SIST ISO 10710:2011

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 10710
First edition
2010-06-15
Water quality — Growth inhibition test
with the marine and brackish water
macroalga Ceramium tenuicorne
Qualité de l'eau — Essai d'inhibition de croissance sur la macro algue
d'eaux marine et saumâtre Ceramium tenuicorne

Reference number
©
ISO 2010
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Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Terms and definitions .1
3 Principle.2
4 Test organisms, nutrients, media, and materials.2
5 Cultivation.6
6 Apparatus.6
7 Procedure.7
7.1 Algae material.7
7.2 Preparation of dilution water.8
7.3 Choice of test concentrations.8
7.4 Start of test.9
7.5 Incubation.9
7.6 Measurement.9
7.7 Test with reference substances.9
8 Validity criteria.9
9 Evaluation of results .10
9.1 Calculations.10
9.2 Determination of E C .10
r x
9.3 Expression of results.10
9.4 Interpretation of results .11
10 Reproducibility .11
11 Test report.11
Annex A (informative) Growth pattern of Ceramium tenuicorne in 7S and 20S.13
Annex B (informative) Results of ring test with Ceramium tenuicorne at 20 S.16
Bibliography.17

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 10710 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 5, Biological
methods.
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Introduction
The red macroalga Ceramium tenuicorne belongs to Ceramiaceae, Rhodophyta. The species can be used as
a model organism for the near coastal ecosystem. This species is found in temperate marine waters in both
the northern and southern hemispheres and is thus relevant for large areas. As primary producers, they are a
food source for many invertebrates and serve as living habitat for bacteria, invertebrates, and juvenile fish.
They also serve as substrate for many oviparous fish species.

INTERNATIONAL STANDARD ISO 10710:2010(E)

Water quality — Growth inhibition test with the marine and
brackish water macroalga Ceramium tenuicorne
WARNING — Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory
practice. This International Standard does not purport to address all of the safety problems, if any,
associated with its use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health
practices and to ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this International Standard
be carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of the inhibition of growth of the
macroalga Ceramium tenuicorne by substances and mixtures contained in seawater or by waste water with
salinities between 4S and 32S. This method is applicable to substances that are easily soluble in water.
[4] [2]
NOTE With modifications as described in ISO 14442 and ISO 5667-16 , the inhibitory effects of poorly soluble
organic and inorganic materials, volatile compounds, metals, waste water, marine water samples, and elutriates of
sediments can be tested.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
algal length
length from the first division to the most distant tip of the plant
NOTE The algal length is expressed in millimetres.
See Figure 1.
2.2
control medium
combination of dilution water and/or nutrient medium used in the test
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.6]
2.3
control batch
control medium including organisms used for testing
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.5]
2.4
effective concentration
E C
r x
concentration of test sample at which an effect of x % is measured, if compared to the control
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.9]
2.5
growth medium
mixture of natural seawater and nutrients in which algal plants are cultivated, which is used for pre-cultures
[3]
NOTE Adapted from ISO 8692:2004 , 3.3.
2.6
growth rate
µ
〈water quality〉 proportional rate of increase in algal length per day
NOTE See Clause 9.
2.7
salinity
practical salinity
S
〈seawater〉 ratio K of the electrical conductivity of the seawater sample, at the temperature of 15 °C and a
pressure of one standard atmosphere, to that of a potassium chloride solutions in which the mass fraction of
−3
KCl is 32,435 6 × 10 , at the same temperature and pressure
NOTE Adapted from Reference [14], p. 12.
2.8
test medium
mixture of seawater, nutrients and test sample
[3]
NOTE Adapted from ISO 8692:2004 , 3.5.
2.9
test sample
〈water quality〉 aqueous sample, e.g. chemical substance, mixture of chemicals or waste water, for which the
inhibitory effects on the growth of algae are determined
[3]
NOTE Adapted from ISO 8692:2004 , 3.4.
3 Principle
Algal tips from monocultures of ceramium female gametophytes are grown in defined test conditions and in a
defined medium containing a range of concentrations of the test sample. The test solutions are incubated for a
period of 7 d after which the increase in length is measured and the growth rate is calculated. The growth
inhibition is determined as a reduction in growth rate, relative to control cultures grown under identical
conditions.
When toxicity of samples is to be compared to the toxicity of other chemicals or waste waters, tests can be
performed in artificial seawater. If the purpose of the testing is to assess and to predict effects in a specific
receiving water body, the tests can be conducted with algae adapted to the salinity in the receiving water body.
In this case, natural seawater from an uncontaminated site of the same properties is used.
4 Test organisms, nutrients, media, and materials
Unless otherwise stated, use only reagents of recognized analytical grade and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
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4.1 Test organisms
Use either of the following marine algal clones:
a) Ceramium tenuicorne Kützing Waern (7S clone originating from the Baltic Sea);
b) C. tenuicorne Kützing Waern (20S and 30S clone originating from the Oslo fjord).
This alga is a widely distributed macroalgae species (phylum Rhodophyta) in estuarine and coastal areas. The
1)
strains recommended are available in unialgal, non-axenic cultures .
NOTE 1 This growth inhibition test is based on two clones, which were formerly regarded as two different species.
These species were the marine Ceramium strictum Harvey sensu Kylin and the brackish water species C. tenuicorne
Kützing Waern. Complete interfertility (References [11][12]) and DNA data (Reference [10]) have shown that the two
entities belong to the same species, with C. tenuicorne as the valid name. The marine clone (former C. strictum) used in
this test was isolated in 1973 and originates from the Oslo fjord (20S to 25S). It has been maintained as a laboratory
culture for over 30 years. The brackish water clone was isolated in 1995 and originates from the Baltic Sea, 20 km south
of the Askö laboratory in northern Baltic proper (6S to 7S). Cultures can be maintained in the medium specified in Clause 5.
Regular subculturing is necessary.
NOTE 2 Among the red algae, changes occur between haploid and diploid generations. In the growth inhibition test,
the female gametophytic generation is used since it has an even dichotomous growth pattern and the fastest growth rate.
In nature it is difficult to distinguish between male and female plants. This can be done in the laboratory where
spermatangia are found on the branches of the male plants and trichogynes can be seen on the tips of the claws on the
female plants.
NOTE 3 The Baltic Sea clone can be adapted and used in tests in salinities between 4S and 12S. The marine clone can
be used as test organism in salinities between 12S and 32S.
4.2 Natural and artificial seawater
4.2.1 General
Natural seawater is used for the cultivation of the algae and either natural or artificial seawater should be used
for testing. The type of seawater to be used depends on the objective of the test. When natural seawater is
used, care shall be taken to ensure that it is not polluted. Take special care to avoid contamination of the
water by inorganic or organic substances during preparation and storage. Equipment made of copper shall not
be use
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 10710
Première édition
2010-06-15
Qualité de l'eau — Essai d'inhibition de
croissance sur la macro algue d'eaux
marine et saumâtre Ceramium tenuicorne
Water quality — Growth inhibition test with the marine and brackish
water macroalga Ceramium tenuicorne

