ISO 11737-3:2023
(Main)Sterilization of health care products — Microbiological methods — Part 3: Bacterial endotoxin testing
Sterilization of health care products — Microbiological methods — Part 3: Bacterial endotoxin testing
This document specifies general criteria to be applied in the determination of bacterial endotoxins on or in health care products, components or raw materials using bacterial endotoxins test (BET) methods, using amebocyte lysate reagents. This document is not applicable to the evaluation of pyrogens other than bacterial endotoxins. Other endotoxin detection methodologies are not included (see B.12). This document does not address setting specific endotoxin limit specifications.
Stérilisation des produits de santé — Méthodes microbiologiques — Partie 3: Essai des endotoxines bactériennes
Le présent document spécifie les critères généraux à appliquer pour la détermination des endotoxines bactériennes présentes sur ou dans les produits de santé, les composants ou les matières premières en utilisant les méthodes d'essai des endotoxines bactériennes (EEB), à l'aide des réactifs de lysat d'amébocytes. Le présent document ne s'applique pas à l'évaluation des pyrogènes autres que les endotoxines bactériennes. Les autres méthodologies de détection des endotoxines ne sont pas incluses (voir B.12). Le présent document ne traite pas de l'établissement de spécifications particulières de limite d'endotoxines.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 11737-3
First edition
2023-06
Sterilization of health care products —
Microbiological methods —
Part 3:
Bacterial endotoxin testing
Stérilisation des produits de santé — Méthodes microbiologiques —
Partie 3: Essai des endotoxines bactériennes
Reference number
© ISO 2023
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Published in Switzerland
ii
Contents Page
Foreword .v
Introduction . vi
1 Scope . 1
1.1 Inclusions. 1
1.2 Exclusions . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 General requirements . 7
5 Selection of products .8
5.1 General . 8
5.2 Selection of product units . 8
6 Methods for BET . 9
6.1 General . 9
6.2 Consideration of an applicable endotoxin limit . 10
6.2.1 Endotoxin limit . 10
6.2.2 Calculation of endotoxin limit for the extract solution . 10
6.2.3 Maximum valid dilution (MVD) . 10
6.3 Critical test parameters . 11
6.3.1 Temperature . 11
6.3.2 Time . 11
6.3.3 pH . 11
6.4 Equipment and materials . 11
6.5 Reagents .12
7 Method suitability for BET (BET validation) .12
7.1 General .12
7.2 Product and test method suitability .12
7.2.1 Gel-clot technique .12
7.2.2 Kinetic and end point methods (chromogenic and turbidimetric techniques) .13
7.3 Sample preparation . 14
7.3.1 General . 14
7.3.2 Solid health care products . 14
7.3.3 Aqueous health care products . 15
7.3.4 Sample interference .15
7.4 Reagent and analyst qualification . 15
7.4.1 Gel-clot technique reagent qualification . 15
7.4.2 Kinetic and end point method reagent qualification .15
7.4.3 Analyst qualification . 16
8 Routine testing, monitoring and interpretation of data .16
8.1 Routine testing . 16
8.1.1 Gel-clot limit test . 16
8.1.2 Gel-clot assay . 16
8.1.3 Kinetic and end point methods (chromogenic and turbidimetric) . 17
8.2 Monitoring (test frequency) . 17
8.3 Interpretation of results . 17
8.3.1 General . 17
8.3.2 Gel clot methods. 18
8.3.3 Kinetic and end point methods . 18
8.4 Data analysis . 18
8.5 Statistical methods . 18
9 Maintenance of the BET method .18
9.1 General . 18
iii
9.2 Changes to either the product or manufacturing process, or both . 18
9.3 Changes to the BET method . 19
10 Alternatives to batch testing .19
10.1 General . 19
10.2 Criteria for establishing alternatives to batch testing . 19
10.3 Manufacturing process assessment . 20
10.3.1 Quality planning of manufacturing processes . 20
10.3.2 Process design .20
10.3.3 Process control . 20
10.4 Change control . 21
10.5 Maintenance of risk assessment . 21
Annex A (informative) Guidance on bacterial endotoxin testing (following the subclauses
in this document) .22
Annex B (informative) History and background on the bacterial endotoxins test (BET) .42
Annex C (informative) Guidance on out of specified limits (OSL) and failure investigation .46
Annex D (informative) Guidance on in-process monitoring of manufacturing processes or
component testing .50
Annex E (informative) Guidance on conducting a risk assessment to support alternatives
to batch testing .53
Annex F (informative) Typical assignment of responsibilities .58
Bibliography .60
iv
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use
of (a) patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed
patent rights in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received
notice of (a) patent(s) which may be required to implement this document. However, implementers are
cautioned that this may not represent the latest information, which may be obtained from the patent
database available at www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all
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constitute an endorsement.
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expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to
the World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see
www.iso.org/iso/foreword.html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 198, Sterilization of health care products.
A list of all parts in the ISO 11737 series can be found on the ISO website.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
v
Introduction
A pyrogen is any substance that can induce fever. Testing for pyrogens is required for release of many
health care products. Pyrogens can be classified into two groups: microbial (e.g. bacteria, fungi, viruses)
and non-microbial (e.g. drugs, device materials, steroids, plasma fractions; see the ISO 10993 series).
The predominant pyrogenic contaminants encountered in the manufacturing of health care products
are bacterial endotoxins, which are components of the cell walls of Gram-negative bacteria. Although
Gram-positive bacteria, fungi, and viruses can be pyrogenic, they do so through different mechanisms
(systemic effects) and to a lesser degree than Gram-negative bacteria. Only the Gram-negative bacterial
endotoxins test (BET) using amebocyte lysate reagents from Limulus polyphemus or Tachypleus
tridentatus is covered in this document. Other endotoxin detection methodologies, such as monocyte
activation and recombinant Factor C (rFc), are not included (see B.12) in this document.
Endotoxins are the molecular weight lipopolysaccharide (LPS) components of the outer cell wall of
Gram-negative bacteria, that can cause fever, meningitis, and a rapid fall in blood pressure if introduced
into the blood stream or certain other tissues of the body. The outer cell wall components, which are
composed primarily of proteins, phospholipids and LPS, are constantly released by the cell into the
surrounding environment. Endotoxins are ubiquitous in nature, stable, and small enough to pass
through conventional sterilizing filters. Sterilization processes will inactivate microorganisms on or
in products, but usually do not inactivate endotoxin on products. With controlled processes, endotoxin
contamination can be prevented.
The non-pyrogenicity of a health care product can be achieved through the following:
a) manufacturing techniques that prevent or control endotoxin contamination (e.g. contamination
with Gram-negative bacteria);
b) depyrogenation by endotoxin inactivation (e.g. dry heat) or physical removal (e.g. rinsing,
distillation, ultrafiltration).
The purpose of this document is to describe the requirements and guidance for testing for bacterial
endotoxins. This includes product required to be non-pyrogenic based on either intended use or
non-pyrogenic label claim, or both. Guidance is also provided on selection of product units, method
suitability, use of techniques for routine testing, interpretation of test results, and alternatives to batch
testing and risk assessment. Information on the following is provided in the annexes:
— guidance on bacterial endotoxin testing (Annex A);
— the history and background on the BET (Annex B);
— guidance on out of specified limits (OSL) and failure investigation (Annex C);
— guidance on in-process monitoring of manufacturing or component testing (Annex D);
— guidance on conducting a risk assessment to support alternatives to batch testing (Annex E);
— typical assignment of responsibilities (Annex F).
