ISO 13366-1:1997
(Main)Milk — Enumeration of somatic cells — Part 1: Microscopic method
Milk — Enumeration of somatic cells — Part 1: Microscopic method
Lait — Dénombrement des cellules somatiques — Partie 1: Méthode au microscope
La présente partie de l'ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques. La méthode est applicable à la préparation d'échantillons pour essais étalons et à l'étalonnage de procédés mécanisés et automatiques de comptage des cellules.
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL
IS0
STANDARD
13366-l
First edition
1997-06-I 5
Milk - Enumeration of somatic cells -
Part 1:
Microscopic method
Lait - Dknombrement des cellules soma tiques -
Parfie I: Mkthode au microscope
Reference number
IS0 13366-l :1997(E)
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IS0 13366-l :1997(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work of
preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for which
a technical committee has been established has the right to be represented
on that committee. International organizations, governmental and non-
governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 13366-1 was prepared by Technical
Committee lSO/TC 34, Agricultural food products, in collaboration with the
International Dairy Federation (IDF) and AOAC INTERNATIONAL, and will
also be published by these organizations.
IS0 13366 consists of the following parts, under the general title Milk -
Enumeration of soma tic cells:
Part I: Microscopic method
Electronic particle counter method
Part 2:
Part 3: Nuoro-opto-electronic method
Annex A of this part of IS0 13366 is for information only.
0 IS0 1997
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Internet central @ isocs.iso.ch
x.400
c=ch; a=40Onet; p=iso; o=isocs; s=central
Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD 0 Iso IS0 13366-I : 1997(E)
- Enumeration of somatic cells -
Milk
Part 1:
Microscopic method
WARNING - The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment. This
standard does not purport to address all of the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices and to
determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of IS0 13366 specifies a method for counting somatic cells in both raw and chemically preserved milk. The
method is suitable for preparing standard test samples and for calibrating mechanized and automatic cell-counting
procedures.
2 Definition
For the purposes of this part of IS0 13366, the following definition applies.
2.1 somatic cells: Those cells with nuclei, that is, all leucocytes and epithelial cells.
3 Principle
Spreading of a test portion of the milk to be examined over a slide to form a film. Drying and staining of the film and
subsequent counting of the stained cells using a microscope. Multiplication of the number of cells counted in a
defined area by a working factor to give the number of cells per millilitre.
4 Reagents
WARNING - Tetrachloroethane is poisonous. Ethidium bromide is toxic. The preparation and application
of the dye solution shall be carried out in a fume cupboard. Use gloves for protection.
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or deionized water or
water of equivalent purity.
1
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@ IS0
IS0 13366-l :1997(E)
4.1 Dye solution
4.1 .l Composition
Ethanol 95 % (VW) 54,0 ml
Tetrachloroethane 40,O ml
Methylene blue 05 g
Acetic acid, glacial 6,0 ml
NOTE - As an alternative, tetrachloroethane may be replaced by the same amount of trichloroethane. Instead of methylene
blue, ethidium bromide can be used (see IS0 13366-3).
4.1.2 Preparation
Mix the ethanol and tetrachloroethane in a bottle. Heat in the water bath (5.1) set at 65 “C. Add the methylene blue
and mix carefully. Cool in a refrigerator to 4 “C and then add the glacial acetic acid. Pass the solution through an
appropriate filter (5.3) into an airtight bottle and store it as such. If necessary, filter again before use.
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 Water bath, capable of being maintained at a temperature of 65 “C + 5 “C.
5.2 Water bath, capable of being maintained at a temperature of 35 “C ~fi 5 “C.
5.3 Filter, resistant to the solvents used, with a pore size of between 10 pm and 12 pm or less.
5.4 Microscope, with magnification of between x 500 and x 1 000.
If ethidium bromide is used, the microscope shall have fluorescence equipment.
5.5 Microsyringe, of capacity 0,Ol ml, with maximum tolerance of 2 %.
5.6 Slides, marked with the outline of a shape of a film of dimensions 20 mm x 5 mm, or a standard slide and a
template of dimensions 20 mm x 5 mm.
5.7 Hot-plate, capable of being maintained at a temperature of 40 “C + 10 “C.
5.8 Fan, hairdryer type.
6 Sampling
6.1 It is important that the laboratory receive a sample which is truly representative and has not been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A
...
ISO
NORME
13366-l
INTERNATIONALE
Première édition
1997-06-l 5
Lait - Dénombrement des cellules
somatiques
Partie 1:
Méthode au microscope
Milk - Enumeration of somatic cells -
Part 1: Microscopic method
Numéro de référence
ISO 133664 : 1997(F)
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ISO 133664:1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 13366-1 a été élaborée par le comité
technique ISOTTC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers en collaboration avec la Fédération internationale de
laiterie (FIL) et I’AOAC INTERNATIONAL, et sera également publiée par
ces organisations.
