ISO 19001:2002
(Main)In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology
In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology
ISO 19001:2002 specifies requirements for information supplied by the manufacturer with reagents used in staining in biology. It applies to producers, suppliers and vendors of dyes, stains, chromogenic reagents and other reagents used for staining in biology. The requirements for information supplied by the manufacturer specified in ISO 19001:2002 are a prerequisite for achieving comparable and reproducible results in all fields of staining in biology.
Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro — Informations fournies par le fabricant avec les réactifs de coloration de diagnostic in vitro utilisés en biologie
L'ISO 19001:2002 spécifie des exigences relatives aux informations fournies par le fabricant et applicables aux colorants utilisés en biologie. Elle s'adresse aux fabricants, fournisseurs et distributeurs de teintures, colorants, réactifs chromogènes et autres réactifs de coloration utilisés en biologie. Les exigences relatives aux informations fournies par le fabricant et spécifiées dans l'ISO 19001:2002 constituent une condition préalable à l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans le domaine des colorations biologiques.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 19001
First edition
2002-11-15
In vitro diagnostic medical devices —
Information supplied by the manufacturer
with in vitro diagnostic reagents for
staining in biology
Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro — Informations fournies par le
fabricant avec les réactifs de coloration de diagnostic in vitro utilisés en
biologie
Reference number
ISO 19001:2002(E)
©
ISO 2002
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ISO 19001:2002(E)
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ISO 19001:2002(E)
Contents Page
Foreword . iv
Introduction. v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 1
4 Requirements for information supplied by the manufacturer. 3
Annex A (informative). 6
Bibliography. 16
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ISO 19001:2002(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards adopted
by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this International Standard may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 19001 was prepared by Technical Committee ISO/TC 212, Clinical laboratory testing and in vitro diagnostic
test systems.
Annex A of this International Standard is for information only.
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ISO 19001:2002(E)
Introduction
This International Standard relates to EN 375 and EN 376 and should be used in conjunction with these.
The use of reagents required for staining in biology as well as the specific examples of information supplied by the
manufacturer for four staining procedures as provided in annex A are based on a European consensus; they
constitute the scientific justification for the requirements listed in clause 4. This information is to assist
manufacturers, suppliers and vendors of dyes, stains, chromogenic reagents and other reagents used for staining
in biology in complying with the required specific product data.
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 19001:2002(E)
In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the
manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in
biology
1 Scope
This International Standard specifies requirements for information supplied by the manufacturer with reagents used
in staining in biology. It applies to producers, suppliers and vendors of dyes, stains, chromogenic reagents and
other reagents used for staining in biology. The requirements for information supplied by the manufacturer
specified in this International Standard are a prerequisite for achieving comparable and reproducible results in all
fields of staining in biology.
2 Normative references
The following normative documents contain provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this International Standard. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, any of these
publications do not apply. However, parties to agreements based on this International Standard are encouraged to
investigate the possibility of applying the most recent editions of the normative documents indicated below. For
undated references, the latest edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC
maintain registers of currently valid International Standards.
ISO 31-8, Quantities and units — Part 8: Physical chemistry and molecular physics
ISO 1000, SI units and recommendations for the use of their multiples and of certain other units
EN 375, Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for professional use
EN 376, Information supplied by the manufacturer with in vitro diagnostic reagents for self-testing
3 Terms and definitions
For the purposes of this International Standard, the following terms and definitions apply.
3.1
information supplied by the manufacturer
all printed, written, graphic or other information annexed to, or accompanying an in vitro diagnostic reagent
3.2
label
any printed, written or graphic information placed on a container
[EN 375]
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ISO 19001:2002(E)
3.3
in vitro diagnostic reagent
reagent that, used alone or in combination with other in vitro diagnostic medical devices, is intended by the
manufacturer to be used in vitro for examination of substances derived from human, animal or plant sources, for
providing information relevant to the detection, diagnosis, monitoring or treatment of physiological states, states of
health or disease, or congenital abnormality
3.4
staining
impartment of colour to a material by means of reaction with a stain or chromogenic reagent
3.5
dye
coloured organic compound that, when dissolved in a suitable solvent, can impart colour to a material
NOTE The physical origin of colour is the selective absorbance (and/or emission) in the visible region of the
electromagnetic spectrum between 400 nm and 800 nm. Dyes are molecules with large systems of delocalized electrons
(conjugated π-electronic system). The light absorbance characteristics of dyes are displayed by absorbance spectra, resulting
from plotting absorbance of light against wavelength. The shape of the spectra and the wavelength at maximum absorbance
depend on the chemical structure of the dye, the solvent and on the conditions of the spectral measurements.
3.6
stain
solution of one or more dyes at defined concentrations in a defined solvent used for staining
NOTE The stain can be prepared by directly dissolving the dye in the solvent or by dilution of a stock solution with suitable
agents.
3.6.1
stock solution of stain
stable defined solution of one or more dyes at a higher concentration than that used for staining
NOTE Stability refers to constant properties of the dye even in the presence of other dyes.