This document is based on ANSI/AAMI ST72. Several sections in this document have been restructured
and extended or changed from ANSI/AAMI ST72.
vi
INTERNATIONAL STANDARD ISO 11737-3:2023(E)
Sterilization of health care products — Microbiological
methods —
Part 3:
Bacterial endotoxin testing
1 Scope
1.1 Inclusions
This document specifies general criteria to be applied in the determination of bacterial endotoxins on or
in health care products, components or raw materials using bacterial endotoxins test (BET) methods,
using amebocyte lysate reagents.
1.2 Exclusions
1.2.1 This document is not applicable to the evaluation of pyrogens other than bacterial endotoxins.
Other endotoxin detection methodologies are not included (see B.12).
1.2.2 This document does not address setting specific endotoxin limit specifications.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at https:// www .electropedia .org/
3.1
bacterial endotoxins test
BET
assay for measuring bacterial endotoxins by combining an aqueous test sample or test sample extract
with Tachypleus amebocyte lysate (TAL) (3.41) or Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) reagent and
measuring the resulting proportional reaction via visual, turbidimetric (3.42) or chromogenic techniques
(3.3)
3.2
batch
defined quantity of a product intended or purported to be uniform in character and quality produced
during a specified cycle of manufacture
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.21]
3.3
chromogenic technique
bacterial endotoxins test (BET) (3.1) methodology that quantifies endotoxins on the basis of a measured
colour-producing reaction proportional to the interaction of Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) and
endotoxin
3.4
control standard endotoxin
CSE
endotoxin standard preparation whose potency has been standardized against the Reference Standard
Endotoxin (RSE) (3.37) for a specific batch of Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28)
3.5
depyrogenation
process used to remove or deactivate pyrogenic substances to a specified level
Note 1 to entry: Pyrogenic substances include bacterial endotoxins.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.77]
3.6
direct contact
medical device or medical device component that comes into physical contact with body tissue
[SOURCE: ISO 10993-1:2018, 3.6]
3.7
end product
product samples that have completed the entire manufacturing process
Note 1 to entry: For the purposes of this document, end-product testing can be performed prior to sterilization
(pre-sterilization samples) or after sterilization (post-sterilization samples). For limitations see 5.2.6.
3.8
endotoxin
bacterial endotoxin
lipopolysaccharide (LPS)(3.29) component of the cell wall of Gram-negative bacteria that is heat stable
and elicits a variety of inflammatory responses in animals and humans
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.101]
3.9
endotoxin limit
maximum allowable amount of endotoxin present on the product or in a product extraction solution
3.10
endotoxin unit
EU
international unit
IU
standard unit of measure for endotoxin activity initially established relative to the activity contained
in 0,2 ng of the Reference Standard Endotoxin (RSE) (3.37) Lot EC-2 [US Pharmacopeia (USP) standard
reference material]
Note 1 to entry: Currently, the US RSE EC-6, USP Lot G, and the World Health Organization’s primary international
[45]
endotoxin standard (IS) are sub-lots of the same endotoxin preparation, making the EU and IU equal .
3.11
end point
most dilute concentration of a test or control solution for which a positive reaction for bacterial
endotoxin is observed
Note 1 to entry: This definition is used for concentration dependent bacterial endotoxin testing, in contrast to
dilution dependent end point methods described in A.6.1.1.
3.12
enhancement
bacterial endotoxins test (BET) (3.1) anomaly in which a non-endotoxin related factor, usually
attributable to a characteristic of the test sample, elicits a test reaction greater than the amount of
endotoxin present
3.13
gel-clot technique
bacterial endotoxins test (BET) (3.1) methodology that quantifies or detects endotoxin on the basis of
a clot-producing reaction proportional to the interaction of Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) and
endotoxin
3.14
geometric mean end point
antilog of the average of the logarithmic values with respect to the end points (3.11) from replicate
dilution series converted back to a base 10 number used to establish the central tendency or typical
value from a test solution
3.15
health care product
medical device, including in vitro diagnostic medical device, or medicinal product, including
biopharmaceutical
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.132]
3.16
indirect contact
medical device or medical device component through which a fluid or gas passes, prior to the fluid or
gas coming into physical contact with body tissue (in this case the medical device or medical device
component itself does not physically contact body tissue)
[SOURCE: ISO 10993-1:2018, 3.11]
3.17
inhibition
bacterial endotoxins test (BET) (3.1) anomaly in which a non-endotoxin related factor, usually attributable
to a characteristic of the test sample, elicits a test reaction less than the amount of endotoxin present
3.18
method suitability
inhibition/enhancement test
test used to determine whether a particular sample contains interfering factors that diminish its
accuracy by introducing enhancement (3.12) or inhibition (3.17) into the test system
3.19
interference
interfering factor observed in the performance of the test that exceeds the acceptable threshold for
a given bacterial endotoxins test (BET) (3.1) technique (e.g. positive product control that indicates a
detected endotoxin level less than 50 % or greater than 200 % or ±2 lambda)
3.20
intraocular, adj.
located or occurring within or administered through the eye
3.21
interfering factors
non-endotoxin related factor, usually attributable to a characteristic of the test sample, that causes
inhibition (3.17) or enhancement (3.12)
3.22
intravascular, adj.
located or occurring within or administered through the heart or blood vessels
3.23
intralymphatic, adj.
located or occurring within or administered through a lymph vessel
3.24
intrathecal, adj.
located, or occurring within or administered through the space under the arachnoid membrane of the
brain or spinal cord
3.25
kinetic method
photometric quantitative techniques (turbidimetric or chromogenic) for bacterial endotoxins test (BET)
(3.1)
3.26
LAL reactive material
LAL-RM
Limulus amebocyte lysate reactive material
any non-endotoxin compound that will activate the Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) clotting
cascade and cause enhancement (3.12)
3.27
lambda
λ
labelled sensitivity of a Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) gel-clot reagent, expressed in EU/ml or,
for chromogenic or turbidimetric tests, the lowest point (endotoxin concentration) on the referenced
standard curve
3.28
Limulus amebocyte lysate
LAL
reagent extracted from amebocytes taken from hemolymph of the horseshoe crab, Limulus polyphemus,
that reacts with endotoxin, to form a gelatinous clot and is used to estimate endotoxin levels in bacterial
endotoxins test (BET) (3.1) methods
Note 1 to entry: The term LAL is sometimes used to describe Tachypleus amebocyte lysate (TAL) (3.41), as both
are similar lysates that are used in the BET. They also are often generically referred to as “lysate”.
