ISO/TS 10272-3:2010

SPÉCIFICATION ISO/TS
TECHNIQUE 10272-3
Première édition
2010-03-01
Microbiologie des aliments — Méthode
horizontale pour la recherche et le
dénombrement de Campylobacter spp. —
Partie 3:
Méthode semi-quantitative
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method
for detection and enumeration of Campylobacter spp. —
Part 3: Semi-quantitative method

Numéro de référence
©
ISO 2010
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2010
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2010 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .1
4 Principe.2
5 Milieux de culture et réactifs .2
6 Appareillage .3
7 Échantillonnage.4
8 Préparation de l'échantillon pour essai .4
9 Mode opératoire.4
9.1 Généralités .4
9.2 Prise d'essai, suspension mère et dilutions.4
9.3 Enrichissement.4
9.4 Isolement.4
9.5 Confirmation des Campylobacter spp. .5
9.6 Identification des Campylobacter spp. (facultatif).6
10 Calcul et expression des résultats .8
10.1 Mode de calcul.8
10.2 Fidélité .8
11 Rapport d'essai.9
Annexe A (normative) Schéma du mode opératoire .10
Annexe B (normative) Composition et préparation des milieux de culture et des réactifs .11
Bibliographie.17

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
Dans d'autres circonstances, en particulier lorsqu'il existe une demande urgente du marché, un comité
technique peut décider de publier d'autres types de documents normatifs:
⎯ une Spécification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) représente un accord entre les experts dans
un groupe de travail ISO et est acceptée pour publication si elle est approuvée par plus de 50 % des
membres votants du comité dont relève le groupe de travail;
⎯ une Spécification technique ISO (ISO/TS) représente un accord entre les membres d'un comité technique
et est acceptée pour publication si elle est approuvée par 2/3 des membres votants du comité.
Une ISO/PAS ou ISO/TS fait l'objet d'un examen après trois ans afin de décider si elle est confirmée pour trois
nouvelles années, révisée pour devenir une Norme internationale, ou annulée. Lorsqu'une ISO/PAS ou
ISO/TS a été confirmée, elle fait l'objet d'un nouvel examen après trois ans qui décidera soit de sa
transformation en Norme internationale soit de son annulation.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO/TS 10272-3 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9
Microbiologie.
L'ISO 10272 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Microbiologie des aliments —
Méthode horizontale pour la recherche et le dénombrement de Campylobacter spp.:
⎯ Partie 1: Méthode de recherche
⎯ Partie 2: Technique par comptage des colonies [Spécification technique]
⎯ Partie 3: Méthode semi-quantitative [Spécification technique]

iv © ISO 2010 – Tous droits réservés

Introduction
En raison de la grande diversité des produits alimentaires, l'ISO 10272 peut ne pas convenir en tout point
pour certains produits et, pour certains autres, il peut s'avérer nécessaire de recourir à des méthodes
différentes.
Néanmoins, dans tous les cas, il convient autant que possible d'appliquer l'ISO 10272, tout écart n'étant
justifié que par une absolue nécessité liée à des raisons techniques.
Lors de la prochaine révision de l'ISO 10272, toutes les informations alors disponibles relatives à la mesure
dans laquelle les méthodes ont été suivies, et les raisons des écarts par rapport à celles-ci dans le cas de
certains produits, seront prises en compte. L'harmonisation des méthodes d'essai ne peut pas être immédiate
et, pour certains groupes de produits, des Normes internationales et/ou nationales peuvent déjà exister,
lesquelles ne sont pas en conformité avec l'ISO 10272. Il est souhaitable que, lors de leur révision, de telles
normes soient modifiées pour une mise en conformité avec l'ISO 10272 de sorte que, en fin de compte, les
seules divergences restantes soient celles imposées pour des raisons techniques bien établies.

SPÉCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 10272-3:2010(F)

Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour
la recherche et le dénombrement de Campylobacter spp. —
Partie 3:
Méthode semi-quantitative
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 10272 décrit une méthode horizontale relative pour la détermination semi-
quantitative de Campylobacter spp.
Elle est applicable aux produits destinés à une consommation humaine ou aux aliments pour animaux et à
des échantillons environnementaux dans le domaine de la production alimentaire et de la manipulation des
aliments. Toutefois, il est possible que la présente partie de l'ISO 10272 ne convienne pas en tout point pour
certains produits, des écarts étant rendus nécessaires par des raisons techniques. Il est possible que la
présente partie de l'ISO 10272 ne s'applique pas du tout à certains autres produits.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6887 (toutes les parties), Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension
mère et des dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments — Lignes directrices pour la préparation et la production des
milieux de culture — Partie 1: Lignes directrices générales d'assurance qualité pour la préparation des milieux
de culture en laboratoire
ISO/TS 11133-2:2003, Microbiologie des aliments — Guide pour la préparation et la production des milieux de
culture — Partie 2: Guide général pour les essais de performance des milieux de culture
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Campylobacter
〈Campylobacter en microbiologie des aliments〉 microorganismes formant des colonies caractéristiques sur
des milieux solides sélectifs lorsqu'ils sont incubés en microaérobie à 41,5 °C, et non à 25 °C, et présentant la
mobilité caractéristique ainsi que les propriétés biochimiques et les propriétés de croissance décrites lorsque
les essais sont réalisés conformément à la présente partie de l'ISO 10272
NOTE Les espèces les plus courantes sont Campylobacter jejuni et C. coli. Toutefois, d'autres espèces ont été
décrites (C. lari, C. upsaliensis et quelques autres).
3.2
détermination semi-quantitative
〈Campylobacter en microbiologie des aliments〉 détermination du niveau de contamination par Campylobacter
lorsqu'un faible nombre est attendu ou si le niveau de la flore associée est relativement élevé
4 Principe
4.1 Généralité. La détermination semi-quantitative du Campylobacter spp. implique les étapes 4.2 à 4.4
(voir Figure A.1).
4.2 Enrichissement en milieu liquide sélectif. La prise d'essai et ses dilutions décimales sont inoculées
ou diluées dans le milieu d'enrichissement liquide (bouillon de Bolton) et homogénéisées.
Le milieu d'enrichissement est incubé à 37 °C durant 4 h à 6 h puis à 41,5 °C durant (44 ± 4) h.
4.3 Isolement et sélection pour confirmation. À partir des cultures obtenues en 4.2, le milieu sélectif
solide gélosé modifié à base de céfopérazone, de charbon et de désoxycholate de sodium (gélose mCCD) est
inoculé, incubé à 41,5 °C en atmosphère microaérophile et observé après (44 ± 4) h en vue de détecter la
présence de colonies supposées être des Campylobacter spp. en raison de leurs caractéristiques.
4.4 Confirmation. Les colonies supposées être des Campylobacter ssp. sont ensemencées sur un milieu
non sélectif, une gélose Colombia au sang; la confirmation est ensuite obtenue à l'aide d'un examen
microscopique ainsi que des essais biochimiques et des essais de croissance appropriés. En option, les
espèces Campylobacter spp. sont identifiées par des essais biochimiques spécifiques et par des essais de
sensibilité aux antibiotiques.
5 Milieux de culture et réactifs
5.1 Généralités. Pour la pratique de laboratoire courante, voir l'ISO 7218, l'ISO/TS 11133-1 et
l'ISO/TS 11133-2.
NOTE En raison du grand nombre de milieux de culture et de réactifs et à des fins de clarté du texte, leurs
compositions et préparations sont données dans l'Annexe B.
5.2 Milieu d'enrichissement liquide: bouillon de Bolton. Voir B.1.
5.3 Milieu d'isolement sélectif: gélose modifiée à base de céfopérazone, de charbon et de
désoxycholate de sodium (gélose mCCD). Voir B.2.
5.4 Milieux et réactifs de confirmation et d'identification.
5.4.1 Gélose Colombia au sang. Voir B.3.
5.4.2 Bouillon Brucella. Voir B.4.
5.4.3 Réactif permettant la détection d'oxydase. Voir B.5.
5.4.4 Solution de peroxyde d'hydrogène, 3 % (fraction volumique).
5.4.5 Réactifs permettant de détecter l'hydrolyse de l'hippurate. Voir B.6.
5.4.6 Gélose de Mueller Hinton au sang. Voir B.7.
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

