ISO 21527-1:2008

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 21527-1
First edition
2008-07-01
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Horizontal method for the
enumeration of yeasts and moulds —
Part 1:
Colony count technique in products with
water activity greater than 0,95
Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour le
dénombrement des levures et moisissures —
Partie 1: Technique par comptage des colonies dans les produits à
activité d'eau supérieure à 0,95

Reference number
©
ISO 2008
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

©  ISO 2008
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2008 – All rights reserved

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 21527-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 9,
Microbiology.
ISO 21527 consists of the following parts, under the general title Microbiology of food and animal feedings
stuffs — Horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds:
⎯ Part 1: Colony count technique in products with water activity greater than 0,95
⎯ Part 2: Colony count technique in products with water activity less than or equal to 0,95
This part of ISO 21527, together with ISO 21527-2, cancel and replace ISO 7698:1990, ISO 7954:1987 and
ISO 13681:1995.
Introduction
Because of the large variety of food and feed products, the applications of the horizontal method specified in
ISO 21527 (all parts) may not be appropriate for certain products. In this case, different methods, which are
specific to these products, may be used if absolutely necessary for justified technical reasons. Nevertheless,
every attempt shall be made to apply the horizontal method as specified in ISO 21527 (all parts) as far as
possible.
When ISO 21527 (all parts) is next reviewed, account will be taken of all information then available regarding
the extent to which the horizontal method has been followed and the reasons for deviations from this method
in the case of particular products.
The harmonization of test methods cannot be immediate, and for certain groups of products International
Standards and/or national standards may already exist that do not comply with the horizontal method as
specified in ISO 21527 (all parts). It is hoped that when such standards are reviewed they will be changed to
comply with ISO 21527 (all parts) so that eventually the only remaining departures from this horizontal method
will be those necessary for well-established technical reasons.

iv © ISO 2008 – All rights reserved

INTERNATIONAL STANDARD ISO 21527-1:2008(E)

Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal
method for the enumeration of yeasts and moulds —
Part 1:
Colony count technique in products with water activity greater
than 0,95
WARNING — It is essential that enumeration of moulds is carried out with the greatest care to protect
the operator and to prevent contamination of the atmosphere with mould spores.
1 Scope
This part of ISO 21527 specifies a horizontal method for the enumeration of viable yeasts and moulds in
products intended for human consumption or feeding of animals that have a water activity greater than 0,95
[eggs, meat, dairy products (except milk powder), fruits, vegetables, fresh pastes, etc.], by means of the
colony count technique at 25 °C ± 1 °C (References [1], [2]).
This part of ISO 21527 does not allow the enumeration of mould spores. Neither the identification of fungal
flora nor the examination of foods for mycotoxins lie within the scope of this part of ISO 21527. The method
specified in this part of ISO 21527 is not suitable for enumeration of heat-resistant fungi, such as
Byssochlamys fulva or Byssochlamys nivea, in canned or bottled fruit and vegetables.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial
suspension and decimal dilutions for microbiological examination
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 8261, Milk and milk products — General guidance for the preparation of test samples, initial suspensions
and decimal dilutions for microbiological examination
ISO/TS 11133 (all parts), Microbiology of food and animal feeding stuffs — Guidelines on preparation and
production of culture media
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
NOTE There are some intermediate forms and the distinction between a yeast (3.1) and a mould (3.2) can be
arbitrary.
3.1
yeast
mesophilic aerobic microorganism which, at 25 °C using mycological agar medium under the conditions
described in this part of ISO 21527, develops matt or shiny round colonies (3.4) on the surface of the
medium, usually having a regular outline and a more or less convex surface
NOTE Yeasts within, rather than on, a medium develop round, lenticular, colonies.
3.2
mould
mesophilic aerobic filamentous microorganism which, on the surface of mycological agar medium under the
conditions described in this part of ISO 21527, usually develops flat or fluffy spreading
propagules/germs (3.3) or colonies (3.4) often with coloured fruiting or sporing structures.
NOTE Moulds within, rather than on, a medium can develop round, lenticular, colonies.
3.3
propagule
germ
viable entity capable of growth in a nutrient medium
EXAMPLE Vegetative cell, group of cells, spore, spore cluster, or a piece of fungal mycelium.
[ISO 6107-6:2004, 65]
3.4
colony
localized visible accumulation of microbial mass developed on or in a solid nutrient medium from a viable
particle
[ISO 6107-6:2004, 15]
4 Principle
4.1 Surface-inoculated plates are prepared using a specified selective culture medium. Depending on the
expected number of colonies, a specified quantity of the sample (if the product is liquid), or of an initial
suspension (in the case of other products), or decimal dilutions of the sample/suspension are used.
Additional plates can be prepared under the same conditions, using decimal dilutions of the test sample or of
the initial suspension.
4.2 The plates are then aerobically incubated at 25 °C ± 1 °C for 5 d. If necessary, the agar plates are left to
stand in diffuse daylight for 1 d to 2 d.
4.3 Colonies/propagules are then counted and, if required (to distinguish yeast colonies from bacterial
colonies), the identity of any doubtful colonies is confirmed by examination with a binocular magnifier or
microscope.
4.4 The number of yeasts and moulds per gram or per millilitre of sample is calculated from the number of
colonies/propagules/germs obtained on plates chosen at dilution levels producing countable colonies. Moulds
and yeasts are counted separately, if necessary.
2 © ISO 2008 – All rights reserved

