CEN/TS 16817-2:2015
(Main)Ambient air - Monitoring the effects of genetically modified organisms (GMO) - Pollen monitoring - Part 2: Biological pollen sampling using bee colonies
Ambient air - Monitoring the effects of genetically modified organisms (GMO) - Pollen monitoring - Part 2: Biological pollen sampling using bee colonies
This Technical Specification describes a procedure through which pollen – in particular pollen of genetically modified organisms (GMO) – can be sampled by means of bee colonies.
Bee colonies, especially the foraging bees, actively roam an area and are therefore area related samplers. Pollen sampling depends on the collection activity of the bees and the availability of pollen sources within the spatial zone according to the bees' preferences (supply of melliferous plants). A colony of bees normally forages over an area of up to 5 km radius (median 1,6 km, mean 2,2 km), in rare cases some bees may also forage in greater distances up to 10 km and more [26].
Foragers fix the gathered pollen on the outside of their hind legs (pollen loads, also known as pollen pellets). Inside the hive they place these pollen loads into comb cells close to the brood nest (bee bread). Furthermore, foragers gather nectar and honeydew. Nectar contains pollen which fell from the anthers of the blossom into the nectar drop, or pollen which was dispersed by the wind and sticks in the nectar of other blossoms or adheres to the sticky honeydew of plants. Nectar and honeydew are converted to honey and stored by the bees in the beehive.
Honey, pollen load and bee-bread may be used as sample matrices for the subsequent analysis of pollen as it is possible to concentrate sufficient amounts of pollen for microscopic and molecular biological diagnostics.
Microscopic analysis is used to identify the various pollen types and to quantify the exposure to the target pollen types in question. GMO exposure is analyzed by molecular-biological methods: For analysis of pollen DNA quantitative PCR methods are used and described here in this Technical Specification. The analysis of GMO specific proteins and toxins in pollen is possible, too, using ELISA, but to this date the method has not been evaluated enough in pollen matrices for standardization in this Technical Specification.
Außenluft - Monitoring der Wirkungen von gentechnisch veränderten Organismen (GVO) - Pollenmonitoring - Teil 2: Biologische Pollensammlung mit Bienenvölkern
Diese Technische Spezifikation beschreibt ein Verfahren, mit dem Pollen — insbesondere Pollen von gentechnisch veränderten Organismen (GVO) — mittels Bienenvölkern gesammelt werden können.
Bienenvölker, insbesondere die sammelnden Flugbienen, durchstreifen aktiv ein Gebiet und sind daher flächenbezogene Sammler. Die Pollensammlung steht in Abhängigkeit von der Sammelaktivität der Bienen sowie der Verfügbarkeit von Pollenquellen nach den Vorlieben der Bienen innerhalb des räumlichen Gebiets (Trachtangebot). Ein Bienenvolk befliegt in der Regel ein Gebiet mit einem Radius von bis zu 5 km (Medianwert 1,6 km, Mittelwert 2,2 km), in seltenen Fällen können einige Bienen auch Gebiete in größeren Entfernungen von bis zu 10 km und mehr anfliegen [26].
Sammelbienen befestigen die gesammelten Pollen auf der Außenseite ihrer Hinterbeine (Pollenladung, auch als Pollenhöschen bezeichnet). Im Inneren des Bienenstocks werden diese Pollenladungen in Wabenzellen in der Nähe des Brutnestes verbracht (Bienenbrot). Außerdem tragen Sammelbienen Nektar und Honigtau ein. Der Nektar enthält Pollen, der aus den Antheren der Blüte in den Nektartropfen gefallen ist, oder Pollen, der durch den Wind verbreitet im Nektar anderer Blüten bzw. auf klebrigem Honigtau an Pflanzen haften bleibt. Im Bienenstock werden Nektar und Honigtau zu Honig konvertiert und gelagert.
Honig, Pollenladung und Bienenbrot können als Probenmatrices für die anschließende Pollenanalyse genutzt werden, da es möglich ist, ausreichende Pollenmengen für eine molekularbiologische Diagnostik zu konzentrieren.
Die mikroskopische Analyse dient der Identifizierung der verschiedenen Pollenarten sowie zur quantitativen Bestimmung der Exposition gegenüber den betrachteten Zielpollenarten. Die GVO-Exposition wird durch molekularbiologische Verfahren ermittelt: Zur Analyse der Pollen-DNA werden quantitative PCR-Verfahren eingesetzt, die in der vorliegenden Technischen Spezifikation beschrieben werden. Durch Verwendung von ELISA können auch in Pollen befindliche GVO-spezifische Proteine und Toxine analysiert werden, jedoch wurde dieses Verfahren bis zum heutigen Datum noch nicht ausreichend für den Einsatz in Pollenmatrices und somit für eine Standardisierbarkeit im Rahmen dieser Technischen Spezifikation validiert.
