ISO 17780:2015

NORME ISO
INTERNATIONALE 17780
Première édition
2015-08-15
Corp gras d’origines animale et
végétale — Détermination des
hydrocarbures aliphatiques en corps
gras d’origines végétale
Animal and vegetable fats and oils — Determination of aliphatic
hydrocarbons in vegetable oils
Numéro de référence
©
ISO 2015
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sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 4
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l’échantillon pour essai . 5
9 Mode opératoire. 5
9.1 Préparation de la colonne de chromatographie . 5
9.1.1 Préparation du gel de silice imprégné d’AgNO .
3 5
9.1.2 Garnissage de la colonne. 5
9.2 Élution de la fraction d’hydrocarbures . 6
9.3 Chromatographie en phase gazeuse . 6
9.3.1 Réglage de l’appareillage . 6
9.3.2 Conditions opératoires de l’analyse par chromatographie en phase gazeuse . 6
9.3.3 Identification des pics . 7
9.3.4 Performances du système de chromatographie en phase gazeuse . 7
9.4 Essai à blanc . 7
9.5 Dosage quantitatif . 8
10 Dosage des hydrocarbures susceptibles d’être d’origine minérale .11
11 Fidélité .11
11.1 Essais interlaboratoires . .11
11.2 Répétabilité .11
11.3 Reproductibilité .12
12 Rapport d’essai .12
Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes .13
Annexe B (informative) Validation de la purification sur gel de silice imprégné de
nitrate d’argent .18
Annexe C (informative) Mode opératoire de la méthode rapide .20
Annexe D (informative) Extraction de la matière grasse d’un échantillon alimentaire .24
Annexe E (informative) Résultats des essais interlaboratoires .27
Bibliographie .30
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, Sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
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Introduction
La majorité des hydrocarbures saturés présents dans les huiles végétales sont des n-alcanes à
chaîne longue, contenant plus de 21 atomes de carbone et dont le nombre d’atomes de carbone est de
[1]
préférence impair.
Les huiles minérales peuvent contenir des n-alcanes possédant jusqu’à 60 atomes de carbone sans
prédominance d’atomes de carbone de nombre impair. Les chromatogrammes des huiles minérales
obtenus par cette méthode se caractérisent par un pic large dû à la présence d’un mélange complexe
d’hydrocarbures saturés, ramifiés et cycliques. Les huiles minérales à basse et moyenne viscosité se
distinguent généralement par un mélange complexe de longueurs de chaîne comprises entre C10
et C25, alors que les huiles minérales à haute viscosité sont caractérisées par un mélange complexe
[2]
dont la longueur de chaîne moyenne avoisine C30. Le Comité mixte FAO/OMS d’experts des additifs
alimentaires (JECFA) a fixé plusieurs DJA pour les huiles minérales (2002), en scindant les huiles
minérales à basse-moyenne viscosité en 3 différentes sous-classes en fonction du niveau de toxicité. La
présente méthode ne permet pas de distinguer les différentes classes.
Les chromatogrammes de gasoil se caractérisent par la présence de n-alcanes de longueurs de chaîne
comprises entre C10 et C25 sans prédominance d’atomes de carbone de nombre impair, c’est-à-dire
que les hydrocarbures à nombres d’atomes de carbone pair et impair sont présents en proportions
sensiblement égales.
NORME INTERNATIONALE ISO 17780:2015(F)
Corp gras d’origines animale et végétale —
Détermination des hydrocarbures aliphatiques en corps
gras d’origines végétale
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode applicable pour le dosage des hydrocarbures
aliphatiques saturés de C10 à C56 d’origine naturelle présents dans les huiles végétales, ainsi que pour
détecter la présence d’huile minérale et de gasoil.
La méthode est applicable à tous les types de corps gras comestibles bruts et raffinés, pour des
concentrations d’huiles minérales allant de 50 mg/kg à 1 000 mg/kg.
L’Annexe C propose une méthode de dosage rapide pour les huiles raffinées et vierges (ou pressées à
froid). Cette méthode rapide ne convient pas pour les huiles brutes en raison d’un défaut de rétention
des triglycérides observé pour certains échantillons.