L’ISO 13366 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
général Lait - Dénombrement des cellules somatiques:
- Partie 1: Méthode au microscope
- Partie 2: Méthode au compteur électronique de particules
- Partie 3: Méthode fluoro-opto-électronique
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 13366 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Internet central @ isocs.iso.ch
x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Imprimé en Suisse
ii
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NORME INTERNATIONALE @ ISO ISO 133664 : 1997(F)
Lait - Dénombrement des cellules somatiques
Partie 1:
Méthode au microscope
AVERTISSEMENT - L’utilisation de la présente Norme internationale implique l’intervention de produits,
d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale n’a pas la
prétention d’aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. II est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente Norme internationale de consulter et d’établir des règles de sécurité et d’hygiène
appropriées et de déterminer I’applicabilité des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d‘application
La présente partie de I’ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois
dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques. La méthode est applicable à la préparation
d’échantillons pour essais étalons et à l’étalonnage de procédés mécanisés et automatiques de comptage des
cellules.
2 Définition
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 13366, la définition suivante s’applique.
2.1 cellules somatiques: Cellules pourvues d’un noyau, c’est-à-dire les leucocytes et les cellules épithéliales.
3 Principe
Étalement sur une lame d’une prise d’essai prélevée dans le lait soumis à l’essai, jusqu’à l’obtention d’un film.
Séchage et coloration du film, puis comptage des cellules colorées à l’aide d’un microscope. Multiplication du
nombre de cellules comptées sur une surface définie par un coefficient de travail permettant d’obtenir le nombre de
cellules par millilitre.
4 Réactifs
AVERTISSEMENT - Le tétrachloroéthane est un poison et le bromure d’éthidium est toxique. La
préparation et l’application de la solution de coloration doivent être effectuées sous hotte fermée. Utiliser
des gants de protection.
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@ ISO
ISO 13366-l : 1997(F)
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou
déionisée ou de pureté équivalente.
4.1 Solution de coloration
4.1 .l Composition
Éthanol 95 % (WV) 54,0 ml
Tétrachloroéthane 40,O ml
Bleu de méthylène
096 g
Acide acétique, cristallisable 6,0 ml
NOTE - Le tétrachloroéthane peut être remplacé par la même quantité de trichloroéthane. À la place du bleu de méthylène,
du bromure d’éthidium peut être utilisé (voir I’ISO 13366-3).
4.1.2 Préparation
Mélanger I’éthanol et le tétrachloroéthane dans un flacon. Chauffer le mélange dans le bain d’eau (5.1) réglé à
65 OC. Ajouter le bleu de méthylène et mélanger soigneusement. Refroidir dans un réfrigérateur jusqu’à 4 “C, puis
ajouter l’acide acétique cristallisable. Faire passer la solution sur un filtre de porosité appropriée (5.3) et la
conserver dans un flacon hermétiquement fermé. Si nécessaire, filtrer à nouveau la solution avant de l’utiliser.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Bain d’eau, réglable à 65 OC k 5 OC.
5.2 Bain d’eau, réglable à 35 “C + 5 “C.
5.3 Filtre, résistant aux solvants utilisés de porosité comprise entre 10 prn et 12 prn ou inférieure.
5.4 Microscope, permettant un grossissement compris entre x 500 et x 1 000.
Si du bromure d’éthidium est utilisé, le microscope doit être muni d’un équipement de fluorescence.
5.5 Microseringue, de 0,Ol ml de capacité, avec une tolérance maximale de 2 %.
5.6 Lames, avec repères correspondant aux dimensions du film, soit 20 mm x 5 mm, ou lames ordinaires avec
gabarit de 20 mm x 5 mm.
5.7 Plaque chauffante, réglable à 40 “C + 10 OC.
5.8 Ventilateur, de type sèche-cheveux.
6 Échantillonnage
6.1 II est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié
lors du transport et de l’entreposage.
2
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@ ISO
ISO 133664 : 1997(F)
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode prescrite dans la pré
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ISO
NORME
13366-l
INTERNATIONALE
Première édition
1997-06-l 5
Lait - Dénombrement des cellules
somatiques
Partie 1:
Méthode au microscope
Milk - Enumeration of somatic cells -
Part 1: Microscopic method
Numéro de référence
ISO 133664 : 1997(F)
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ISO 133664:1997(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales,
en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore
étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI) en
ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 13366-1 a été élaborée par le comité
technique ISOTTC 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers en collaboration avec la Fédération internationale de
laiterie (FIL) et I’AOAC INTERNATIONAL, et sera également publiée par
ces organisations.
