ISO 12873:2010

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12873
First edition
2010-05-01


Olive oils and olive-pomace oils —
Determination of wax content by capillary
gas chromatography
Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive — Détermination de la teneur
en cires par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire





Reference number
ISO 12873:2010(E)
©
ISO 2010

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ISO 12873:2010(E)
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ISO 12873:2010(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 12873 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
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ISO 12873:2010(E)
Introduction
As part of the Trade standard applying to olive oils and olive-pomace oils, the International Olive Oil Council
[4]
(IOOC) — now known as International Olive Council (IOC) — published COI/T.20/Doc. 18:2007 .
COI/T.20/Doc. 18 was applicable to olive and olive-pomace oils and was used to distinguish between oils
obtained by either pressing or centrifuging and olive-pomace oils. Olive pomace is the residual paste which
still contains a variable amount of water and oil after pressing or centrifuging.
In 2008, the IOC submitted the document to ISO/TC 34/SC 11 for adoption as an International Standard.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 12873:2010(E)

Olive oils and olive-pomace oils — Determination of wax
content by capillary gas chromatography
1 Scope
This International Standard specifies the determination of the wax content, as a mass fraction expressed in
milligrams per kilogram, of olive oils and olive-pomace oils. The individual waxes are separated according to
the number of carbon atoms. The method is recommended for distinguishing between olive oil obtained by
pressing or centrifuging and that obtained from olive pomace (olive-pomace oil).
[4]
NOTE This International Standard is based on COI/T.20/Doc. 18/Rev. 2:2007 .
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
wax content
mass fraction of those substances in a sample determined in accordance with the method specified in this
International Standard
NOTE The wax content is expressed in milligrams per kilogram.
4 Principle
After a suitable internal standard has been added, the oil is fractionated by chromatography on a hydrated
silica gel column. The fraction eluted under test conditions (which has a lower polarity than the triglycerides) is
recovered and analysed by capillary gas chromatography.
5 Reagents
WARNING — Comply with any local regulations which specify the handling of hazardous substances.
Technical, organizational and personal safety measures shall be followed.
During the analysis, unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade, and distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
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ISO 12873:2010(E)
5.1 Silica gel, with a particle size of 60 µm to 200 µm, prepared as follows: place the gel in the muffle oven
at 500 °C for at least 4 h; allow to cool, then add 2 % of water in relation to the mass of silica gel used; shake
well to homogenize the slurry. Store in darkness for at least 12 h prior to use.
5.2 n-Hexane, chromatography grade.
5.3 Diethyl ether, chromatography grade.
5.4 n-Heptane, chromatography grade.
5.5 Internal standard, solution of lauryl arachidate in hexane, mass concentration 0,1 g/100 ml.
NOTE Palmityl palmitate or myristyl stearate may also be used.
5.6 Sudan I (1-phenylazo-2-naphthol).
5.7 Carrier gas: hydrogen or helium, gas chromatography grade.
5.8 Auxiliary gases: hydrogen, free from moisture and organic substances, and synthetic air, gas
chromatography grade.
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Erlenmeyer flask, 25 ml.
6.2 Glass column for liquid chromatography, of diameter 15,0 mm and length 30 cm to 40 cm, with
stopcock.
6.3 Gas chromatograph, suitable for use with a capillary column, equipped with the components specified
in 6.3.1 to 6.3.5.
6.3.1 Cold on-column injector.
6.3.2 Thermostat-controlled oven with temperature programming.
6.3.3 Flame-ionization detector.
6.3.4 Computer-based integration system.
6.3.5 Capillary column, fused silica, of length 8 m to 12 m and internal diameter 0,25 mm to 0,32 mm, with
1)
SE-52 or SE-54 liquid phase or equivalent, with a film thickness of 0,10 µm to 0,30 µm.
6.4 Microsyringe for on-column injection, of capacity 10 µl, with a hardened needle.
6.5 Electric shaker.
6.6 Rotary evaporator.
6.7 Muffle oven.
6.8 Analytical balance, for weighing to an accuracy of 0,1 mg.