3.7
chromogenic reagent
reagent that reacts with certain chemical groups present or induced in cells and tissues with the formation of a
coloured compound in situ
EXAMPLE A typical chromogenic reagent is:
a) diazonium salt;
b) Schiff ’s reagent.
3.8
fluorochrome
reagent that emits visible light when irradiated with excitation light of a shorter wavelength
3.9
antibody
specific immunoglobulin formed by B-lymphocytes in response to exposure to an immunogenic substance and able
to bind to this
NOTE The molecule of an immunogenic substance contains one or more parts with a characteristic chemical composition,
an epitope.
3.9.1
polyclonal antibody
mixture of antibodies capable of reacting specifically with a certain immunogenic substance
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ISO 19001:2002(E)
3.9.2
monoclonal antibody
antibody capable of reacting specifically with a single epitope of a certain immunogenic substance
3.10
nucleic acid probe
single stranded oligonucleotide or polynucleotide of defined length complementary to specific sequences of
nucleotides in nucleic acids
3.11
lectin
protein of non-immunogenic origin with two or more binding sites that recognize and bind to specific saccharide
residues
4 Requirements for information supplied by the manufacturer
4.1 General requirements
4.1.1 Information supplied by the manufacturer with reagents used for staining in biology
Information supplied by the manufacturer with reagents used for staining in biology shall be in accordance with
ISO 31-8, ISO 1000, EN 375 and EN 376. Special attention shall be given to cautionary statements as given in
EN 375. Furthermore, where relevant, the requirements as specified in 4.1.2, 4.1.3 and 4.1.4 shall be met for the
various reagents used for staining in biology.
4.1.2 Product name
The product name shall include CAS-registry number and Colour Index name and number, where applicable.
NOTE 1 CAS-registry numbers are the Chemical Abstracts Service registry numbers. These are unique numerical code
numbers assigned to chemical substances indexed by Chemical Abstracts.
NOTE 2 The Colour Index gives a 5-digit number, the C.I. number and a specially constructed name to most dyes.
4.1.3 Description of reagent
The description of the reagent shall include appropriate physico-chemical data accompanied by relevant data
sheets for each batch. The data shall contain at least the following information:
a) the molecular formula including counter-ion;
b) the molar mass (g/mol) clearly stating whether this is with or without counter-ion;
c) the permissible limits of interfering substances.
For coloured organic compounds, the data shall also contain:
d) the molar absorbance (this can be substituted by content of the pure dye molecule but not by content of total
dye);
e) the wavelength or wave number at maximum absorbance;
f) thin layer chromatographic, high performance liquid chromatographic, or high performance thin layer
chromatographic data.
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ISO 19001:2002(E)
4.1.4 Intended use
A description shall be provided giving guidelines for staining in biology and for qualitative and quantitative
procedures (if applicable). This shall include information on:
a) type(s) of biological material and handling and treatment before staining, e.g.:
1) whether cell or tissue samples or both can be used;
2) whether frozen or chemically-fixed material or both can be used;
3) protocol for tissue processing;
4) which embedding media can be used;
b) details of a suitable reaction procedure used by the manufacturer for testing the reactivity of the dye, stain,
chromogenic reagent, fluorochrome, antibody, nucleic acid probe or lectin used for staining in biology;
c) result(s) expected when using the reaction procedure on the suggested type(s) of material in the way outlined
by the manufacturer;
d) notes on suitable positive and negative control tissue and on interpretation of the result(s);
e) references to published results obtained using the product in the way suggested by the manufacturer.
4.2 Additional requirements for specific kinds of reagent
4.2.1 Fluorochromes
Independent of the type of application, fluorochromes offered for staining in biology shall be accompanied by the
following information:
a) selectivity, i.e., a description of the target(s) which may be demonstrated using the conditions specified;
b) excitation and emission wavelengths;
c) for fluorochromes conjugated to antibodies, the ratio of fluorochrome/protein (F/P).
4.2.2 Metal salts
When offering metal compounds for use in metal uptake procedures in staining in biology, the following additional
information shall be included:
a) the systematic name;
b) purity.
4.2.3 Antibodies
Antibodies offered for staining in biology shall be accompanied by the following information:
a) a description of the antigen (immunogenic substance) against which the antibody was raised, and if the
antigen is defined by the cluster of differentiation systems, a CD number. This description shall contain, as
appropriate, the type of (macro)molecule detected, which part of the molecule has been detected, its cellular
localization, and in which cells and/or tissues it is found, and any cross reactivity with other epitopes;
b) for monoclonal antibodies, clone, method of production (tissue culture supernatant or ascitic fluid),
immunoglobulin subclass and light chain identity;
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c) for polyclonal antibodies, animal host and whether whole serum or gammaglobulin fraction is used;
d) a description of form (solution or lyophilized powder), amount of total protein and specific antibody and, if in
solution, the nature and concentration of diluent or medium;
e) if applicable, a description of any molecular linkers or extenders added to the antibody;
f) a declaration of purity, purification techniques and detection methods for impurity (e.g. Western blotting,
immunohistochemistry);
g) appropriate references to publications dealing with application of the antibody.
