ISO 16931:2009

NORME ISO
INTERNATIONALE 16931
Deuxième édition
2009-04-15
Corps gras d'origines animale et
végétale — Détermination de la teneur en
triacylglycérols polymérisés par
chromatographie liquide d'exclusion à
haute performance (CLHP d'exclusion)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of polymerized
triacylglycerols by high-performance size-exclusion chromatography
(HPSEC)
Numéro de référence
©
ISO 2009
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2009
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2009 – Tous droits réservés

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 16931 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 16931:2001) qui a fait l'objet d'une
révision technique.
NORME INTERNATIONALE ISO 16931:2009(F)

Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de
la teneur en triacylglycérols polymérisés par chromatographie
liquide d'exclusion à haute performance (CLHP d'exclusion)
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode utilisant la chromatographie liquide d'exclusion à
haute performance (CLHP d'exclusion) pour la détermination de la teneur en triacylglycérols polymérisés
(PTAG), en fraction massique, dans les corps gras contenant au moins 3 % (à partir des aires de pics) de ces
polymères. Les PTAG (à proprement parler les triacylglycérols dimériques et oligomériques) se forment
pendant le chauffage des corps gras; par conséquent, cette méthode sert à évaluer la détérioration thermique
des corps gras ayant été utilisés en friture.
Cette méthode est applicable aux graisses de friture et aux corps gras ayant été traités thermiquement, à
condition que la teneur en PTAG soit au moins égale à 3 %. Elle peut également être appliquée à la
détermination des polymères dans les graisses contenues dans les aliments pour animaux. Dans ce cas, la
méthode d'extraction utilisée peut avoir une influence sur le résultat.
[4]
NOTE Pour plus d'informations, voir l'ISO 6492 .
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
triacylglycérols polymérisés
PTAG
constituants des corps gras chauffés qui sont déterminés par CLHP d'exclusion dans les conditions spécifiées
dans la présente Norme internationale
NOTE La teneur en PTAG est exprimée sous forme de fraction massique en pourcentage, en grammes pour 100 g,
de tous les pics de triacylglycérols polymérisés, mono-, di- et triacylglycérols (PTAG, MAG, DAG et TAG) élués.
4 Principe
L'échantillon est mélangé de façon homogène avec du tétrahydrofurane (THF) et les PTAG sont séparées par
chromatographie de perméation de gel en fonction de la taille des molécules. Les composés sont détectés au
moyen d'un détecteur d'indice de réfraction.
NOTE Pour une meilleure résolution, deux colonnes en série (2 × 300 mm) sont utilisées.
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
AVERTISSEMENT — L'attention est attirée sur les règlementations qui spécifient la manipulation des
substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et
personnel doivent être suivies.
5.1 Tétrahydrofurane (THF), pour CLHP, éventuellement stabilisé avec du butylhydroxytoluène (BHT),
dégazé, ne contenant pas d'eau.
S'assurer que le THF utilisé comme diluant pour l'échantillon a la même teneur en eau que l'éluant, sinon des
pics négatifs peuvent être observés.
5.2 Toluène, pour CLHP.
5.3 Huile d'olive extra vierge, comme étalon de référence: ajouter 100 mg à 300 mg d'huile dans 10 ml de
THF et homogénéiser le mélange.
NOTE L'huile d'olive extra vierge ne contient pas de PTAG et peut être utilisée pour déterminer le temps de rétention
des triacylglycérols monomériques.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Réservoir de solvant, de 500 ml à 1 000 ml de capacité, doté d'un filtre plongeur dans une phase
mobile en polytétrafluoroéthylène.
6.2 Pompe CLHP, sans pulsation, ayant un débit volumique compris entre 0,5 ml/min et 1,5 ml/min.
6.3 Vanne d'injection, avec une boucle de 20 µl et une seringue appropriée d'un volume compris entre
50 µl et 100 µl, ou injecteur automatique approprié.
6.4 Colonnes en acier inoxydable, 2 × 300 mm de longueur, de 7,5 mm à 7,8 mm de diamètre intérieur,
garnies de microparticules sphériques de diamètre 5 µm, de gel de copolymère de divinylbenzène-styrène;
1)
d'ouverture de pores de 10 nm ou 50 nm .
NOTE Les chromatogrammes de l'Annexe A montrent la résolution requise avec deux colonnes.
L'utilisation d'une colonne de garde est recommandée. Il convient que l'efficacité de la colonne, exprimée en
nombre de plateaux théoriques, n, pour les triacylglycérols monomériques, soit d'au moins 6 000.
Maintenir la température de la colonne entre 30 °C et 35 °C, au moyen d'un dispositif de contrôle.
Si nécessaire, la colonne peut être entreposée dans du toluène (5.2), mais l'expérience montre qu'il est
préférable de laisser le système fonctionner avec du THF.
6.5 Détecteur d'indice de réfraction, à température contrôlée.
La température idéale pour le détecteur se situe juste au-dessus de la température de la colonne (30 °C à
35 °C).
1) 1 nm = 10 Å.
2 © ISO 2009 – Tous droits réservés

