in ISO 5555 .
It is important the laboratory receive a truly representative sample which has not been damaged or changed
during transport or storage.
8 Preparation of test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
Ensure that the test sample is perfectly homogeneous and contains no suspended impurities. Filter oils which
are liquid at ambient temperature through paper at a temperature of approximately 30 °C. Homogenize and
filter hard fats at a temperature of not more than 10 °C above their melting point.

1) Suitable holmium filters and potassium dichromate-sealed cells are available commercially, e.g. from Starna Scientific
(www.starnascientific.com). This information is given for the convenience of users of this document and does not
constitute an endorse
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 3656
Quatrième édition
2011-02-01


Corps gras d'origines animale
et végétale — Détermination de
l'absorbance dans l'ultraviolet, exprimée
sous la forme d'extinction spécifique
en lumière ultraviolette
Animal and vegetable fats and oils — Determination of ultraviolet
absorbance expressed as specific UV extinction





Numéro de référence
ISO 3656:2011(F)
©
ISO 2011

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ISO 3656:2011(F)
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ISO 3656:2011(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 3656 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
Cette quatrième édition annule et remplace la troisième édition (ISO 3656:2002), qui a fait l'objet d'une
révision technique.
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ISO 3656:2011(F)
Introduction
La présente Norme internationale décrit une méthode de détermination de l'absorbance de la lumière dans le
spectre ultraviolet (UV) par les corps gras. Les changements d'absorption dans la région UV sont utilisés
comme critères de qualité, de pureté et d'authenticité pour les corps gras. Le raffinage provoque la formation
de diènes et de triènes conjugués et une augmentation des valeurs de K et K , phénomènes indiquant la
232 268
présence d'huiles raffinées. L'oxydation des acides linoléique et linolénique entraîne la formation de
peroxydes d'hydrogène dans lesquels les doubles liaisons se conjuguent. Par ailleurs, on observe la
formation de liaisons carbone-carbone ou de liaisons carbone-oxygène (composés carbonylés α,β-insaturés)
sous forme de produits d'auto-oxydation secondaire. L'ensemble de ces composés entraîne une
augmentation de l'absorption dans la région comprise entre 225 nm et 325 nm.
La troisième édition de la présente Norme internationale a permis de déterminer l'absorbance UV à 232 nm et
268 nm, à l'aide de trois solvants différents (isooctane, cyclohexane ou n-hexane). On sait toutefois que les
solvants exercent eux-mêmes un effet sur l'absorbance UV entre 260 nm et 276 nm dans les huiles d'origine
végétale. De récentes recherches ont montré que le mesurage de K et de K , pour une huile identique,
268 270
dans l'isooctane ou dans le cyclohexane, donne des résultats significativement différents. Dans l'isooctane,
les maxima apparaissent entre 267 nm et 268 nm, alors qu'ils apparaissent entre 268 nm et 269 nm dans le
cyclohexane. Dans les normes COI relatives à la détermination de l'absorbance dans l'ultraviolet des huiles
d'olive (vierges), les longueurs d'onde spécifiées sont de 232 nm et 270 nm.
S'appuyant sur les éléments ci-dessus, la quatrième édition de la présente Norme internationale spécifie un
mesurage à 268 nm en cas d'utilisation d'isooctane, et un mesurage à 270 nm en cas d'utilisation de
cyclohexane. De plus, la variation de l'extinction spécifique, ΔΚ, pour les huiles d'olive a été introduite. Les
données de fidélité provenant d'un nouvel essai interlaboratoires ont également été prises en compte dans le
cadre de cette révision.