3.29
lipopolysaccharide
LPS
Gram-negative bacterial cell wall component composed of lipid A, a core polysaccharide, and an O-side
chain
3.30
maximum valid dilution
MVD
maximum amount a sample can be diluted, or the total extraction volume used relative to the sensitivity
of a bacterial endotoxins test (BET) (3.1) in which the specified endotoxin limit (3.9) can be detected
3.31
medical device
instrument, apparatus, implement, machine, appliance, implant, reagent for in vitro use, or software
material or other similar or related article, intended by the manufacturer to be used, alone or in
combination, for human beings, for one or more of the specific medical purpose(s) of:
— diagnosis, prevention, monitoring, treatment or alleviation of disease;
— diagnosis, monitoring, treatment, alleviation of or compensation for an injury;
— investigation, replacement, modification or support of the anatomy or of a physiological process;
— supporting or sustaining life;
— control of conception;
— disinfection of medical devices;
— providing information by means of in vitro examination of specimens derived from the human
body;
and does not achieve its primary intended action by pharmacological, immunological or metabolic
means, but which may be assisted in its intended function by such means
Note 1 to entry: Products which can be considered to be medical devices in some jurisdictions, but not in others
include:
— items specifically intended for cleaning or sterilization of medical devices;
— pouches, reel goods, sterilization wrap, and reusable containers for packaging of medical devices for
sterilization;
— disinfection substances;
— aids for persons with disabilities;
— devices incorporating either animal or human tissues, or both;
— devices for in vitro fertilization or assisted reproduction technologies.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.166]
3.32
non-pyrogenic, adj.
not inducing a fever
Note 1 to entry: Describes an item or product that contains endotoxin levels that conform to specified limits.
3.33
out of specified limits
OSL
sample with a valid bacterial endotoxins test (BET) (3.1) result that exceeds a product endotoxin limit
(3.9) specification
Note 1 to entry: The term OSL applies only within the context of this document and does not imply compliance
with any other regulatory guidance dealing with out of specification (OOS) results.
3.34
product positive control
PPC
sample spiked with a known amount of endotoxin used for confirmation that the product being tested
is not subject to interfering factors (3.21)
3.35
pyrogen
substance that induces a fever
3.36
pyrogenic, adj.
inducing a fever
Note 1 to entry: Describes an item or product that contains endotoxin levels above specified limits.
3.37
Reference Standard Endotoxin
RSE
US Pharmacopeia (USP) endotoxin reference standard that has a defined potency of 10 000 USP EUs per
vial
3.38
repeat test
analysis of additional product samples from a previously tested batch or another batch
3.39
retest
reanalysis of previously tested product samples or product sample preparation
3.40
standard control series
serial dilution series of Reference Standard Endotoxin (RSE) (3.37) or control standard endotoxin (CSE)
(3.4) used to verify Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) sensitivity
3.41
Tachypleus amebocyte lysate
TAL
reagent extracted from amebocytes taken from hemolymph of the horseshoe crab, Tachypleus
tridentatus, which reacts with endotoxin, to form a gelatinous clot and is used to estimate endotoxin
levels in bacterial endotoxins test (BET) (3.1) methods
Note 1 to entry: The term TAL is sometimes used to describe Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28), as both are
similar lysates that are used in the BET. They also are often generically referred to as “lysate”.
3.42
turbidimetric technique
bacterial endotoxins test (BET) (3.1) methodology that quantifies or detects endotoxin on the basis of a
measured turbidity reaction proportional to the interaction of Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28)
and endotoxin
3.43
validation
confirmation, through the provision of objective evidence, that the requirements for a specific intended
use or application have been fulfilled
Note 1 to entry: The objective evidence needed for a validation is the result of a test or other form of determination
such as performing alternative calculations or reviewing documents.
Note 2 to entry: The word “validated” is used to designate the corresponding status.
Note 3 to entry: The use conditions for validation can be real or simulated.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.313]
3.44
verification
confirmation, through the provision of objective evidence, that specified requirements have been
fulfilled
Note 1 to entry: The objective evidence needed for a verification can be the result of an inspection or of other
forms of determination such as performing alternative calculations or reviewing documents.
Note 2 to entry: The word “verified” is used to designate the corresponding status.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.314]
3.45
water for bacterial endotoxins test
WBET
purified water employable as a solvent, diluent, and/or extractant that is non-reactive with the lysate
employed at the detection limit of the reagent, and does not elicit interference (3.19) with methodology
in use (typically Limulus amebocyte lysate (LAL) (3.28) reagent water, water for injection, or other
appropriate solution meeting these requirements)
4 General requirements
4.1 The development, validation and routine control of products with acceptable endotoxin levels
are critical elements in the realization of some types of health care products. To ensure the consistent
implementation of the requirements specified in this document, the necessary processes shall be
established, implemented and maintained. Processes of particular importance in relation to the
development, validation and routine endotoxin control of a process include but are not limited to:
— control of documentation, including records,
— assignment of management responsibility,
— provision of adequate resources, including competent human resources and infrastructure,
— control of product provided by external parties,
— identification and traceability of product throughout the process, and
— control of non-conforming product.
NOTE ISO 13485 covers all stages of the life cycle of medical devices in the context of quality management
systems for regulatory purposes. National and/or regional regulatory requirements for the provision of health
care product can require the implementation of a full quality management system and the assessment of that
system by a recognized conformity assessment body.
4.2 A process shall be specified for the calibration of all equipment, including instrumentation for
test purposes, used in meeting the requirements of this document.
5 Selection of products
5.1 General
5.1.1 The types of products required or labelled to be non-pyrogenic and the associated bacterial
endotoxin limits shall be determined and be consistent with the intended clinical application.
Products should not be labelled as ‘pyrogen free’ because complete freedom from bacterial endotoxins
cannot be demonstrated by testing due to the detection limits inherent in current test methods. The
term ‘non-pyrogenic’ should be used.
NOTE 1 See A.5.1.1 and Annex B for risks associated with endotoxins and for commonly used limits.
NOTE 2 National regulatory requirements can apply regarding non-pyrogenic labelling.
5.1.2 For some products, higher endotoxin limits can be justifiable, with additional supporting data
depending on the risk/benefit of the device. Likewise, for other products, more stringent limits can be
required (e.g. devices with intrathecal contact).
5.1.3 Product required or labelled to be non-pyrogenic shall require explicit substantiation employing
a suitable BET method. Such substantiation shall include at least one of the following:
— end-product testing for each batch;
— alternative-to-batch testing (see Clause 10 and Annex E).
5.1.4 All parts of products required or labelled to be non-pyrogenic shall be included in the testing
process. The exclusion of any part of the product shall be justified and documented (e.g. a handle or a
power cord).
5.1.5 There are health care products that have portions of the product that are sealed and as such do
not come into contact with the patient. Such portions of the product that do not have patient contact are
not required or intended to be non-pyrogenic, and may be excluded from endotoxin testing.
5.1.6 For products for which a claim of non-pyrogenicity applies only to a portion of the product (e.g.
the fluid path in an administration set for intravenous infusion), endotoxin testing does not apply to
the portions of product not intended to be non-pyrogenic. A statement about the portion of the product
to which the claim applies (such as ‘non-pyrogenic fluid path’) shall be supported by appropriate
evaluation of components and surfaces relevant to that portion of the product.
5.1.7 For multi-component kit products for which a claim of either non-pyrogenicity or label claim, or
both, applies to only a portion of the kit, endotoxin testing does not apply to the portions of the kit not
intended to be non-pyrogenic. The non-pyrogenic portions of the kit shall be supported by appropriate
documented rationale.