6.6 Système d'acquisition et de traitement de données pour chromatographie, permettant d'afficher et
de quantifier avec exactitude l'aire des pics.
6.7 Seringues à usage unique, de capacité 1 ml.
2)
6.8 Filtres en nylon, d'ouverture de pores de 0,45 µm .
6.9 Seringue pour CLHP, de capacité comprise entre 50 µl et 100 µl.
7 Échantillonnage
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, n'ayant pas été endommagé
ou modifié pendant le transport ou l'entreposage.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
[1]
méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 5555 .
8 Préparation de l'échantillon pour essai
L'échantillon pour essai doit être préparé conformément à l'ISO 661.
9 Mode opératoire
9.1 Mise en service de l'appareillage CLHP
Il est conseillé de suivre scrupuleusement les recommandations du fabricant. Mettre sous tension l
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 16931
Второе издание
2009-04-15
Жиры и масла животные и
растительные. Определение
полимеризованных
триацилглицеринов с помощью
высокоэффективной эксклюзионной
хроматографии (HPSEC)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of polymerized
triacylglycerols by high-performance size-exclusion chromatography
(HPSEC)
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2009
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

©  ISO 2009
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2009 – Все права сохраняются

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. ISO осуществляет тесное сотрудничество с международной
электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области электротехники.
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Обращается внимание на возможность патентования некоторых элементов данного международного
стандарта. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо или всех таких патентных
прав.
ISO 16931 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом
SC 11, Животные и растительные жиры и масла.
Это второе издание отменяет и заменяет первое издание (ISO 16931:2001).
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 16931:2009(R)