5 Diluent and culture medium
For current laboratory practice, see ISO 6887 (all parts) and ISO 8261.
5.1 Diluent
5.1.1 General
See ISO 6887 (all parts), ISO 8261 and the specific International Standard dealing with the product
concerned.
1)
NOTE It is possible to add surface-active agents such as sodium poly(oxyethylene)sorbatitanmonooleate [0,05 %
(mass concentration)] to diluents to reduce clumping of mould spores and conidia (Reference [2]).
Except for specific preparation of the test sample, the use of 0,1 % (mass concentration) peptone water broth
as diluent is recommended.
5.1.2 Composition of 0,1 % (mass concentration) peptone water broth
Enzymatic digest of animal or vegetal tissues 1,0 g
Water 1 000 ml
5.1.3 Preparation of 0,1 % (mass concentration) peptone water broth
Dissolve the components in the water, by heating if necessary.
If necessary, adjust the pH so that, after sterilization, it is 7,0 ± 0,2 at 25 °C.
5.2 Culture medium
5.2.1 Dichloran-rose bengal chloramphenicol agar (DRBC) (References [3], [4])
5.2.1.1 Composition
Enzymatic digest of animal and plant tissues 5,0 g
D-Glucose (C H O) 10,0 g
6 12 6
Potassium dihydrogenphosphate (KH PO) 1,0 g
2 4
Magnesium sulfate (MgSO · HO) 0,5 g
4 2
Dichloran (2,6-dichloro-4-nitroaniline) 0,002 g
Rose bengal 0,025 g
a
Agar 12 g to 15 g
Chloramphenicol 0,1 g
Water, distilled or deionized 1 000 ml
a
Depending on the gel strength of the agar.

1) Tween 80 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of
users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
5.2.1.2 Preparation
5.2.1.2.1 General
Suspend all the ingredients except chloramphenicol in the water and bring to the boil to dissolve completely. If
necessary, adjust the pH (6.4) so that after sterilization it is 5,6 ± 0,2 at 25 °C.
Add 10 ml of a 1 % (mass concentration)
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 21527-1
Première édition
2008-07-01
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour le dénombrement des
levures et moisissures —
Partie 1:
Technique par comptage des colonies
dans les produits à activité d'eau
supérieure à 0,95
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of yeasts and moulds —
Part 1: Colony count technique in products with water activity greater
than 0,95
Numéro de référence
©
ISO 2008
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2008
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2008 – Tous droits réservés