Numéro de référence
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ISO 2010
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Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Termes et définitions .1
3 Principe.2
4 Organismes d'essai, nutriments, milieux et matériaux .3
4.1 Organismes d'essai.3
4.2 Eau de mer naturelle et artificielle .3
4.3 Nutriments.4
4.4 Milieu.5
5 Culture .6
6 Appareillage .7
7 Mode opératoire.7
7.1 Algues.7
7.2 Préparation de l'eau de dilution.8
7.3 Choix des concentrations d'essai .9
7.4 Démarrage de l'essai.9
7.5 Incubation.9
7.6 Mesurage.10
7.7 Essai avec substances de référence.10
8 Critères de validité .10
9 Évaluation des résultats .10
9.1 Calculs.10
9.2 Détermination de la C E .11
x r
9.3 Expression des résultats.11
9.4 Interprétation des résultats .11
10 Reproductibilité .11
11 Rapport d'essai.12
Annexe A (informative) Modèle de croissance de Ceramium tenuicorne aux salinités 7S et 20S .13
Annexe B (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires avec Ceramium tenuicorne à la
salinité 20S .16
Bibliographie.17

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 10710 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité SC 5,
Méthodes biologiques.
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Introduction
La macro algue rouge Ceramium tenuicorne appartient aux Ceramiaceae, Rhodophyta. L'espèce peut être
utilisée comme organisme modèle pour l'écosystème côtier. Cette espèce existe dans les eaux marines
tempérées des hémisphères nord et sud et elle est donc représentative de grandes zones. En tant que
producteurs primaires, les macro algues sont une source de nourriture pour de nombreux invertébrés et
servent d'habitat aux bactéries, invertébrés et aux juvéniles de poissons. Elles servent aussi de substrat à de
nombreuses espèces de poissons ovipares.
NORME INTERNATIONALE ISO 10710:2010(F)