4.2.4 Nucleic acid probes
Nucleic acid probes offered for staining in biology shall be accompanied by the following information:
a) the base sequence and whether the probe is double- or single-stranded;
b) the molar mass of the probe or the number of bases and, if applicable, the number fraction (in percent) of
guanine-cytosine base pairs;
c) marker used (radioactive isotope or non-radioactive molecule); for non-radioactive markers, point(s) of
attachment to the probe (3' and/or 5') and substance fraction in percent of probe marked;
d) the target gene (DNA or RNA sequence) detected;
e) a description of form (lyophilized powder or solution) and amount (pg or pmol) or concentration (pg/ml or
pmol/ml) as appropriate and if in solution, the nature and concentration of diluent or medium;
f) a declaration of purity, purification techniques and detection methods for impurity, e.g. HPLC (high
performance liquid chromatography);
g) appropriate references to publications dealing with the source description of DNA sequence, existence of any
known patents and information on application of the nucleic acid probe.
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ISO 19001:2002(E)
Annex A
(informative)
Examples of information supplied by the manufacturer with reagents
commonly used in biological staining procedures
A.1 General
The following information is provided as examples of procedures and should not be considered as the only way the
procedures described can be carried out. These procedures could be used by the manufacturer to test the
reactivity of the dyes, and illustrates how the manufacturer may present the information in order to conform to this
International Standard.
A.2 Methyl green-pyronin Y stain
A.2.1 Methyl green dye
Information concerning methyl green dye is the following.
a) Product identity:
methyl green (synonyms: double green SF, light green);
CAS-registry number: 22383-16-0;
Colour Index name and number: basic blue 20, 42585.
b) Composition:
2+ −
molecular formula including counter ion: C H N 2BF ;
26 33 3 4
−1 −1
molar mass with (and without) counter ion: 561,17 g mol , (387,56 g mol );
mass fraction (content) of methyl green cation: 85 %, determined by absorption spectrometry;
permissible limits of interfering substances all given as mass fractions:
1) water: less than 1 %;
2) inorganic salts: less than 0,1 %;
3) detergents: not present;
4) coloured impurities including crystal violet: not detectable by thin layer chromatography;
5) indifferent compounds: 14 % soluble starch.
c) Wavelength of maximum absorbance of dye solution: 633 nm.
d) Thin layer chromatography: only one major component present consistent with methyl green.
e) Handling and storage: stable when kept in a tightly stoppered brown glass bottle at room temperature
(18 °C to 28 °C).
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ISO 19001:2002(E)
A.2.2 Ethyl green dye
Information concerning ethyl green dye is the following.
a) Product identity:
1) ethyl green (synonym: methyl green).
2) CAS-registry number: 7114-03-6.
3) Colour Index name and number: no Colour Index name, 42590.
b) Composition:
2+ −
1) molecular formula including counter ion: C H N 2 BF ;
27 35 3 4
−1 −1
2) molar mass with (and without) counter ion: 575,19 g mol (401,58 g mol );
3) mass fraction of ethyl green cation: 85 %, determined by absorption spectrometry;
4) permissible limits of interfering substances all given as mass fractions:
water: less than 1 %;
inorganic salts: less than 0,1 %;
detergents: not present;
coloured impurities including crystal violet: not detectable by thin layer chromatography;
indifferent compounds: 14 % soluble starch.
c) Wavelength of maximum absorbance of dye solution: 633 nm.
d) Thin layer chromatography: only one major component present consistent with ethyl green.
e) Handling and storage: stable when kept in a tightly stoppered brown glass bottle at room temperature
(18 °C to 28 °C).
A.2.3 Pyronin Y dye
Information concerning pyronin Y dye is the following.
a) Product identity:
1) pyronin Y (synonyms: pyronine Y, pyronin G, pyronine G);
2) CAS-registry number: 92-32-0;
3) Colour Index name and number: no Colour Index name, 45005.
b) Composition:
+ −
1) molecular formula including counter ion: C H N O Cl ;
17 19 2
−1 −1
2) molar mass with (and without) counter ion: 302,75 g mol (267,30 g mol );
3) mass fraction of pyronin Y cation: 80 %, determined by absorption spectrometry;
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ISO 19001:2002(E)
4) permissible limits of interfering substances all given as mass fractions:
water: less than 1 %;
inorganic salts: less than 0,1 %;
detergents: not present;
coloured impurities: not detectable by thin layer chromatography;
indifferent compounds: 19 % soluble starch.
c) Wavelength of maximum absorbance of dye solution: 550 nm.
d) Thin layer chromatography: only one major component present consistent with pyronin Y.
