ISO 15799:2019
(Main)Soil quality — Guidance on the ecotoxicological characterization of soils and soil materials
Soil quality — Guidance on the ecotoxicological characterization of soils and soil materials
This document is one of a family of International Standards providing guidance on soils and soil materials in relation to certain functions and uses including conservation of biodiversity. It applies in conjunction with these other standards. It provides guidance on the selection of experimental methods for the assessment of the ecotoxic potential of soils and soil materials (e.g. excavated and remediated soils, refills, embankments) with respect to their intended use and possible adverse effects on aquatic and soil dwelling organisms. NOTE This is a reflection of the maintenance of the habitat and retention function of the soil. In fact, the methods listed in this document are suitable for usage in a TRIAD approach, i.e. for an ecological assessment of potentially contaminated soils (see ISO 19204). This document does not cover tests for bioaccumulation. The ecological assessment of uncontaminated soils with a view to natural, agricultural or horticultural use is not within the scope of this document. Such soils can be of interest if they can serve as a reference for the assessment of soils from contaminated sites. The interpretation of results gained by applying the proposed methods is not in the scope of this document.
Qualité du sol — Lignes directrices relatives à la caractérisation écotoxicologique des sols et des matériaux du sol
Le présent document fait partie d'une famille de Normes internationales fournissant des lignes directrices sur les sols et les matériaux du sol en relation avec certaines fonctions et utilisations, y compris la préservation de la biodiversité. Il s'applique conjointement avec ces autres normes. Il fournit des lignes directrices relatives à la sélection des méthodes expérimentales permettant l'évaluation du potentiel écotoxique des sols et des matériaux du sol (par exemple terres excavées ayant fait l'objet d'une remédiation, remblais, talus) par rapport à leur utilisation prévue et aux effets éventuellement défavorables pour les organismes vivant dans l'eau et le sol. NOTE Il est le reflet du maintien des fonctions d'habitat et de rétention du sol. En fait, les méthodes énumérées dans le présent document sont adaptées à une utilisation dans l'approche TRIADE, c'est-à-dire pour une évaluation écologique des sols potentiellement contaminés (voir l'ISO 19204). Le présent document ne traite pas des essais relatifs à la bioaccumulation. L'évaluation écologique des sols non pollués en vue d'une utilisation naturelle, agricole ou horticole ne relève pas du domaine d'application du présent document. De tels sols peuvent être intéressants s'ils peuvent servir de référence pour l'évaluation de sols provenant de sites pollués. L'interprétation des résultats obtenus selon les méthodes proposées ne relève pas du domaine d'application du présent document.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 15799
Second edition
2019-03
Soil quality — Guidance on the
ecotoxicological characterization of
soils and soil materials
Qualité du sol — Lignes directrices relatives à la caractérisation
écotoxicologique des sols et des matériaux du sol
Reference number
©
ISO 2019
© ISO 2019
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Published in Switzerland
ii © ISO 2019 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Field of application . 3
4.1 Soils and areas of soil use where ecotoxicity tests should be considered . 3
4.2 Soils and areas of soil use where ecotoxicological tests are not necessary . 3
5 Selection of tests according to the use/re-use of soils and soil materials and soil
functions . 4
5.1 Use of ecotoxicity tests . 4
5.2 General criteria for selection of tests . 4
5.3 Considerations for the examination of soil functions . 5
5.3.1 Retention function . 5
5.3.2 Habitat function . 5
6 Sampling, transport, storage and sample preparation . 7
7 Limitations of proposed biotests for soils/soil materials . 8
Annex A (informative) Standardized forms of recommended test systems .9
Bibliography .47
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
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constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see www .iso
.org/iso/foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 190, Soil quality, Subcommittee SC 4,
Biological characterization.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 15799:2003), which has been technically
revised. The main changes compared to the previous edition are as follows:
— standardized forms of recommended test systems in Annex A have been amended and updated (e.g.
ISO 20963 deleted and ISO 18311, ISO 18187 added).
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/members .html.
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Introduction
Most of the existing ecotoxicological test methods (biotests) that are being internationally harmonized
were developed to describe the ecotoxic potential of a test substance when added to a soil/soil material.
These methods can be used with some modifications for the ecotoxicological characterization of soils
and soil materials with respect to their function depending on the intended use. For substances with
properties resulting in toxic effects, biotests are a complement to conventional chemical analysis.
Results from chemical analysis can be used for ecotoxicological assessments based on information on
the substances identified, including properties of the chemicals, e.g. their bioaccumulation potential.
This information is often scarce (if it exists at all) and it does not include possible interactions (synergy/
antagonism) between chemicals and the complex soil matrix. Furthermore, an exhaustive identification
and quantification of substances is impractical. Therefore, ecotoxicological testing of soils can be used
for investigating the potential toxicity of complex chemical mixtures. The extrapolation from laboratory
tests to field conditions requires adequate consideration of important environmental factors within the
test conditions and the selection of suitable ecotoxicological end points.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 15799:2019(E)
Soil quality — Guidance on the ecotoxicological
characterization of soils and soil materials
1 Scope
This document is one of a family of International Standards providing guidance on soils and soil
materials in relation to certain functions and uses including conservation of biodiversity. It applies in
conjunction with these other standards. It provides guidance on the selection of experimental methods
for the assessment of the ecotoxic potential of soils and soil materials (e.g. excavated and remediated
soils, refills, embankments) with respect to their intended use and possible adverse effects on aquatic
and soil dwelling organisms.
NOTE This is a reflection of the maintenance of the habitat and retention function of the soil. In fact, the
methods listed in this document are suitable for usage in a TRIAD approach, i.e. for an ecological assessment of
potentially contaminated soils (see ISO 19204).
This document does not cover tests for bioaccumulation.
The ecological assessment of uncontaminated soils with a view to natural, agricultural or horticultural
use is not within the scope of this document. Such soils can be of interest if they can serve as a reference
for the assessment of soils from contaminated sites.
The interpretation of results gained by applying the proposed methods is not in the scope of this
document.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https: //www .iso .org/obp
— IEC Electropedia: available at http: //www .electropedia .org/
3.1 Types of soil and other soil materials
3.1.1
soil
upper layer of the Earth’s crust composed of mineral particles, organic matter, water, air and organisms
[SOURCE: ISO 11074:2015, 2.1.11, modified — The definition has been slightly modified and the Note 1
to entry has been deleted.]
3.1.2
soil material
material which includes excavated soil (3.1.3), dredged materials, manufactured soils, treated soils and
fill materials
3.1.3
excavated soil
any natural material excavated from ground including top-soil, sub-soil, altered parent rock and parent
rock itself
Note 1 to entry: Excavated soil typically arises during construction works.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.1.5]
3.1.4
standard soil
field collected soil whose main properties (e.g. pH, texture, organic matter content) are within a
known range
Note 1 to entry: An example for standard soils is “Eurosoils” (see Reference [28]).
3.2 Terms relating to soil characteristics
3.2.1
habitat function
ability of soils (3.1.1)/soil materials (3.1.2) to serve as a habitat for microorganisms, plants, soil living
animals and their interactions (biocenoses)
3.2.2
retention function
ability of soils (3.1.1)/soil materials (3.1.2) to adsorb pollutants (3.2.3) in such a way that they cannot be
mobilised via the water pathway and translocated into the food chain
Note 1 to entry: The habitat and retention functions include the following soil functions according to
ISO 11074:2015:
— control of substance and energy cycles as components of ecosystems;
— basis for the life of plants, animals and man;
— carrier of genetic reservoir;
— basis for the production of agricultural products;
— buffer inhibiting movement of water, contaminants or other agents into the ground water.
3.2.3
pollutant
substance which due to their properties, amount or concentration cause impacts on the soil function or
soil use
Note 1 to entry: See also contaminant (3.2.4) and potentially harmful substance (3.2.5).
[SOURCE: ISO 11074:2015, 3.4.18, modified — Wording has been slightly modified and Note 1 to entry
has been added.]
3.2.4
contaminant
substance or agent present in the soil (3.1.1) as a result of human activity
Note 1 to entry: There is no assumption in this definition that harm results from the presence of the contaminant:
see also pollutant (3.2.3) and potentially harmful substance (3.2.5).
[SOURCE: ISO 15176:2002, definition 3.2.6, modified — The wording in the Note 1 to entry has been
slightly modified.]
2 © ISO 2019 – All rights reserved
3.2.5
potentially harmful substance
substance which when present in sufficient concentration or amount may be harmful to humans or the
environment
Note 1 to entry: It may be the result of human activity [contaminant (3.2.4)] or naturally occurring.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.2.8, modified — A Note 1 to entry has been added.]
3.3 Land and sites
3.3.1
re-use
useful and harmless utilisation of soil materials
Note 1 to entry: In the context of this International Standard, re-use means the transfer of soil materials to
another location for use in agriculture, horticulture, forestry, gardens, recreational areas and construction sites.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.4.1]
4 Field of application
4.1 Soils and areas of soil use where ecotoxicity tests should be considered
Ecotoxicity tests should be considered in the following soils and areas of soil use:
— Assessment of the ability of a soil to sustain a natural biocenosis or agriculture.