1) SE-52 and SE-54 are examples of suitable products available commercially. This information is given for the
convenience of users of this document and does not constitute an endorsement by ISO of these products.
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ISO 12873:2010(E)
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
[1]
is given in ISO 5555 .
It is important that the laboratory receive a truly representative sample which has not been damaged or
changed during transport or storage.
8 Preparation of the test sample
Prepare the test sample in accordance with ISO 661.
9 Procedure
9.1 Preparation of the chromatography column
Suspend 15 g of silica gel (5.1) in n-hexane (5.2) and introduce into the chromatography column (6.2). Allow
to settle spontaneously. Use an electric shaker (6.5) to assist in complete settling to make the
chromatographic band more homogeneous. Percolate 30 ml n-hexane to remove any impurities. Weigh, to the
nearest 0,1 mg, about 500 mg of the sample into a 25 ml Erlenmeyer flask (6.1), add a suitable amount of
internal standard (5.5) depending on the assumed wax content. Add 0,1 mg of lauryl arachidate in the internal
standard solution (5.5) in the case of olive oil, and 0,25 mg to 0,50 mg in the case of olive-pomace oil.
Transfer the test portion to the chromatographic column with the aid of two 2 ml portions of n-hexane.
Allow the solvent to drain off to 1 mm above the upper level of the absorbent. Percolate a further 70 ml of
n-hexane to remove any n-alkanes naturally present. Then start chromatographi
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 12873
Première édition
2010-05-01



Huiles d'olive et huiles de grignons
d'olive — Détermination de la teneur en
cires par chromatographie en phase
gazeuse sur colonne capillaire
Olive oils and olive-pomace oils — Determination of wax content by
capillary gas chromatography





Numéro de référence
ISO 12873:2010(F)
©
ISO 2010

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ISO 12873:2010(F)
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ISO 12873:2010(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 12873 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
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ISO 12873:2010(F)
Introduction
Dans le cadre de la Norme commerciale applicable aux huiles d'olive et aux huiles de grignons d'olive, le
[4]
Conseil oléicole international (COI) a publié la COI/T.20/Doc. 18:2007 . La COI/T.20/Doc. 18 était applicable
aux huiles d'olive et aux huiles de grignons d'olive et était utilisée pour faire la distinction entre les huiles
d'olive vierges lampantes et les huiles de grignons d'olive brutes. Les grignons d'olive constituent la pâte
résiduelle qui contient encore une quantité variable d'eau et d'huile après pressage ou centrifugation.
En 2008, le COI a soumis le document à l'ISO/TC 34/SC 11 en vue de son adoption en tant que Norme
internationale.

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NORME INTERNATIONALE ISO 12873:2010(F)

Huiles d'olive et huiles de grignons d'olive — Détermination de
la teneur en cires par chromatographie en phase gazeuse sur
colonne capillaire
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie la détermination de la teneur en cires, sous forme de fraction
massique exprimée en milligrammes par kilogramme, des huiles d'olive et des huiles de grignons d'olive. Les
différentes cires sont séparées en fonction du nombre d'atomes de carbone. La méthode est recommandée
pour différencier l'huile d'olive obtenue par pressage ou centrifugation de celle obtenue par extraction (huile
de grignons d'olive).
[4]
NOTE La présente Norme internationale est fondée sur la méthode COI/T.20/Doc. 18/Rev. 2:2007 .
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 661, Corps gras d'origines animale et végétale — Préparation de l'échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en cires
fraction massique de ces substances dans un échantillon, déterminée conformément à la méthode spécifiée
dans la présente Norme internationale
NOTE La teneur en cires est exprimée en milligrammes par kilogramme.
4 Principe
L'huile, additionnée d'un étalon interne approprié, est fractionnée par chromatographie sur colonne de gel de
silice hydraté. La fraction éluée dans les conditions de l'essai (à polarité inférieure à celle des triglycérides)
est récupérée et analysée par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — Il est nécessaire de se conformer à toute réglementation locale relative à la
manipulation des substances dangereuses. Des mesures de sécurité technique, organisationnelle et
personnelle doivent être suivies.
© ISO 2010 – Tous droits réservés 1