e) Handling and storage: stable
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 19001
Première édition
2002-11-15
Dispositifs médicaux de diagnostic in
vitro — Informations fournies par le
fabricant avec les réactifs de coloration
de diagnostic in vitro utilisés en biologie
In vitro diagnostic medical devices — Information supplied by the
manufacturer with in vitro diagnostic reagents for staining in biology
Numéro de référence
ISO 19001:2002(F)
©
ISO 2002
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ISO 19001:2002(F)
PDF – Exonération de responsabilité
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Web www.iso.org
Version française parue en 2010
Publié en Suisse
ii © ISO 2002 – Tous droits réservés
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ISO 19001:2002(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Exigences relatives aux informations fournies par le fabricant.3
Annexe A (informative) Exemples d'informations fournies par le fabricant avec les réactifs
communément utilisés dans les modes opératoires de coloration biologique.6
Bibliographie.17
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ISO 19001:2002(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 19001 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 212, Laboratoires d'analyses de biologie
médicale et systèmes de diagnostic in vitro.
L'Annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement à titre informatif.
iv © ISO 2002 – Tous droits réservés
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 19001:2002(F)
Introduction
La présente Norme internationale se rattache à l'EN 375 et à l'EN 376, et il convient de l'utiliser conjointement
avec celles-ci.
L'utilisation des colorants requis en biologie ainsi que les exemples spécifiques d'informations fournis par le
fabricant sur quatre techniques de coloration présentées dans l'Annexe A reposent sur un consensus
européen et constituent le support scientifique des exigences énumérées dans l'Article 4. Ces informations
ont pour objet d'aider les fabricants, les fournisseurs et les distributeurs de teintures, colorants, réactifs
chromogènes et autres colorants utilisés en biologie à satisfaire aux exigences spécifiques requises pour ces
produits.
© ISO 2002 – Tous droits réservés v
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NORME INTERNATIONALE ISO 19001:2002(F)
Dispositifs médicaux de diagnostic in vitro — Informations
fournies par le fabricant avec les réactifs de coloration de
diagnostic in vitro utilisés en biologie
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie des exigences relatives aux informations fournies par le fabricant et
applicables aux colorants utilisés en biologie. Elle s'adresse aux fabricants, fournisseurs et distributeurs de
teintures, colorants, réactifs chromogènes et autres réactifs de coloration utilisés en biologie. Les exigences
relatives aux informations fournies par le fabricant et spécifiées dans la présente Norme internationale
constituent une condition préalable à l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans le domaine
des colorations biologiques.
2 Références normatives
Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite,
constituent des dispositions valables pour la présente Norme internationale. Pour les références datées, les
amendements ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s'appliquent pas. Toutefois, les parties
prenantes aux accords fondés sur la présente Norme internationale sont invitées à rechercher la possibilité
d'appliquer les éditions les plus récentes des documents normatifs indiqués ci-après. Pour les références non
datées, la dernière édition du document normatif en référence s'applique. Les membres de l'ISO et de la CEI
possèdent le registre des Normes internationales en vigueur.
ISO 31-8, Grandeurs et unités — Partie 8: Chimie physique et physique moléculaire
ISO 1000, Unités SI et recommandations pour l'emploi de leurs multiples et de certaines autres unités
EN 375, Informations fournies par le fabricant avec les réactifs de diagnostic in vitro pour usage professionnel
EN 376, Informations fournies par le fabricant de réactifs pour le diagnostic in vitro pour l'utilisation comme
auto-test
3 Termes et définitions
Pour les besoins de la présente Norme internationale, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
informations fournies par le fabricant
élément écrit, imprimé ou graphique ou toute autre information annexée à ou accompagnant un réactif de
diagnostic in vitro
3.2
étiquette
élément écrit, imprimé ou graphique apposé sur un conteneur
[EN 375]
© ISO 2002 – Tous droits réservés 1
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ISO 19001:2002(F)
3.3
réactif de diagnostic in vitro
réactif DIV
réactif qui, utilisé seul ou en combinaison avec d'autres dispositifs médicaux de diagnostic in vitro, est destiné
par le fabricant à être utilisé in vitro pour l'examen de substances dérivées de l'Homme, de l'animal ou de
sources végétales pour fournir des informations pertinentes sur la détection, le diagnostic, le monitorage ou le
traitement des états physiologiques, des états de santé ou de maladie, ou de malformation congénitale
3.4
coloration
action de conférer une couleur à un matériau en le faisant réagir avec un colorant ou un réactif chromogène
3.5
teinture
composé organique coloré qui, après dissolution dans un solvant approprié, peut conférer une couleur à un
matériau
NOTE L'origine physique de la couleur est l'absorbance sélective (et/ou l'émission) dans la région visible du spectre
électromagnétique entre 400 nm et 800 nm. Les teintures sont des molécules avec de larges systèmes d'électrons
délocalisés (systèmes d'électrons π conjugués). Les caractéristiques d'absorbance de la lumière des teintures sont
données par un spectre d'absorbance, résultant d'un graphique de l'absorbance de la lumière en fonction de la longueur
d'onde. La forme du spectre et la longueur d'onde à l'absorbance maximale dépendent de la structure chimique de la
teinture, du solvant et des conditions de mesure spectrales.