L’Annexe D propose une méthode de récupération de la matière grasse des échantillons alimentaires
par extraction soxhlet, en utilisant un mélange de solvants.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 661, Corps gras d’origines animale et végétale — Préparation de l’échantillon pour essai
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
teneur en hydrocarbures
somme des hydrocarbures aliphatiques saturés, exprimée en fraction massique et déterminée suivant
la méthode spécifiée
3.2
mélange complexe non résolu
UCM
mélange complexe d’hydrocarbures saturés non résolu par chromatographie en phase gazeuse,
représenté par un pic large, qui peut être dû à une contamination par une huile minérale
Note 1 à l’article: La largeur du pic est de 5 min à 15 min environ, selon les conditions de la chromatographie en
phase gazeuse.
Note 2 à l’article: Voir les chromatogrammes concernés de l’Annexe A.
3.3
gasoil
somme des n-alcanes saturés de longueurs de chaîne C10-C25, exprimée en fraction massique et
déterminée suivant la méthode spécifiée
Note 1 à l’article: Voir les chromatogrammes concernés de l’Annexe A.
4 Principe
Les hydrocarbures aliphatiques saturés de l’échantillon sont isolés par chromatographie en phase
liquide sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent, et dosés par chromatographie en phase gazeuse sur
colonne capillaire avec une détection à ionisation de flamme en utilisant un étalon interne. En partant
du chromatogramme, l’aire attribuée à l’huile minérale est calculée en soustrayant les pics fins dus
aux n-alcanes (hydrocarbures présents à l’état naturel) de l’aire totale incluant l’UCM. Pour indiquer la
contamination par du gasoil, les aires des pics de chaque hydrocarbure de longueur de chaîne comprise
entre C10 et C25 sont additionnées et quantifiées collectivement.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L’attention des lecteurs est attirée sur la règlementation nationale qui
spécifie la manipulation des substances dangereuses, ainsi que sur les obligations sous-jacentes
des utilisateurs. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et personnel
doivent être suivies.
Sauf spécification contraire, les réactifs utilisés doivent uniquement être de qualité analytique reconnue.
1)
5.1 Gel de silice 60 , extra pur pour chromatographie sur colonne avec une taille de particules
comprise entre 60 µm et 200 µm (70 et 230 mesh).
5.2 Eau, distillée et refroidie jusqu’à la température ambiante.
5.3 Sulfate de sodium anhydre, de qualité analytique et de pureté au moins égale à 99 %.
NOTE Le sulfate de sodium peut être remplacé par du sable de mer lavé au n-hexane.
5.4 n-hexane, pour l’analyse des traces de composés organiques, au moins 99 % de pureté, résidu
après évaporation de 2 mg/kg max.
NOTE 1 La pureté de l’hexane peut être contrôlée en concentrant 200 ml de n-hexane mélangé à 2 ml de
solution étalon interne (5.6) à l’aide d’un évaporateur rotatif, en reprenant le résidu dans 0,2 ml de n-hexane et en
effectuant l’analyse de 5 µl par chromatographie en phase gazeuse (9.3).
NOTE 2 Le n-hexane peut être remplacé par de l’isooctane, du n-heptane ou un mélange d’alcanes à point
d’ébullition compris entre 65 et 70 °C, sous réserve que le résidu après évaporation atteigne au maximum
2 mg/kg. L’évaporation des solvants dont le point d’ébullition est supérieur à celui du n-hexane est plus longue. Ils
sont toutefois préférés en raison de la toxicité de l’hexane.
5.5 Étalon interne: n-octadécane (C18), au moins 99 % de pureté.
Le n-octadécane peut être remplacé par le n-eicosane (C20). Avant de choisir l’un de ces deux composés
comme étalon interne, il convient de vérifier qu’aucune co-élution ne se produit avec d’autres pics de
l’échantillon à analyser.
1) Ce gel de silice est disponible auprès de Merck, sous la référence 7754 ou 7734. Cette référence est un exemple
de produit adapté disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente
Norme internationale et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à l’égard de ce produit.
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Le n-octadécane doit être remplacé par le naphtalène si l’échantillon est contaminé par un gasoil, afin
d’éviter le chevauchement des pics de l’étalon interne avec les pics de l’alcane à quantifier.
5.6 Solution étalon interne, concentration massique ρ = 0,04 mg/ml.
À titre d’exemple, peser au mg près, environ 50 mg de n-octadécane (5.5) et les diluer dans 25 ml avec
du n‑hexane (5.4), puis procéder à une seconde dilution de ce mélange à raison de 1 ml → 50 ml avec du
n-hexane. Conserver cette solution à température ambiante afin de maintenir sa stabilité.
5.7 n-Décane (C10), au moins 99 % de pureté.