Жиры и масла животные и растительные. Определение
полимеризованных триацилглицеринов с помощью
высокоэффективной эксклюзионной хроматографии
(HPSEC)
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод с использованием высокоэффективной
эксклюзионной хроматографии (HPSEC) для определения содержания, в массовых долях,
полимеризованных триацилглицеринов (PTAGs) в маслах и жирах, которые содержат не менее 3 % (по
площадям пиков) этих полимеров. PTAGs (строго говоря, двумерные и олигомерные
триацилглицерины) образуются при нагреве жиров и масел, и таким образом этот метод может
применяться для оценки термической деградации обжарочных жиров после использования.
Этот метод применим к обжарочным жирам и жирам и маслам, которые были термически обработаны,
при условии что содержание PTAGs составляет не менее 3 %. Его можно также применять для
определения полимеров в жирах для животных кормов, хотя в этом случае используемый метод
экстрагирования может повлиять на результат.
[4]
ПРИМЕЧАНИЕ Дальнейшие детали см. в ISO 6492 .
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 661, Жиры и масла животные и растительные. Подготовка пробы для испытания
3 Термины и определения
Применительно к этому документу используются следующие термины и определения.
3.1
полимеризованные триацилглицерины
polymerized triacylglycerols
PTAGs
составляющие нагретых жиров и масел, которые определяются методом HPSEC в условиях,
установленных в этом международном стандарте
ПРИМЕЧАНИЕ Содержание PTAGs выражено как процентная массовая доля, в граммах на 100 г, всех пиков,
обусловленных элюированными полимеризованными и моно-, ди- и триацилглицеринами (PTAGs, MAGs, DAGs, и
TAGs).
4 Сущность метода
Пробу тщательно смешивают с тетрагидрофураном (THF) до образования однородной смеси, и PTAGs
разделяют посредством гель-проникающей хроматографии согласно молекулярному размеру.
Соединения детектируют с помощью рефрактометрического детектора.
ПРИМЕЧАНИЕ Для лучшего разрешения используются последовательно две колонки (2 × 300 мм).
5 Реактивы
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Обращается внимание на регламент, который устанавливает процедуры
работы с опасными веществами. Должны соблюдаться технические, организационные и
индивидуальные меры безопасности.
5.1 Тетрагидрофуран (THF) для HPLC, возможно, стабилизированный бутилгидрокситолуолом
(BHT), дегазированный, безводный.
THF, используемый в качестве растворителя для пробы, должен иметь такое же содержание воды, как
элюент; иначе может наблюдаться отрицательный пик.
5.2 Толуол для HPLC.
5.3 Оливковое масло первого холодного отжима в качестве стандартного образца: добавить от
100 мг до 300 мг масла к 10 мл THF и смесь гомогенизировать.
ПРИМЕЧАНИЕ Оливковое масло первого холодного отжима не содержит PTAGs и может быть использовано
для определения времени удержания мономерных TAGs.
6 Оборудование
Обычное лабораторное оборудование и, в частности, следующее.
6.1 Сосуд для растворителя, вместимостью от 500 мл до 1 000 мл, с политетрафторэтиленовым
линейным фильтром подвижной фазы.
6.2 HPLC насос, безимпульсный, с объемным расходом от 0,5 мл/мин до 1,5 мл/мин.
6.3 Инжекционный клапан, с петлей 20 мкл и подходящим шприцем объемом от 50 мкл до 100 мкл,
или с подходящей автоматической пипеткой.
6.4 Колонки из нержавеющей стали, длиной 2 × 300 мм, внутренним диаметром от 7,5 мм до
7,8 мм, наполненные гранулами, диаметром 5 мкм, высокоэффективного геля из сополимера стирола
1)
и дивинилбензола; размер пор 10 нм или 50 нм .
ПРИМЕЧАНИЕ Хроматограммы в Приложении A показывают требуемое разрешение с двумя колонками.
Рекомендуется использование защитной колонки. Эффективность колонки, определяемая как число, n,
теоретических пластин для мономерных TAGs, должна быть не менее 6 000.
Температура колонки поддерживается между 30 °C и 35 °C с помощью устройства управления.

1) 1 нм = 10 Å
2 © ISO 2009 – Все права сохраняются

При необходимости колонку можно хранить в толуоле (5.2), хотя опыт показал, что лучше систему
держать в токе THF.
6.5 Детектор, рефрактометрический детектор с регулируемой температурой.
Идеальная температура для детектора должна быть чуть выше температуры колонки (от 30 °C до
35 °C).
6.6 Система хроматографических данных (CDS), обеспечивающая отображение и точный
количественный анализ площадей пиков.
6.7 Шприцы одноразового использования, вместимостью 1 мл.
2)
6.8 Нейлоновые фильтры, размер пор 0,45 мкм .
6.9 HPLC шприц, вместимость от 50 мкл до 100 мкл.
7 Отбор проб
Важно, чтобы лаборатория получила пробу, которая является действительно репрезентативной и не
была повреждена или изменена во время транспортировки или хранения.
Отбор проб не является частью метода, установленного в этом междунаро
...