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NORME INTERNATIONALE ISO 3656:2011(F)

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination
de l'absorbance dans l'ultraviolet, exprimée sous la forme
d'extinction spécifique en lumière ultraviolette
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination de l'absorbance des corps gras
d'origines animale et végétale, aux longueurs d'onde ultraviolettes.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
NOTE La politique habituelle de l'ISO/TC 34/SC 11 consistant à utiliser des symboles spécifiés dans la Norme
[5]
internationale 80000 n'est pas suivie dans la présente Norme internationale. Les symboles sont ceux utilisés, par
[6]
exemple, dans le règlement (CEE) N° 2568/91 de la commission.
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
extinction spécifique (K – K – K )
232 268 270
absorbance de 1 g d'échantillon, dissous dans 100 ml d'isooctane ou de cyclohexane, mesurée dans une
cuve de 10 mm aux longueurs d'onde spécifiques de 232 nm, 268 nm et 270 nm
4 Principe
Un échantillon est dissous dans de l'isooctane ou du cyclohexane et l'absorbance est mesurée à l'aide d'un
spectrophotomètre dans une plage de longueurs d'onde ultraviolettes spécifiée. L'absorbance spécifique à
232 nm et 268 nm dans l'isooctane ou à 232 nm et 270 nm dans le cyclohexane, pour une concentration de
1 g pour 100 ml dans une cuve de 10 mm, est calculée.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L'attention est attirée sur les réglementations qui s'appliquent à la manipulation
de substances dangereuses. Les mesures de sécurité d'ordre technique, organisationnel et personnel
doivent être respectées.
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l'eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
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ISO 3656:2011(F)
5.1 Solvant: isooctane (2,2,4-triméthylpentane) pour le mesurage à 232 nm et 268 nm ou cyclohexane
pour le mesurage à 232 nm et 270 nm, ayant une absorbance inférieure à 0,12 à 232 nm et inférieure à 0,05
à 250 nm par rapport à l'eau, mesurée dans une cuve de 10 mm.
6 Appareillage
La verrerie utilisée pour la détermination doit être soigneusement nettoyée et rincée avec le solvant (5.1)
avant utilisation afin de la débarrasser des impuretés ayant une absorbance dans la plage de longueurs
d'onde comprise entre 220 nm et 360 nm.
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
[1]
6.1 Fioles jaugées à un trait, d'une capacité de 25 ml, ISO 1042 classe A.
6.2 Balance analytique, pouvant être lue à 0,000 1 g près.
6.3 Spectromètre, avec cuves en quartz d'une épaisseur de 10 mm, approprié pour les mesurages aux
longueurs d'onde ultraviolettes (220 nm à 360 nm).
6.3.1 Généralités. Avant toute utilisation, il est recommandé de vérifier les échelles de longueur d'onde et
d'absorbance du spectromètre comme spécifié en 6.3.2 et 6.3.3.
6.3.2 Échelle de longueur d'onde. Vérifier celle-ci en utilisant un matériau de référence constitué d'un
filtre optique en verre contenant de l'oxyde d'holmium qui possède des bandes d'absorption distinctes. Le
matériau de référence sert à vérifier et à étalonner les échelles de longueur d'onde des spectrophotomètres
UV et visible ayant des largeurs de bande spectrale nominale de 5 nm ou moins. Le filtre en verre à l'holmium
est mesuré en mode absorbance par rapport à un blanc d'air, sur la plage de longueurs d'onde comprise entre
640 nm et 240 nm. Pour chaque largeur de bande spectrale (0,10, 0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00 et 3,00), une
correction de la ligne de base est effectuée avec un support de cuve vide. Les longueurs d'onde de la largeur
1)
de bande spectrale sont indiquées dans le certificat du matériau de référence .
6.3.3 Échelle d'absorbance. Celle-ci peut être vérifiée en utilisant un matériau de référence comprenant
quatre solutions de bichromate de potassium dans de l'acide perchlorique dans des cuves étanches en quartz
à UV lointain pour mesurer la linéarité et l'exactitude photométrique de la référence dans l'UV. Les cuves
remplies de bichromate de potassium (40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml et 100 mg/ml) sont mesurées par
rapport à un blanc d'acide perchlorique (voir Référence [7]). Les valeurs d'absorbance nettes sont indiquées
1)
dans le certificat du matériau de référence .
7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
[2]
méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 5555 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié
lors du transport ou de l'entreposage.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Préparer l'échantillon pour essai conformément à l'ISO 661.

1) Des filtres à l'holmium et des cuves étanches au bichromate de potassium appropriés sont disponibles sur le marché,
par exemple auprès de Starna Scientific (www.starnascientific.com). Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l'ISO a
...