— Assessment of the combined ecotoxicity of all bioavailable contaminants present in soils or soil
materials.
— Assessment of the ecotoxicity of potentially harmful substances in cases where the soil/soil material
can affect the ground and surface water.
— Identification of soils or soil materials (refills, embankments) with a low degree of contamination
usually within a depth of 1 m, which can remain at the site without further treatment.
— Detection of potential ecotoxicity which could not be traced by chemical analysis.
— Monitoring and control of the success of soil treatment (off-site, on-site/in situ).
— Monitoring and control of soils/soil materials, which have been decontaminated and are to be
applied at the surface.
4.2 Soils and areas of soil use where ecotoxicological tests are not necessary
Provided that groundwater contamination can be excluded, ecotoxicological testing is not necessary in
the following cases.
— Contaminated soils which are classified as hazardous waste or can be characterized clearly by
chemical/analytical parameters. In such cases, ecotoxicological testing may be useful for a final
investigation after remediation and for process control during biological remediation.
— Commercially/industrially used areas with no prospect of horticultural/agricultural use.
— Soil materials or backfilled materials in an area which is to be effectively sealed by covering with
buildings or other forms of low permeability cover such as concrete or tarmacadam or asphalt.
5 Selection of tests according to the use/re-use of soils and soil materials and
soil functions
5.1 Use of ecotoxicity tests
Toxicants can affect different species (and in some cases genotypes) present within ecosystems at
different concentrations. The ideal approach for the precise ecotoxicological characterization of the soil
toxicity is to use a battery of tests with several species belonging to different taxonomic and trophic
groups to avoid false-negative results due to an adaption of a test system (genotypic shift) to a specific
contaminant as compared to uncontaminated soils. Studies using field or semi-field investigations are
rarely carried out and may be very expensive.
The ideal scheme can be rendered more practicable by the adoption of simpler testing strategies and
the application of safety factors to the results obtained. If, however, testing is performed on one species
or function only, the high diversity in the sensitivity of species to toxicants will result in a high level of
uncertainty. It is therefore recommended to test at least a microbial process, a species from the plant
kingdom, and one from the animal kingdom, usually a saprophagous/detritivorous species. If more than
one animal species are tested, a predatory species should be included in the test battery. The minimum
number of species to be tested depends on the regulations to which the test strategy shall comply. This
document only gives the basic principles for their use. Further considerations to the selection of tests
using soil organisms are given in 5.3.
5.2 General criteria for selection of tests
Criteria for the selection of ecotoxicity tests were established in the context of hazard assessment and
classification of chemicals. These criteria should also apply for the ecotoxicological characterization of
contaminated soils. Criteria reviewed were scientific validity, ecological significance, practicability and
acceptability (see References [27] and [28]).
Basic requirements which test protocols shall fulfil in order to be laid down in International Standards
include reproducibility, statistical validity, general acceptance and performance.
The importance of a criterion is relative to the specific situation. Decisions have to be made between
which criteria are most important or tests which may have to be modified by more practical
considerations, such as easy culturing of test organisms in the laboratory or the availability of life
stages required for a test throughout the year.
The test methods recommended (see Annex A) in this document were originally designed for hazard
assessment of chemicals and were in most cases internationally harmonized e.g. by OECD, EU or ISO. In
most of them provisions have been made to adapt the test design for the purposes within the scope of
this document. In addition, the selection of ecotoxicological test methods for the assessment of soils/soil
materials depends on their intended use/re-use and on the soil functions to be protected, in particular
the retention and habitat functions.
Table 1 gives an example of a decision scheme based on the relevant function.
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Table 1 — Relevance for ecotoxicological testing to the intended re-use of the soil
Re-use of soils Soil function
Retention function Habitat function
Aquatic organisms Plant growth Soil biocenoses
Detection of biological effects
a
Below sealed areas low low low
Commercially and industrially used un- high low low
sealed areas
Landfill covering high high low
Green areas, parks and recreation areas high high high
Areas used in horticulture or agriculture high high high
a
Applies only to the unsatured soil zone.
5.3 Considerations for the examination of soil functions
5.3.1 Retention function
Transport via water of soluble, colloidal or particle fractions play a dominant role in the risk assessment
of contaminated soils. This is true not only because water can mobilize contaminants, but also because
contaminants and metabolites in the water phase potentially have a severe effect on microorganisms,
plants and soil fauna.
Aqueous eluates (for preparation see Clause 6, ISO 18772, EN 14735) are useful for testing ecotoxic effects
on organisms exposed via the water mediated transport. It should be taken into account that substances
mobilized via water can be subjected to different types of changes, such as metabolism or hydrolysis when
transported into the groundwater and from there into surface waters, and that their concentrations are
reduced by dilution. Moreover, substances can be mobilised over time due to environmental changes (e.g.
pH, chemical and biological transformation). Eluates can serve as early indicators for the contamination
of pore and ground water prior to the exposure of surface and drinking water.
With these aspects, the investigation of groundwater and eluates is of utmost importance regardless of
the proposed soil use.
For ecotoxicology tests working with aqueous soil extracts and aquatic test organisms it shall be
considered that nutrient ions and compounds are easily dissolved in water (at least easier than
hydrophobic pollutants) and can substantially interfere during the test.
5.3.2 Habitat function
5.3.2.1 General
The suitability of the soil for living organisms can best be examined by means of test methods which are
selected to include organisms and processes representative of different taxonomic and ecological groups.
5.3.2.2 Soil material used as control for bioassays on solid matrices
As a general principle in ecotoxicological testing, any end point measured in a treatment is compared
with the one measured in the control(s).
In order to evaluate the suitability of the soil for soil-dwelling organisms, it is a prerequisite to compare
the contaminated soil or soil material with a control material, which may also be used for preparing
dilution series with the contaminated sample.
Several types of control material can be used:
— an uncontaminated soil with comparable pedological properties to the sample being tested;
— an inert material (e.g. quartz sand);
— a certified natural soil (e.g. standard soil);
— a standardized artificial soil (see ISO 11268-1 and ISO 11268-2, ISO 11267).
The choice between these control materials depends entirely on the aims of the ecotoxicological
assessment, the type of biological test being carried out and the requirements of the test organism. This
recommendation cannot be generalized for all biological tests. Adding sand to a soil or a soil material can
create a compact mixture which is incompatible with the growth and development of many organisms
(e.g. plant growth tests). It is preferable to use a more complex control material (such as artificial soil)
for dilution where this would have the advantage of reproducing more closely the natural environment
of the organisms and even if it may interact with pollutants. Placing an organism in a medium which
does not match the most important characteristics of its natural habitat may cause stress.
— If a dose-response curve is needed, one of the control materials mentioned above may be used to
dilute the contaminated substrate.
— If the aim is to classify each sample of soil or soil materials in terms of ecotoxicity hazard, it is
preferable to use an inert material (e.g. quartz sand) which will not interact with the pollutants
present in the sample, and whose composition and granulometry can be rigorously standardized.
The requirements of the control material shall take into account the different soil uses and the type
and origin of the soil (e.g. undisturbed soil, refilling material, excavated soil, remediated soil). Nutrient
deficiency, as well as physical conditions, can cause differences in plant growth and animal behaviour
that need not necessarily be caused by the pollutant situation and the hazard potential.
— If the aim is to evaluate the ecotoxicity of a soil or soil material sample from a contaminated site, the
preferred method would be to use an uncontaminated control material that is similar to the sample
being tested.
— If the aim is to evaluate the ecotoxicity of soils or soil materials which may be re-employed for
certain specific uses, the preferred method would be to use as a control material any material which
may in future be mixed with soil or soil material.
5.3.2.3 Soil as substrate (medium) for soil microorganisms
The soil microflora comprises on average 80 % of the mass of organisms living in soil. In combination
with the microfauna, the main functions of the microflora are the decomposition and degradation of
complex organic substances to easily available nutrients thereby maintaining the natural substance
cycles of carbon, nitrogen, phosphorus and sulfur.
Substrate-induced respiration provides an indicator of the microbial population density.
Nitrifying bacteria, which are responsible for the oxidation of ammonium to nitrite and from nitrite to
nitrate, are a very sensitive group of microorganisms. Decreased nitrification need not necessarily lead
to significant changes in the ecosystem but can be used as a sensitive indicator for the inhibition of an
essential soil process.
The purpose of determining the microbial biomass or other microbial processes in soils is to allow
assessment of the continued maintenance of soil fertility, the potential ability to degrade organic
compounds, and the effects of added materials on the soil microbial community.
5.3.2.4 Soil as substrate for plant growth
After microorganisms, plant roots constitute the largest biological surface in soil. Their contact
area with soil particles is increased by the presence of root hairs and mycorrhizal associations (VA-
mycorrhiza with cultivated plants and additional ectomycorrhizal with woody plants).