5.8 Solution de n-décane, concentration massique ρ = 0,04 mg/ml.
À titre d’exemple, peser au mg près, environ 50 mg de n-décane et les diluer dans 25 ml avec du n-hexane
(5.4), puis procéder à une seconde dilution de ce mélange à raison de 1 ml → 50 ml avec du n‑hexane.
Conserver cette solution à température ambiante afin de maintenir sa stabilité.
5.9 Octatétracontane (C48), au moins 99 % de pureté. Cet étalon est utilisé pour limiter l’intégration
de l’enveloppe à un certain temps de rétention qui correspondra à celui de cet hydrocarbure.
5.10 Solution d’octatétracontane, concentration massique ρ = 0,08 mg/ml environ.
À titre d’exemple, peser au mg près, environ 2 mg d’octatétracontane (5.9) et les diluer dans 25 ml avec
du n‑hexane (5.4). Conserver cette solution à température ambiante afin de maintenir sa stabilité.
NOTE La solubilité de l’octatétracontane dans l’hexane est limitée à température ambiante, en raison de son
point de fusion élevé. Cependant, la concentration de la solution d’octatétracontane ne doit pas nécessairement
être précise car elle sert uniquement à déterminer la limite d’intégration pour le pic de l’huile minérale.
5.11 Nitrate d’argent (AgNO ), de qualité analytique.
5.12 Solution aqueuse de nitrate d’argent, concentration massique ρ = 0,75 g/ml.
À titre d’exemple, pour préparer un gel de silice au nitrate d’argent pour 3 colonnes, peser environ 4,5 g
de nitrate d’argent dans 6 ml d’eau distillée (5.2).
5.13 Gaz vecteur pour chromatographie en phase gazeuse, hélium ou hydrogène.
5.14 Gaz auxiliaires pour détecteur à ionisation de flamme, hydrogène, air et azote appropriés pour
la chromatographie en phase gazeuse.
2)
5.15 Mélange étalon d’alcanes C10 à C40 , en solution dans solvant apolaire.
3)
5.16 Paraffine visqueuse et paraffine fortement liquide , en solution dans solvant apolaire.
2) Un mélange étalon d’alcanes à 50 mg/l est disponible auprès de Sigma-Aldrich, sous la référence 68281 (www.
sigmaaldrich.com). Cette référence est un exemple de produit adapté disponible sur le marché. Cette information est
donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne saurait constituer un engagement de
l’ISO à l’égard de ce produit.
3) Une paraffine visqueuse est disponible auprès de Merck, sous la référence 107160. Une paraffine fortement
liquide est disponible auprès de Merck, sous la référence 107174. Cette information est donnée à l’intention des
utilisateurs de la présente Norme internationale et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à l’égard de ce
produit.
5.17 Solution de paraffine et de n-octadécane, concentration massique de la paraffine ρ = 0,5 mg/ml,
concentration du n-octadécane ρ = 0,08 mg/ml.
À titre d’exemple, peser au mg près, environ 500 mg de paraffine visqueuse (5.16) et 80 mg de
n‑octadécane (5.5) et les diluer dans 10 ml avec du n-hexane (5.4), puis procéder à une seconde dilution
de ce mélange à raison de 1 ml → 100 ml avec du n-hexane. Conserver cette solution à température
ambiante afin de maintenir sa stabilité.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
IMPORTANT — Avant son utilisation pour le dosage, la verrerie doit être soigneusement nettoyée
et rincée au n-hexane (5.4) afin d’en éliminer les impuretés.
6.1 Colonne de chromatographie en verre (30 cm à 40 cm de longueur et 15 mm à 20 mm de diamètre
intérieur), équipée de disques en verre fritté et d’un robinet d’arrêt en polytétrafluoroéthylène (PTFE).
NOTE Les disques en verre fritté présents dans la colonne en verre peuvent être remplacés par un morceau
de coton préalablement soumis de façon exhaustive à une extraction par du n-hexane.
6.2 Baguettes de verre.
6.3 Ballons à fond rond, de 250 ml et 500 ml.
6.4 Évaporateur rotatif, sous vide et avec bain-marie à 35 °C (recommandé). Il convient d’éviter toute
contamination croisée. Nettoyer méticuleusement le système entre les analyses.
4)
6.5 Évaporateur automatique
, pour tube de 10 ml (facultatif), conditions opératoires
recommandées: température du bain-marie = 35 °C, pression d’azote = 5 psi.