3.6
colorant
solution d'une ou plusieurs teintures à des concentrations définies dans un solvant déterminé utilisée pour
effectuer une coloration
NOTE Le colorant peut être préparé soit en dissolvant directement la teinture dans le solvant, soit en diluant une
solution mère avec des produits appropriés.
3.6.1
solution mère de colorant
solution stable définie, composée d'une ou de plusieurs teintures et ayant une concentration supérieure à
celle utilisée pour effectuer une coloration
NOTE Le terme «stabilité» se rapporte au caractère constant des propriétés de la teinture, et ce même en présence
d'autres teintures.
3.7
réactif chromogène
réactif qui réagit avec certains groupes chimiques présents ou apportés dans les cellules et tissus pour former
in situ un composé coloré
EXEMPLE Un réactif chromogène type est:
a) sel de diazonium;
b) réactif de Schiff.
3.8
fluorochrome
réactif qui émet une lumière visible lorsqu'il est excité par une lumière de courte longueur d'onde
3.9
anticorps
immunoglobuline spécifique produite par les lymphocytes B en réponse à l'exposition à une substance
immunogène et pouvant se combiner avec elle
NOTE La molécule d'une substance immunogène contient un ou plusieurs sites de composition chimique
caractéristique, ou épitope.
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ISO 19001:2002(F)
3.9.1
anticorps polyclonal
mélange d'anticorps pouvant réagir spécifiquement avec une substance immunogène particulière
3.9.2
anticorps monoclonal
anticorps pouvant réagir spécifiquement avec un seul épitope d'une substance immunogène particulière
3.10
sonde nucléique
oligonucléotide ou polynucléotide mono-brin de longueur définie, complémentaire de séquences spécifiques
des nucléotides dans les acides nucléiques
3.11
lectine
protéine ne provenant pas du système immunitaire et ayant au moins deux sites de fixation, qui reconnaît et
se combine à des radicaux spécifiques saccharidiques
4 Exigences relatives aux informations fournies par le fabricant
4.1 Exigences générales
4.1.1 Informations fournies par le fabricant avec les réactifs de coloration utilisés en biologie
Les informations fournies par le fabricant avec les réactifs de coloration utilisés en biologie doivent être
conformes à l'ISO 31-8, l'ISO 1000, l'EN 375 et l'EN 376. Une attention particulière doit être donnée aux
avertissements et mesures de précaution à prendre, mentionnés dans l'EN 375. De plus, si nécessaires, les
exigences telles que spécifiées en 4.1.2, 4.1.3 et 4.1.4 doivent s'appliquer aux divers réactifs de coloration
utilisés en biologie.
4.1.2 Nom du produit
Le nom du produit doit comprendre le numéro CAS, ainsi que le nom et le numéro dans l'index des couleurs,
s'il s'applique.
NOTE 1 Le numéro de registre CAS est le numéro du «Chemical Abstracts Service». Il s'agit de codes numériques
uniques attribués aux substances chimiques indexées par le service Chemical Abstracts.
NOTE 2 L'index des couleurs donne un nombre à 5 chiffres, à savoir le numéro de couleur et un nom de structure
attribué à la plupart des teintures.
4.1.3 Description du produit
La description du réactif doit mentionner les caractéristiques physico-chimiques appropriées accompagnées
des fiches techniques pertinentes relatives à chaque lot. Ces caractéristiques doivent comprendre les
informations suivantes:
a) la formule moléculaire, y compris le contre-ion;
b) la masse moléculaire (g/mol) en indiquant clairement si elle comprend ou non le contre-ion;
c) les limites admissibles de substances interférentes;
Pour les composés organiques colorés, ces caractéristiques doivent également comprendre:
d) l'absorbance molaire (elle peut être remplacée par la teneur en molécule de teinture pure, mais pas par
celle en teinture totale);
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e) la longueur d'onde ou le nombre d'onde pour une absorbance maximale;
f) les résultats d'une analyse chromatographique sur couche mince, d'une analyse chromatographique
haute performance en phase liquide ou haute performance sur couche mince.
4.1.4 Utilisation prévue
Une description doit être fournie donnant les recommandations concernant la coloration en biologie, ainsi que
les méthodes qualitative et quantitative (le cas échéant). Elle doit comporter des informations portant sur
a) le(s) type(s) de matériau biologique, ainsi que la manipulation et le traitement précédant la coloration, par
exemple
1) des échantillons cellulaires ou tissulaires, ou les deux, peuvent être utilisés;
2) un matériau congelé ou chimiquement fixé, ou les deux, peuvent être utilisés;
3) un protocole de traitement des tissus;
4) quels milieux d'inclusion peuvent être utilisés.
b) les détails d'une technique de réaction adaptée, utilisée par le fabricant pour effectuer les essais de
réactivité de la teinture, du colorant, du réactif chromogène, du fluorochrome, de l'anticorps, de la sonde
nucléique ou de la lectine de coloration utilisée en biologie,
c) le(s) résultat(s) attendu(s) lors de l'utilisation de la technique de réaction sur le(s) type(s) de matériau
recommandé(s) selon le mode indiqué dans ses grandes lignes par le fabricant,
d) les renseignements concernant le tissu de contrôle adapté, positif ou négatif, ainsi que l'interprétation du
ou des résultats,
e) les références aux publications des résultats obtenus en utilisant le produit selon les recommandations
du fabricant.