6 © ISO 2019 – All rights reserved
As with the other bioassays proposed, tests with higher plants are designed to assess the bioavailability
and effects of pollutants detected or not detected by chemical analysis respectively. By applying a test
period of at least 14 days, short-term changes in the soil by the test plant itself are included.
The accumulation of pollutants in plants, their metabolism and their effects on consumers are not
investigated in these tests. They do not apply to the assessment of soil fertility and productivity.
5.3.2.5 Soil as substrate for soil-inhabiting fauna
Soil animals generally fulfil the following four functions:
— mechanical activities (drainage, aeration, mixing, mechanical comminution);
— chemical changes (enhanced availability of nitrate and phosphate from excrements and accelerated
formation of clay-humus complexes, after the substrate has passed the gut);
— biological changes (distribution of microorganisms in the soil matrix, synergistic effects through
stimulation of microbial activity and organic matter decomposition);
— significant links in the food web.
Short-term and long term tests are available for examination of the effects of pollutants on soil
fauna. For testing the habitat function, characterization by sub-lethal test parameters is particularly
recommended.
Since a single test method cannot adequately represent the vast number of very diverse invertebrates, a
test battery should be used. When selecting the individual test species, the following criteria should be
considered:
— trophic level: e.g. saprophagous and predatory species should be included;
— taxonomic/physiological groups: in order to cover the biodiversity of soil communities, at least
representatives of Annelida and Arthropoda have to be selected;
— size class/exposure pathway: species of the micro-, meso- and macrofauna do not only represent
various size classes but also different life-styles and therefore exposure routes (e.g. pore water
versus food uptake);
— ecological role: at least soil-dwelling and litter-inhabiting species are important to be considered.
Only internationally standardized methods should be used.
6 Sampling, transport, storage and sample preparation
Before soil quality is assessed by any of the methods proposed, soil samples need to be collected from
the site under investigation (see ISO 23611-6). Soil sampling should be carried out by trained personnel
with sufficient knowledge of sampling, handling of samples and safety measures at contaminated sites
and sampling locations. The sampling strategy and handling should be determined by the site to be
investigated, the kind of contamination and the aim of the biological tests (e.g. quantities of soil samples
can vary between 100 g and 100 kg depending on the tests selected).
Record all data concerning sampling, transport and sample preparation. Instructions on the design
of sampling programmes, sampling techniques, safety, investigations of natural, cultivated, urban
and industrial sites and on the collection, handling and storage of soil for the assessment of biological
functional and structural end points in the laboratory are given in ISO 18400-206. For the preparation
of eluates for testing the retention function with aquatic test methods ISO 18772 and EN 14735 are
recommended.
7 Limitations of proposed biotests for soils/soil materials
Biological test systems are only suitable to a limited extent for volatile pollutants. Other methods
should be developed for this purpose. Similarly the impact of organic contaminants, which are easily
degradable under aerobic conditions, may be detected incompletely by the methods described. In this
case alternative methods for sampling and sample preparation should be applied.
The proposed terrestrial and aquatic test methods in A.1 and A.2 were developed to assess the ecotoxic
potential of chemicals. The characterization of soils or soil eluates was not their primary goal. Therefore,
the methods shall be adapted to the specific requirements of soil and site assessment.
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Annex A
(informative)
Standardized forms of recommended test systems
A.1 Terrestrial test methods
A.1.1 Soil fauna
A.1.1.1 Collembola — Effects on reproduction
1. Title of the test: Soil quality — Inhibition of reproduction of Collembola (Folsomia
candida) by soil contaminants
2. Harmonization International
3. References ISO 11267
4. Principle Determination of the effect on reproduction of springtails incu-
bated over a four weeks test period
5. Test type Static subchronic
6. Test organism Springtails
Breeding stocks Folsomia candida Willem 1902
Age 10 d to 12 d
Feeding Dry yeast
7. Test substrate Artificial Soil, contaminated soil
Volume 30 g (wet mass)/container
8. Test conditions
Test chamber Enclosure capable of being temperature-controlled
Temperature 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5 for testing contaminated soils do not adjust pH
Light intensity/quality Between 400 lx and 800 lx
Photoperiod 12 h: 12 h or 16 h: 8 h
Soil moisture 40 % to 60 % of total water holding capacity
9. No. Replicates At least 4
10. Test duration/incubation 28 d
11. Neg. control/ dilution soil Reference or standard soil (e.g. artificial soil)
12. Validity criteria Control: mortality < 20 %, min. reproduction 100 juveniles,
CV ≤ 30 %
13. Pos. Control/reference Boric acid or Betosip (a.i. 157 g/l Phenmedipham)
toxicant Mean EC50, CV
14. Statistics ANOVA, multiple t-test, u-test, regression analysis
15. Test parameter(s) Mortality of adults, inhibition of reproduction
16. End points EC (x = % effect level, e.g. 10, 50), NOEC, NOER
x
17. Limitations/Comments Originally the test was designed for testing substances added to
an artificial soil. The test is also applicable to soils and soil mate-
rials of unknown quality, e.g. from contaminated sites, amended
soils, soils after remediation, industrial, agricultural or other
sites under concern as well as waste materials.
A.1.1.2 Earthworms — Acute toxicity
1. Title of the test: Soil quality — Effects of pollutants on earthworms — Part 1:
Determination of acute toxicity to Eisenia fetida/Eisenia andrei
2. Harmonization International
3. References ISO 11268-1
4. Principle The percent mortality of adult earthworms (species: Eisenia fetida or
Eisenia andrei) exposed to the test soil are compared to those ob-
served for test organisms exposed to a control soil.
5. Test type Acute, static
6. Test organism Earthworms
Breeding stocks Eisenia fetida Savigny, E. andrei Bouché
Age > 2 months
Feeding No
7. Test substrate Test soil, standard soil (e.g. Artificial Soil)
Volume 500 g (dry mass)
8. Test conditions
Test chamber Enclosure capable of being controlled
Temperature 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5, Field-collected soils, soil or waste materials: Soil pH should not
be corrected as it can influence bioavailability of soil contaminants.
Light intensity/quality 400 lx to 800 lx
Photoperiod Between 12 h: 12 h or 16 h: 8 h
Soil moisture 40 % to 60 % water holding capacity
9. No. Replicates 4
10. Test duration/ 14 days
incubation
11. Neg. control/dilution Standard soil or artificial soil
soil
12. Validity criteria Control: mortality < 10 %, biomass loss ≤ 20 %
13. Positive control/ Boric acid. Significant effects on mortality should be observed be-
reference toxicant tween 3 000 mg and 4 500 mg of boric acid per kilogram of artificial
soil (dry mass).
14. Statistics Fisher’s exact test ANOVA
10 © ISO 2019 – All rights reserved
15. Test parameter(s) Mortality, biomass
16. End points LC50 – 14 d
17. Limitations/Comments Originally the test was designed for testing substances added to an
artificial soil. The test is also applicable to soils and soil materials of
unknown quality, e.g. from contaminated sites, amended soils, soils
after remediation, agricultural or other sites concerned, and waste
materials. In a new Annex the test performance under tropical condi-
tions is described. The test has been used successfully for the assess-
ment of wastes.
A.1.1.3 Earthworms — Effects on reproduction
1. Title of the test: Soil quality — Effects of pollutants on earthworms — Part 2: Deter-
mination of effects on reproduction of Eisenia fetida/Eisenia andrei
2. Harmonization International
3. References ISO 11268-2
4. Principle The effects on reproduction of adult earthworms (species: Eisenia
fetida or Eisenia andrei) exposed to the test soil are compared to
those observed for
test organisms exposed to a control soil.
5. Test type Subchronic, static
6. Test organism Earthworms
Breeding stocks Eisenia fetida Savigny, E. andrei Bouché
Age between 2 months and 1 year
Feeding Cow dung
7. Test substrate Test soil, standard soil (e.g. Artificial Soil)
Volume 500 g to 600 g dry mass
8. Test conditions
Test chamber Enclosure capable of being controlled
Temperature 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5 Field-collected soils, soil or waste materials: Soil pH should not
be corrected as it can influence bioavailability of soil contaminants.
Light intensity/quality 400 lx to 800 lx
Photoperiod Between 12 h: 12 h or 16 h: 8 h
Soil moisture 40 % to 60 % water holding capacity
9. No. Replicates 4
10. Test duration/ 8 weeks
incubation
11. Neg. control/ dilution soil Standard soil or artificial soil
12. Validity criteria Control: 30 juveniles/container, CV ≤ 30 %, adult mortality ≤ 10 %
13. Pos. Control/reference Boric acid. Significant effects on mortality should be observed be-
toxicant tween 3 000 mg and 4 500 mg of boric acid per kilogram of artificial
soil (dry mass).
14. Statistics Multiple t-test, u – test, regression analysis
15. Test parameter(s) Mortality, growth, reproduction
16. End points EC50, NOEC
17. Limitations/Comments Same as for ISO 11268-1. In a new Annex the test performance under
tropical conditions is described. The test has been used successfully
for the assessment of wastes.
