ISO 23305:2020

NORME ISO
INTERNATIONALE 23305
Première édition
2020-04
Poudres de lait fortifié, formules
infantiles et produits nutritionnels
pour adultes — Détermination
de la teneur en biotine totale par
chromatographie liquide après
une purification sur colonne
d'immunoaffinité
Fortified milk powders, infant formula and adult nutritionals —
Determination of total biotin by liquid chromatography coupled with
immunoaffinity column clean-up extraction
Numéro de référence
ISO 23305:2020(F)
©
ISO 2020

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ISO 23305:2020(F)

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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs et matériaux . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Préparation des réactifs . 3
5.3 Préparation des solutions étalons . 3
5.4 Calcul de la concentration . 4
6 Appareillage . 4
7 Mode opératoire. 5
7.1 Préparation de l’échantillon . 5
7.2 Chromatographie . 7
7.3 Contrôle qualité . 7
8 Calculs . 8
9 Fidélité . 9
9.1 Généralités . 9
9.2 Répétabilité . 9
9.3 Reproductibilité . 9
10 Incertitude de mesure . 9
11 Limites de quantification . 9
Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes .10
Annexe B (informative) Données de fidélité .12
Annexe C (informative) Comparaison entre le présent document et l’EN 15607 .14
Bibliographie .16
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Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, en
collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Il est publié par l’ISO, et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans le présent document est l’équivalent de la méthode officielle
de l’AOAC 2016.02: Determination of Total Biotin by Liquid Chromatography Coupled with Immunoaffinity
Column Cleanup Extraction: Multilaboratory Testing, Final Action 2016.02.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
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Poudres de lait fortifié, formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes — Détermination de la teneur
en biotine totale par chromatographie liquide après une
purification sur colonne d'immunoaffinité
AVERTISSEMENT — La présente méthode peut impliquer l’utilisation de produits dangereux
et la mise en œuvre de modes opératoires et d’appareillage à caractère dangereux. La
présente méthode n’est pas destinée à traiter de tous les problèmes de sécurité liés à son
utilisation. Il incombe à l’utilisateur de la présente méthode d’établir, avant de l’utiliser, des
pratiques d’hygiène et de sécurité appropriées et de déterminer l’applicabilité des restrictions
réglementaires.
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de détermination quantitative de la teneur en biotine
et/ou biocytine dans les poudres de lait fortifié, les formules infantiles et les produits nutritionnels
pour adultes sous formes solides (c’est-à-dire, poudres) ou liquides (c’est-à-dire, liquides et concentrés
liquides prêts à l’emploi) par chromatographie liquide après purification sur colonne d’immunoaffinité.
Les données de fidélité extraites d’un essai interlaboratoires sont indiquées à l’Annexe B. Une
comparaison des données obtenues avec la méthode du présent document et l’EN 15607 est indiquée à
l’Annexe C.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/
3.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment spécialement formulé, complet sur le plan nutritionnel, consommé sous forme liquide, qui peut
constituer la seule source d’alimentation, constitué de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,
lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte
3.2
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, à lui seul, les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de leur vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: Codex Standard 72-1981]
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4 Principe
Dispersion de l’échantillon dans un tampon phosphate de sodium et passage à l’autoclave à 121 °C ± 2 °C
pendant 25 min. Refroidissement de l’échantillon à température ambiante puis dilution à 100 ml dans
une fiole jaugée. Centrifugation et filtration de l’extrait à l’aide d’un filtre en microfibres de verre.
Collecte du filtrat limpide en vue de sa purification et de son extraction. Montage d’une colonne
d’immunoaffinité pour la biotine sur un collecteur d’extraction en phase solide (SPE). Raccordement
d’un corps de seringue jetable à la colonne d’immunoaffinité en tant que réservoir. Élimination du
tampon présent dans la colonne d’affinité, dépôt du filtrat d’échantillon à travers le réservoir et
écoulement par gravité. Lavage de la colonne avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS)
puis avec de l’eau. Introduction d’air dans la colonne pour éliminer le liquide résiduel.
Élution de la biotine et/ou biocytine de la colonne avec du méthanol et collecte dans un flacon.
Évaporation à sec de l’éluat à l’aide d’un bloc chauffant réglé à 85 °C ± 5 °C sous un léger flux d’azote