6.6 Flacons coniques en verre pour échantillons, de 10 ml.
6.7 Chromatographe en phase gazeuse, pouvant être utilisé avec une colonne capillaire, équipé d’un
injecteur de type «on-column» ou d’un dispositif équivalent, d’un four à température programmable et
d’un détecteur à ionisation de flamme (FID).
NOTE Un injecteur de vaporisation à température programmée (PTV) peut également être utilisé.
6.8 Système d’acquisition de données, avec possibilité d’intégration manuelle.
6.9 Colonne capillaire, programmable jusqu’à 400 °C (de type «haute température») et pour laquelle
les caractéristiques suivantes sont recommandées: phase stationnaire de 100 % de diméthylpolysiloxane
ou 95 % de diméthyle/5 % de diphényl polysiloxane, longueur: 15 m, diamètre intérieur: 0,32 mm ou
0,25 mm, épaisseur du film: 0,1 µm.
NOTE Pour obtenir une séparation entre le pic du solvant et l’huile minérale contenant des hydrocarbures à
chaîne courte (C10 à C14), une colonne capillaire de 30 m de long peut être utilisée.
6.10 Microseringue, de 5 µl à 10 µl, adaptée à l’injection de type «on-column» en chromatographie en
phase gazeuse.
4) L’évaporateur Zymark TurboVap LV est un exemple de produit adapté disponible sur le marché. Cette
information est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne saurait constituer un
engagement de l’ISO à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être employés s’il peut être démontré
qu’ils conduisent à des résultats identiques.
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6.11 Balance analytique, offrant une précision de lecture de 0,001 g et une précision de pesée de 0,001 g.
6.12 Pipette Pasteur, en verre.
Les pipettes Pasteur en plastique doivent être évitées, ainsi que les films en polyéthylène.
7 Échantillonnage
Il convient de transmettre au laboratoire un échantillon représentatif. Il convient également que cet
échantillon n’ait pas été endommagé ou modifié lors du transport ou du stockage.
La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale ne couvre pas l’échantillonnage. Une
[3]
méthode d’échantillonnage recommandée est donnée dans l’ISO 5555.
8 Préparation de l’échantillon pour essai
Préparer l’échantillon pour essai conformément à l’ISO 661.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation de la colonne de chromatographie
9.1.1 Préparation du gel de silice imprégné d’AgNO
Préparation de la colonne de gel de silice au nitrate d’argent (pour 3 colonnes): peser 45 g de gel de
silice (5.1) dans un ballon à fond rond de 500 ml (6.3) protégé par une feuille d’aluminium. À l’aide
d’une pipette Pasteur (6.12), ajouter la solution de nitrate d’agent (5.12) goutte à goutte, sous agitation
continue. Bien agiter le mélange pendant 30 min afin de l’homogénéiser. À l’issue de cette période,
recouvrir le ballon de la feuille d’aluminium et laisser reposer à température ambiante pendant 12 h
avant utilisation.
Pour améliorer l’homogénéisation, il est recommandé d’utiliser un agitateur automatique. Si aucun
agitateur automatique n’est disponible, il est possible de placer le ballon dans un évaporateur rotatif et
de le faire tourner pendant 30 min en l’absence de vide.
NOTE 1 Le gel de silice imprégné peut être conservé une semaine à température ambiante dans un
dessiccateur, à condition de protéger le ballon à l’aide d’une feuille d’aluminium.
NOTE 2 Le gel de silice imprégné d’AgNO peut être remplacé par un gel de silice non imprégné, à des fins de
dépistage. Les résultats seront similaires ou supérieurs à ceux obtenus avec un gel de silice argenté.
NOTE 3 Pour les huiles végétales raffinées autres que l’huile de grignons d’olive raffinée, le gel de silice
imprégné d’AgNO peut être remplacé par un gel de silice non imprégné.
9.1.2 Garnissage de la colonne
Dans un bécher, mettre en suspension 18,5 g de gel de silice imprégné de nitrate d’argent (9.1.1) dans
du n-hexane (5.4). Introduire le mélange dans la colonne (6.1) contenant 40 ml de n-hexane et tasser
la colonne en la tapotant doucement avec une baguette de verre (6.2). Ajouter au moins 0,5 cm à 1 cm
de sulfate de sodium (5.3) au-dessus du gel de silice imprégné d’AgNO , puis comprimer le gel de silice
imprégné d’AgNO à l’aide d’un flux d’azote. Rincer le gel de silice imprégné d’AgNO avec un volume
3 3
supplémentaire de 60 ml de n‑hexane (5.4) afin d’éliminer les impuretés du gel de silice imprégné d’AgNO .