4.2 Exigences supplémentaires relatives à certains types de réactifs
4.2.1 Fluorochromes
Quel que soit leur type d'application, les fluorochromes proposés pour effectuer les colorations en biologie
doivent être accompagnés des informations suivantes:
a) la sélectivité, c'est-à-dire la description du ou des sites susceptibles d'être révélés en utilisant les
conditions spécifiées;
b) les longueurs d'onde d'excitation et d'émission;
c) dans le cas de fluorochromes conjugués à des anticorps, le rapport fluorochrome/protéine (F/P).
4.2.2 Sels métalliques
Lorsque l'on propose d'employer des composés métalliques dans le cadre des méthodes utilisées en biologie
pour effectuer les colorations avec absorption de métaux, les informations complémentaires suivantes doivent
être indiquées:
a) le nom générique;
b) la pureté.
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4.2.3 Anticorps
Les anticorps proposés pour effectuer les colorations en biologie doivent être accompagnés des informations
suivantes:
a) une description de l'antigène (substance immunogène) contre lequel l'anticorps est dirigé et un numéro
CD, si l'antigène est défini par le marqueur d'une classe de différenciation. Cette description doit indiquer
le type de la (macro)molécule détectée, quelle partie de la molécule a été détectée, sa localisation
cellulaire, dans quels tissus et/ou cellules elle a été trouvée et toute réactivité croisée avec d'autres
épitopes;
b) pour les anticorps monoclonaux, le clone, la méthode de production (surnageant de culture de tissus ou
liquide d'ascite), ainsi que l'identité de la sous-classe d'immunoglobuline et de la chaîne légère;
c) pour les anticorps polyclonaux, l'animal hôte et l'utilisation du sérum non fractionné ou d'une fraction de
γ-globuline;
d) une description de la forme (solution ou poudre lyophilisée) et la quantité de protéines totales et
d'anticorps spécifiques, ainsi que, dans le cas d'une solution, la nature et la concentration du diluant ou
du milieu;
e) une description de tous les transporteurs et agents de liaison ajoutés à l'anticorps;
f) des indications relatives à la pureté, les techniques de purification et les méthodes de détection des
impuretés (par exemple technique du Western blot, révélation immunohistochimique);
g) les références bibliographiques appropriées traitant des applications de l'anticorps.
4.2.4 Sondes nucléiques
Les sondes nucléiques proposées pour effectuer les colorations en biologie doivent être accompagnées des
informations suivantes:
a) la séquence de base et une indication précisant si la molécule est monobrin ou double brin;
b) la masse molaire de la sonde ou le nombre de base et, le cas échéant, la fraction (en pourcentage) de
paires de base guanine-cytosine;
c) le marqueur utilisé (radio-isotope ou molécule froide) et, dans le cas de marqueurs non radioactifs, le ou
les points de fixation de la sonde (3' et/ou 5') et le pourcentage de substance marquée par la sonde;
d) le gène cible (séquence d'ADN ou d'ARN) détecté;
e) une description de la forme (poudre lyophilisée ou solution) et la quantité (pg ou pmol) ou la
concentration (pg/ml ou pmol/ml) et, dans le cas d'une solution, la nature et la concentration du diluant ou
du milieu;
f) des indications relatives à la pureté, les méthodes de purification et de détection des impuretés, par
exemple chromatographie liquide à haute performance (HPLC);
g) les références bibliographiques appropriées traitant de la description de la source de la séquence d'ADN,
l'existence de brevets connus et d'informations sur l'application de la sonde nucléique.
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Annexe A
(informative)
Exemples d'informations fournies par le fabricant
avec les réactifs communément utilisés
dans les modes opératoires de coloration biologique
A.1 Généralités
Les informations suivantes sont présentées à titre d'exemple de modes opératoires et il convient de ne pas
les considérer comme la seule façon d'appliquer les modes opératoires décrits. Ces derniers pourraient être
utilisés par le fabricant pour soumettre à essai la réactivité des teintures et illustrent la manière dont il peut
présenter les informations afin de se conformer à la présente Norme internationale.