A.1.1.4 Enchytraeid — Effects on reproduction
1. Title of the test Soil quality — Effects of contaminants on Enchytraeidae (Enchytraeus
sp.) — Determination of effects on reproduction
2. Harmonization International
3. References ISO 16387
4. Principle The effects on reproduction of adult enchytraeids (species: Enchytrae-
us sp.) exposed to the test soil are compared to those observed for test
organisms exposed to a control soil.
5. Test type Subchronic, static
6. Test organism Enchytraeids
Breeding stocks Enchytraeus albidus Henle and other species of the Enchytraeus sp., in
particular E. crypticus see Reference [37]
Age Adult worms with eggs in the clitellum region
Feeding Rolled oats
7. Test substrate Test soil, field soils or Artificial soil
Volume 20 g dry mass/container
8. Test conditions
Test chamber Enclosure capable of being controlled
Temperature 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5
Light intensity/ quality 400 lx to 800 lx
Photoperiod Preferably 16 h: 8 h
Soil moisture 40 % to 60 % water holding capacity
9. No. Replicates 2 to 4 depending on the test design (NOEC/EC )
x
10. Test duration/ 6 weeks (final test)
incubation
11. Neg. control/ Artificial soil, field soil (e.g. LUFA 2.2)
dilution soil
12. Validity criteria Control: Mort. ≤ 20 %, min. no. of juveniles 25/vessel CV ≤ 50 %
13. Pos. Control/ Carbendazim EC (1,2 ± 0,8) mg a.i./kg
reference toxicant
Mean EC50, CV
14. Statistics Multiple t-test, regression analysis, probit analysis
15. Test parameter(s) Mortality, reproduction
16. End points LC50, NOEC, EC
x
17. L i m i t a t i on s / The test has been used successfully for the assessment of wastes.
Comments
12 © ISO 2019 – All rights reserved
A.1.1.5 Nematoda — Effects on growth, fertility and reproduction
1. Title of the test Water quality and soil quality — Determination of the toxic effect of sed-
iment and soil samples on growth, fertility and reproduction of
Caenorhabditis elegans (Nematoda)
2. Harmonization International
3. References ISO 10872
4. Principle The effects on growth, fertility and reproduction of juvenile nematods
(species: C. elegans) exposed to the test soil are compared to those ob-
served for test organisms exposed to a control soil.
5. Test type Chronic, static
6. Test organism Nematods
Breeding stocks Caenorhabditis elegans (Maupas, 1899)
Age First stage juveniles (J1; exposed test organisms)
Feeding Defined food medium, containing the bacterium Escherichia coli
7. Test substrate Field soils
Volume 0,500 ± 0,010 g (dry mass) per test well
8. Test conditions
Test chamber Multidishes, with 12 wells, 3,5 cm /well
Temperature 20 °C ± 2 °C (room temperature)
pH Not specified (5,4 to 6,5 values show the range of control soils)
Light intensity/ quality Not specified
Photoperiod In the dark
Soil moisture 80 % water holding capacity
9. No. Replicates At least 4
10. Test duration/ 96 h
incubation
11. Neg. control/ LUFA 2.2 or Artificial soil
dilution soil
12. Validity criteria Mean recovery of exposed test organisms from the control is ≥ 80 %
and ≤ 120 %;
Mean percentage of males in the control is ≤ 10 %; the percentage of
males in a single control replicate is ≤ 20 %;
Mean fertility in the control is ≥ 80 %;
Mean reproduction in the control is ≥ 30 offspring per exposed test
organism.
13. Pos. Control/ Benzylcetyldimethylammonium chloride monohydrate (BAC C16), tested
reference toxicant in water. At 15 mg/l growth should be inhibited in a range of 20 % to 80 %.
Mean EC50, CV
Additionally, the EC of BAC shall be determined at least every
12 months. The EC (growth) in water shall be in the range of 8 mg to
22 mg BAC/l
14. Statistics Not specified.
15. Test parameter(s) Growth, fertility, reproduction
16. End points Deviation from control; EC
x
17. Limitations/ Recovery of exposed test organisms from the control sediment or
Comments control soil is an indicator of accuracy when adding test organisms
and accuracy of nematode separation. The determination of ≥ 80 %
and ≤ 120 % recovery as validity criteria ensures certain accuracy for
the calculations of reproduction. The test has been used successfully for
the assessment of wastes.
A.1.1.6 Snails — Effects on growth
1. Title of the test: Soil quality — Effects of pollutants on juvenile land snails (Helicidae) —
Determination of the effects on growth by soil contamination
2. Harmonization International
3. References ISO 15952
4. Principle The effects of soil contaminants on growth and survival of young snails,
usually Helix aspersa aspersa, are determined in artificial or natural soil
and are compared to those observed for test organisms exposed to a con-
trol soil.
5. Test type Semi-static
6. Test organism Snails (Gastropoda)
Breeding stocks Helix aspersa aspersa (= Cornu aspersum) Müller (1774); other species of
the Helicidae possible.
Age Juveniles (3 weeks to 5 weeks old); fresh mass of (1 ± 0,3) g; shell diame-
ter of (15,5 ± 1) mm
Feeding Flour-based feed comprising cereals, forage, mineral salts and vitamins
(commercially available)
7. Test substrate Artificial Soil or natural soils (not specified)
Volume 140 g (dry mass) in case of Artificial Soil; the bottom of the test container
has to be covered up to one centimetre.
8. Test conditions
Test chamber Container: 24 cm (length) ± 10,5 cm (width) ± 8 cm (height)
Temperature 20 °C ± 2 °C (room temperature)
pH Artificial Soil: 6 ± 0,5; natural soils not specified
Light intensity/ quality 50 lx − 100 lx
Photoperiod Day-night photoperiod of 18 h to 6 h
Soil moisture 50 % to 60 % of its total water-holding capacity
9. No. Replicates At least 3
10. Test duration/ 28 days (plus a nursery period of 3 weeks to 5 weeks)
incubation
11. Neg. control/ Artificial Soil or natural soil (not specified)
dilution soil
12. Validity criteria Percentage of mortality: ≤ 10 % at the end of the test;
Coefficient of variation (growth) ≤ 40 %;
Mean body mass: increase at least by factor of 4 throughout the test
duration;
Mean shell diameter: increase by at least by a factor of 1,5;
14 © ISO 2019 – All rights reserved
13. Pos. Control/ EC ,mass (28 days) of CdCl : 350 mg − 650 mg of Cd per kg of dry test
50 2
reference toxicant substrate;
Mean EC50, CV
EC , diameter (28 days) of CdCl : 500 mg − 800 mg of Cd per kg of dry
50 2
test substrate.
14. Statistics Appropriate methods (e.g. the logistic model); examples are given.
15. Test parameter(s) Mortality, body mass, shell diameter
16. End points For body mass and shell diameter: growth coefficient per replicate and
the mean percentage of growth inhibition. Graphic presentation of the
results of the test, focusing on dose-response relationship for the effects
17. Limitations/ The test has successfully been performed with waste materials.
Comments
A.1.1.7 Bait lamina — Acute effects
1. Title of the test Soil quality — Method for testing effects of soil contaminants on the
feeding activity of soil dwelling organisms — Bait-lamina test
2. Harmonization International
3. References ISO 18311
4. Principle Determination of the feeding activity of soil invertebrates using perfo-
rated plastic strips filled with an artificial food mixture (= bait)
5. Test type Chronic, static
6. Test organism Natural field invertebrate community
Breeding stocks N. a.
Age N. a.
Feeding N. a.
7. Test substrate Natural soil in undisturbed condition
Volume N. a.
8. Test conditions
Test chamber N. a. (field sites)
Temperature N. a. (field conditions)
pH Not defined
Light intensity/quality N. a. (field conditions)
Photoperiod N. a. (field conditions)
Soil moisture 50 % water holding capacity
9. No. Replicates 3
10. T
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 15799
Deuxième édition
2019-03
Qualité du sol — Lignes directrices
relatives à la caractérisation
écotoxicologique des sols et des
matériaux du sol
Soil quality — Guidance on the ecotoxicological characterization of
soils and soil materials
Numéro de référence
©
ISO 2019
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y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2019 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
3.1 Types des sols et autres matériaux du sol . 1
3.2 Termes relatifs aux caractéristiques du sol . 2
3.3 Terrain et sites . 3
4 Applications des essais écotoxicologiques . 3
4.1 Sols et domaines d’utilisation des sols où il convient d’envisager des essais d’écotoxicité . 3
4.2 Sols et domaines d’utilisation des sols où les essais écotoxicologiques ne sont pas
nécessaires . 3
5 Choix des essais suivant l’utilisation/la réutilisation des sols et des matériaux du
sol et selon les fonctions du sol . 4
5.1 Utilisation d’essais d’écotoxicité . 4
5.2 Critères généraux pour le choix des essais . 4
5.3 Considérations relatives à l’examen des fonctions du sol . 5
5.3.1 Fonction de rétention . 5
5.3.2 Fonction d’habitat . 5
6 Échantillonnage, transport, stockage et préparation des échantillons .8
7 Limites des essais biologiques proposés pour les sols/matériaux du sol .8
Annexe A (informative) Formulaires normalisés des systèmes d’essai recommandés .9
Bibliographie .49
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/iso/fr/avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4,
Caractérisation biologique.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 15799:2003), qui a fait l’objet d’une
révision technique. Les principales modifications par rapport à l’édition précédente sont les suivantes:
— les formulaires normalisés des systèmes d’essai recommandés dans l’Annexe A ont été modifiés et
mis à jour (par exemple ISO 20963 supprimé et ISO 18311, ISO 18187 ajoutés).