Il convient de recouvrir la colonne d’un cylindre de papier noir ou d’une feuille d’aluminium afin d’éviter
l’oxydation du nitrate d’argent.
Éluer le solvant jusqu’à ce que son niveau dans la colonne soit environ 0,5 cm plus haut que la couche
de gel de silice imprégné d’AgNO . Placer un ballon à fond rond de 250 ml (6.3) sous la colonne de
chromatographie.
9.2 Élution de la fraction d’hydrocarbures
Peser à 1 mg près, 1 g de l’échantillon dans un bécher et ajouter 1 ml de la solution étalon interne (5.6),
transférer la solution dans la colonne chromatographique (9.1.2) à l’aide d’une pipette Pasteur (6.12) et
laisser l’échantillon pénétrer dans la phase stationnaire. Laver le bécher avec deux portions de 1 ml de
n-hexane (5.4) et introduire la solution dans la colonne. Éluer la fraction d’hydrocarbures avec 55 ml
de n-hexane (5.4) à une cadence d’environ 15 gouttes toutes les 10 s, en recueillant la fraction dans un
ballon de 250 ml (6.3). Évaporer la majorité du solvant jusqu’à 1 ou 2 ml en utilisant un évaporateur
rotatif équipé d’un bain-marie réglé à 35 °C (6.4). Transférer la solution concentrée dans un tube conique
de 10 ml. Concentrer le solvant jusqu’à 0,5 ml dans le tube conique sous un flux d’azote, en utilisant soit
un bain-marie à 35 °C soit un évaporateur automatique (6.5). Au cours des deux étapes d’évaporation,
veiller à ce que le résidu ne soit pas évaporé à sec afin d’éviter toute perte des alcanes volatils.
Ajuster le volume d’élution du n-hexane par l’analyse de 1 ml de solution de paraffine (5.17), en
recueillant des fractions consécutives de 50 ml, 10 ml et 10 ml, et en les analysant individuellement par
chromatographie en phase gazeuse (CPG).
9.3 Chromatographie en phase gazeuse
9.3.1 Réglage de l’appareillage
Placer la colonne (6.9) dans le chromatographe en phase gazeuse (6.7) et contrôler les conditions
opératoires en injectant le solvant, le n-hexane (5.4). Il convient que la ligne de base soit droite avec une
légère dérive positive. Si la dérive est importante, procéder au conditionnement de la colonne. En cas de
dérive négative, vérifier les raccordements de la colonne.
En cas de première utilisation de la colonne, il est nécessaire de la conditionner en la chauffant dans le
four du CPG avec un gradient de température allant jusqu’à 370 °C (selon la température du four choisie
pour l’analyse) pendant 4 heures. Maintenir la température pendant 2 h.
9.3.2 Conditions opératoires de l’analyse par chromatographie en phase gazeuse
Les conditions opératoires suivantes se sont avérées satisfaisantes pour l’analyse:
DB5 HT (15 m de long - 0,25 mm de diamètre intérieur - 0,10 µm d’épais-
Colonne
seur de film)
Température initiale de 60 °C pendant 3 min, programmée à 12 °C/min
Température du four
jusqu’à 350 °C, maintien pendant 10 min
Gaz vecteur Pression d’hydrogène en tête de colonne: 100 kPa
Température du détecteur 370 °C
Volume d’injection 2 µl
NOTE En cas d’utilisation d’un injecteur de vaporisation à température programmée, les conditions
opératoires suivantes se sont avérées satisfaisantes pour l’analyse: température initiale de 50 °C pendant
0,5 min: programmée à 300 °C/min jusqu’à 300 °C, maintien pendant 10 min.
Ces conditions peuvent être ajustées en fonction des caractéristiques de l’appareillage de
chromatographie en phase gazeuse et de la colonne. Cependant, la température du four doit être
portée à 350 °C afin d’éluer les hydrocarbures à poids moléculaire élevé. Une rampe de température
de 12 °C/min constitue un bon compromis entre une bonne sensibilité due à une «enveloppe amincie»
et une dérive limitée de la ligne de base.
L’Annexe A présente des chromatogrammes types.