5.2 Selection of product units
5.2.1 The sampling criteria for selection of product units for endotoxin testing are based on the
premise that the manufacturing process, as well as the processes identified in 4.1, are controlled (refer
to A.2).
NOTE See Annex D for guidance on in-process monitoring of manufacturing processes or component testing.
5.2.2 The selection of product units for testing shall be based on criteria defined in a sampling plan
that includes an assessment of components and processing. This rationale should consider the following:
a) applicable regulatory requirements;
b) assessment of risk;
c) historical performance;
d) manufacturing process validation;
e) statistical considerations.
5.2.3 There are two types of sampling plans: batch testing and alternatives to batch testing.
5.2.3.1 For batch testing, non-pyrogenicity is confirmed through the use of end-product testing.
The batch may be defined as each production lot or a product intended or purported to be uniform in
character and quality produced during a specified cycle of manufacture. This should be supported with
documented rationale or risk assessment (refer to A.5.2 for guidance on the number of samples).
5.2.3.2 Alternatives to batch testing may be used if it has been demonstrated that the manufacturing
process and materials are suitably controlled. If alternatives to batch testing are performed, a risk
assessment to evaluate the criteria used to establish the sampling plan shall be performed (see
Clause 10 and Annex E).
5.2.4 Samples selected for testing shall include all factors that can affect or contribute to the levels of
endotoxin.
5.2.5 Samples used for endotoxin testing can be selected from routine production, products that have
been rejected for other production quality issues that have no effect on endotoxin content, or surrogate
samples that are representative of the full manufacturing process and representative of product
endotoxin levels.
5.2.6 Samples may be obtained prior to sterilization (pre-sterilization) or after sterilization (post-
sterilization). Post-sterilization samples encompass all the factors that can affect the product or
the endotoxin test. When pre-sterilization samples are selected for testing, the acceptability of the
samples in representing the endotoxin level on sterilized product shall be justified and documented.
The program for ongoing testing should consistently reflect either pre- or post-sterilization samples.
Guidance is provided in A.5.2.6 for assessing the acceptability of pre-sterilization testing.
NOTE For products that support microbial growth, see A.5.2.6.
5.2.7 In the testing of multi-component kits (procedure packs) or sets of individual products within
the same sterile barrier system, depending upon how the product is used, there are instances where
each component may be evaluated individually and other instances where the entire contents may
be considered as a single entity. Consideration of a set or a kit as a single unit shall address sample
preparation in adherence to method requirements and the applicable endotoxin limit. The total volume
of extraction fluid used for the subcomponents should not exceed the maximum extraction volume
determined by the MVD.
6 Methods for BET
6.1 General
6.1.1 There are currently three commonly accepted BET techniques. The choice of technique
should be based upon an assessment of the laboratory’s capability, experience, sample throughput
requirements, data handling requirements, and the nature of the test sample. The current techniques
and associated methods are:
a) gel-clot techniques: limit test and assay methods;
b) chromogenic photometric technique: end point method;
NOTE A turbidimetric end point is available but is not commonly used.
c) chromogenic and turbidimetric photometric techniques: kinetic methods.
Information on each of these methods is presented in A.6.
6.1.2 The selected method shall be determined to be suitable as specified in Clause 7. Continued
suitability shall be confirmed as specified in Clause 9.
6.2 Consideration of an applicable endotoxin limit
6.2.1 Endotoxin limit
The endotoxin limit defines the maximum allowable amount of endotoxin present on the product or in
a product extract solution.
6.2.2 Calculation of endotoxin limit for the extract solution
The endotoxin limit for the extract solution in endotoxin units per ml (EU/ml) shall be calculated as
shown in Formula (1) as:
()KN()
(1)
V
where
K is the product endotoxin limit;
N is the number of devices tested;
V is the total volume of the extract or rinse (ml) that can be adjusted for the size and configu-
ration of the device(s).
Product endotoxin limits can be reported in terms of EU/ml, provided an appropriate specified volume
for rinsing/immersing has been determined to not exceed the MVD. Reporting the results in EU/device
takes into account the initial extraction volume.
6.2.3 Maximum valid dilution (MVD)
6.2.3.1 Products can sometimes interfere with a BET, resulting in inhibition or enhancement due to
the presence of interfering factors. The interfering factors shall be assessed. A common technique used
to mitigate such interference is to dilute the product extract with water for bacterial endotoxins test
(WBET) or another appropriate diluent. The interference can also be diluted by increasing the total
extraction volume used to extract the product (e.g. rather than extracting with 40 ml, extract with
80 ml). Because these techniques will also dilute any endotoxin present, there is a limit to the extent of
dilution that is allowed. This is referred to as the maximum valid dilution (MVD) and shall be calculated
as shown in Formulae (2) and (3):
The MVD, in terms of extraction solution in EU/ml:
EndotoxinLimitof extractsolutionE()Um/ l
EU/mL
= (2)
λλ
or the MVD in terms of maximum extraction volume in EU/device:
EndotoxinLimit()EU/device
EU/device
= (3)
λλ
6.2.3.2 The value of the MVD indicates the greatest dilution or total extraction volume that may be
used to overcome inhibition/enhancement, based on the sensitivity of the LAL. For example, an MVD of
10 means that a sample extract can be diluted no more than 1:10 without affecting the ability to detect
the product endotoxin limit (see Tables A.5 and A.6 for examples of calculations).