5.4.7 Disques d'acide nalidixique et de céfalotine. Chaque type de disque contient 30 µg de réactif.
5.4.8 Disques d'acétate d'indoxyle. Voir B.8.
6 Appareillage
Matériel de laboratoire de microbiologie courant (voir l'ISO 7218) et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Appareil pour la stérilisation par chaleur sèche (étuve) ou stérilisation par voie humide
(autoclave). Voir l'ISO 7218.
6.2 Étuve, hotte à flux laminaire ou incubateur, pouvant être maintenu(e) à des températures comprises
entre 37 °C et 55 °C.
6.3 Incubateurs, pouvant être maintenus à (25 ± 1) °C, (37 ± 1) °C et (41,5 ± 1) °C.
6.4 Bain-marie, pouvant être maintenu à (37 ± 1) °C.
6.5 Bain-marie, pouvant être maintenu à une température comprise entre 47 °C et 50 °C.
6.6 pH-mètre, d'une précision de 0,1 unité de pH à 25 °C.
6.7 Récipients, en particulier des tubes de cultures de 18 mm × 180 mm et 9 mm × 180 mm, des tubes à
hémolyse de 13 mm × 75 mm, des flacons avec des fermetures métalliques non toxiques et/ou des fioles de
contenance adaptée, munies de couvercles appropriés.
6.8 Boîtes de Petri, en verre ou en plastique, de 90 mm à 100 mm de diamètre.
6.9 Pipettes graduées à écoulement total, pourvues d'une large ouverture et d'une capacité nominale de
[1] [2]
1 ml et de 10 ml, graduées par division de 0,1 ml, ISO 835 , classe A, et pipettes Pasteur, ISO 7712 .
6.10 Poires en caoutchouc, ou tout autre système de sécurité pouvant s'adapter aux pipettes graduées.
6.11 Anses stériles, en platine iridié, en alliage nickel-chrome ou en matière plastique, de 3 mm de
diamètre environ et des fils droits constitués des mêmes matériaux, ou une baguette en plastique ou une
baguette en verre.
Ne pas utiliser une anse en alliage nickel-chrome pour l'essai de l'oxydase (voir 9.5.6).
6.12 Pinces, fines, à bouts ronds, en acier inoxydable.
6.13 Microscope, de préférence à contraste de phase (pour observer la mobilité caractéristique de
Campylobacter spp.).
6.14 Appareil approprié pour obtenir une atmosphère microaérophile, avec des fractions volumiques en
oxygène de (5 ± 2) %, en dioxyde de carbone de (10 ± 3) %, en hydrogène u 10 % (facultatif), le complément
étant de l'azote. Des récipients appropriés étanches aux gaz sont utilisés pour placer les boîtes de Petri et/ou
les fioles ou flacons d'une contenance d'environ 350 ml employés pour le bouillon d'enrichissement, par
exemple des jarres bactériologiques anaérobies.
NOTE 1 L'atmosphère microaérophile appropriée peut être obtenue au moyen de kits de génération de gaz disponibles
dans le commerce en respectant scrupuleusement les instructions du fabricant, notamment celles relatives au volume de
la jarre et à la capacité du kit de génération de gaz. La jarre peut également être remplie d'un mélange de gaz approprié
avant l'incubation.
NOTE 2 Au lieu de l'incubation en atmosphère microaérophile, le bouillon d'enrichissement peut être incubé dans des
flacons, fioles ou tubes pourvus d'un bouchon à vis et remplis dudit bouillon, en laissant un espace vide inférieur à 20 mm
et en vissant hermétiquement les bouchons.
7 Échantillonnage
Il convient que le laboratoire reçoive un échantillon représentatif, non endommagé ou modifié lors du transport
ou de la conservation.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 10272. Voir la
Norme internationale spécifique se rapportant au produit concerné. S'il n'existe aucune Norme internationale
spécifique, il est recommandé que les parties concernées parviennent à un accord sur ce sujet.
Campylobacter spp. étant très sensible à la congélation, mais survivant mieux à basses températures, il est
recommandé de conserver les échantillons à une température de (+3 ± 2) °C et de les analyser aussi vite que
possible. Éviter également de laisser les échantillons se dessécher.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Préparer l'échantillon pour essai conformément à la partie pertinente de l'ISO 6887, traitant du produit
concerné. Si l'ISO 6887 n'est pas appropriée, il est recommandé que les parties concernées parviennent à un
accord sur ce sujet.
9 Mode opératoire
9.1 Généralités
Voir Figure A.1.
9.2 Prise d'essai, suspension mère et dilutions
9.2.1 Introduire une prise d'essai de x g ou x ml (minimum 15 g ou 15 ml), prélevée à partir de l'échantillon
pour essai (Article 8), dans 8 fois (minimum 120 ml) son volume de milieu d'enrichissement, le bouillon de
Bolton (5.2), et homogénéiser.
Il s'agit de la suspension mère.
9.2.2 Transférer 90 ml de suspension mère (9.2.1) dans un flacon de 100 ml. Cela représente 10 g de la
prise d'essai. Lors de la lecture des résultats, cette dilution correspond à 10 .
9.2.3 Transférer 10 ml de suspension mère (9.2.1) dans un tube de culture. Lors de la lecture des résultats,
cette dilution correspond à 10 . Après l'étape suivante de dilution (9.2.4), il reste 9 ml de cette dilution. Cela
représente 1 g de la prise d'essai.