Air ambiant - Surveillance des effets d'organismes génétiquement modifiés (OGM) - Surveillance du pollen - Partie 2 : Échantillonnage biologique du pollen à l'aide de colonies d'abeilles
La présente Spécification technique décrit un mode opératoire avec lequel le pollen, en particulier le pollen d’organismes génétiquement modifiés (OGM), peut être échantillonné à l’aide de colonies d’abeilles.
Les colonies d’abeilles, notamment les abeilles butineuses, se déplacent activement sur une zone et sont donc des échantillonneurs de zone. L’échantillonnage du pollen dépend de l’activité de récolte des abeilles et de la disponibilité des sources de pollen dans la zone spatiale selon les préférences des abeilles (abondance des plantes mellifères). Une colonie d’abeilles butine normalement sur une zone de 5 km de rayon (médiane de 1,6 km, moyenne de 2,2 km), dans de rares cas certaines abeilles peuvent également butiner à des distances supérieures à 10 km et plus [26].
Les butineuses fixent le pollen récolté sur la partie extérieure de leurs pattes arrières (charges de pollen, également appelées pelotes de pollen). Une fois dans la ruche, elles placent ces charges de pollen dans les alvéoles qui entourent le nid à couvain (pain d’abeille). Par ailleurs, les butineuses récoltent le nectar et le miellat. Le nectar contient du pollen tombé des anthères de la fleur dans la goutte de nectar, ou du pollen qui a été dispersé par le vent et se colle au nectar d’autres fleurs ou adhère au miellat collant de plantes. Le nectar et le miellat sont transformés en miel et stockés par les abeilles dans la ruche.
Le miel, la charge de pollen et le pain d’abeille peuvent être utilisés comme matrices d’échantillons pour l’analyse ultérieure du pollen car il est possible de concentrer des quantités suffisantes de pollen pour les diagnostics microscopiques et par biologie moléculaire.
L’analyse microscopique est utilisée pour identifier les différents types de pollen et pour quantifier l’exposition aux types de pollen cibles étudiés. L’analyse de l’exposition aux OGM utilise des méthodes par biologie moléculaire. Pour l’analyse de l’ADN du pollen, des méthodes de PCR quantitative sont utilisées et décrites dans la présente Spécification technique. Il est également possible d’analyser les protéines et les toxines spécifiques des OGM dans le pollen à l’aide de la méthode ELISA. Toutefois, la méthode n’a pas encore été suffisamment évaluée dans les matrices de pollen pour être normalisée dans la présente Spécification technique.
Zunanji zrak - Monitoring učinkov gensko spremenjenih organizmov (GSO) - Monitoring peloda - 2. del: Biološko vzorčenje peloda z uporabo čebelje družine
Načrtovani standard opisuje postopek, v katerem je mogoče pelod – zlasti pelod gensko spremenjenih organizmov – vzorčiti s pomočjo kolonij čebel. Aktivne pašne čebele nabirajo pelod in nektar. Med in cvetni prah se lahko uporabita kot vzorca v naknadnih analizah peloda, saj je mogoče zbrati zadostne količine peloda za molekularno-biološko diagnostiko. Vzorčenje peloda v medu in cvetnem prahu je treba obravnavati skupaj s tehničnim vzorčenjem monitoringa gensko spremenjenih organizmov (NWI št. 264088).
General Information
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
01-februar-2016
=XQDQML]UDN0RQLWRULQJXþLQNRYJHQVNRVSUHPHQMHQLKRUJDQL]PRY *62
0RQLWRULQJSHORGDGHO %LRORãNRY]RUþHQMHSHORGD]XSRUDERþHEHOMHGUXåLQH
Ambient air - Monitoring the effects of genetically modified organisms (GMO) - Pollen
monitoring - Part 2: Biological pollen sampling using bee colonies
Außenluft - Monitoring der Wirkungen gentechnisch veränderter Organismen (GVO) -
Pollenmonitoring - Teil 2: Biologische Pollensammlung mit Bienenvölkern
Air ambiant - Surveillance des effets d'organismes génétiquement modifiés (OGM) -
Surveillance du pollen - Partie 2 : Échantillonnage biologique du pollen à l'aide de
colonies d'abeilles
Ta slovenski standard je istoveten z: CEN/TS 16817-2:2015
ICS:
13.040.20 Kakovost okoljskega zraka Ambient atmospheres
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
CEN/TS 16817-2
TECHNICAL SPECIFICATION
SPÉCIFICATION TECHNIQUE
October 2015
TECHNISCHE SPEZIFIKATION
ICS 07.080; 13.020.99
English Version
Ambient air - Monitoring the effects of genetically
modified organisms (GMO) - Pollen monitoring - Part 2:
Biological pollen sampling using bee colonies
Air ambiant - Surveillance des effets d'organismes Außenluft - Monitoring der Wirkungen von
génétiquement modifiés (OGM) - Surveillance du gentechnisch veränderten Organismen (GVO) -
pollen - Partie 2 : Échantillonnage biologique du pollen Pollenmonitoring - Teil 2: Biologische Pollensammlung
à l'aide de colonies d'abeilles mit Bienenvölkern
This Technical Specification (CEN/TS) was approved by CEN on 16 May 2015 for provisional application.