A.2 Coloration au vert de méthyle-pyronine Y
A.2.1 Teinture de vert de méthyle
Les informations relatives à la teinture de vert de méthyle sont les suivantes:
a) Nom et description du produit:
1) vert de méthyle (synonymes: vert de méthyle SF, vert clair);
2) numéro CAS: 22383-16-0;
3) nom et numéro de l'index des couleurs: bleu basique 20, 42585.
b) Composition:
2+ −
1) formule moléculaire, y compris le contre-ion: C H N 2BF ;
26 33 3 4
−1 −1
2) masse molaire avec (et sans) le contre-ion: 561,17 g·mol , (387,56 g·mol );
3) fraction massique (teneur) du cation du vert de méthyle: 85 %, déterminée par spectrométrie
d'absorption;
4) limites admissibles de substances interférentes toutes données sous forme de fractions massiques:
⎯ eau: inférieure à 1 %;
⎯ sels inorganiques: inférieure à 0,1 %;
⎯ détergents: absents;
⎯ impuretés colorées, y compris du violet de méthyle: non décelables par chromatographie sur
couche mince;
⎯ composés neutres: 14 % d'amidon soluble.
c) Longueur d'onde de l'absorbance maximale de la solution de teinture: 633 nm.
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d) Chromatographie sur couche mince: présence d'un seul constituant principal compatible avec le vert de
méthyle.
e) Manipulation et stockage: stable lorsqu'il est conservé à température ambiante (entre 18 °C et 28 °C)
dans un flacon en verre ambré hermétiquement bouché.
A.2.2 Teinture de vert brillant
Les informations relatives à la teinture de vert brillant sont les suivantes:
a) Nom et description du produit:
1) vert brillant (synonymes: vert de méthyle);
2) numéro CAS: 7114-03-6;
3) nom et numéro de l'index des couleurs: absence de nom dans l'index des couleurs, 42590.
b) Composition:
2+ −
1) formule moléculaire, y compris le contre-ion: C H N 2BF ;
27 35 3 4
−1 −1
2) masse molaire avec (et sans) le contre-ion: 575,19 g·mol , (401,58 g·mol );
3) fraction massique (teneur) du cation du vert de méthyle: 85 %, déterminée par spectrométrie
d'absorption;
4) limites admissibles de substances interférentes toutes données sous forme de fractions massiques:
⎯ eau: inférieure à 1 %;
⎯ sels inorganiques: inférieure à 0,1 %;
⎯ détergents: absents;
⎯ impuretés colorées, y compris du violet de méthyle: non décelables par chromatographie sur
couche mince;
⎯ composés neutres: 14 % d'amidon soluble.
c) Longueur d'onde de l'absorbance maximale de la solution de teinture: 633 nm.
d) Chromatographie sur couche mince: présence d'un seul constituant principal compatible avec le vert
brillant.
e) Manipulation et stockage: stable lorsqu'il est conservé à température ambiante (entre 18 °C et 28 °C)
dans un flacon en verre ambré hermétiquement bouché.
A.2.3 Teinture de pyronine Y
Les informations relatives à la teinture de pyronine Y sont les suivantes:
a) Nom et description du produit:
1) pyronine Y (synonymes: pyronine G);
2) numéro CAS: 92-32-0;
3) nom et numéro de l'index des couleurs: absence de nom dans l'index des couleurs, 45005.
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b) Composition:
+ −
1) formule moléculaire, y compris le contre-ion: C H N O Cl ;
17 19 2
−1 −1
2) masse molaire avec (et sans) le contre-ion: 302,75 g·mol , (267,30 g·mol );
3) fraction massique (teneur) du cation pyronine Y: 80 %, déterminée par spectrométrie d'absorption;
4) limites admissibles de substances interférentes toutes données sous forme de fractions massiques:
⎯ eau: inférieure à 1 %;
⎯ sels inorganiques: inférieure à 0,1 %;
⎯ détergents: absents;
⎯ impuretés colorées: non décelables par chromatographie sur couche mince;
⎯ composés neutres: 19 % d'amidon soluble.
c) Longueur d'onde de l'absorbance maximale de la solution de teinture: 550 nm.
d) Chromatographie sur couche mince: présence d'un seul constituant principal compatible avec la
pyronine Y.
e) Manipulation et stockage: stable lorsqu'il est conservé à température ambiante (entre 18 °C et 28 °C)
dans un flacon en verre ambré hermétiquement bouché.
A.2.4 Utilisation prévue de la technique au vert de méthyle-pyronine Y
A.2.4.1 Type(s) de matériau
La coloration au vert de méthyle-pyronine Y est utilisée pour des coupes de différents types de tissus,
incluses dans la paraffine ou dans du plastique ou congelées à l'aide d'un cryostat.
A.2.4.2 Manipulation et traitement avant coloration
Les fixateurs recommandés incluent:
⎯ solution de Carnoy [éthanol (fraction volumique de 99 %) + chloroforme + acide acétique (fraction
massique de 99 %) mélangés en volumes de (60 + 30 + 10) ml], ou
⎯ formaldéhyde (fraction massique de 3,6 %) avec tampon phosphate (pH = 7,0), en général,
déshydratation, clarification, infiltration de paraffine et inclusion, préparation des coupes au microtome.
A.2.4.3 Solution de travail
Dissoudre la solution de vert brillant ou de vert de méthyle dans une quantité correspondant à une masse de
0,15 g de teinture pure et représentant les cations colorés de vert brillant ou de vert de méthyle (dans
l'exemple ci-dessus, 0,176 g dans chaque cas), dans 90 ml d'eau distillée chaude (50 °C).