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/fr/members .html.
iv © ISO 2019 – Tous droits réservés
Introduction
La plupart des méthodes d’essais écotoxicologiques existantes (essais biologiques) en cours
d’harmonisation sur le plan international ont été mises au point pour décrire le potentiel écotoxique
d’une substance d’essai lorsqu’on l’ajoute à un sol/matériau du sol. Ces méthodes peuvent être utilisées,
sous réserve de quelques modifications, pour la caractérisation écotoxicologique des sols/matériaux du
sol pour ce qui concerne leur fonction, suivant l’utilisation prévue. Les essais biologiques complètent
les analyses chimiques classiques pour les substances ayant des propriétés se traduisant par des effets
toxiques. Les résultats d’une analyse chimique peuvent être utilisés pour effectuer des évaluations
écotoxicologiques à partir de données relatives aux substances identifiées, y compris les propriétés des
produits chimiques telles que leur potentiel de bioaccumulation. Ces données sont souvent rares (pour
autant qu’elles existent) et ne comprennent pas les éventuelles interactions (synergie/antagonisme)
entre les produits chimiques et la matrice complexe du sol. En outre, une identification et une
quantification exhaustives des substances sont irréalisables. C’est pourquoi les essais écotoxicologiques
peuvent être utilisés pour étudier l’éventuelle toxicité de mélanges chimiques complexes dans les
sols. L’extrapolation des essais de laboratoire aux conditions de terrain nécessite une prise en compte
adéquate des facteurs environnementaux essentiels dans les conditions d’essai ainsi que le choix de
critères d’effet écotoxicologique appropriés.
NORME INTERNATIONALE ISO 15799:2019(F)
Qualité du sol — Lignes directrices relatives à la
caractérisation écotoxicologique des sols et des
matériaux du sol
1 Domaine d’application
Le présent document fait partie d’une famille de Normes internationales fournissant des lignes
directrices sur les sols et les matériaux du sol en relation avec certaines fonctions et utilisations, y
compris la préservation de la biodiversité. Il s’applique conjointement avec ces autres normes. Il fournit
des lignes directrices relatives à la sélection des méthodes expérimentales permettant l’évaluation du
potentiel écotoxique des sols et des matériaux du sol (par exemple terres excavées ayant fait l’objet
d’une remédiation, remblais, talus) par rapport à leur utilisation prévue et aux effets éventuellement
défavorables pour les organismes vivant dans l’eau et le sol.
NOTE Il est le reflet du maintien des fonctions d’habitat et de rétention du sol. En fait, les méthodes
énumérées dans le présent document sont adaptées à une utilisation dans l’approche TRIADE, c’est-à-dire pour
une évaluation écologique des sols potentiellement contaminés (voir l’ISO 19204).
Le présent document ne traite pas des essais relatifs à la bioaccumulation.
L’évaluation écologique des sols non pollués en vue d’une utilisation naturelle, agricole ou horticole ne
relève pas du domaine d’application du présent document. De tels sols peuvent être intéressants s’ils
peuvent servir de référence pour l’évaluation de sols provenant de sites pollués.
L’interprétation des résultats obtenus selon les méthodes proposées ne relève pas du domaine
d’application du présent document.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https: //www .iso .org/obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http: //www .electropedia .org/.
3.1 Types des sols et autres matériaux du sol
3.1.1
sol
couche supérieure de la croûte terrestre composée de particules minérales, de matière organique,
d’eau, d’air et d’organismes
[SOURCE: ISO 11074:2015, 2.1.11, modifiée — La définition a été légèrement modifiée et la Note 1 à
l’article a été supprimée.]
3.1.2
matériau du sol
comprend les terres excavées (3.1.3), les matériaux de dragage, les matériaux artificiels, les sols traités
et les matériaux de remblai
3.1.3
terre excavée
tout type de matériau naturel extrait du sol, y compris l’horizon superficiel, le sous-sol, la roche mère
altérée et la roche mère elle-même
Note 1 à l'article: La terre excavée est généralement mise à jour lors de chantiers.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.1.5]
3.1.4
sol standard
sol prélevé sur le terrain dont les principales propriétés (par exemple pH, texture, teneur en matières
organiques) se situent dans une gamme connue
[28]
Note 1 à l'article: Les « Euro-sols » (voir Référence ) sont un exemple de sols standard.
3.2 Termes relatifs aux caractéristiques du sol
3.2.1
fonction d’habitat
aptitude des sols (3.1.1)/des matériaux du sol (3.1.2) à servir d’habitat aux microorganismes, aux
végétaux et aux animaux vivant dans le sol, et à permettre leurs interactions (biocénose)
3.2.2
fonction de rétention
capacité des sols (3.1.1)/des matériaux du sol (3.1.2) à adsorber des polluants (3.2.3) de sorte qu’ils ne
puissent pas être entraînés par le mouvement de l’eau ni transférés à la chaîne alimentaire
Note 1 à l'article: Les fonctions d’habitat et de rétention comprennent les fonctions du sol suivantes conformément
à l’ISO 11074:2015:
— le contrôle des cycles des substances et de l’énergie en tant que composantes des écosystèmes;
— le support vital pour les plantes, les animaux et l’homme;
— la constitution d’une réserve génétique;
— la base pour la production agricole;
— la constitution d’un « tampon » régulant la pénétration dans les eaux souterraines de l’eau, des polluants et
autres agents.
3.2.3
polluant
substance qui, du fait de leurs propriétés, de leur quantité ou de leur concentration, ont des effets
préjudiciables sur la fonction ou l’utilisation du sol
Note 1 à l'article: Voir aussi contaminant (3.2.4) et substance potentiellement dangereuse (3.2.5).
[SOURCE: ISO 11074:2015, 3.4.18, modifiée — La formulation a été légèrement modifiée et la Note 1 à
l’article a été ajoutée.]
3.2.4
contaminant
substance ou agent présent dans le sol (3.1.1) et résultant de l’activité humaine
Note 1 à l'article: Cette définition n’implique nullement que la présence de contaminant a un effet négatif: voir
aussi polluant (3.2.3) et substance potentiellement dangereuse (3.2.5).
2 © ISO 2019 – Tous droits réservés
[SOURCE: ISO 15176:2002, définition 3.2.6, modifiée — La formulation de la Note 1 à l’article a été
légèrement modifiée.]
3.2.5
substance potentiellement dangereuse
substance pouvant être dangereuse pour les êtres humains ou l’environnement lorsqu’elle est présente
en quantité ou concentration suffisante
Note 1 à l'article: Elle peut être due à l’activité humaine [contaminant (3.2.4)] ou à une cause naturelle.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.2.8, modifiée — Une Note 1 à l’article a été ajoutée.]
3.3 Terrain et sites
3.3.1
réutilisation
utilisation sans risque et avec profit des matériaux du sol
Note 1 à l'article: Dans le cadre de la présente Norme internationale, le terme « réutilisation » signifie le transfert
des matériaux du sol vers d’autres lieux pour une utilisation dans l’agriculture, l’horticulture, l’exploitation
forestière, les jardins, les zones de loisirs et les chantiers de construction.
[SOURCE: ISO 15176:2002, 3.4.1]
4 Applications des essais écotoxicologiques
4.1 Sols et domaines d’utilisation des sols où il convient d’envisager des essais
d’écotoxicité
Il convient d’envisager des essais d’écotoxicité pour les sols et domaines d’utilisation des sols suivants:
— évaluation de l’aptitude d’un sol à supporter la biocénose naturelle ou l’agriculture;
— évaluation de l’écotoxicité cumulée de tous les polluants biodisponibles présents dans les sols ou les
matériaux du sol;
— évaluation de l’écotoxicité des substances potentiellement dangereuses dans les cas où le sol/les
matériaux du sol peuvent affecter les eaux souterraines et de surface;
— identification des sols ou des matériaux du sol (remblais, talus) faiblement pollués (généralement
jusqu’à une profondeur de 1 m) qui peuvent demeurer sur le site sans traitement supplémentaire;
— détection de l’écotoxicité potentielle n’ayant pu être identifiée par une analyse chimique;
— surveillance et contrôle de la réussite du traitement d’un sol (hors site, sur site);
— surveillance et contrôle des sols/matériaux du sol dépollués et devant être mis en place sous forme
de sols redisposés en surface.