6.2.3.3 If a product is tested at the MVD, the endotoxin test indicates a pass or fail result. Any
endotoxin detected in the assay (a positive test result) that exceeds the defined endotoxin limit shall
indicate a failing result. A negative result indicates a
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 11737-3
Première édition
2023-06
Stérilisation des produits de santé —
Méthodes microbiologiques —
Partie 3:
Essai des endotoxines bactériennes
Sterilization of health care products — Microbiological methods —
Part 3: Bacterial endotoxin testing
Numéro de référence
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CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction . vi
1 Domaine d'application .1
1.1 Inclusions. 1
1.2 Exclusions . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 1
4 Exigences générales . .7
5 Sélection des produits . 8
5.1 Généralités . 8
5.2 Sélection des unités de produits . 9
6 Méthodes pour l'EEB .10
6.1 Généralités . 10
6.2 Prise en compte d'une limite d'endotoxines applicable . 10
6.2.1 Limite d'endotoxines. 10
6.2.2 Calcul de la limite d'endotoxines pour la solution d'extrait . 11
6.2.3 Dilution maximale significative (DMS ou MVD). 11
6.3 Paramètres d'essai critiques . 12
6.3.1 Température .12
6.3.2 Temps.12
6.3.3 pH .12
6.4 Équipements et matériaux .12
6.5 Réactifs .12
7 Validation de la méthode pour l'EEB (validation de l'EEB) .13
7.1 Généralités . 13
7.2 Validation du produit et de la méthode d'essai . 14
7.2.1 Technique par gélification. 14
7.2.2 Méthodes cinétiques et en point final (techniques colorimétriques et
turbidimétriques) . 14
7.3 Préparation des échantillons . 15
7.3.1 Généralités .15
7.3.2 Produits de santé solides . 15
7.3.3 Produits de santé à base de solution aqueuse . 16
7.3.4 Interférence de l'échantillon . 16
7.4 Qualification des réactifs et des analystes . 16
7.4.1 Qualification des réactifs de la technique par gélification . 16
7.4.2 Qualification des réactifs des méthodes cinétiques et des méthodes en
point final . 17
7.4.3 Qualification de l'analyste . 17
8 Essais de routine, surveillance et interprétation des données .17
8.1 Essais de routine . 17
8.1.1 Essai limite par gélification . 17
8.1.2 Dosage par gélification . 18
8.1.3 Méthodes cinétiques et en point final (colorimétriques et turbidimétriques) . 18
8.2 Surveillance (fréquence d'essai) . 18
8.3 Interprétation des résultats . 19
8.3.1 Généralités . 19
8.3.2 Méthodes par gélification . 19
8.3.3 Méthode cinétique et méthode en point final . 20
8.4 Analyse des données .20
8.5 Méthodes statistiques . 20
iii
9 Maintenance de la méthode d'EEB .20
9.1 Généralités . 20
9.2 Modifications apportées au produit ou au procédé de fabrication, ou aux deux.20
9.3 Modifications de la méthode d'EEB . 20
10 Alternatives aux essais par lots .21
10.1 Généralités . 21
10.2 Critères pour établir des alternatives aux essais par lots . 21
10.3 Évaluation du procédé de fabrication . 22
10.3.1 Planification de la qualité des procédés de fabrication .22
10.3.2 Conception du procédé .22
10.3.3 Contrôle du procédé . 22
10.4 Maîtrise des modifications .22
10.5 Mise à jour de l'évaluation des risques . 23
Annexe A (informative) Recommandations relatives aux essais des endotoxines
bactériennes (suivant les paragraphes du présent document) .24
Annexe B (informative) Historique et contexte de l'essai des endotoxines bactériennes
(EEB) .45
Annexe C (informative) Recommandations relatives aux résultats de limites hors
spécification (OSL) et aux investigations associées .50
Annexe D (informative) Recommandations relatives à la surveillance des procédés de
fabrication ou aux essais des composants .55
Annexe E (informative) Recommandations relatives à la réalisation d'une évaluation des
risques pour étayer les alternatives aux essais par lots .58
Annexe F (informative) Répartition type des responsabilités .63
Bibliographie .65
iv
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner
l’utilisation d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité
et à l’applicabilité de tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent
document, l’ISO n'avait pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa
mise en application. Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent
document que des informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de
brevets, disponible à l'adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié tout ou partie de tels droits de propriété.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l'Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www.iso.org/iso/fr/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 198, Stérilisation des produits de
santé.
Une liste de toutes les parties de la série ISO 11737 se trouve sur le site web de l'ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
v
Introduction
Un pyrogène est une substance susceptible de provoquer de la fièvre. La recherche de pyrogène est
nécessaire pour la libération de nombreux produits de santé. Les pyrogènes peuvent être classés
en deux groupes: microbiens (par exemple, bactéries, champignons, virus) et non microbiens (par
exemple, médicaments, matériaux des dispositifs, stéroïdes, fractions de plasma, voir la série de normes
ISO 10993). Les contaminants pyrogènes prédominants observés lors de la fabrication de produits
de santé sont les endotoxines bactériennes, qui sont des composants de la membrane cellulaire des
bactéries à Gram-négatif. Bien que les bactéries à Gram-positif, les champignons et les virus puissent
être pyrogènes, ils agissent par des mécanismes différents (effets systémiques) et à un degré moindre
que les bactéries à Gram-négatif. Seul l'essai des endotoxines bactériennes à Gram-négatif (EEB)
utilisant des réactifs de lysat d'amébocytes de Limulus polyphemus ou de Tachypleus tridentatus est
couvert dans le présent document. Les autres méthodologies de détection des endotoxines, telles que
l'activation des monocytes et le facteur C recombinant (rFc), ne sont pas incluses (voir B.12) dans le
présent document.
Les endotoxines sont les composants lipopolysaccharides (LPS) de poids moléculaire situés dans la
membrane cellulaire externe des bactéries à Gram-négatif, qui peuvent provoquer de la fièvre, une
méningite et une chute rapide de la pression artérielle s'ils sont introduits dans la circulation sanguine
ou dans certains autres tissus de l'organisme. Les composants de la membrane cellulaire externe, qui
sont principalement composés de protéines, de phospholipides et de LPS, sont constamment libérés par
la cellule dans le milieu environnant. Les endotoxines sont omniprésentes dans la nature, stables et
suffisamment petites pour passer à travers les filtres de stérilisation conventionnels. Les procédés de
stérilisation inactivent les micro-organismes sur ou dans les produits, mais n'inactivent généralement
pas les endotoxines sur les produits. Or, des procédés contrôlés permettent d'éviter la contamination
par des endotoxines.
L'absence de pyrogène sur un produit de santé peut être obtenue par les moyens suivants:
a) des techniques de fabrication qui empêchent ou contrôlent la contamination par des endotoxines
(par exemple la contamination par des bactéries à Gram-négatif);
b) la dépyrogénation par inactivation des endotoxines (par exemple, chaleur sèche) ou élimination
physique (par exemple, rinçage, distillation, ultrafiltration).
L'objectif du présent document consiste à décrire les exigences et les recommandations relatives aux
essais des endotoxines bactériennes. Ces essais portent notamment sur les produits devant être non
pyrogènes en raison de leur usage prévu ou de la mention «non pyrogène» sur l'étiquette, ou des deux.
Des recommandations sont également formulées au sujet de la sélection des unités de produit, de la
validation des méthodes, de l'utilisation des techniques pour les essais de routine, de l'interprétation
des résultats d'essai, et des alternatives aux essais par lots et à l'évaluation des risques. Les annexes
présentent des informations concernant:
— les recommandations relatives aux essais des endotoxines bactériennes (Annexe A);
— l'historique et le contexte relatifs aux essais EEB (Annexe B);
— les recommandations relatives aux résultats de limites hors spécification (OSL) et aux investigations
associées (Annexe C);
— les recommandations relatives à la surveillance des procédés de fabrication ou aux essais des
composants (Annexe D);
— les recommandations relatives à la réalisation d'une évaluation des risques pour étayer les
alternatives aux essais par lots (Annexe E);
— la répartition type des responsabilités (Annexe F).
Le présent document est fondé sur l'ANSI/AAMI ST72. Plusieurs sections du présent document ont été
réorganisées et étendues ou modifiées par rapport à l'ANSI/AAMI ST72.
vi
NORME INTERNATIONALE ISO 11737-3:2023(F)
Stérilisation des produits de santé — Méthodes
microbiologiques —
Partie 3:
Essai des endotoxines bactériennes
1 Domaine d'application
1.1 Inclusions
Le présent document spécifie les critères généraux à appliquer pour la détermination des endotoxines
bactériennes présentes sur ou dans les produits de santé, les composants ou les matières premières
en utilisant les méthodes d'essai des endotoxines bactériennes (EEB), à l'aide des réactifs de lysat
d'amébocytes.