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9.3.3 Identification des pics
Identifier l’étalon interne n-octadécane en injectant 2 µl de la solution étalon (5.6). Contrôler la
résolution du n-décane (C10) séparé du pic de solvant, en injectant 2 µl de la solution étalon (5.8). La
résolution de l’octatétracontane (C48) peut être vérifiée en injectant 2 µl de la solution étalon (5.10).
Voir les chromatogrammes des Figures A.1 et A.2.
Injecter 2 µl du mélange étalon d’alcanes C10-C40 (5.15) afin d’identifier les aires à prendre en compte
pour le calcul de la concentration d’alcanes C10-C25 (Figure A.1).
Dans les huiles de tournesol, les pics majeurs correspondent aux hydrocarbures aliphatiques saturés
C27, C29 et C31 (Figure A3).
La résolution de la paraffine fortement liquide et de la paraffine visqueuse (5.16) peut être contrôlée en
injectant 2 µl de la solution étalon à 0,5 mg/ml (Figures A.4 et A.5).
Selon les conditions de CPG, un pic large de 5 min à 15 min environ représente un mélange complexe
d’hydrocarbures (UCM) que la chromatographie ne peut pas résoudre et il est attribué aux huiles
minérales (Figures A.6 à A.10).
En cas de contamination d’une huile végétale par du gasoil, le chromatogramme est caractérisé par la
présence de n-alcanes entre les longueurs de chaîne C10 et C25 sans prédominance d’atomes de carbone
de nombre impair (Figure A.11). L’étalon interne utilisé doit être le naphtalène.
9.3.4 Performances du système de chromatographie en phase gazeuse
Injecter 2 µl de la solution de paraffine et de n‑octadécane (5.17) afin de contrôler les performances de
l’analyse par chromatographie en phase gazeuse.
Calculer le taux de récupération de la paraffine d’après l’équation suivante:
AC⋅⋅100
HC IS
∑
R =
HC
AC⋅
IS HC
où
est l’aire du pic UCM de la paraffine (intégration allant du pic de l’étalon interne jusqu’à la
A
∑
HC
fin du pic UCM - Figure A.4);
A est l’aire du pic de l’étalon interne (n-octadécane);
IS
C est la concentration, en milligrammes par millilitre, de n-octadécane dans la solution
IS
étalon interne (5.17);
C est la concentration, en milligrammes par millilitre, de la paraffine dans la solution étalon
HC
interne (5.17).
Le système de chromatographie en phase gazeuse est considéré optimisé si le taux de récupération de
la paraffine est supérieur ou égal à 90 %.
9.4 Essai à blanc
Il convient de procéder à un essai à blanc afin de tester la pureté des réactifs, mais aussi d’autres sources
de contamination possibles, telles que la verrerie et l’appareillage d’analyse.
La teneur en huile minérale de l’échantillon à blanc ne doit pas dépasser le niveau de 10 mg/kg. En cas
de dépassement de ce niveau, la source de contamination doit être identifiée et la contamination doit
être éliminée.
Les résultats ne doivent pas être corrigés par déduction de la teneur de l’échantillon à blanc.
Un essai à blanc est un échantillon à blanc composé de tous les réactifs prévus pour la préparation d’une
prise d’essai et en tous points traité comme une prise d’essai. Il se compose de 1 ml d’étalon interne
(5.6) transféré dans la colonne de gel de silice imprégné d’AgNO et analysé comme un échantillon
conformément à la méthode. Le niveau de contamination est exprimé en mg par kg d’huile végétale, en
considérant que l’analyse porte sur 1 g d’huile.
9.5 Dosage quantitatif
Pour calculer la teneur en hydrocarbures de l’UCM, déterminer tout d’abord la fraction massique des
hydrocarbures totaux (w ) en intégrant manuellement le signal total composé de l’UCM et des pics fins
HC1
situés au-dessus de l’UCM à partir du point où la ligne de base commence à augmenter jusqu’à la ligne
de base au temps de rétention de l’octatétracontane (C48). Cependant, selon le type d’huile minérale,
l’intégration de l’UCM peut débuter avant le temps de rétention de l’étalon interne, et peut se terminer
après le temps de rétention de l’octatétracontane (voir Figure 1 pour obtenir des exemples d’intégration
du signal des hydrocarbures totaux: les flèches indiquent le début et la fin de l’intégration).
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
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C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
Figure 1 — Exemples d’intégration du signal des hydrocarbures totaux
Calculer ensuite la fraction massique des hydrocarbures d’origine naturelle (w ) par réintégration du
HC2
chromatogramme en traçant manuellement la ligne de vallée à vallée sur le profil de l’UCM pour tous les
pics fins (voir Figure 2 pour obtenir des exemples d’intégration du signal des hydrocarbures naturels).