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 21527-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9,
Microbiologie.
L'ISO 21527 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Méthode horizontale pour le dénombrement des levures et moisissures:
⎯ Partie 1: Technique par comptage des colonies dans les produits à activité d'eau supérieure à 0,95
⎯ Partie 2: Technique par comptage des colonies dans les produits à activité d'eau inférieure ou égale
à 0,95
La présente partie de l'ISO 21527, conjointement avec l'ISO 21527-2, annule et remplace l'ISO 7698:1990,
l'ISO 7954:1987 et l'ISO 13681:1995.
Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, il est possible que l'application de la méthode
horizontale spécifiée dans l'ISO 21527 (toutes les parties) ne soit pas appropriée à certains produits. Dans ce
cas, il est possible d'employer des méthodes différentes, spécifiques à ces produits, si cela est absolument
nécessaire pour des raisons techniques justifiées. Néanmoins, tous les efforts doivent être faits pour appliquer
la méthode horizontale, comme spécifié dans l'ISO 21527 (toutes les parties), dans la mesure du possible.
Lorsque l'ISO 21527 (toutes les parties) sera réexaminée, il sera tenu compte de toutes les informations
disponibles à ce moment-là, pour estimer dans quelle mesure cette méthode horizontale aura été suivie et les
raisons pour lesquelles il aura été nécessaire d'y déroger dans le cas de produits particuliers.
L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immédiate et, pour certains groupes de produits, des
Normes internationales et/ou des normes nationales, qui ne sont pas conformes à la méthode horizontale
spécifiée dans l'ISO 21527 (toutes les parties), existent peut-être déjà. Il est souhaitable que ces normes
soient modifiées de façon à se conformer à l'ISO 21527 (toutes les parties) lors de leur révision, afin que,
finalement, les seules déviations qui restent soient celles nécessaires pour des raisons techniques bien
établies.
iv © ISO 2008 – Tous droits réservés

NORME INTERNATIONALE ISO 21527-1:2008(F)

Microbiologie des aliments — Méthode horizontale
pour le dénombrement des levures et moisissures —
Partie 1:
Technique par comptage des colonies dans les produits
à activité d'eau supérieure à 0,95
AVERTISSEMENT — Il est essentiel que le dénombrement des moisissures soit effectué avec le plus
grand soin pour protéger l'opérateur et pour empêcher la contamination de l'atmosphère par des
spores de moisissures.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 21527 spécifie une méthode horizontale pour le dénombrement des levures et des
moisissures viables présentes dans les produits destinés à la consommation par l'homme ou à l'alimentation
des animaux, dont l'activité d'eau est supérieure à 0,95 [œufs, viande, produits laitiers (excepté le lait en
poudre), fruits, légumes, pâtes fraîches, etc.], au moyen de la technique par comptage des colonies à
25 °C ± 1 °C (Voir Références [1], [2]).
La présente partie de l'ISO 21527 ne permet pas le dénombrement des spores de moisissures et ne
s'applique pas à l'identification de la flore fongique ou à l'examen des aliments pour la recherche de
mycotoxines. La méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 21527 n'est pas appropriée pour le
dénombrement de champignons résistant à la chaleur, tels que les Byssochlamys fulva ou les Byssochlamys
nivea, présents dans les fruits et légumes en conserve ou en bouteille.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 8261, Lait et produits laitiers — Lignes directrices générales pour la préparation des échantillons pour
essai, de la suspension mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO/TS 11133 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
NOTE Il existe des formes intermédiaires de micro-organismes et la distinction entre une levure (3.1) et une
moisissure (3.2) peut être arbitraire.
3.1
levure
micro-organisme aérobie, mésophile qui, à 25 °C et en utilisant un milieu gélosé dans les conditions décrites
dans la présente partie de l'ISO 21527, se développe à la surface du milieu en formant des colonies (3.4)
présentant le plus souvent un contour régulier et une surface plus ou moins convexe
NOTE Des levures se développant en profondeur, plutôt qu'à la surface, d'un milieu peuvent former des colonies
rondes et lenticulaires.
3.2
moisissure
micro-organisme aérobie, mésophile filamenteux qui, à la surface d'un milieu gélosé et dans les conditions
décrites dans la présente partie de l'ISO 21527, développe habituellement des propagules/germes (3.3)
plats ou duveteux ou des colonies (3.4) présentant souvent des fructifications colorées et des formes de
sporulation
NOTE Des moisissures se développant en profondeur, plutôt qu'à la surface, d'un milieu peuvent former des colonies
rondes et lenticulaires.
3.3
propagule
germe
entité viable, capable de se développer dans un milieu nutritif
EXEMPLE Cellule végétative, groupe de cellules, spore, groupe de spores ou morceau de mycélium fongique.
[ISO 6107-6:2004, 65]
3.4
colonie
accumulation visible localisée de masse microbienne développée sur ou dans un milieu nutritif solide à partir
d'une cellule viable
[ISO 6107-6:2004, 15]
4 Principe
4.1 Des boîtes de Petri préparées en utilisant un milieu de culture sélectif défini sont ensemencées. En
fonction du nombre de colonies attendu, une quantité spécifique de l'échantillon pour essai (si le produit est
liquide) ou de la suspension mère (dans le cas d'autres produits) ou des dilutions décimales de
l'échantillon/suspension sont utilisées.
Des boîtes supplémentaires peuvent être ensemencées dans les mêmes conditions; en utilisant des dilutions
décimales obtenues à partir de l'échantillon pour essai ou de la suspension mère.
4.2 Les boîtes sont ensuite mises à incuber en aérobiose à 25 °C ± 1 °C pendant cinq jours. Puis, si
nécessaire, les boîtes de gélose sont laissées au repos à la lumière du jour pendant un jour à deux jours.
4.3 Les colonies/propagules sont alors comptées et, si nécessaire (pour distinguer les colonies de levures
des colonies de bactéries), l'identité des colonies douteuses est confirmée par examen à la loupe binoculaire
ou au microscope.
4.4 Le nombre de levures et de moisissures par gramme ou par millilitre d'échantillon est calculé à partir du
nombre de colonies/propagules/germes obtenus sur les boîtes choisies à des taux de dilution permettant
d'obtenir des colonies pouvant être dénombrées. Les moisissures et les levures sont comptées séparément,
si nécessaire.
2 © ISO 2008 – Tous droits réservés