L’ISO 13366 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
général Lait - Dénombrement des cellules somatiques:
- Partie 1: Méthode au microscope
- Partie 2: Méthode au compteur électronique de particules
- Partie 3: Méthode fluoro-opto-électronique
L’annexe A de la présente partie de I’ISO 13366 est donnée uniquement à
titre d’information.
0 ISO 1997
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-121 1 Genève 20 l Suisse
Internet central @ isocs.iso.ch
x.400 c=ch; a=400net; p=iso; o=isocs; s=central
Imprimé en Suisse
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NORME INTERNATIONALE @ ISO ISO 133664 : 1997(F)
Lait - Dénombrement des cellules somatiques
Partie 1:
Méthode au microscope
AVERTISSEMENT - L’utilisation de la présente Norme internationale implique l’intervention de produits,
d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale n’a pas la
prétention d’aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. II est de la responsabilité de
l’utilisateur de la présente Norme internationale de consulter et d’établir des règles de sécurité et d’hygiène
appropriées et de déterminer I’applicabilité des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d‘application
La présente partie de I’ISO 13366 prescrit une méthode pour le dénombrement des cellules somatiques à la fois
dans le lait cru et dans le lait contenant des conservateurs chimiques. La méthode est applicable à la préparation
d’échantillons pour essais étalons et à l’étalonnage de procédés mécanisés et automatiques de comptage des
cellules.
2 Définition
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 13366, la définition suivante s’applique.
2.1 cellules somatiques: Cellules pourvues d’un noyau, c’est-à-dire les leucocytes et les cellules épithéliales.
3 Principe
Étalement sur une lame d’une prise d’essai prélevée dans le lait soumis à l’essai, jusqu’à l’obtention d’un film.
Séchage et coloration du film, puis comptage des cellules colorées à l’aide d’un microscope. Multiplication du
nombre de cellules comptées sur une surface définie par un coefficient de travail permettant d’obtenir le nombre de
cellules par millilitre.
4 Réactifs
AVERTISSEMENT - Le tétrachloroéthane est un poison et le bromure d’éthidium est toxique. La
préparation et l’application de la solution de coloration doivent être effectuées sous hotte fermée. Utiliser
des gants de protection.
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@ ISO
ISO 13366-l : 1997(F)
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l’eau distillée ou
déionisée ou de pureté équivalente.
4.1 Solution de coloration
4.1 .l Composition
Éthanol 95 % (WV) 54,0 ml
Tétrachloroéthane 40,O ml
Bleu de méthylène
096 g
Acide acétique, cristallisable 6,0 ml
NOTE - Le tétrachloroéthane peut être remplacé par la même quantité de trichloroéthane. À la place du bleu de méthylène,
du bromure d’éthidium peut être utilisé (voir I’ISO 13366-3).
4.1.2 Préparation
Mélanger I’éthanol et le tétrachloroéthane dans un flacon. Chauffer le mélange dans le bain d’eau (5.1) réglé à
65 OC. Ajouter le bleu de méthylène et mélanger soigneusement. Refroidir dans un réfrigérateur jusqu’à 4 “C, puis
ajouter l’acide acétique cristallisable. Faire passer la solution sur un filtre de porosité appropriée (5.3) et la
conserver dans un flacon hermétiquement fermé. Si nécessaire, filtrer à nouveau la solution avant de l’utiliser.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Bain d’eau, réglable à 65 OC k 5 OC.
5.2 Bain d’eau, réglable à 35 “C + 5 “C.
5.3 Filtre, résistant aux solvants utilisés de porosité comprise entre 10 prn et 12 prn ou inférieure.
5.4 Microscope, permettant un grossissement compris entre x 500 et x 1 000.
Si du bromure d’éthidium est utilisé, le microscope doit être muni d’un équipement de fluorescence.
5.5 Microseringue, de 0,Ol ml de capacité, avec une tolérance maximale de 2 %.
5.6 Lames, avec repères correspondant aux dimensions du film, soit 20 mm x 5 mm, ou lames ordinaires avec
gabarit de 20 mm x 5 mm.
5.7 Plaque chauffante, réglable à 40 “C + 10 OC.
5.8 Ventilateur, de type sèche-cheveux.
6 Échantillonnage
6.1 II est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié
lors du transport et de l’entreposage.
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L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode prescrite dans la pré
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Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.