Qualité de l'eau — Essai d'inhibition de croissance sur la macro
algue d'eaux marine et saumâtre Ceramium tenuicorne
AVERTISSEMENT — Il convient que l'utilisateur de la présente Norme internationale connaisse bien
les pratiques courantes de laboratoire. La présente Norme internationale n'a pas pour but de traiter
tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur
d'établir des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de s'assurer de la
conformité à la réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est absolument essentiel que les essais réalisés conformément à la présente Norme
internationale soient exécutés par un personnel ayant reçu une formation adéquate.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination de l'inhibition de la croissance de la
macro algue Ceramium tenuicorne par des substances et des mélanges contenus dans l'eau de mer ou par
des eaux usées dont les salinités sont comprises entre 4S et 32S. Cette méthode est applicable à des
substances qui sont facilement hydrosolubles.
NOTE Les effets inhibiteurs des matériaux organiques et inorganiques faiblement solubles, des composés volatils,
des métaux, des eaux résiduaires, des échantillons d'eau de mer et des élutriats de sédiments peuvent être soumis à
[4] [2]
essai, avec des modifications telles que celles décrites dans l'ISO 14442 et dans l'ISO 5667-16 .
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
longueur de l'algue
longueur depuis la première division jusqu'au bourgeon le plus distant de l'algue
NOTE La longueur de l'algue est exprimée en millimètres.
Voir Figure 1.
2.2
milieu témoin
combinaison de l'eau de dilution et/ou du milieu nutritif utilisée pour l'essai
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.6]
2.3
lot témoin
milieu témoin, incluant les organismes utilisés pour l'essai
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.5]
2.4
concentration effective
C E
x r
concentration de l'échantillon pour essai à laquelle un effet de x % est mesuré par rapport au témoin
[5]
[ISO 20079:2005 , 3.9]
2.5
milieu de croissance
mélange d'eau de mer naturelle et de nutriments utilisé pour les précultures des algues, dans lequel les
cellules algales sont incubées
[3]
NOTE Adapté de l'ISO 8692:2004 , 3.3.
2.6
taux de croissance
µ
〈qualité de l'eau〉 taux proportionnel de croissance en longueur de l'algue par jour
NOTE Voir l'Article 9.
2.7
salinité
salinité pratique
S
〈eau de mer〉 rapport K entre la conductivité électrique de l'échantillon d'eau de mer à la température de
15 °C et sous une pression d'une atmosphère normale et celle d'une solution de chlorure de potassium dont
−3
la fraction massique de KCl est de 32,435 6 × 10 , à la même température et à la même pression
NOTE Adapté de la Référence [14], p. 28.
2.8
milieu d'essai
mélange d'eau de mer, de nutriments et d'échantillon pour essai
[3]
NOTE Adapté de l'ISO 8692:2004 , 3.5.
2.9
échantillon pour essai
〈qualité de l'eau〉 échantillon aqueux, par exemple substance chimique, mélange de produits chimiques ou
eaux résiduaires, pour lequel les effets inhibiteurs sur la croissance des algues doivent être déterminés
[3]
NOTE Adapté de l'ISO 8692:2004 , 3.4.
3 Principe
Les bourgeons d'algues provenant de monocultures de gamétophytes femelles de Ceramium sont cultivés
dans des conditions d'essai définies et dans un milieu défini contenant une plage de concentrations de
l'échantillon pour essai. Les solutions d'essai sont incubées pendant une période de sept jours après laquelle
l'augmentation de longueur est mesurée et le taux de croissance calculé. L'inhibition de la croissance est
déterminée comme une réduction du taux de croissance par rapport aux cultures témoin cultivées dans des
conditions identiques.
Lorsque la toxicité des échantillons est comparée à celle d'autres produits chimiques ou d'eaux usées, les
essais peuvent être réalisés dans de l'eau de mer artificielle. Si l'essai est destiné à évaluer et à prédire les
effets pour une masse d'eau réceptrice spécifique, les essais peuvent être effectués avec une algue adaptée
à la salinité de la masse d'eau réceptrice. Dans ce cas, de l'eau de mer naturelle provenant d'un site non
contaminé ayant les mêmes propriétés est utilisée.
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

4 Organismes d'essai, nutriments, milieux et matériaux
Sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distillée
ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Organismes d'essai
Utiliser l'un des clones d'algues marines suivants:
a) Ceramium tenuicorne Kützing Waern (clone 7S originaire de la mer Baltique);
b) C. tenuicorne Kützing Waern (clone 20S et 30S originaire du fjord d'Oslo).
Ces algues sont des espèces de macro algues largement distribuées (phylum Rhodophyta) dans les zones
estuariennes et côtières. Les souches recommandées sont disponibles en cultures unialgales, non
1)
axéniques .
NOTE 1 Cet essai d'inhibition de croissance est fondé sur deux clones, considérés auparavant comme deux espèces
différentes. Ces espèces éta
...