5 Diluant et milieu de culture
Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir l'ISO 6887 (toutes les parties) et l'ISO 8261.
5.1 Diluant
5.1.1 Généralités
Voir l'ISO 6887 (toutes les parties), l'ISO 8261 et la Norme internationale spécifique portant sur le produit
concerné.
NOTE Il est possible d'ajouter des agents tensioactifs, tels que le poly(oxyéthylène) sorbitan monooléate [par
1)
exemple Tween 80 ] (0,05 %, concentration en masse) pour réduire l'agglutination des spores de moisissures et des

conidies (Référence [2]).
Sauf dans le cas d'une préparation spécifique de l'échantillon pour essai, il est recommandé d'utiliser de l'eau
peptonée à 0,1 % (concentration en masse) comme diluant.
5.1.2 Composition de l'eau peptonée à 0,1 % (concentration en masse)
Digestat enzymatique de tissus animaux et végétaux 1,0 g
Eau 1 000 ml
5.1.3 Préparation de l'eau peptonée à 0,1 % (concentration en masse)
Dissoudre les composants dans l'eau, en chauffant si nécessaire.
Si nécessaire, ajuster le pH de manière qu'après stérilisation celui-ci soit de 7,0 ± 0,2 à 25 °C.
5.2 Milieu de culture
5.2.1 Dichloran rose bengal chloramphenicol agar (DRBC) (gélose dichloran-rose bengale-
chloramphénicol) (Références [3], [4])
5.2.1.1 Composition
Digestat enzymatique de tissus animaux et végétaux 5,0 g
D-Glucose (C H O) 10,0 g
6 12 6
Phosphate monopotassique (KH PO) 1,0 g
2 4
Sulfate de magnésium (MgSO , HO) 0,5 g
4 2
Dichloran (2,6-dichloro-4-nitroaniline) 0,002 g
Rose bengale 0,025 g
a
Gélose 12 g à 15 g
Chloramphénicol 0,1 g
Eau, distillée ou déionisée 1 000 ml
a
En fonction du pouvoir gélifiant de la gélose.

1) Tween 80 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention
des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi
exclusif du produit ainsi désigné. Des produits équivalents peuvent être utilisés s'il est démontré qu'ils conduisent aux
mêmes résultats.
5.2.1.2 Préparation
5.2.1.2.1 Généralités
5.2.1.2.1 Mettre tous les ingrédients, excepté le chloramphénicol, en suspension dans l'eau et porter à
ébullition pour dissoudre complètement. Si nécessaire, ajuster le pH (6.4), de sorte qu'après stérilisation, il
soit de 5,6 ± 0,2 à 25 °C.
Ajou
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 21527-1
Первое издание
2008-07-01
Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных.
Горизонтальный метод подсчета
дрожжевых и плесневых грибов.
Часть 1.
Методика подсчета колоний в
продуктах, активность воды в которых
больше 0,95
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
the enumeration of yeasts and moulds —
Part 1: Colony count technique in products with water activity greater
than 0,95
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2008
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

©  ISO 2008
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO по соответствующему адресу, указанному ниже, или комитета-члена ISO в стране
заявителя.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2008 – Все права сохраняются