−4 0
9.2.4 Procéder à une série de dilutions au 1/10 (par exemple jusqu'à 10 ) à partir de la dilution 10 (9.2.3)
en transférant 1,0 ml dans des tubes contenant 9,0 ml de bouillon de Bolton. Prélever et jeter 1,0 ml de la
dilution la plus élevée, tous les tubes devant contenir 9,0 ml. Lors de la lecture des résultats, ces dilutions
–1 –2
correspondent à 10 , 10 , etc.
9.3 Enrichissement
Incuber les prises d'essai et les dilutions (9.2.2, 9.2.3 et 9.2.4) en atmosphère microaérophile (6.14) à 37 °C
durant 4 h à 6 h puis à 41,5 °C durant (44 ± 4) h.
9.4 Isolement
9.4.1 À partir de chacune des cultures obtenues dans le milieu d'enrichissement (9.3), inoculer la surface
des boîtes de gélose du milieu d'isolement sélectif mCCD (5.3) au moyen d'une anse stérile (6.11).
4 © ISO 2010 – Tous droits réservés

9.4.2 Incuber les boîtes (9.4.1) à 41,5 °C en atmosphère microaérophile (6.14).
9.4.3 Après (44 ± 4) h d'incubation, examiner les boîtes pour détecter des colonies typiques et/ou
supposées de Campylobacter spp.
Sur la gélose mCCD, les colonies typiques sont grisâtres, souvent avec un reflet métallique. Elles sont, en
outre, plates et humides et présentent une tendance à s'étaler. Les colonies s'étalent moins sur des surfaces
de gélose plus sèches. D'autres formes de colonies peuvent apparaître.
9.5 Confirmation des Campylobacter spp.
9.5.1 Généralités
Les bactéries se détériorant rapidement dans l'air, suivre sans délai le mode opératoire décrit de 9.5.2 à 9.5.6.
9.5.2 Sélection de colonies pour confirmation
9.5.2.1 Pour procéder à la confirmation, prélever sur chaque boîte (9.4.3) au moins une colonie
considérée comme étant typique ou supposée être une colonie de Campylobacter spp., en examiner la
morphologie et la mobilité par un examen microscopique (9.5.3.1) et procéder de la même façon avec au
maximum quatre autres colonies si la première se révèle négative.
9.5.2.2 Ensemencer chacune des colonies sélectionnées sur une boîte de gélose Colombia au sang
(5.4.1) afin de permettre le développement de colonies bien isolées. Incuber les boîtes en atmosphère
microaérophile à 41,5 °C durant 24 h à 48 h. Utiliser les cultures pures pour l'examen de la morphologie, la
mobilité, la croissance en microaérobie à 25 °C, la croissance en aérobi
...