4.2 Sols et domaines d’utilisation des sols où les essais écotoxicologiques ne sont pas
nécessaires
Sous réserve de pouvoir exclure une pollution des eaux souterraines, les essais écotoxicologiques ne
sont pas nécessaires dans les cas suivants:
— sols pollués classés comme déchets dangereux ou pouvant être clairement caractérisés par des
paramètres chimiques/analytiques. Dans de tels cas, les essais écotoxicologiques peuvent être
utiles en vue d’une vérification finale après remédiation et pour le contrôle du procédé pendant la
remédiation biologique;
— zones à usage commercial/industriel sans perspective d’utilisation horticole/agricole;
— matériaux du sol ou matériaux de remblai sur un terrain qui devra être rendu imperméable car il
sera recouvert de bâtiments ou de toute autre forme de revêtement à faible perméabilité comme le
béton, le macadam ou l’asphalte.
5 Choix des essais suivant l’utilisation/la réutilisation des sols et des matériaux
du sol et selon les fonctions du sol
5.1 Utilisation d’essais d’écotoxicité
Les toxiques peuvent altérer différentes espèces (et dans certains cas, les génotypes) présentes dans
les écosystèmes à diverses concentrations. L’approche idéale pour effectuer une caractérisation
écotoxicologique précise de la toxicité du sol consiste à utiliser une batterie d’essais faisant intervenir
plusieurs espèces appartenant à différents groupes taxonomiques et trophiques afin d’éviter des
résultats négatifs erronés dus à une adaptation d’un système d’essai (changement génotypique) à un
polluant spécifique par comparaison avec des sols non pollués. Des études de terrain ou en conditions
semi-naturelles sont rarement effectuées et peuvent s’avérer très onéreuses.
Le schéma idéal peut être facilité par l’adoption de stratégies d’essai plus simples et par l’application
de facteurs de sécurité aux résultats obtenus. Cependant, la diversité de la sensibilité des espèces aux
toxiques est telle qu’elle engendre un degré élevé d’incertitude si les essais ne portent que sur une seule
espèce ou fonction. Il est donc recommandé de réaliser des essais sur au moins un processus microbien,
une espèce du règne végétal et une du règne animal, généralement une espèce saprophage/détritivore.
Si plusieurs espèces animales font l’objet d’essais, il convient d’inclure une espèce prédatrice dans la
batterie d’essais. Le nombre minimal d’espèces à étudier dépend des réglementations auxquelles la
stratégie d’essai doit satisfaire. Le présent document n’indique que les principes de base en vue de leur
utilisation. D’autres considérations relatives au choix d’essais utilisant des organismes vivant dans le
sol sont données en 5.3.
5.2 Critères généraux pour le choix des essais
Les critères de choix des essais d’écotoxicité ont été établis dans le contexte de l’évaluation des
dangers et de la classification des produits chimiques. Ces critères devraient également s’appliquer à
la caractérisation écotoxicologique des sols pollués. Les critères étudiés sont la validité scientifique,
[27] [28]
l’importance écologique, la faisabilité et l’acceptabilité (voir Références et ).
Les exigences fondamentales que les protocoles d’essai doivent satisfaire afin d’être intégrés dans des
Normes internationales comprennent la reproductibilité, la validité statistique, l’acceptation générale
et les performances.
L’importance d’un critère est spécifique à chaque situation. Selon le cas, des règles de sélection des
critères les plus importants doivent être déterminées, de même que doivent être définis les essais qui
nécessitent des ajustements en fonction de considérations pratiques telles que la facilité d’élevage des
organismes d’essai au laboratoire, ou la disponibilité continue des stades de développement appropriés
à la réalisation des essais tout au long de l’année.
Les méthodes d’essai recommandées dans le présent document (voir l’Annexe A) ont été conçues
initialement pour l’évaluation des dangers des produits chimiques et ont été, dans la plupart des cas,
harmonisées au niveau international, par exemple par l’OCDE, l’UE ou l’ISO. Dans la plupart d’entre elles,
des dispositions ont été prises pour adapter le dispositif expérimental aux besoins énoncés dans le
domaine d’application du présent document. En outre, le choix des méthodes d’essais écotoxicologiques
pour l’évaluation des sols/matériaux du sol dépend de l’utilisation/de la réutilisation prévue et des
fonctions du sol à protéger, en particulier ses fonctions de rétention et d’habitat.
Le Tableau 1 donne un exemple de schéma décisionnel selon la fonction concernée.
4 © ISO 2019 – Tous droits réservés
Tableau 1 — Pertinence des essais écotoxicologiques en fonction de la réutilisation du
sol prévue
Réutilisation des sols Fonction du sol
Fonction de rétention Fonction d’habitat
Organismes aqua- Croissance des Biocénose du sol
tiques végétaux
Détection des effets biologiques
Sous des zones imperméables faiblea faible faible
Dans des zones non imperméables, à usage élevée faible faible
commercial et industriel
Couverture de décharge élevée élevée faible
Zones vertes, parcs et zones de loisirs élevée élevée élevée
Zones utilisées en horticulture ou agriculture élevée élevée élevée
a S’applique uniquement à la zone non saturée du sol.
5.3 Considérations relatives à l’examen des fonctions du sol
5.3.1 Fonction de rétention
Le transfert de fractions solubles, colloïdales ou particulaires par l’eau joue un rôle prédominant dans
l’évaluation des risques induits par les sols pollués. En effet, non seulement l’eau peut mobiliser les
polluants, mais ces derniers et leurs métabolites dans la phase aqueuse peuvent avoir de graves effets
sur les microorganismes, les plantes et la faune du sol.
Les éluats aqueux (pour la préparation, voir l’Article 6, l’ISO 18776, l’EN 14735) sont utiles pour
déterminer les effets écotoxiques sur les organismes exposés du fait d’un transfert par l’eau. Il
convient de tenir compte, d’une part, du fait que les substances mobilisées par l’eau peuvent être
soumises à différents types de modifications, telles que la métabolisation ou l’hydrolyse, lorsqu’elles
sont transportées vers les eaux souterraines ou les eaux de surface, et d’autre part, du fait que leur
concentration peut également diminuer au cours du temps par dilution. De plus, des substances
peuvent être mobilisées dans le temps en raison de variations environnementales (par exemple pH,
transformations chimique et biologique). Les éluats peuvent être utiles comme indicateurs précoces de
la pollution des eaux interstitielles et souterraines avant que celle-ci n’atteigne les eaux de surface et les
eaux potables.
Au vu de ces considérations, l’étude des eaux souterraines et des éluats est de la plus haute importance,
quelle que soit l’utilisation prévue du sol.
Pour les essais écotoxicologiques réalisés avec des extraits aqueux de sol et des organismes d’essai
aquatiques, il faut tenir compte du fait que les ions et composés nutritifs se dissolvent facilement
dans l’eau (plus facilement du moins que les polluants hydrophobes) et peuvent interférer de manière
significative pendant l’essai.
5.3.2 Fonction d’habitat
5.3.2.1 Généralités
La meilleure façon d’étudier l’aptitude d’un sol à héberger des organismes vivants consiste à mettre en
œuvre des méthodes d’essai comprenant des organismes et des processus représentatifs des différents
groupes taxonomiques et écologiques.
5.3.2.2 Matériaux du sol utilisés comme témoins pour les essais biologiques effectués sur des
matrices solides
En tant que principe général de tous les essais écotoxicologiques, chaque critère d’effet mesuré lors
d’un traitement est comparé à celui mesuré sur le ou les témoins.
Pour évaluer l’aptitude du sol à héberger des organismes vivants, la condition préalable est de comparer
le sol ou les matériaux du sol pollués avec un matériau témoin qui peut également servir à préparer les
séries de dilution avec l’échantillon pollué.
Il est possible d’utiliser différents types de matériaux témoins:
— un sol non pollué ayant des propriétés pédologiques comparables à celles de l’échantillon étudié;
— un matériau inerte (par exemple, du sable de quartz);
— un sol naturel certifié (par exemple un sol standard);
— un sol artificiel normalisé (voir l’ISO 11268-1, l’ISO 11268-2 et l’ISO 11267).
Le choix entre ces matériaux témoins dépend entièrement des objectifs de l’évaluation écotoxicologique,
du type d’essai biologique effectué et des besoins de l’organisme d’essai. Cette recommandation ne
peut pas être généralisée à tous les essais biologiques. L’ajout de sable à un sol ou à des matériaux du
sol peut créer un mélange compact qui est incompatible avec le développement et la croissance de
nombreux organismes (par exemple des essais de croissance de plantes). Il est préférable d’utiliser un
matériau témoin plus complexe (tel que du sol artificiel) pour la dilution, si cela peut offrir l’avantage
de reproduire de manière plus fidèle l’environnement naturel des organismes, même s’il peut interagir
avec les polluants. L’introduction d’un organisme dans un milieu qui ne correspond pas aux principales
caractéristiques de son habitat naturel peut engendrer un stress.