1.2 Exclusions
1.2.1 Le présent document ne s'applique pas à l'évaluation des pyrogènes autres que les endotoxines
bactériennes. Les autres méthodologies de détection des endotoxines ne sont pas incluses (voir B.12).
1.2.2 Le présent document ne traite pas de l'établissement de spécifications particulières de limite
d'endotoxines.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
L'ISO et l'IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l'adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l'adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
essai des endotoxines bactériennes
EEB (BET, bacterial endotoxins test)
essai destiné à mesurer les endotoxines bactériennes en combinant un échantillon pour essai aqueux
ou un extrait d'échantillon pour essai avec un lysat d'amébocytes de Tachypleus (TAL) (3.41) ou un lysat
d'amébocytes de limule (LAL) (3.28) comme réactif et en mesurant la réaction proportionnelle qui en
résulte par des techniques visuelles, turbidimétriques (3.42) ou colorimétriques (3.3)
3.2
lot
quantité donnée de produit, destinée ou censée être de nature et de qualité uniformes, et qui a été
fabriquée pendant un cycle de fabrication spécifié
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.21]
3.3
technique colorimétrique
méthodologie de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) qui quantifie les endotoxines sur la base
d'une réaction colorée mesurée, proportionnelle à l'interaction entre le lysat d'amébocytes de limule
(LAL) (3.28) et l'endotoxine
3.4
endotoxine standard de contrôle
CSE
préparation d'endotoxine standard dont le titre a été normalisé par rapport à l'endotoxine standard de
référence (RSE, Reference Standard Endotoxin) (3.37) pour un lot spécifique de lysat d'amébocytes de
limule (LAL) (3.28)
3.5
dépyrogénation
procédé utilisé pour éliminer ou désactiver des substances pyrogènes jusqu'à un niveau spécifié
Note 1 à l'article: Les substances pyrogènes incluent les endotoxines bactériennes.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.77]
3.6
contact direct
dispositif médical ou composant de dispositif médical qui entre en contact physique avec un tissu de
l'organisme
[SOURCE: ISO 10993-1:2018, 3.6]
3.7
produit fini
échantillons ou produits arrivés au terme de l'ensemble du procédé de fabrication
Note 1 à l'article: Aux fins du présent document, l'analyse du produit fini peut être effectuée avant la stérilisation
(échantillons de pré-stérilisation) ou après la stérilisation (échantillons de post-stérilisation). Pour les limites,
voir 5.2.6.
3.8
endotoxine
endotoxine bactérienne
lipopolysaccharide (LPS) (3.29) de la paroi cellulaire d'une bactérie à Gram-négatif qui se caractérise
par sa stabilité à la chaleur et qui provoque diverses réactions inflammatoires chez l'Homme et chez les
animaux
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.101]
3.9
limite d'endotoxines
quantité maximale admissible d'endotoxines présente sur le produit ou dans une solution d'extraction
du produit
3.10
unité d'endotoxines
UE
unité internationale
UI
unité de mesure normalisée de l'activité de l'endotoxine initialement établie par rapport à l'activité
contenue dans 0,2 ng du lot EC-2 de l'endotoxine standard de référence (RSE) (3.37) (matériau standard
de référence de la pharmacopée américaine (USP))
Note 1 à l'article: Actuellement, l'endotoxine RSE EC-6, le lot G de l'USP, et l'endotoxine standard internationale
primaire (IS) de l'Organisation mondiale de la santé sont des sous-lots de la même préparation d'endotoxine, ce
[45]
qui rend l'UE et l'UI égales .
3.11
point final
concentration la plus faible d'une solution d'essai ou de contrôle pour laquelle une réaction positive à
l'endotoxine bactérienne est observée
Note 1 à l'article: Cette définition est utilisée pour les essais des endotoxines bactériennes dépendant de la
concentration, par contraste avec les méthodes en point final dépendant de la dilution décrites en A.6.1.1.
3.12
activation
anomalie de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) caractérisée par le fait qu'un facteur non lié
à l'endotoxine, généralement dû à une caractéristique de l'échantillon pour essai, provoque une réaction
supérieure à la quantité d'endotoxines présente
3.13
technique par gélification
méthodologie de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) qui quantifie ou détecte l'endotoxine
sur la base d'une réaction de production de caillots proportionnelle à l'interaction entre le lysat
d'amébocytes de limule (LAL) (3.28) et l'endotoxine
3.14
moyenne géométrique au point final
antilogarithme de la moyenne des valeurs logarithmiques par rapport aux points finaux (3.11) des séries
de réplicats de dilution converties en un nombre en base 10 utilisé pour établir la tendance centrale ou
la valeur typique d'une solution d'essai
3.15
produit de santé
dispositif médical, pouvant être un dispositif médical de diagnostic in vitro, ou produit médicinal,
notamment un produit biopharmaceutique
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.132]
3.16
contact indirect
dispositif médical ou composant de dispositif médical par lequel passe un fluide ou un gaz, avant que
le fluide ou le gaz entre en contact physique avec un tissu de l'organisme (dans ce cas, le dispositif
médical ou le composant de dispositif médical lui-même n'entre pas en contact physique avec le tissu de
l'organisme)
[SOURCE: ISO 10993-1:2018, 3.11]
3.17
inhibition
anomalie de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) caractérisée par le fait qu'un facteur non lié
à l'endotoxine, généralement dû à une caractéristique de l'échantillon pour essai, provoque une réaction
inférieure à la quantité d'endotoxines présente
3.18
validation de la méthode
essai d'inhibition/d'activation
essai servant à déterminer si un échantillon particulier contient des facteurs d'interférence qui
diminuent sa précision par l'introduction d'une activation (3.12) ou d'une inhibition (3.17) dans le
système d'essai
3.19
interférence
facteur d'interférence observé au cours de l'essai qui dépasse le seuil acceptable pour une technique
d'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) donnée (par exemple, un contrôle positif du produit
indiquant un niveau d'endotoxines détecté inférieur à 50 % ou supérieur à 200 % ou ±2 lambda)
3.20
intraoculaire
situé ou survenant à l'intérieur de l'œil ou administré par ce dernier
3.21
facteurs d'interférence
facteur indépendant de l'endotoxine, généralement dû à une caractéristique de l'échantillon pour essai,
qui provoque une inhibition (3.17) ou une activation (3.12)
3.22
intravasculaire
situé ou survenant à l'intérieur du cœur ou administré par le cœur ou les vaisseaux sanguins
3.23
intralymphatique
situé ou survenant à l'intérieur du vaisseau lymphatique ou administré par ce dernier
3.24
intrathécal
situé ou survenant à l'intérieur de l'espace sous la membrane arachnoïde du cerveau ou de la moelle
épinière, ou administré par ce dernier
3.25
méthode cinétique
techniques photométriques quantitatives (turbidimétriques ou colorimétriques) pour l'essai des
endotoxines bactériennes (EEB) (3.1)
3.26
matériau réactif au LAL
LAL-MR
matériau réactif au lysat d'amébocytes de limule
tout composé autre qu'une endotoxine qui activera la cascade de coagulation du lysat d'amébocytes de
limule (LAL) (3.28) et provoquera une activation (3.12)
3.27
lambda
λ
sensibilité revendiquée d'un réactif au lysat d'amébocytes de limule (LAL) (3.28) par gélification exprimée
en UE/ml ou, pour les essais colorimétriques ou turbidimétriques, point le plus bas (concentration en
endotoxines) sur la courbe d'étalonnage
3.28
lysat d'amébocytes de limule
LAL
réactif extrait d'amébocytes prélevés dans l'hémolymphe de la limule, Limulus polyphemus, qui
réagit avec l'endotoxine pour former un caillot gélatineux et qui est utilisé pour estimer les niveaux
d'endotoxines dans les méthodes d'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1)
Note 1 à l'article: Le terme LAL est parfois utilisé pour décrire le lysat d'amébocytes de Tachypleus (TAL) (3.41),
car les deux sont des lysats similaires qui sont utilisés pour l'EEB. Ils sont également souvent désignés par le
terme générique «lysat».