ТЕХНИЧЕСКИЕ ISO/TS
УСЛОВИЯ 10272-3
Первое издание
2010-03-01
Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных.
Горизонтальный метод обнаружения и
подсчета бактерий Campylobacter spp.
Часть 3.
Полуколичественный метод
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for
detection and enumeration of Campylobacter spp. —
Part 3:
Semi-quantitative method
Ответственность за подготовку русской версии несѐт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьѐй 18.1 Устава ISO

Ссылочный номер
©
ISO 2010
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на интегрированные шрифты и они не будут установлены на компьютере, на котором ведется редактирование. В
случае загрузки настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение
лицензионных условий фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO или IDF не несут никакой ответственности в этом
отношении.
Adobe – торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованные для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO и национальными комитетами IDF. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба
проинформировать Центральный секретариат по адресу, приведенному ниже.

ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56  CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2010 – Все права сохраняются

Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Принцип .2
5 Питательные среды и реактивы .2
6 Аппаратура .3
7 Отбор проб .4
8 Приготовление испытуемой пробы .4
9 Методика .4
9.1 Общие положения .4
9.2 Проба для анализа, исходная суспензия и разбавления .4
9.3 Обогащение .5
9.4 Изоляция .5
9.5 Подтверждение вида Campylobacter spp. .5
9.6 Идентификация вида Campylobacter spp. (альтернативная процедура) .6
10 Расчет и выражение результатов .8
10.1 Метод расчета .8
10.2 Прецизионность.9
11 Протокол испытания .9
Приложение A (нормативное) Диаграмма методики . 10
Приложение B (нормативное) Состав и приготовление питательных сред и реактивов . 11
Библиография . 17

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с
ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO
работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, приведенным в Директивах
ISO/IEC, Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимавших участие в голосовании.
При других обстоятельствах, особенно когда существует срочная потребность рынка в таких
документах, технический комитет может принять решение о публикации других типов нормативного
документа:
 общедоступные технические условия ISO (ISO/PAS) представляют собой соглашение между
техническими экспертами в рабочей группе ISO и принимаются к публикации после одобрения
более чем 50 % членов основного комитета, участвующих в голосовании;
 технические условия ISO (ISO/TS) представляют собой соглашение между членами технического
комитета и принимаются к публикации после одобрения 2/3 членов комитета, участвующих в
голосовании.
Документы ISO/PAS или ISO/TS рассматриваются спустя три года для принятия решения, в
соответствии с которым они либо утверждаются на последующие три года, либо пересматриваются и
преобразовываются в Международный стандарт, либо аннулируются. Если документ ISO/PAS или
ISO/TS одобряется, то он пересматривается снова через три года, в течение которых документ должен
быть либо преобразован в Международный стандарт, либо аннулирован.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не должен нести ответственность за идентификацию какого-либо одного или всех таких
патентных прав.
ISO/TS 10272-3 разработан Техническим комитетом ISO/ТC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом
SC 9, Микробиология.
ISO 10272 состоит из следующих частей под общим названием Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Горизонтальный метод обнаружения и подсчета бактерий Campylobacter spp.
— Часть 1. Метод обнаружения
— Часть 2. Метод подсчета колоний [Технические условия]
— Часть 3. Полуколичественный метод [Технические условия]
iv © ISO 2010 – Все права сохраняются

Введение
Принимая во внимание большое разнообразие пищевых продуктов и кормов, ISO 10272 не может быть
применим во всех деталях к некоторым видам продукции, а для некоторых других видов продукции
может потребоваться использование других методов.
Вместе с тем во всех случаях следует предпринимать попытки применения, по мере возможности,
ISO 10272, а какие-либо отклонения от него могут быть обоснованы исключительно в силу технических
причин.
При последующем пересмотре ISO 10272 во внимание будет принята вся имеющаяся информация
относительно пределов применения этих методов и доводы в пользу отступления от них в случае
анализа конкретных видов продукции. Гармонизация методов испытаний не может быть осуществлена
в ближайшее время, а в отношении некоторых групп продукции уже существуют международные
стандарты и/или национальные стандарты, которые не согласуются с ISO 10272. Выражается
пожелание, что в период пересмотра этих стандартов в них будут внесены изменения с целью
приведения их в соответствие с ISO 10272 с тем, чтобы в итоге только оставшиеся отклонения были
действительно обоснованы по установленным техническим причинам.

ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ ISO/TS 10272-3:2010(R)

Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных. Горизонтальный метод обнаружения и подсчета
бактерий Campylobacter spp.
Часть 3.
Полуколичественный метод
1 Область применения
Настоящая часть ISO 10272 содержит описание горизонтального метода полуколичественного
определения Campylobacter spp.
Она применима к продукции, предназначенной для потребления человеком или кормления животных,
и к пробам окружающей среды в сфере производства и обращения с пищевой продукцией. Однако
возможно, что данная часть ISO 10272 не применима во всех деталях к некоторым видам продукции,
поэтому отклонения от них по техническим причинам становятся необходимыми. Возможно, что
данная часть ISO 10272 совсем не применима к некоторым другим видам продукции.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 6887 (все части), Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление
проб для испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических
исследований
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям
ISO/TS 11133-1, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания
по приготовлению и производству питательных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по
обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории
ISO/TS 11133-2:2003, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие
указания по приготовлению и производству питательных сред. Часть 2. Практические
руководящие указания по определению эффективности питательных сред
3 Термины и определения
В настоящем документе используются следующие термины и определения.
3.1
Campylobacter
Campylobacter
микробиология пищевых и кормовых Campylobacterрод микроорганизмов, образующих характерные
колонии на твердых селективных средах, когда их инкубируют микроаэробным способом при
температуре 41,5 ºC, но не при 25 ºC, и которые обладают характерной подвижностью,
биохимическими свойствами и способностью к росту, описанными в тех случаях, когда испытания
проводятся в соответствии с настоящей частью ISO 10272
ПРИМЕЧАНИЕ Наиболее часто встречающимися видами являются Campylobacter jejuni и C. coli. Вместе с тем,
были описаны и другие виды (C. lari, C. upsaliensis и некоторые другие).
3.2
полуколичественное определение
semi-quantitative determination
микробиология пищевых и кормовых Campylobacter определение уровня загрязнения Campylobacter
в том случае, когда ожидается низкое количество или если уровень сопутствующей флоры
относительно высок
4 Принцип
4.1 Общие положения. Для полуколичественного определения Campylobacter spp. необходимы
операции, описанные в 4.2 – 4.4 (см. Рисунок A.1).
4.2 Обогащение в селективной жидкой среде. Пробу для анализа и ее десятичные разбавления
инокулируют или разбавляют в жидкой обогатительной среде (бульон Болтона) и гомогенизируют.
Обогатительную среду инкубируют при 37 ºC в течение 4 – 6 ч и затем при 41,5ºC в течение (44 ч ± 4) ч.
4.3 Изоляция и отбор для подтверждения. Из культур, полученных в 4.2, твердую селективную
среду, основанную на модифицированном агаре с углем, цефоперазоном и дезоксихолатом
(mCCD агар), инокулируют, инкубируют при 41,5 °C в микроаэробной атмосфере и проверяют после
(44  4) ч с целью обнаружения присутствия колоний, которые по своим характеристикам
предположительно являются Campylobacter spp.
4.4 Подтверждение. Колонии, предположительно являющиеся Campylobacter spp., пересевают на
неселективный колумбийский кровяной агар и затем подтверждают при помощи исследования под
микроскопом и надлежащих биохимических испытаний и испытаний на рост. Дополнительно вид
Campylobacter spp. идентифицируют путем специфических биохимических испытаний и испытаний на
чувствительность к антибиотикам.
5 Питательные среды и реактивы
5.1 Общие положения. Для получения информации об общепринятой лабораторной практике см.
ISO 7218, ISO/TS 11133-1 и ISO/TS 11133-2.
ПРИМЕЧАНИЕ Ввиду наличия большого количества питательных сред и реактивов и для ясности изложения,
их составы и процедуры приготовления приведены в Приложении B.
5.2 Жидкая обогатительная среда: бульон Болтона. См. B.1.
5.3 Селективная среда для чашек Петри: модифицированный агар с углем, цефоперазоном и
дезоксихолатом (mCCD агар). СМ. B.2.
2 © ISO 2010 – Все права сохраняются