The period of validity of this CEN/TS is limited initially to three years. After two years the members of CEN will be requested to
submit their comments, particularly on the question whether the CEN/TS can be converted into a European Standard.
CEN members are required to announce the existence of this CEN/TS in the same way as for an EN and to make the CEN/TS
available promptly at national level in an appropriate form. It is permissible to keep conflicting national standards in force (in
parallel to the CEN/TS) until the final decision about the possible conversion of the CEN/TS into an EN is reached.
CEN members are the national standards bodies of Austria, Belgium, Bulgaria, Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia,
Finland, Former Yugoslav Republic of Macedonia, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania,
Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Romania, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland, Turkey and
United Kingdom.
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
CEN-CENELEC Management Centre: Avenue Marnix 17, B-1000 Brussels
© 2015 CEN All rights of exploitation in any form and by any means reserved Ref. No. CEN/TS 16817-2:2015 E
worldwide for CEN national Members.
Contents Page
European foreword . 4
Introduction . 5
1 Scope . 6
2 Normative references . 6
3 Terms and definitions . 6
4 Basic principle of the procedure . 8
5 Sample matrices . 8
5.1 Honey . 8
5.2 Pollen load . 9
5.3 Bee-bread . 9
6 Sampling procedure . 9
6.1 General . 9
6.2 Bee colony and hive . 9
6.3 Sample site . 9
6.4 Preparation and assembly . 10
6.5 Exposure time . 10
6.6 Sampling dates . 10
6.7 Extraction, transport and storage . 10
7 Palynology . 11
7.1 General . 11
7.2 From sample preparation to embedded slide preparation . 11
7.2.1 General . 11
7.2.2 Honey . 11
7.2.3 Pollen load . 11
7.2.4 Bee bread . 11
7.3 Microscopic analysis . 12
7.4 Pollen diversity . 12
8 Molecular-biological analysis . 13
8.1 General . 13
8.2 Sample preparation . 13
8.2.1 Honey . 13
8.2.2 Pollen loads . 13
8.2.3 Bee bread . 14
9 Determination of the target parameters for GMO monitoring and representation of
the results . 14
9.1 Microscopic pollen analysis . 14
9.1.1 General . 14
9.1.2 Concentration in counts per gram of sample mass . 14
9.1.3 Total number of pollen collected per exposure time and season. 15
9.1.4 Relative frequency . 15
9.2 Molecular-biological analysis . 16
10 Performance characteristics of the methods . 16
10.1 General . 16
10.2 Bee colony . 16
10.3 Foraging distance . 17
10.4 Honey samples, bee-bread samples and pollen load samples . 17
10.5 Microscopic pollen analysis . 17
10.6 Molecular-biological analysis. 17
11 Quality assurance and quality control . 18
11.1 General measurement strategy and task of pollen monitoring with biological
samplers . 18
11.2 Site protocol . 18
11.3 Accompanying documentation for samples . 19
11.4 Parallel measurements. 19
11.5 Quality assurance and reference materials . 19
Annex A (normative) Maize-specific requirements . 20
A.1 Scope . 20
A.2 Basic principles . 20
A.3 Sampling . 21
A.4 Sample preparation . 22
A.5 Molecular-biological analysis of maize DNA using PCR . 23
A.5.1 General . 23
A.5.2 DNA extraction . 23
A.5.3 Real-time PCR analysis . 24
A.6 Determination of the target parameters for GMO monitoring and assessment of the
results . 24
Annex B (normative) Rapeseed specific requirements . 25
B.1 Scope . 25
B.2 Basic principles . 25
B.3 Sampling . 26
B.4 Sample preparation . 27
B.5 Molecular-biological analysis of rapeseed DNA using PCR for GMO detection . 28
B.5.1 General .
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.