3.29
lipopolysaccharide
LPS
composant de la membrane cellulaire d'une bactérie à Gram-négatif composé d'un lipide A, d'un
polysaccharide central et d'une chaîne latérale O
3.30
dilution maximale significative
DMS (MVD, maximum valid dilution)
dilution maximale pour un échantillon ou volume total d'extraction utilisé par rapport à la sensibilité
d'un essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) dans lequel la limite d'endotoxines (3.9) spécifiée peut
être détectée
3.31
dispositif médical
instrument, appareil, équipement, machine, dispositif, implant, réactif destiné à une utilisation in vitro,
ou logiciel, matériel ou autre article similaire ou associé, dont le fabricant prévoit qu'il soit utilisé seul
ou en association chez l'être humain pour une ou plusieurs fins médicales spécifiques suivantes:
— diagnostic, prévention, contrôle, traitement ou atténuation d'une maladie;
— diagnostic, contrôle, traitement, atténuation ou compensation d'une blessure;
— étude, remplacement, modification ou entretien de l'anatomie ou d'un processus physiologique;
— entretien (artificiel) ou maintien de la vie;
— maîtrise de la conception;
— désinfection des dispositifs médicaux;
— communication d'informations par un examen in vitro de spécimens (prélèvements) provenant du
corps humain;
et dont l'action principale voulue n'est pas obtenue par des moyens pharmacologiques ou
immunologiques ni par métabolisme, mais dont la fonction peut être assistée par de tels moyens;
Note 1 à l'article: Les produits qui peuvent être considérés comme des dispositifs médicaux dans certaines
juridictions, mais pas dans d'autres incluent:
— les articles spécifiquement destinés au nettoyage ou à la stérilisation des dispositifs médicaux;
— les sachets, les objets en bobine, les emballages de stérilisation et les récipients réutilisables pour emballer
les dispositifs médicaux en vue d'une stérilisation;
— les produits désinfectants;
— les aides pour les personnes en situation de handicap;
— les dispositifs intégrant des tissus animaux ou humains, ou les deux;
— les dispositifs pour les technologies de fécondation in vitro et de reproduction assistée.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.166]
3.32
non pyrogène
qui ne provoque pas de fièvre
Note 1 à l'article: Décrit un élément ou un produit dont les niveaux d'endotoxines sont conformes aux limites
spécifiées.
3.33
limites hors spécification
OSL (out of specified limits)
échantillon dont le résultat de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) est valide, mais qui dépasse
la spécification de limite d'endotoxines (3.9) du produit
Note 1 à l'article: Le terme OSL s'applique uniquement dans le contexte du présent document et n'implique pas la
conformité à d'autres recommandations réglementaires traitant des résultats hors spécifications (OOS).
3.34
contrôle positif du produit
PPC (product positive control)
échantillon dans lequel une quantité connue d'endotoxine a été ajoutée, utilisé pour confirmer que le
produit soumis à essai ne présente pas de facteurs d'interférence (3.21)
3.35
substance pyrogène
substance qui provoque de la fièvre
3.36
pyrogène
qui provoque de la fièvre
Note 1 à l'article: Décrit un élément ou un produit dont les niveaux d'endotoxines sont supérieurs aux limites
spécifiées.
3.37
endotoxine standard de référence
RSE (reference standard endotoxin)
endotoxine standard de référence de la pharmacopée américaine (USP-United States Standard
Pharmacopeia) qui a un titre défini de 10 000 USP UE par flacon
3.38
essai répété
analyse d'échantillons de produit supplémentaires d'un lot précédemment soumis à essai ou d'un autre
lot
3.39
contre-essai
nouvelle analyse d'échantillons de produit ou de préparation d'échantillon de produit, précédemment
soumis à essai
3.40
série de contrôles standard
série de dilutions d'endotoxine standard de référence (RSE) (3.37) ou d'endotoxine standard de contrôle
(CSE) (3.4) utilisée pour vérifier la sensibilité du lysat d'amébocytes de limule (LAL) (3.28)
3.41
lysat d'amébocytes de Tachypleus
TAL
réactif extrait d'amébocytes prélevés dans l'hémolymphe de la limule, Tachypleus tridentatus, qui
réagit avec l'endotoxine pour former un caillot gélatineux et qui est utilisé pour estimer les niveaux
d'endotoxines dans les méthodes d'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1)
Note 1 à l'article: Le terme TAL est parfois utilisé pour décrire le lysat d'amébocytes de limule (LAL) (3.28), car
les deux sont des lysats similaires qui sont utilisés pour l'EEB. Ils sont également souvent désignés par le terme
générique «lysat».
3.42
technique turbidimétrique
méthodologie de l'essai des endotoxines bactériennes (EEB) (3.1) qui quantifie ou détecte l'endotoxine sur
la base d'une réaction de turbidité mesurée, proportionnelle à l'interaction entre le lysat d'amébocytes
de limule (LAL) (3.28) et l'endotoxine
3.43
validation
confirmation par des preuves objectives que les exigences pour une utilisation spécifique ou une
application prévue ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Les preuves objectives requises pour la validation peuvent être le résultat d'un essai ou d'une
autre forme de détermination, telles que la réalisation de calculs ou la revue de documents.
Note 2 à l'article: Le terme «validé» est utilisé pour désigner l'état correspondant.
Note 3 à l'article: Pour la validation, les conditions d'utilisation peuvent être réelles ou simulées.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.313]
3.44
vérification
confirmation, au moyen de preuves objectives, que les exigences spécifiées ont été satisfaites
Note 1 à l'article: Les preuves objectives requises pour la vérification peuvent être le résultat d'un contrôle ou
d'autres formes de détermination, telles que la réalisation de calculs ou l'examen de documents.
Note 2 à l'article: Le terme «vérifié» est utilisé pour désigner l'état correspondant.