et reconstitution de l’échantillon dans 1 ml d’eau. Analyse simultanée par CLHP de la biotine et de
la biocytine dans l’échantillon reconstitué à l’aide d’un détecteur à barrette de diodes (PDA) réglé à
200 nm. Identification des pics d’après le temps de rétention absolu. Quantification par étalonnage
externe multipoint à l’aide des réponses des aires de pic des analytes. Possibilité d’utiliser un spectre
(200 nm à 350 nm) pour confirmer la pureté et l’identité selon les exigences.
5 Réactifs et matériaux
5.1 Généralités
Pendant l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue, et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau d’une pureté équivalente.
5.1.1 Eau de qualité pour laboratoire.
5.1.2 Dihydrogénophosphate de sodium dihydraté (CAS n° 13472-35-0).
5.1.3 Hydrogénophosphate de disodium dihydraté (CAS n° 10028-24-7).
5.1.4 Hydroxyde de sodium (CAS n° 1310-73-2).
5.1.5 Méthanol, de qualité CLHP (CAS n° 67-56-1).
5.1.6 Acétonitrile, de qualité CLHP (CAS n° 75-05-8).
5.1.7 Acide orthophosphorique, fraction massique w (H PO ) = 85 % (CAS n° 7664-38-2).
3 4
1)
5.1.8 PBS, pH = 7,4 (Thermo Scientific ou équivalent).
1)
5.1.9 Biotine, pureté ≥ 99 % (réf. B4501 Sigma Chemical ou équivalent).
1)
5.1.10 Biocytine, pureté ≥ 98 % (réf. B4261 Sigma Chemical ou équivalent).
1) Il s’agit d’un exemple d’un produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est donnée par
souci de commodité à l’intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de
l’ISO à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux
mêmes résultats.
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5.2 Préparation des réactifs
5.2.1 Hydroxyde de sodium, concentration c = 2 mol/l.
Peser 80 g d’hydroxyde de sodium dans une fiole jaugée de 1 l, dissoudre et compléter au volume avec
de l’eau.
5.2.2 Tampon phosphate de sodium, c = 0,15 mol/l.
Peser 9,15 g de dihydrogénophosphate de sodium dihydraté et 16,31 g d’hydrogénophosphate de
disodium dihydraté dans une fiole jaugée de 1 l, dissoudre et compléter au volume avec de l’eau. Ajuster
le pH à 7 avec la solution d’hydroxyde de sodium à 2 mol/l.
5.2.3 Acide phosphorique, w = 0,1 %.
Dans une fiole jaugée de 1 l, transvaser 500 ml d’eau. Ajouter 1,2 ml d’acide orthophosphorique.
Mélanger et compléter au volume avec de l’eau.
5.2.4 Phase mobile A, 0,1 % d’acide phosphorique dans l’eau.
5.2.5 Phase mobile B, 100 % d’acétonitrile.
5.2.6 Phase mobile C, 80 % d’acétonitrile.
5.3 Préparation des solutions étalons
5.3.1 Solution mère étalon de biotine, concentration massique ρ = 100 μg/ml.
Dans une fiole jaugée ambrée de 250 ml, peser 25 mg de l’étalon de biotine. Ajouter 150 ml d’eau et
passer au bain à ultrasons à température ambiante pendant 90 min en agitant occasionnellement.
Compléter au volume avec de l’eau.
5.3.2 Solution mère étalon de biocytine, ρ = 100 μg/ml.
Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser 10 mg d’étalon de biocytine. Ajouter 60 ml d’eau et passer au
bain à ultrasons à température ambiante pendant 90 min en agitant occasionnellement. Compléter au
volume avec de l’eau.
5.3.3 Solution étalon intermédiaire mixte, ρ = 100 μg/100 ml.
Diluer 1 ml de chaque solution mère étalon dans 100 ml d’eau.
5.3.4 Solution d’étalonnage 1, ρ = 1,0 μg/100 ml.
Diluer 100 μl de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
5.3.5 Solution d’étalonnage 2, ρ = 2,5 μg/100 ml.
Diluer 250 μl de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
5.3.6 Solution d’étalonnage 3, ρ = 5,0 μg/100 ml.
Diluer 500 μl de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
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5.3.7 Solution d’étalonnage 4, ρ = 7,5 μg/100 ml.
Diluer 750 μl de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
5.3.8 Solution d’étalonnage 5, ρ = 10 μg/100 ml.
Diluer 1 ml de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
5.3.9 Solution d’étalonnage 6, ρ = 20 μg/100 ml.
Diluer 2 ml de solution étalon intermédiaire mixte dans 10 ml d’eau.
5.4 Calcul de la concentration
Les concentrations données en 5.3 sont purement indicatives. Calculer les concentrations réelles
en biotine et en biocytine dans chaque solution d’étalonnage, en μg/100 ml, d’après la Formule (1). Il
convient d’injecter les solutions d’étalonnage au début et en fin de cycle d’analyse.
mP××10×V
()
1 is
ρ = (1)
()biotine/biocytine
V×10
()
où
m est la masse de biotine ou de biocytine, en mg;
1
P est le pourcentage de pureté indiqué par le certificat d’analyse ou vérifié par les
monographies de l’USP/BP/Ph Eur;
V est le volume de solution étalon intermédiaire mixte pour la solution d’étalonnage, en ml;
is
V est le volume de solution mère étalon, V = 250 ml pour la biotine et V = 100 ml pour la
biocytine.
6 Appareillage
Appareillage et verrerie de laboratoire habituels et, en particulier, les éléments suivants.
6.1 Système CLHP, constitué d’un détecteur PDA, d’un système de pompe à gradient basse pression,
d’une unité d’injection d’échantillons, d’une unité de dégazage e
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