ISO 14675:2003

NORME ISO
INTERNATIONALE 14675
FIL
Première édition
2003-01-15
Lait et produits laitiers — Lignes directrices
pour une description normalisée des tests
immuno-enzymatiques — Détermination de
la teneur en aflatoxine M
Milk and milk products — Guidelines for a standardized description of
competitive enzyme immunoassays — Determination of aflatoxin M
content
Numéros de référence
FIL 186:2003(F)
©
ISO et FIL 2003
FIL 186:2003(F)
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Imprimé en Suisse
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FIL 186:2003(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI, Partie 3.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments de la présente Norme internationale peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L’ISO 14675FIL 186 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l’AOAC International.
Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC International.
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FIL 186:2003(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l’ISO et avec l’AOAC
International pour l’élaboration de méthodes normalisées d’analyse et d’échantillonnage pour le lait et les produits
laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d’Action et les Comités permanents sont soumis
aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 50 %
au moins des Comités Nationaux votants.
L’ISO 14675FIL 186 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration avec l’AOAC International.
Elle est publiée conjointement par l’ISO et la FIL, et séparément par l’AOAC International.
L’ensemble des travaux a été confié à l’Équipe d’Action mixte ISO/FIL/AOAC, Contaminants organiques, du
Comité permanent sur les Méthodes d’analyse pour les additifs et les contaminants, sous la conduite de son chef
de projet, Dr. E. Märtlbauer (DE).

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FIL 186:2003(F)
Introduction
Les méthodes spécifiques, comme les méthodes ELISA, ne peuvent pas être décrites dans des Normes
internationales distinctes. Par conséquent, la présente Norme internationale a pour objet de fournir des lignes
directrices concernant les paramètres fondamentaux requis pour l’évaluation/la validation des tests immuno-
enzymatiques pour le dosage quantitatif de l’aflatoxine M dans le lait et les produits laitiers.
Actuellement, plusieurs types de tests immuno-chimiques quantitatifs sont commercialisés; tous sont basés sur le
principe du dosage immuno-enzymatique. Cependant, comme le principe de l’essai microplaque de 96 puits est le
plus couramment utilisé pour les mesurages quantitatifs, les paramètres donnés dans la présente Norme
internationale sont spécifiquement adaptés à ce principe et ne sont pas nécessairement applicables à d’autres
tests.
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NORME INTERNATIONALE
FIL 186:2003(F)
Lait et produits laitiers — Lignes directrices pour une description
normalisée des tests immuno-enzymatiques — Détermination de la
teneur en aflatoxine M
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices concernant l’utilisation des méthodes de criblage
pour le dosage de l’aflatoxine M dans le lait et les produits laitiers, basées sur des tests immuno-enzymatiques.
Pour des raisons légales, les résultats de tests immuno-enzymatiques positifs nécessitent une confirmation par une
méthode de référence généralement admise. Cependant, dans la mesure où ils répondent aux spécifications
indiquées ci-après, les tests immuno-enzymatiques peuvent être utilisés pour des contrôles qualité de routine,
surtout si l’absence d’aflatoxine M au-delà de la limite réglementaire doit être confirmée.
2 Principe
Les méthodes immuno-chimiques sont basées sur la capacité des anticorps à se lier à des substances spécifiques.
L’association réversible entre des anticorps et leurs antigènes est appelée réaction immunologique. Les forces de
liaison mises en jeu sont des interactions moléculaires faibles, comme les forces de Coulomb et de Van der Waals,
ainsi que des liaisons hydrogène et des liaisons hydrophobes.
La réaction antigène-anticorps obéit à la loi d’action de masse, et la quantité d’antigène ou d’anticorps présents
dans le mélange réactionnel peut être déduite de l’importance de la réaction.
La «qualité» d’un test immuno-enzymatique est fonction du principe immuno-chimique de la méthode, des
propriétés des réactifs, du type d’essai et des erreurs expérimentales. Ces principes fondamentaux déterminent la
sensibilité, la spécificité, la fidélité et l’exactitude de l’essai.
Concernant le principe de la méthode, il existe une distinction entre les méthodes compétitives et les méthodes
non compétitives.
Pour des raisons pratiques, ces méthodes nécessitent un antigène marqué ou un anticorps marqué pour permettre
d’observer la réaction antigène-anticorps.
Les méthodes compétitives sont basées sur la compétition de l’antigène libre (A ) et de l’antigène marqué ()A *
g g
pour un nombre limité de sites combinant des anticorps (AB).
Ce principe immuno-chimique peut être présenté schématiquement selon la formule suivante:
A++A**AB= A AB+ A AB+ A+ A*
gg g g g g
Dans la plupart des cas, la réponse du test représente la liaison avec l’antigène marqué, mais toute mesure de la
distribution de l’antigène marqué est en principe possible.
Pour la détection des composés de faible poids moléculaire, comme les mycotoxines, qui possèdent seulement un
site de liaison d’anticorps (épitope), le test compétitif s’impose. Pour permettre de distinguer les réactifs non
complexés des réactifs complexés, la plupart des tests utilisent soit des anticorps (test compétitif direct), soit des
antigènes (test compétitif indirect) liés à une phase solide utilisée comme immuno-adsorbant. Ainsi, tous les
réactifs qu
...