5.4 Среды и реактивы для подтверждения и идентификации.
5.4.1 Колумбийский кровяной агар. См. B.3.
5.4.2 Бульон для бруцелл. См. B.4.
5.4.3 Реактив для обнаружения оксидазы. См. B.5.
5.4.4 Раствор пероксида водорода, 3 % (объемная доля).
5.4.5 Реактивы для определения гидролиза гиппурата. См. B.6.
5.4.6 Кровяной агар Мюллера-Хинтона. См. B.7.
5.4.7 Диски с налидиксовой кислотой и цефалотином. Каждый тип диска содержит по 30 мкг
реактива.
5.4.8 Диски с индоксилацетатом. См. B.8.
6 Аппаратура
Используют обычную микробиологическую лабораторную аппаратуру (см. ISO 7218) и, в частности,
нижеприведенную.
6.1 Оборудование для сухой стерилизации (сушильный шкаф) или влажной стерилизации
(автоклав). См. ISO 7218.
6.2 Сушильный шкаф, ламинарный бокс или термостат, способные функционировать в
диапазоне температур от 37 °C до 55 °C.
6.3 Термостат, работающий при (25  1) °C, (37  1) °C и (41,5  1) °C.
6.4 Водяная баня, работающая при (37  1) °C.
6.5 Водяная баня, работающая в диапазоне от 47 °C до 50 °C.
6.6 pH-метр, с точностью до 0,1 pH при 25 °C.
6.7 Емкости, в частности, культуральные пробирки с размерами 18 мм × 180 мм и 9 мм × 180 мм,
пробирки для гемолиза с размерами 13 мм × 75 мм, бутылки с нетоксичными металлическими
крышками и/или колбы подходящей вместимости с соответствующими крышками.
6.8 Чашки Петри, стеклянные или пластиковые, диаметром 90 мм – 100 мм.
6.9 Градуированные пипетки, поставляющие полный объем, с широким отверстием,
[1]
номинальной вместимостью 1 мл и 10 мл, градуированные с ценой деления 0,1 мл, ISO 835 класс A,
[2]
и пастеровские пипетки, ISO 7712 .
6.10 Резиновые соски, или любая другая безопасная система, которую можно адаптировать к
градуированным пипеткам.
6.11 Стерильные петли, из платиново-иридиевого или никелево-хромового сплава либо
пластиковые, диаметром приблизительно 3 мм, и проволоки из того же материала или стеклянная или
пластиковая палочка.
Петля из никелево-хромового сплава не пригодна для использования в испытании на оксидазу (см. 9.5.6).
6.12 Пинцет, тонкий, с закругленными краями, из нержавеющей стали.
6.13 Микроскоп, предпочтительно с фазовым контрастом (для наблюдения характерной подвижности
Campylobacter spp.).
6.14 Надлежащее оборудование для достижения микроаэробной атмосферы с объемными
долями: кислорода (5  2) %, диоксида углерода (10  3) %, альтернативного водорода ≤ 10 %, с
соблюдением баланса азота. Используют надлежащие герметичные контейнеры, чтобы удерживать
чашки Петри и/или колбы или бутылки вместимостью примерно 350 мл, используемые для
обогатительного бульона, например, бактериологические анаэробные сосуды.
ПРИМЕЧАНИЕ 1 Соответствующая микроаэробная атмосфера может быть получена при использовании
имеющихся в продаже газогенераторных комплектов; следует в точности соблюдать инструкции изготовителя,
особенно те из них, которые касаются объема сосуда и вместимости газогенераторного комплекта. В качестве
альтернативы можно использовать заполнение сосуда надлежащей газовой смесью перед инкубацией.
ПРИМЕЧАНИЕ 2 В качестве альтернативы инкубации в микроаэробной атмосфере, обогатительный бульон
можно инкубировать в бутылках с винтовыми крышками, колбах или пробирках, заполнив их обогатительным
бульоном, оставляя свободное пространство величиной менее 20 мм и тщательно закупоривая крышками.
7 Отбор проб
В лабораторию должна поступать репрезентативная проба. Она не должна подвергаться повреждению
или изменению в период транспортировки или хранения.
Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящей части ISO 10272. См. конкретный
международный стандарт, распространяющийся на данную продукцию. Если не существует
конкретного международного стандарта, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли
согласия по данному вопросу.
Принимая во внимание, что Campylobacter spp. весьма чувствительны к замораживанию, но лучше
выживают при низких температурах, рекомендуется, чтобы пробы не хранились при температуре
( 3  2) °C и анализировались в кратчайшие сроки. Также принимают меры по предотвращению
высыхания проб.
8 Приготовление испытуемой пробы
Испытуемую пробу приготовляют в соответствии с соответствующей частью ISO 6887,
распространяющейся на определенный вид продукции. Если не существует соответствующей части
ISO 6887, рекомендуется, чтобы заинтересованные стороны достигли согласия по данному вопросу.
9 Методика
9.1 Общие положения
См. Рисунок A.1.
9.2 Проба для анализа, исходная суспензия и разбавления
9.2.1 Вводят пробу для анализа в количестве x г или x мл (минимум 15 г или 15 мл) из испытуемой
пробы (Раздел 8) в восьмикратный объем (120 мл минимум) обогатительной среды – бульон Болтона
(5.2) и гомогенизируют.
Полученная суспензия является исходной суспензией.
9.2.2 Переносят 90 мл исходной суспензии (9.2.1) в бутылку вместимостью 100 мл. Это
соответствует 10 г пробы для анализа. При подсчете результатов это разбавление соответствует 10 .
4 © ISO 2010 – Все права сохраняются