Предисловие
Международная организация по стандартизации ISO является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в
этом комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие
связи с ISO, также принимают участие в работах. ISO осуществляет тесное сотрудничество с
международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам стандартизации в области
электротехники.
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Обращается внимание на возможность патентования некоторых элементов данного международного
стандарта. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо или всех таких патентных
прав.
ISO 21527-1 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом
SC 9, Микробиология.
ISO 21527 состоит из следующих частей под общим заглавием Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета дрожжевых и плесневых грибов:
 Часть 1. Методика подсчета колоний в продуктах, активность воды в которых больше 0,95
 Часть 2. Методика подсчета колоний в продуктах, активность воды в которых меньше или
равна 0,95
Эта часть ISO 21527, вместе с ISO 21527-2, отменяет и заменяет ISO 7698:1990, ISO 7954:1987 и
ISO 13681:1995.
Введение
Ввиду большого разнообразия пищевых и кормовых продуктов применение горизонтального метода,
установленного в ISO 21527 (все части), может не соответствовать отдельным продуктам. В таком
случае можно использовать другие методы, которые соответствуют этим продуктам, если это
абсолютно необходимо по обоснованным техническим причинам. Тем не менее, по возможности
должны быть опробованы все средства для применения горизонтального метода, установленного в
ISO 21527 (все части).
При последующем пересмотре ISO 21527 (все части) будет учтена вся имеющаяся информация
относительно применения данного метода и причин отклонения от него для конкретных продуктов.
Гармонизация методов испытания не может быть обеспечена немедленно, и для некоторых групп
продуктов уже могут существовать международные стандарты и/или национальные стандарты,
которые не соответствуют горизонтальному методу, установленному в ISO 21527 (все части).
Выражается надежда, что при пересмотре таких стандартов они будут приведены в соответствие с
ISO 21527 (все части), чтобы, в конце концов, единственными остающимися отклонениями от этого
горизонтального метода были только те, которые необходимы по хорошо установленным техническим
причинам.
iv © ISO 2008 – Все права сохраняются

МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 21527-1:2008(R)

Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных. Горизонтальный метод подсчета дрожжевых и
плесневых грибов.
Часть 1.
Методика подсчета колоний в продуктах, активность воды
в которых больше 0,95
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ − Подсчет плесневых грибов следует проводить с большой осторожностью
для обеспечения защиты оператора и предотвращения загрязнения атмосферы плесневыми
спорами.
1 Область применения
В этой части ISO 21527 устанавливается горизонтальный метод для определения количества
жизнеспособных дрожжевых и плесневых грибов в продуктах с активностью воды больше 95 %,
предназначенных для потребления человеком или для кормления животных [яйца, мясо, порошковые
продукты (кроме сухого молока), фрукты, овощи, свежая паста и др.], посредством подсчета колоний
при 25 °C ± 1 °C (Ссылки [1], [2]).
В этой части ISO 21527 не определяется подсчет спор плесневых грибов. Идентификация грибковой
флоры и испытание пищевых продуктов на микотоксины не относятся к области применения
настоящей части ISO 21527. Метод, установленный в данной части ISO 21527, не пригоден для
подсчета теплостойких грибов, таких как Byssochlamys fulva или Byssochlamys nivea, в
консервированных фруктах и овощах в банках или бутылках.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 6887 (все части), Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для
испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
руководство для микробиологических исследований
ISO 8261, Молоко и молочные продукты. Общие правила приготовления проб для анализа, исходных
суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований
ISO/TS 11133 (все части), Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Правила
приготовления и производства питательных сред
3 Термины и определения
Применительно к этому документу используются следующие термины и определения.
ПРИМЕЧАНИЕ Некоторые промежуточные формы и различия между дрожжевым грибом (3.1) и плесневым
грибом (3.2) могут быть произвольными.
3.1
дрожжевой гриб
yeast
мезофильный аэробный микроорганизм, который при 25 °C в условиях, описанных в этой части
ISO 21527, образует на поверхности микологической агаровой среды матовые или блестящие
округлые колонии (3.4), обычно имеющие ровные очертания либо более или менее выпуклую
поверхность
ПРИМЕЧАНИЕ Дрожжевые грибы внутри среды, а не на поверхности, образуют круглые, чечевицеобразные,
колонии.
3.2
плесневый гриб
mould
мезофильный аэробный нитевидный микроорганизм, который на поверхности микологической
агаровой среды в условиях, описанных в этой части ISO 21527, обычно образует гладкие или
ворсистые раскидистые пропагулы/зародыши (3.3) или колонии (3.4), часто с окрашенными
плодоносными или спороносными структурами.
ПРИМЕЧАНИЕ Плесневые грибы внутри среды, а не на поверхности, образуют круглые, чечевицеобразные, колонии.
3.3
пропагула (росток)
зародыш
propagule
germ
жизнеспособный организм, растущий в питательной среде
ПРИМЕР Вегетативная клетка, группа клеток, спора, скопление спор или часть мицелия (грибницы).
[ISO 6107-6:2004, 65]
3.4
колония
colony
локализованное видимое скопление микробной массы, образованное на или в твердой питательной
среде из жизнеспособной частицы
[ISO 6107-6:2004, 15]
4 Принцип
4.1 Приготовляют поверхностно-инокулированные пластины, используя установленную селективную
культуральную (питательную) среду. В зависимости от ожидаемого количества колоний используют
заданное количество пробы (если продукт жидкий) или исходной суспензии (в случае других
продуктов) или десятикратных разведений пробы/суспензии.
Дополнительные пластины можно приготовить при тех же условиях, используя десятикратные
разведения испытательного образца или исходной суспензии.
4.2 Затем пластины аэробно инкубируют при 25 °C ± 1 °C в течение 5 дней. Если необходимо,
пластины оставляют при дневном рассеянном свете на период от 1 до 2 дней.
4.3 Колонии/пропагулы затем подсчитывают и, если необходимо (чтобы различать колонии
дрожжевых грибов от бактериальных колоний), идентичность любых сомнительных колоний
подтверждают посредством исследования с помощью бинокулярной лупы или микроскопа.
2 © ISO 2008 – Все права сохраняются