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
TRACE GC-Channel 1
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
Figure 2 — Exemples d’intégration du signal des hydrocarbures naturels
Si le pic du n-octadécane se situe sur le pic de l’UCM, l’aire de l’étalon déterminée sur le second
chromatogramme (intégré de vallée à vallée) (A ) est soustraite de l’aire totale du premier
IS
chromatogramme (UCM inclus) et la valeur résultante est A .
i
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La fraction massique w de la teneur en hydrocarbures, exprimée en milligrammes par kilogramme,
HC
est calculée à l’aide de l’équation suivante:
Am⋅⋅1000
i IS
∑
w =
HC
Am⋅
IS
où
est l’aire de tous les pics autres que le pic de l’étalon interne (soit les pics situés au-dessus
A
∑
i
de l’UCM uniquement pour w , soit l’UCM + les pics situés au-dessus de l’UCM pour w );
HC2 HC1
A est l’aire du pic de l’étalon interne;
IS
m est la masse, en milligrammes, de l’étalon interne dans 1 ml de solution (5.6);
IS
m est la masse de la prise d’essai, en grammes.
La limite de quantification (LQ) du pic de l’UCM est variable car elle dépend de la largeur et de la
hauteur du pic, elles-mêmes dépendantes de l’analyte. L’erreur sur la valeur est significative car de
faibles variations dans le choix de la ligne de base entraînent d’importantes variations de l’aire. Une
estimation de la LQ est 25 mg/kg.
Pour calculer la concentration d’UCM et de n-alcanes qui éluent entre C10 et C25, il est nécessaire de
superposer le chromatogramme de l’échantillon et celui du mélange étalon d’alcanes C10 à C40 et
d’intégrer la partie de l’UCM qui est incluse dans la plage C10 à C25. Dans le mélange étalon, le C25 n’est
pas présent et, de ce fait, il convient de calculer le temps de rétention.
Pour calculer la concentration d’une contamination par du gasoil, il faut intégrer les n-alcanes qui
éluent entre C10 et C25. Il est nécessaire de superposer le chromatogramme de l’échantillon et celui du
mélange étalon d’alcanes C10 à C40, afin d’identifier les pics qui doivent être intégrés (Figure A.11).
L’Annexe B indique les données de validation de la purification sur gel de silice imprégné de nitrate
d’argent.
10 Dosage des hydrocarbures susceptibles d’être d’origine minérale
La teneur en hydrocarbures susceptibles d’être d’origine minérale (W ), exprimée sous forme
MO-C10-56
de fraction massique en milligrammes par kilogramme, est calculée d’après l’équation suivante:
ww=−w
MO HC12HC
Le résultat est exprimé en milligrammes par kilogramme d’huile minérale, en référence à l’étalon
interne. Dans le cas de w , il convient de réaliser une intégration spéciale jusqu’à C25.
MO-C10-25
11 Fidélité
11.1 Essais interlaboratoires
Les détails d’un essai interlaboratoires relatif à la fidélité de la méthode sont résumés dans l’Annexe E.
Il est possible que les valeurs obtenues à partir de cet essai ne soient pas applicables aux plages de
concentrations et matrices autres que celles indiquées.
11.2 Répétabilité
La différence absolue entre deux résultats d’essai individuels indépendants, obtenus par cette même
méthode, sur un matériel d’essai identique, dans le même laboratoire, par le même opérateur utilisant le
même appareillage et dans un court intervalle de temps, dépassera, dans 5 % des cas au maximum, les
limites de répétabilité, r, indiquées dans les Tableaux E.1, E.2 et E.3.
11.3 Reproductibilité
La différence absolue entre deux résultats d’essai individuels, obtenus par cette même méthode, sur
un matériel d’essai identique, dans des laboratoires différents, par des opérateurs différents utilisant
un appareillage différent, dépassera, dans 5 % des cas au maximum, les limites de reproductibilité, R
indiquées dans les Tableaux E.1, E.2 et E.3.