[SOURCE: ISO 11139:2018, 3.314]
3.45
eau pour l'essai des endotoxines bactériennes
eau EEB (WBET, water for bacterial endotoxins test)
eau purifiée pouvant être utilisée comme solvant, diluant et/ou agent d'extraction, qui ne réagit pas
avec le lysat employé à la limite de détection du réactif et qui ne provoque pas d'interférence (3.19) avec
la méthodologie utilisée (généralement eau de réactif du lysat d'amébocytes de limule (LAL) (3.28), eau
pour injection ou autre solution appropriée répondant à ces exigences)
4 Exigences générales
4.1 La mise au point, la validation et le contrôle de routine de produits présentant des niveaux
d'endotoxines acceptables constituent des éléments essentiels dans la réalisation de certains types
de produits de santé. Afin de garantir la mise en œuvre cohérente des exigences spécifiées dans le
présent document, il faut établir, mettre en place et entretenir les procédés requis. Les procédés
particulièrement importants concernant le développement, la validation et le contrôle de routine des
endotoxines d'un procédé comprennent, sans toutefois s'y limiter:
— le contrôle de la documentation, y compris des enregistrements;
— l'attribution des responsabilités de la direction;
— l'allocation des ressources adéquates, y compris des ressources humaines et des infrastructures
appropriées;
— le contrôle des produits fournis par des tiers;
— l'identification et la traçabilité des produits tout au long du procédé; et
— le contrôle des produits non conformes.
NOTE L'ISO 13485 couvre toutes les étapes du cycle de vie des dispositifs médicaux dans le contexte des
systèmes de management de la qualité à des fins réglementaires. Les exigences réglementaires nationales et/ou
régionales pour la fourniture de produits de santé peuvent exiger la mise en œuvre d'un système de management
de la qualité complet et l'évaluation de ce système par un organisme d'évaluation reconnu.
4.2 Une procédure doit être spécifiée pour l'étalonnage de l'ensemble des équipements, y compris les
instruments employés à des fins d'essais et utilisés pour satisfaire aux exigences du présent document.
5 Sélection des produits
5.1 Généralités
5.1.1 Les types de produits qui doivent être non pyrogènes ou qui sont étiquetés comme tels et les
limites d'endotoxines bactériennes correspondantes doivent être déterminés et être compatibles avec
l'application clinique prévue.
Il convient de ne pas étiqueter les produits comme «apyrogènes», car l'absence totale d'endotoxines
bactériennes ne peut être démontrée par des essais en raison des limites de détection inhérentes aux
méthodes d'essai actuelles. Il convient d'utiliser le terme «non pyrogène».
NOTE 1 Voir A.5.1.1 et Annexe B pour les risques associés aux endotoxines et pour les limites communément
utilisées.
NOTE 2 Des exigences réglementaires nationales peuvent s'appliquer à l'étiquetage non pyrogène.
5.1.2 Pour certains produits, des limites d'endotoxines plus élevées peuvent être justifiées, sur la
base de données supplémentaires, en fonction du risque/bénéfice du dispositif. De même, pour d'autres
produits, des limites plus strictes peuvent être exigées (par exemple, pour des dispositifs en contact
par voie intrathécale).
5.1.3 Les produits qui doivent être non pyrogènes ou qui sont étiquetés comme tels doivent faire
l'objet d'une justification explicite au moyen d'une méthode d'EEB appropriée. Cette justification doit
comprendre au moins l'un des éléments suivants:
— des essais sur les produits finis pour chaque lot;
— une alternative aux essais par lots (voir Article 10 et Annexe E).
5.1.4 Toutes les parties des produits qui doivent être non pyrogènes ou qui sont étiquetées comme
telles doivent être incluses dans le procédé d'essai. L'exclusion de toute partie du produit doit être
justifiée et documentée (par exemple, une poignée ou un cordon d'alimentation).
5.1.5 Certaines parties de produits de santé sont scellées et n'entrent donc pas en contact avec le
patient. Ces parties du produit qui n'entrent pas en contact avec le patient ne sont pas tenues d'être non
pyrogènes, et peuvent donc être exclues des essais des endotoxines.
5.1.6 Pour les produits dont la déclaration d'absence de pyrogène ne s'applique qu'à une partie du
produit (par exemple, l'intérieur d'un dispositif d'administration pour perfusion intraveineuse), l'essai
des endotoxines ne s'applique pas aux parties du produit qui ne sont pas censées être non pyrogènes.
Une mention relative à la partie du produit à laquelle s'applique la déclaration (telle que «intérieur du
dispositif non pyrogène») doit être accompagnée d'une évaluation appropriée des composants et des
surfaces correspondant à cette partie du produit.
5.1.7 Pour les produits en kit à composants multiples pour lesquels une déclaration d'absence de
pyrogène ou une mention sur l'étiquette, ou les deux, ne s'applique qu'à une partie du kit, l'essai des
endotoxines ne s'applique pas aux parties du kit qui ne sont pas censées être non pyrogènes. Les parties
non pyrogènes du kit doivent être accompagnées d'une justification documentée appropriée.
5.2 Sélection des unités de produits
5.2.1 Les critères d'échantillonnage pour la sélection des unités de produits pour l'essai des
endotoxines reposent sur le principe que le procédé de fabrication, ainsi que les procédés identifiés en
4.1, sont contrôlés (voir A.2).
NOTE Voir l'Annexe D pour des recommandations relatives à la surveillance des procédés de fabrication ou
aux essais des composants.
5.2.2 La sélection des unités de produits pour les essais doit être fondée sur des critères définis dans
un plan d'échantillonnage qui comprend une évaluation des composants et du traitement. Il convient
que cette justification tienne compte des éléments suivants:
a) les exigences réglementaires applicables;
b) l'évaluation des risques;
c) les performances historiques;
d) la validation du procédé de fabrication;
e) des considérations statistiques.
5.2.3 Il existe deux types de plans d'échantillonnage: les essais par lots et les alternatives aux essais
par lots.
5.2.3.1 Pour les essais par lots, l'absence de pyrogène est confirmée par l'utilisation d'essais sur le
produit fini. Le lot peut être défini comme étant chaque lot de production ou un produit destiné ou censé
être de nature et de qualité uniformes, et qui a été fabriqué pendant un cycle de fabrication spécifié. Il
convient d'étayer cela par une justification documentée ou d'une évaluation des risques (voir A.5.2 pour
des recommandations relatives au nombre d'échantillons).
5.2.3.2 Des alternatives aux essais par lots peuvent être utilisées s'il a été démontré que le procédé de
fabrication et les matériaux sont dûment contrôlés. Si des alternatives aux essais par lots sont réalisées,
une évaluation des risques doit être effectuée afin d'évaluer les critères utilisés pour établir le plan
d'échantillonnage (voir Article 10 et Annexe E).
5.2.4 Les échantillons sélectionnés pour les essais doivent inclure tous les facteurs susceptibles
d'avoir une incidence sur les niveaux d'endotoxines ou d'y contribuer.
5.2.5 Les échantillons utilisés pour les essais des endotoxines peuvent provenir de la production de
routine, de produits qui ont été rejetés en raison d'autres problèmes de qualité de production qui n'ont
pas d'incidence sur la teneur en endotoxine, ou d'échantillons de substitution qui sont représentatifs de
l'ensemble du procédé de fabrication et représentatifs des niveaux d'endotoxines du produit.
5.2.6 Les échantillons peuvent être obtenus avant la stérilisation (pré-stérilisation) ou après la
...
Questions, Comments and Discussion
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