— Si une courbe dose-réponse est requise, il est permis d’utiliser l’un des matériaux témoins
susmentionnés pour diluer le substrat pollué.
— Si l’objectif est de classer chaque échantillon de sol ou de matériaux du sol en termes de danger
écotoxicologique, il est préférable d’utiliser un matériau inerte (par exemple du sable de quartz)
qui n’interagira pas avec les polluants présents dans l’échantillon et dont la composition et la
granulométrie peuvent être rigoureusement normalisées.
Les exigences relatives au matériau témoin doivent tenir compte des différentes utilisations du sol ainsi
que de son type et de son origine (par exemple sol non remanié, matériau de remblai, terre excavée, sol
ayant fait l’objet d’une remédiation). Une carence en nutriments, de même que des conditions physiques
inadaptées, peuvent engendrer des différences de croissance entre les végétaux et des différences de
comportement entre les animaux qui ne sont pas nécessairement dues à la situation liée aux polluants
et au potentiel de danger.
— Si l’objectif est d’évaluer l’écotoxicité d’un échantillon de sol ou de matériaux du sol, prélevé sur un site
pollué, il serait préférable d’utiliser un matériau témoin non pollué similaire à l’échantillon étudié.
— Si l’objectif est d’évaluer l’écotoxicité de sols ou de matériaux du sol pouvant être réemployés
pour certaines utilisations spécifiques, il serait préférable d’utiliser comme matériau témoin tout
matériau apte à être ultérieurement mélangé avec le sol ou les matériaux du sol en question.
5.3.2.3 Sol utilisé comme substrat (milieu) pour les microorganismes présents dans le sol
La microflore du sol représente en moyenne 80 % de la masse des organismes qui vivent dans le sol. En
combinaison avec la microfaune, les principales fonctions de la microflore sont la décomposition et la
dégradation des substances organiques complexes en nutriments facilement disponibles, maintenant
ainsi les cycles naturels des substances carbonées, azotées, phosphorées et soufrées.
La respiration induite par le substrat fournit un indicateur de la densité de la population microbienne.
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Les bactéries nitrifiantes, qui sont responsables de l’oxydation de l’ammonium en nitrites et des nitrites
en nitrates, constituent un groupe très sensible de microorganismes. Une réduction de la nitrification
ne conduit pas nécessairement à des changements significatifs dans l’écosystème. Toutefois, elle peut
être utilisée comme un indicateur sensible de l’inhibition d’un processus essentiel du sol.
La détermination de la biomasse microbienne ou de tout autre processus microbien dans les sols a pour
objet de permettre l’évaluation du maintien en continu de la fertilité du sol, de l’aptitude potentielle à
dégrader les composés organiques et des effets induits par les matériaux ajoutés sur la communauté
microbienne des sols.
5.3.2.4 Sol utilisé comme substrat pour la croissance de végétaux
Après les microorganismes, les racines des plantes représentent la plus grande surface biologique dans
le sol. Leur surface de contact avec les particules du sol est accrue par la présence d’un chevelu racinaire
et d’associations mycorhiziennes (mycorhizes à vésicules et arbuscules avec les plantes cultivées et
ectomycorhizes supplémentaires avec les plantes ligneuses).
Comme dans le cas des autres essais biologiques proposés, les essais effectués avec des plantes
supérieures sont conçus pour permettre l’évaluation de la biodisponibilité et des effets des polluants,
respectivement décelés ou non par analyse chimique. En retenant une période d’essai d’au moins
14 jours, les modifications à court terme produites dans le sol par la plante soumise à essai elle-même
sont prises en compte.
L’accumulation des polluants dans les plantes, leur métabolisme et leurs effets sur les consommateurs
ne sont pas étudiés dans le cadre de ces essais. Ceux-ci ne s’appliquent pas à l’évaluation de la fertilité et
de la productivité du sol.
5.3.2.5 Sol utilisé comme substrat pour la faune vivant dans le sol
La faune du sol remplit généralement les quatre fonctions suivantes:
— activités mécaniques (drainage, aération, mélange, fragmentation mécanique);
— modifications chimiques (augmentation de la disponibilité des nitrates et phosphates provenant des
excréments et formation accélérée de complexes argilo-humiques une fois que le substrat est passé
dans l’intestin);
— modifications biologiques (répartition des microorganismes dans la matrice du sol, effets
synergiques par stimulation de l’activité microbienne et décomposition de la matière organique);
— maillons significatifs de la chaîne alimentaire.
Des essais à court et long terme sont disponibles pour examiner les effets des polluants sur la faune
du sol. Pour évaluer la fonction d’habitat, il est particulièrement recommandé de procéder à une
caractérisation au moyen de paramètres d’essai sublétaux.
Il convient d’utiliser une batterie d’essais car une seule méthode d’essai ne peut représenter
correctement la multitude des invertébrés extrêmement différents. Lors du choix d’une espèce
particulière pour essai, il convient de prendre en compte les critères suivants:
— niveau trophique: il convient d’inclure, par exemple, les espèces saprophages et prédatrices;
— groupes taxonomiques/physiologiques: il faut au moins choisir des représentants des annélides et
des arthropodes afin de couvrir la biodiversité des communautés du sol;
— classe de taille/voie d’exposition: les espèces de la micro-, méso- et macro-faune ne représentent pas
seulement diverses classes de tailles, mais également des styles de vie différents et donc des voies
d’exposition différentes (par exemple eau interstitielle par rapport à la consommation d’aliments);
— rôle écologique: il est important de prendre au moins en compte les espèces vivant dans le sol et
celles vivant dans la litière.
Il convient d’appliquer uniquement des méthodes normalisées au niveau international.
6 Échantillonnage, transport, stockage et préparation des échantillons
Avant de pouvoir évaluer la qualité du sol selon l’une des méthodes proposées, il est nécessaire de
prélever des échantillons de sol sur le site étudié (voir l’ISO 23611-6). Il convient que l’échantillonnage
du sol soit effectué par du personnel compétent, ayant une connaissance suffisante de l’échantillonnage,
de la manipulation des échantillons et des mesures de sécurité sur les sites pollués et les zones
d’échantillonnage. Il convient que la stratégie d’échantillonnage et la manipulation soient déterminées
par les caractéristiques du site à étudier, le type de pollution et les contraintes des essais biologiques
(par exemple les quantités d’échantillons de sol peuvent varier entre 100 g et 100 kg, en fonction des
essais choisis).
Enregistrer toutes les données relatives à l’échantillonnage, au transport et à la préparation des
échantillons. L’ISO 18400-206 donne des instructions concernant la conception des programmes
d’échantillonnage, les techniques d’échantillonnage, la sécurité, l’étude des sites naturels, cultivés,
urbains et industriels, ainsi que la collecte, la manipulation et le stockage du sol pour l’évaluation
des paramètres biologiques fonctionnels et structurels en laboratoire. Pour la préparation des éluats
destinés à l’évaluation de la fonction de rétention en utilisant des méthodes d’essai aquatiques,
l’ISO 18772 et l’EN 14735 sont recommandées.
7 Limites des essais biologiques proposés pour les sols/matériaux du sol
Les systèmes d’essais biologiques ne sont que très partiellement adaptés aux polluants volatils. Il
convient de développer d’autres méthodes à ces fins. De même, il se peut que l’impact des polluants
organiques, facilement dégradables dans des conditions aérobies, soit incomplètement décelé au moyen
des méthodes décrites. Dans ce cas, il convient d’appliquer d’autres méthodes d’échantillonnage et de
préparation des échantillons.
Les méthodes d’essai terrestres et aquatiques proposées en A.1 et A.2 ont été mises au point pour
évaluer le potentiel écotoxique des produits chimiques. La caractérisation des sols ou des éluats de sol
n’était pas leur objectif premier. De ce fait, ces méthodes doivent être adaptées aux exigences spécifiques
de l’évaluation du sol et du site.