Dissoudre une quantité correspondant à une masse de 0,03 g de pyronine Y et représentant les cations
colorés (dans l'exemple ci-dessus, 0,038 g) dans 10 ml de tampon phtalate à 0,1 mol/l, (pH = 4,0). Mélanger
la solution obtenue à la solution de vert brillant ou de vert de méthyle.
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A.2.4.4 Stabilité
Cette solution de travail est stable pendant au moins une semaine lorsqu'elle est conservée à température
ambiante (entre 18 °C et 28 °C) dans un flacon en verre ambré hermétiquement bouché.
A.2.4.5 Méthode de coloration
A.2.4.5.1 Déparaffiner les coupes incluses dans la paraffine.
A.2.4.5.2 Hydrater les coupes.
A.2.4.5.3 Colorer pendant 5 min à température ambiante (environ 22 °C) dans la solution de travail.
A.2.4.5.4 Rincer en deux fois à l'eau distillée, 2 s à 3 s à chaque fois.
A.2.4.5.5 Secouer pour éliminer l'excès d'eau.
A.2.4.5.6 Agiter dans un bain de 1-butanol renouvelé trois fois.
A.2.4.5.7 Sortir les coupes du 1-butanol et les monter directement sur une résine synthétique hydrophobe.
A.2.4.6 Résultat(s) escompté(s)
Les résultats escomptés suivants seraient attendus avec les types de matériaux donnés en A.2.4.1:
a) pour la chromatine du noyau: coloration verte (fixation à la solution de Carnoy)
ou bleue (fixation au formaldéhyde);
b) pour le cytoplasme riche en nucléoles et ribosomes: coloration rouge (fixation à la solution de Carnoy)
ou rouge (lilas) (fixation au formaldéhyde);
c) pour les granules et le cytosquelette: coloration orange;
d) pour les muscles, le collagène et les hématies: non colorés.
A.3 Réaction de Feulgen-Schiff
A.3.1 Teinture de pararosaniline
AVERTISSEMENT — Pour R 40: Risque possible d'effets irréversibles;
Pour S 36/37: Porter un vêtement et des gants de protection appropriés.
Les informations relatives à la teinture de pararosaniline sont les suivantes:
a) Nom et description du produit:
1) pararosaniline (synonymes: rubine basique, parafuchsine, paramagenta, magenta 0);
2) numéro CAS: 569-61-9;
3) nom et numéro de l'index des couleurs: rouge basique 9, 42500.
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ISO 19001:2002(F)
b) Composition:
+ −
1) formule moléculaire, y compris le contre-ion: C H N Cl ;
19 18 3
−1 −1
2) masse molaire avec (et sans) le contre-ion: 323,73 g·mol , (288,28 g·mol );
3) fraction massique (teneur) du cation pararosaniline: 85 %, déterminée par spectrométrie
d'absorption;
4) limites admissibles de substances interférentes toutes données sous forme de fractions massiques:
⎯ eau: inférieure à 1 %;
⎯ sels inorganiques: inférieure à 0,1 %;
⎯ détergents: absents;
⎯ impuretés colorées: les homologues méthylés de la pararosaniline peuvent être présents à l'état
de traces, détectés par chromatographie sur couche mince. On ne doit pas trouver d'acridine;
⎯ composés neutres: 14 % d'amidon soluble.
c) Longueur d'onde de l'absorbance maximale de la solution de teinture: 542 nm.
d) Chromatographie sur couche mince: présence d'un seul constituant principal compatible avec la
pararosaniline et présence d'homologues méthylés à l'état de traces;
e) Manipulation et stockage: stable lorsqu'il est conservé à température ambiante (entre 18 °C et 28 °C)
dans un flacon en verre ambré hermétiquement bouché.
A.3.2 Utilisation prévue de la réaction de Feulgen-Schiff
A.3.2.1 Type(s) de matériau
La réaction de Feulgen-Schiff est utilisée pour des coupes de différents tissus, incluses dans la paraffine ou
dans du plastique ou pour des matériaux cytologiques (frottis, empreinte de tissu, culture cellulaire et
monocouche).
A.3.2.2 Manipulation et traitement avant coloration
A.3.2.2.1 Fixateurs recommandés
a) histologie: formaldéhyde (fraction massique de 3,6 %) avec tampon phosphate, (pH = 7,0);
b) cytologie:
1) matériau fixé à l'état humide: éthanol (fraction volumique de 96 %);
2) matériau séché à l'air:
⎯ formaldéhyde (fraction massique de 3,6 %) avec tampon phosphate;
⎯ méthanol + formaldéhyde (fraction massique de 37 %) + acide acétique (fraction massique de
100 %) mélangés en volumes de (85 + 10 + 5) ml.
Un matériau fixé à l'aide du liquide de Bouin ne convient pas à la présente réaction.
Les détails du mode opératoire utilisé par le fabricant pour soumettre à essai la réactivité du réactif
chromogène sont les suivants.
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