4.4 Количество дрожжевых или плесневых грибов на грамм или миллилитр пробы рассчитывают из
количества колоний/пропагул/зародышей, полученных на пластинах при уровнях разбавления, дающих
исчисляемые колонии. При необходимости плесневые и дрожжевые грибы подсчитывают по отдельности.
5 Разбавитель и культуральная среда
О современной лабораторной практике см. ISO 6887 (все части) и ISO 8261.
5.1 Разбавитель
5.1.1 Общие вопросы
См. ISO 6887 (все части), ISO 8261 и конкретный международный стандарт, касающийся исследуемого продукта.
ПРИМЕЧАНИЕ К разбавителям можно добавить поверхностно-активные агенты, например натрий
1)
поли(оксиэтилен)сорбатианмоноолеат [0,05 % (массовая концентрация)], для уменьшения скопления плесневых
спор и конидий (Ссылка [2]).
Помимо специального приготовления испытательного образца рекомендуется использовать в качестве
разбавителя 0,1 %-ную пептонную воду (массовая концентрация) с питательным бульоном.
5.1.2 Состав 0,1 %-ной пептонной воды (массовая концентрация) с питательным бульоном
Ферментный гидролизат животных или растительных тканей 1,0 г
Вода 1 000 мл
5.1.3 Приготовление 0,1 %-ной пептонной воды (массовая концентрация) с питательным бульоном
Растворяют компоненты в воде, нагревая при необходимости.
Если необходимо, регулируют pH, так чтобы после стерилизации он был 7,0 ± 0,2 при 25 °C.
5.2 Культуральная среда
5.2.1 Агар с дихлораном, бенгальским розовым и хлорамфениколом (DRBC) (Ссылки [3], [4])
5.2.1.1 Состав
Ферментный гидролизат животных и растительных тканей 5,0 г
D-Глюкоза (C H O) 10,0 г
6 12 6
Дигидрофосфат калия (KH PO) 1,0 г
2 4
Сульфат магния (MgSO · HO) 0,5 г
4 2
Дихлоран (2,6-дихлор-4-нитроанилин) 0,002 г
Бенгальский розовый 0,025 г
a
Агар 12 г до 15 г
Хлорамфеникол 0,1 г
Вода, дистиллированная или деионизированная 1 000 мл
a
В зависимости от прочности студня агара.

1) Tween 80 является примером подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства
пользователей данного международного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO.
5.2.1.2 Приготовление
5.2.1.2.1 Общее положение
Суспендируют в воде все ингредиенты, кроме хлорамфеникола, и доводят до кипения для полного
растворения. При необходимости регулируют p
...