12 Rapport d’essai
Le rapport d’essai doit spécifier:
— toutes les informations nécessaires à l’identification complète de l’échantillon:
— la méthode d’échantillonnage utilisée, si elle est connue:
— la méthode d’essai utilisée, avec une référence à la présente Norme internationale, c’est-à-dire
l’ISO 17780:
— la (les) masse(s) de la (des) prise(s) d’essai:
— tous les détails opératoires non prévus dans la présente Norme internationale ou considérés comme
facultatifs, ainsi que les détails relatifs à tout incident éventuel susceptible d’avoir eu une incidence
sur le(s) résultat(s) d’essai:
— le (les) résultat(s) d’essai obtenu(s) ou, si la répétabilité a été contrôlée, le résultat final cité obtenu.
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Annexe A
(informative)
Exemples de chromatogrammes
TR AC E GC -C hann el 1
C10-C40 (60°C)
450 450
400 400
350 350
C10
300 300
250 250
C18 C40
200 200
150 150
100 100
50 50
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Minutes
Figure A.1 — Chromatogramme CPG d’un mélange étalon d’alcanes C à C
10 40
TR AC E GC -C hann el 1
C 48 60°
900 900
C48
800 800
700 700
600 600
500 500
400 400
300 300
200 200
100 100
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30
Minutes
Figure A.2 — Chromatogramme CPG de l’étalon d’hydrocarbure: octatétracontane
Millivolts Millivolts
Millivolts Millivolts
TRACE GC-Channel 1
E12-8513 huile de TO raffinée A
5000 5000
C18
4000 4000
3000 3000
C29
C31
2000 2000
1000 1000
C27
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
Figure A.3 — Chromatogramme CPG de la fraction d’hydrocarbures aliphatiques d’une huile
de tournesol raffinée non contaminée, purifiée sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent —
Étalon interne: n-octadécane
TR AC E GC -C hann el 1
essai 3 1m l SM+3ml so l MERC K
Re tentio n Time
900 900
800 800
C10
700 700
600 600
500 500
400 400
300 300
200 200
100 100
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Minutes
Figure A.4 — Chromatogramme CPG de la paraffine à haute viscosité — Étalon interne:
n‑octadécane + n-décane
TR AC E GC -C hann el 1
paraffin e MERC K 17160
900 900
800 800
C18
700 700
600 600
500 500
400 400
300 300
200 200
100 100
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Minutes
Figure A.5 — Chromatogramme CPG de la paraffine à faible viscosité — Étalon interne:
n‑octadécane
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Millivolts Millivolts
Millivolts
10.425
18.777
Millivolts Millivolts
Millivolts
TRACE GC-Channel 1
réf HC A
5000 5000
C18
4000 4000
3000 3000
2000 2000
1000 1000
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
NOTE La ligne de base a été tracée manuellement de 10 min à 25 min pour calculer la teneur en hydrocarbures
totaux —Étalon interne: n-octadécane
Figure A.6 — Chromatogramme CPG de la fraction d’hydrocarbures aliphatiques d’une huile de
tournesol brute contaminée (150 mg/kg), purifiée sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent
TRACE GC-Channel 1
E12-8461 huile d'olive Capicua A
5000 5000
4000 4000
C18
3000 3000
2000 2000
1000 1000
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
NOTE La ligne de base a été tracée manuellement de 11 min à 28 min pour calculer la teneur en hydrocarbures
totaux —Étalon interne: n-octadécane
Figure A.7 — Chromatogramme CPG de la fraction d’hydrocarbures aliphatiques d’une huile de
grignons d’olive purifiée sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent
Millivolts Millivolts
Millivolts Millivolts
TRACE GC-Channel 1
Sample 4 n°12
Name
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
NOTE La ligne de base a été tracée manuellement de 8 min à 23 min pour calculer la teneur en hydrocarbures
totaux —Étalon interne: n-octadécane
Figure A.8 — Chromatogramme CPG de la fraction d’hydrocarbures aliphatiques d’une huile
d’olive vierge dopée (50 mg/kg) purifiée sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent
TRACE GC-Channel 1
Sample n°21
Name
C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
NOTE La ligne de base a été tracée manuellement de 9 min à 22 min pour calculer la teneur en hydrocarbures
totaux —Étalon interne: n-octadécane.
Figure A.9 — Chromatogramme CPG de la fraction d’hydrocarbures aliphatiques d’une huile de
soja brute (90 mg/kg) purifiée sur gel de silice imprégné de nitrate d’argent
16 © ISO 2015 – Tous droits réservés

C18
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34
Minutes
NOTE La ligne de base a été tracée manuellement de 9 min à 22 min pour calculer la teneur en hydrocarbures
totaux —Étalon interne: n-octadécane.
Figure A.10 — Chromatogram
...