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ISO 12873:2010(F)
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l'eau distillée ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
5.1 Gel de silice, d'une granulométrie comprise entre 60 µm et 200 µm, préparé comme suit: placer le gel
de silice dans le four à moufle à 500 °C pendant au moins 4 h; laisser refroidir, puis ajouter 2 % d'eau par
rapport à la masse de gel de silice utilisée; agiter convenablement afin d'homogénéiser la masse. Conserver
à l'abri de la lumière pendant au moins 12 h avant emploi.
5.2 n-Hexane, qualité pour chromatographie.
5.3 Éther diéthylique, qualité pour chromatographie.
5.4 n-Heptane, qualité pour chromatographie.
5.5 Étalon interne, solution d'arachidate de lauryle dans l'hexane, concentration massique 0,1 g/100 ml.
NOTE Il est également possible d'utiliser du palmitate de palmityle ou du stéarate de myristyle.
5.6 Soudan I (1-phénylazo-2-naphtol).
5.7 Gaz vecteur: hydrogène ou hélium, qualité pour chromatographie en phase gazeuse.
5.8 Gaz auxiliaires: hydrogène, exempt d'humidité et de substances organiques, et air synthétique, qualité
pour chromatographie en phase gazeuse.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.1 Erlenmeyer, de 25 ml.
6.2 Colonne en verre pour chromatographie liquide, diamètre intérieur 15,0 mm, hauteur 30 cm à 40 cm,
équipée d'un robinet.
6.3 Chromatographe en phase gazeuse, approprié au fonctionnement avec colonnes capillaires, équipé
des éléments spécifiés de 6.3.1 à 6.3.5.
6.3.1 Dispositif d'injection «on column» à froid.
6.3.2 Four thermostaté, équipé d'un programmateur de température.
6.3.3 Détecteur à ionisation de flamme.
6.3.4 Système informatique d'intégration.
6.3.5 Colonne capillaire, en silice fondue, longueur 8 m à 12 m, diamètre intérieur 0,25 mm à 0,32 mm,
1)
avec phase liquide SE-52 ou SE-54 ou équivalent, avec une épaisseur de film comprise entre 0,10 µm et
0,30 µm.
6.4 Microseringue pour injection directe sur colonne, de 10 µl, munie d'une aiguille rigide.
6.5 Agitateur électrique.

1) SE-52 et SE-54 sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information est donnée à
l'intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande
l'emploi exclusif des produits ainsi désignés.
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

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ISO 12873:2010(F)
6.6 Évaporateur rotatif.
6.7 Four à moufle.
6.8 Balance analytique, pour peser avec une précision de 0,1 mg.
7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
[1]
méthode d'échantillonnage recommandée est indiquée dans l'ISO 5555 .
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié
lors du transport ou de l'entreposage.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
Préparer l'échantillon pour essai conformément à l'ISO 661.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation de la colonne pour chromatographie
Mettre en suspension 15 g de gel de silice (5.1) dans le n-hexane (5.2) et introduire dans la colonne pour
chromatographie (6.2). Laisser déposer spontanément. Utiliser un agitateur électrique (6.5) pour faciliter le
tassement du dépôt et rendre la couche chromatographique plus homogène. Percoler 30 ml de n-hexane afin
d'éliminer les impuretés éventuelles. Peser, à 0,1 mg près, environ 500 mg de l'échantillon dans un
Erlenmeyer de 25 ml (6.1), ajouter une quantité appropriée d'étalon interne (5.5) en fonction de la teneur
présumée en cires. Ajouter 0,1 mg d'arachidate de lauryle dans la solution d'étalon interne (5.5) dans le cas
d'une huile d'olive, et 0,25 mg à 0,50 mg dans le cas d'une huile de grignons d'olive.
Transférer la prise d'essai dans la colonne pour chromatographie à l'aide de deux portions de 2 ml chacune
de n-hexane.
Laisser s'écouler le solvant jusqu'à 1 mm au-dessus du niveau supérieur de l'absorbant. Percoler 70 ml de
n-hexane supplémentaires afin d'éliminer les n-alcanes naturellement présents. Commencer alors l'
...