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Annexe A
(informative)
Formulaires normalisés des systèmes d’essai recommandés
A.1 Méthodes d’essai terrestres
A.1.1 Faune du sol
A.1.1.1 Collemboles — Effets sur la reproduction
1. Titre de l’essai: Qualité du sol — Inhibition de la reproduction de Collembola (Fol-
somia candida) par des contaminants du sol
2. Harmonisation Internationale
3. Références ISO 11267
4. Principe Détermination de l’effet sur la reproduction des collemboles incu-
bés pendant une période d’essai de quatre semaines
5. Type d’essai Statique subchronique
6. Organisme d’essai Collemboles
Souche Folsomia candida Willem 1902
Âge 10 j à 12 j
Alimentation Levure sèche
7. Substrat d’essai Sol artificiel, sol pollué
Volume 30 g (masse humide)/récipient
8. Conditions d’essai
Enceinte d’essai Enceinte thermostatée
Température 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5. Ne pas ajuster le pH pour soumettre à essai des sols pollués
Qualité/intensité lumineuse Entre 400 lx et 800 lx
Durée d’illumination 12 h: 12 h ou 16 h: 8 h
Humidité du sol Entre 40 % et 60 % de la capacité de rétention d’eau totale
9. Nombre de réplicats Au moins 4
10. Durée d’essai/incubation 28 j
11. Témoin négatif/sol utilisé Sol de référence ou standard (par exemple sol artificiel)
pour la dilution
12. Critères de validité Contrôle: mortalité < 20 %, reproduction minimale de 100 jeunes,
CV ≤ 30 %
13. Témoin positif/toxique de Acide borique ou Betosip (substance active 157 g/l de phenmé-
référence CE50 moyenne, CV diphame)
14. Statistique ANOVA, test t multiple, test u, analyse par régression
15. Critères d’effet Mortalité des adultes, inhibition de la reproduction
16. Expression des résultats CE (x = niveau d’effet, en %, par exemple 10, 50), CSEO, RSOE
x
17. Limites/Commentaires À l’origine, l’essai a été conçu pour déterminer les effets des subs-
tances ajoutées à un sol artificiel. L’essai est également applicable
aux sols et matériaux du sol de qualité inconnue, par exemple
provenant de sites pollués, sols amendés, sols après remédiation,
sites industriels, agricoles ou autres sites concernés ainsi qu’aux
déchets.
A.1.1.2 Vers de terre — Toxicité aiguë
1. Titre de l’essai: Qualité du sol — Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre —
Partie 1:
Détermination de la toxicité aiguë vis-à-vis de Eisenia fetida/Eisenia
andrei
2. Harmonisation Internationale
3. Références ISO 11268-1
4. Principe Le pourcentage de mortalité des vers de terre adultes (espèce: Eisenia
fetida ou Eisenia andrei) exposés au sol soumis à l’essai est comparé à
celui observé pour des organismes d’essai exposés à un sol témoin
5. Type d’essai Aigu, statique
6. Organisme d’essai Vers de terre
Souche Eisenia fetida Savigny, E. andrei Bouché
Âge > 2 mois
Alimentation Aucune
7. Substrat d’essai Sol soumis à l’essai, sol standard (par exemple sol artificiel)
Volume 500 g (masse sèche)
8. Conditions d’essai
Enceinte d’essai Enceinte pouvant être contrôlée
Température 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5. Sols prélevés sur le terrain, matériaux du sol ou déchets: il
convient de ne pas corriger le pH du sol car il peut avoir une influence
sur la biodisponibilité des polluants du sol.
Qualité/intensité lumineuse De 400 lx à 800 lx
Durée d’illumination Entre 12 h: 12 h ou 16 h: 8 h
Humidité du sol De 40 % à 60 % de la capacité de rétention d’eau
9. Nombre de réplicats 4
10. Durée d’essai/incuba- 14 jours
tion
11. Témoin négatif/sol Sol standard ou sol artificiel
utilisé pour la dilution
12. Critères de validité Contrôle: mortalité < 10 %, perte de biomasse ≤ 20 %
13. Témoin positif/toxique Acide borique. Des effets significatifs sur la mortalité devraient être
de référence observés entre 3 000 mg et 4 500 mg d’acide borique par kilogramme
de sol artificiel (masse sèche).
14. Statistique Test exact de Fisher, ANOVA
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15. Critère(s) d’effet Mortalité, biomasse
16. Expression des résul- CL — 14 j
tats
17. Limites/Commentaires À l’origine, l’essai a été conçu pour déterminer les effets des subs-
tances ajoutées à un sol artificiel. L’essai est également applicable aux
sols et matériaux du sol de qualité inconnue, par exemple provenant
de sites pollués, sols amendés, sols après remédiation, sites agricoles
ou autres sites concernés, et aux déchets. La réalisation de l’essai dans
des conditions tropicales est décrite dans une nouvelle Annexe. L’essai
a été utilisé avec succès pour l’évaluation de déchets.
A.1.1.3 Vers de terre — Effets sur la reproduction
1. Titre de l’essai: Qualité du sol — Effets des polluants vis-à-vis des vers de terre —
Partie 2: Détermination des effets sur la reproduction de Eisenia
fetida/Eisenia andrei
2. Harmonisation Internationale
3. Références ISO 11268-2
4. Principe Les effets sur la reproduction des vers de terre adultes (espèce:
Eisenia fetida ou Eisenia andrei) exposés au sol soumis à l’essai sont
comparés à ceux observés pour des organismes d’essai exposés à un
sol témoin
5. Type d’essai Subchronique, statique
6. Organisme d’essai Vers de terre
Souche Eisenia fetida Savigny, E. andrei Bouché
Âge Entre 2 mois et 1 an
Alimentation Bouse de vache
7. Substrat d’essai Sol soumis à l’essai, sol standard (par exemple sol artificiel)
Volume De 500 g à 600 g (masse sèche)
8. Conditions d’essai
Enceinte d’essai Enceinte pouvant être contrôlée
Température 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5. Sols prélevés sur le terrain, matériaux du sol ou déchets: il
convient de ne pas corriger le pH du sol car il peut avoir une in-
fluence sur la biodisponibilité des polluants du sol.
Qualité/intensité lumineuse De 400 lx à 800 lx
Durée d’illumination Entre 12 h: 12 h ou 16 h: 8 h
Humidité du sol De 40 % à 60 % de la capacité de rétention d’eau
9. Nombre de réplicats 4
10. Durée d’essai/incubation 8 semaines
11. Témoin négatif/sol uti- Sol standard ou sol artificiel
lisé pour la dilution
12. Critères de validité Contrôle: 30 jeunes/récipient, CV ≤ 30 %, mortalité des
adultes ≤ 10 %
13. Témoin positif/toxique Acide borique. Des effets significatifs sur la mortalité devraient
de référence être observés entre 3 000 mg et 4 500 mg d’acide borique par kilo-
gramme de sol artificiel (masse sèche).
14. Statistique Test t multiple, test u, analyse par régression
15. Critère(s) d’effet Mortalité, croissance, reproduction
16. Expression des résultats CE50, CSEO
17. Limites/Commentaires Comme pour l’ISO 11268-1. La réalisation de l’essai dans des condi-
tions tropicales est décrite dans une nouvelle Annexe. L’essai a été
utilisé avec succès pour l’évaluation de déchets.
A.1.1.4 Enchytrées — Effets sur la reproduction
1. Titre de l’essai Qualité du sol — Effets des contaminants sur les Enchytraeidae (Enchy-
traeus sp.) — Détermination des effets sur la survie et la reproduction
2. Harmonisation Internationale
3. Références ISO 16387
4. Principe Les effets sur la reproduction des enchytrées adultes (espèce: Enchy-
traeus sp.) exposés au sol soumis à l’essai sont comparés à ceux observés
pour des organismes d’essai exposés à un sol témoin
5. Type d’essai Subchronique, statique
6. Organisme d’essai Enchytrées
Souche Enchytraeus albidus Henle et autres espèces de Enchytraeus sp., en parti-
[37]
culier E. crypticus, voir Référence
Âge Vers adultes ayant des œufs dans la région du clitellum
Alimentation Flocons d’avoine
7. Substrat d’essai Sol soumis à l’essai, sols de champ ou sol artificiel
Volume 20 g (masse sèche)/récipient
8. Conditions d’essai
Enceinte d’essai Enceinte pouvant être contrôlée
Température 20 °C ± 2 °C
pH 6 ± 0,5
Qualité/intensité lumi- De 400 lx à 800 lx
neuse
Durée d’illumination De préférence 16 h: 8 h
Humidité du sol De 40 % à 60 % de la capacité de rétention d’eau
9. Nombre de réplicats De 2 à 4 selon la conception de l’essai (CSEO/CE )
x
10. Durée d’essai/ incu- 6 semaines (essai final)
bation
11. Témoin négatif/sol Sol artificiel, sol de champ (par exemple LUFA 2.2)
utilisé pour la dilution
12. Critères de validité Contrôle: mortalité ≤ 20 %, nombre minimal de jeunes de 25/récipient,
CV ≤ 50 %
13. Témoin positif/ Carbendazime CE (1,2 ± 0,8) mg de substance active/kg
toxique de référence CE50
moyenne, CV
14. Statistique Test t multiple, analyse par régression, analyse « probits »
15. Critère(s) d’effet Mortalité, reproduction
16. Expression des CL50, CSEO, CE
x
résultats
17. Limites/ Commen- L’essai a été utilisé avec succès pour l’évaluation de déchets.
taires
12 © ISO 2019 – Tous droits réservés
A.1.1.5 Nématodes — Effets sur la croissance, la fertilité et la reproduction
1. Titre de l’essai Qualité de l’eau et qualité du sol — Détermination de l’effet toxique
d’échantillons de sédiment et de sol sur la croissance, la fertilité et la
reproduction de Caenorhabditis elegans (nématodes)
2. Harmonisation Internationale
3. Références ISO 108
...
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