ISO 15788-2:2003

NORME ISO
INTERNATIONALE 15788-2
Première édition
2003-02-15
Corps gras d'origines animale et
végétale — Dosage des stigmastadiènes
dans les huiles végétales —
Partie 2:
Méthode par chromatographie liquide
à haute performance (CLHP)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of stigmastadienes
in vegetable oils —
Part 2: Method using high-performance liquid chromatography (HPLC)

Numéro de référence
©
ISO 2003
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Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage. 3
7 Échantillonnage . 4
8 Préparation de l’échantillon pour essai. 4
8.1 Généralités. 4
8.2 Méthode avec étalon externe. 4
8.3 Méthode avec étalon interne. 5
9 Mode opératoire . 5
9.1 Chromatographie liquide à haute performance (CLHP). 5
9.2 Identification des stéradiènes . 5
10 Expression des résultats. 6
10.1 Méthode avec étalon externe. 6
10.2 Méthode avec étalon interne. 6
11 Fidélité. 7
11.1 Essai interlaboratoire . 7
11.2 Répétabilité. 7
11.3 Reproductibilité. 7
12 Rapport d’essai . 7
Annexe A (informative) Résultats de l'essai interlaboratoire. 8
Annexe B (informative) Exemples de chromatogrammes. 9
Bibliographie . 10

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 15788-2 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produit alimentaires, sous-comité SC 11,
Corps gras d'origines animale et végétale.
L'ISO 15788 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Corps gras d'origines animale et
végétale — Dosage des stigmastadiènes dans les huiles végétales:
 Partie 1: Méthode par chromatographie en phase gazeuse sur colonne capillaire (Méthode de référence)
 Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
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NORME INTERNATIONALE ISO 15788-2:2003(F)

Corps gras d'origines animale et végétale — Dosage
des stigmastadiènes dans les huiles végétales —
Partie 2:
Méthode par chromatographie liquide à haute performance
(CLHP)
1 Domaine d'application
La présente partie de l’ISO 15788 spécifie une méthode pour le dosage des stéradiènes et plus précisément
des stigmastadiènes. Les stéradiènes se forment par suite de la déshydratation des stérols pendant la
décoloration mais également, et de façon partielle, pendant l’entraînement à la vapeur et la désodorisation. La
méthode est également adaptée, en tant que méthode de sélection, pour détecter la présence d'huiles
végétales raffinées dans les huiles vierges telles que l'huile d'olive vierge.
NOTE L’ISO 15788-1 constitue la méthode de référence pour le dosage des stigmastadiènes dans les huiles
végétales, tandis que la présente partie de l’ISO 15788 peut être utilisée en tant que méthode de sélection rapide. En
référence à la fidélité de la présente méthode (voir Annexe A), des échantillons d’huile d’olive vierge proches de la valeur
limite adoptée par les règlements internationaux [Conseil oléicole international (COI), CE] peuvent être contrôlés par la
méthode par chromatographie en phase gazeuse donnée dans l’ISO 15788-1.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
ISO 12228, Corps gras d'origines animale et végétale — Détermination de la teneur en stérols individuels et
totaux — Méthode par chromatographie en phase gazeuse
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en stigmastadiènes
partie des stigmastadiènes séparés par chromatographie en phase liquide dans les conditions spécifiées par
la présente méthode
NOTE Elle est exprimée en milligrammes par kilogramme.
3.2
teneur en stéradiènes
partie de tous les stéradiènes séparés par chromatographie en phase liquide dans les conditions spécifiées
par la présente méthode
NOTE Elle est exprimée en milligrammes par kilogramme.
4 Principe
Séparation des stéradiènes, sous forme de composés lipidiques non polaires, de la majeure partie des autres
lipides, à l'aide d'éther de pétrole sur une colonne remplie de gel de silice. Concentration de l'éluat d'éther de
pétrole et analyse par chromatographie liquide à haute performance sur silice greffée C 18 et détection UV à
235 nm. La quantification dépend du type d’échantillon et est effectuée avec un étalon interne ou externe.
5 Réactifs
AVERTISSEMENT — L'attention est attirée sur la réglementation relative à la manipulation des
substances dangereuses. Des mesures s'imposent en matière de technique, d'organisation et de
sécurité des personnes.
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau, conforme à la qualité au moins 1 de l’ISO 3696:1987.
5.2 Gel de silice 60, pour chromatographie sur colonne, de granulométrie 0,063 mm à 0,200 mm, ou
1)
0,063 mm à 0,100 mm , et de teneur en eau égale à 2 g pour 100 g.
Sécher le gel de silice dans une coupelle en porcelaine pendant 12 h dans une étuve à 160 °C, puis refroidir à
température ambiante dans un dessiccateur. Pour obtenir un gel de silice avec une teneur en eau de 2 g pour
100 g, peser, à 1 g près, 98 g de gel de silice séché dans une fiole conique à bouchon en verre rodé et
ajouter 2 g d'eau (pesé à 0,01 g près). Agiter vigoureusement pendant 1 min et laisser le gel de silice reposer
une nuit entière dans un récipient étanche.
5.3 Éther de pétrole, ayant un point d'ébullition compris entre 40 °C et 60 °C.
5.4 Acétonitrile, de qualité pour chromatographie.
5.5 tert-Butyle méthyle oxyde, de qualité pour chromatographie.
5.6 Isooctane (triméthyl-2,2,4 pentane).
2)
5.7 Cholesta-3,5-diène , de pureté connue au moins égale à 95 g pour 100 g.
Vérifier la pureté de l'étalon de cholestadiène par chromatographie en phase gazeuse en utilisant comme
étalon interne du 5α-cholestane. Pour cet essai, voir les conditions de la méthode chromatographique en
phase gazeuse pour le dosage des stérols spécifiée dans l’ISO 12228. Le facteur de réponse du détecteur à
ionisation de flamme est supposé égal à 1,0. Tenir compte de la teneur obtenue lors du dosage des
stéradiènes.
5.8 Solutions mères et solutions étalons
5.8.1 Solution mère de cholesta-3,5-diène, ayant une concentration de 1 mg/ml.
Peser, à 0,1 mg près, 50,0 mg de cholesta-3,5-diène dans une fiole jaugée de 50 ml. Mettre en solution et
compléter au trait repère avec du tert-butyle méthyle oxyde (5.5).

1) Par exemple, n° 7734 ou 15101 distribué par E. Merck, 64271 Darmstadt, Allemagne.
2) Par exemple, n° C 6012 distribué par Sigma Chemie GmbH, Grünwalder Weg 30, 82041 Deisenhofen, Allemagne.
Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 15788 et ne signifie nullement que
l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif des produits ainsi désignés.
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5.8.2 Solution étalon de cholesta-3,5-diène pour CLHP
5.8.2.1 Solution étalon externe, ayant une concentration de 10 µg/ml.
Verser à la pipette 100 µl de la solution mère de cholesta-3,5-diène (5.8.1) dans une fiole jaugée de 10 ml et
compléter au trait repère avec un mélange de tert-butyle méthyle oxyde et d'acétonitri
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