9.2.3 Переносят 10 мл исходной суспензии (9.2.1) в культуральную пробирку. При подсчете
результатов это разбавление соответствует 10 . После следующей стадии разбавления (9.2.4)
остается 9 мл этого разбавления. Это соответствует 1 г пробы для анализа.

–4 0
9.2.4 Делают обычную серию 10-кратных разбавлений (например, до 10 ) из 10 разбавления (9.2.3),
перенося по 1,0 мл в пробирки, содержащие 9,0 мл бульон Болтона. Из наибольшего разбавления
отбрасывается 1,0 мл, поскольку все пробирки должны содержать по 9,0 мл. При подсчете результатов
–1 –2
эти разбавления соответствуют 10 , 10 и т.д.
9.3 Обогащение
Инкубируют пробы для анализа и разбавления (9.2.2, 9.2.3 и 9.2.4) в микроаэробной атмосфере (6.14)
при 37 ºС от 4 ч до 6 ч, затем при 41,5 ºС в течение (44  4) ч.
9.4 Изоляция
9.4.1 Используя каждую из культур, полученных в обогатительной среде (9.2), инокулируют
стерильной петлей (6.11) поверхность слоев с селективной изолирующей средой на основе
mCCD агара (5.3).
9.4.2 Инкубируют слои (9.4.1) при 41,5 ºС в микроаэробной атмосфере (6.14).
9.4.3 После инкубации в течение (44  4) ч исследуют слои с целью выявления типичных и/или
подозрительных колоний Campylobacter spp.
Типичные колонии на mCCD агаре имеют сероватый цвет, часто с металлическим блеском, они
плоские и влажные и имеют тенденцию к разрастанию. Разрастание колоний выражено меньше на
более сухих поверхностях агара. Могут встречаться и другие формы колоний.
9.5 Подтверждение вида Campylobacter spp.
9.5.1 Общие положения
Поскольку рассматриваемые бактерии быстро разрушаются на воздухе, необходимо незамедлительно
следовать процедурам, описанным в 9.5.2 – 9.5.6.
9.5.2 Отбор колонии для подтверждения
9.5.2.1 Для подтверждения с каждого слоя (9.4.3) отбирают по меньшей мере одну колонию,
рассматриваемую в качестве типичной или подозрительной колонии Campylobacter spp., исследуют
морфологию и подвижность с помощью микроскопа (9.5.3.1) и продолжают тем же способом с еще
четырьмя колониями, если первая дала отрицательный результат.
9.5.2.2 Производят посев каждой из отобранных колоний на слой колумбийского кровяного агара
(5.4.1), чтобы дать развиться четко изолированным колониям. Слои инкубир
...