ISO 8655-7:2022

NORME ISO
INTERNATIONALE 8655-7
Deuxième édition
2022-04
Version corrigée
2023-01
Appareils volumétriques à piston —
Partie 7:
Modes opératoires de mesure
alternatifs pour la détermination de
volumes
Piston-operated volumetric apparatus —
Part 7: Alternative measurement procedures for the determination of
volume
Numéro de référence
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vii
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 2
4 Exigences générales . .2
4.1 Confirmation métrologique . 2
4.2 Incertitude de mesure . 2
4.3 Qualification de l’opérateur . 3
5 Exigences de performance .3
5.1 Tolérances de performance . 3
5.2 Impact de l’opérateur . 3
6 Conditions d’essai . 3
6.1 Généralités . 3
6.2 Équipement d’essai . 3
6.3 Laboratoire d’essai et conditions environnementales . 4
6.4 Volumes d’essai. 4
6.4.1 AVAP à volume fixe . 4
6.4.2 AVAP à volume variable . 4
6.5 Nombre de mesurages par volume d’essai . 5
6.6 Liquides d’essai . 5
7 Évaluation . 6
7.1 Volume moyen . 6
7.2 Erreur systématique de mesure . 6
7.3 Erreur de mesurage aléatoire . 6
8 Méthodes d’essais. 7
8.1 Généralités . 7
8.2 Méthode gravimétrique . 7
8.3 Méthode photométrique ratiométrique à deux colorants . 8
8.4 Méthode photométrique à un seul colorant . 8
8.5 Méthode hybride photométrique/gravimétrique pour les AVAP multicanaux . 8
8.6 Méthode par titrage . 8
8.7 Contrôle par lots . . 8
9 Modes opératoires de distribution . 9
9.1 Généralités . 9
9.2 Préparation . 9
9.3 Pipettes monocanal à déplacement d’air (conformément à l’ISO 8655-2) . 9
9.3.1 Généralités . 9
9.3.2 Cycle d’essai . 10
9.4 Pipettes multicanaux (conformément à l’ISO 8655-2) . 11
9.5 Pipettes à déplacement positif (conformément à l’ISO 8655-2) . .12
9.6 Burettes (conformément à l’ISO 8655-3) .12
9.7 Diluteurs (conformément à l’ISO 8655-4) .12
9.7.1 Généralités .12
9.7.2 Cycle d’essai .13
9.8 Distributeurs (conformément à l’ISO 8655-5) . 13
9.9 Seringues (conformément à l’ISO 8655-9) . 14
9.9.1 Généralités . 14
9.9.2 Cycle d’essai . 14
10 Consignation des résultats .14
iii
Annexe A (normative) Mode opératoire gravimétrique .16
Annexe B (normative) Mode opératoire photométrique ratiométrique à deux colorants .21
Annexe C (normative) Mode opératoire photométrique à un seul colorant .29
Annexe D (normative) Mode opératoire hybride photométrique/gravimétrique .34
Annexe E (normative) Mode opératoire titrimétrique.43
Annexe F (normative) Conversion de la masse de liquide en volume .47
Bibliographie .50
iv
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www.iso.org/iso/fr/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 48, Équipement de laboratoire, en
collaboration avec le comité technique CEN/TC 332, Équipement de laboratoire, du Comité européen de
normalisation (CEN) conformément à l’accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de
Vienne).
La présente deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 8655-7:2005), qui a fait l’objet
d’une révision technique. Elle intègre également le Rectificatif technique ISO 8655-7:2005/Cor.1:2008.
Les principales modifications sont les suivantes:
— une méthode d’essai gravimétrique a été ajoutée (voir 8.2);
— une méthode d’essai hybride photométrique/gravimétrique a été ajoutée (voir 8.5);
— une méthode d’essai par lots a été ajoutée (voir 8.7);
— les modes opératoires de mesure pour toutes les méthodes sont fournis dans les Annexes A à E
normatives;
— les modes opératoires de distribution normalisés pour les AVAP décrits dans l’ISO 8655-2,
l’ISO 8655−3, l’ISO 8655−4, l’ISO 8655−5 et dans l’ISO 8655−9 ont été ajoutés (voir l’Article 9);
— les exigences relatives à la qualification des opérateurs ont été ajoutées (voir 4.3);
— les exigences relatives aux essais d’AVAP multicanaux sont décrites en détail et accompagnées de
modes opératoires spécifiques pour ces appareils (voir 8.5 et l’Annexe D);
— les Annexes A, B et C de la première édition ont été supprimées et remplacées.
v
Une liste de toutes les parties de la série ISO 8655 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
La présente version corrigée de l'ISO 8655-7:2022 inclut les corrections suivantes:
— les espaces décimaux remplacés par des virgules dans le Tableau B.5 et le Tableau C.3;
— dans le Tableau D.5, le tiret est remplacé par «25» dans la deuxième colonne, l'unité de concentration
a été mise à jour en «mg/ml» et les valeurs de concentration pour «mg/ml» ont été mises à jour;
— en D.3.2.3, l'unité de concentration pour le 16,7 a été mise à jour de «µg/ml» à «mg/ml»;
— en D.3.2.4, la concentration nominale pour les plaques 384 puits a été mise à jour à 29,3 µg/ml;
— en D.3.5.1 et D.3.5.2, le terme « facteur de conversion» est remplacé par «facteur de correction»;
— l'année de publication de l'ISO 23783-2:— a été mise à jour pour lire ISO 23783-2:2022.
vi
Introduction
La série de normes ISO 8655 répond aux besoins des personnes suivantes:
— fabricants, en servant de base pour le contrôle de la qualité y compris, le cas échéant, la publication
des déclarations du fabricant;
— laboratoires d’étalonnage, laboratoires d’essai, utilisateurs de l’équipement et autres organismes,
en servant de base pour les étalonnages indépendants, les essais, les vérifications et les essais
de routine.
Les essais spécifiés dans la série de normes ISO 8655 sont destinés à être réalisés par du personnel
qualifié.
vii
NORME INTERNATIONALE ISO 8655-7:2022(F)
Appareils volumétriques à piston —
Partie 7:
Modes opératoires de mesure alternatifs pour la
détermination de volumes
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie des modes opératoires de mesure alternatifs pour la détermination
du volume des appareils volumétriques à piston.
Les modes opératoires sont applicables à des systèmes complets comprenant l’appareil de base et toutes
les parties sélectionnées pour être utilisées avec l’appareil, à usage unique ou réutilisables, impliqués
dans le mesurage par procédé de distribution (Ex). Les méthodes décrites dans le présent document
sont adaptées à différents volumes nominaux maximum d’appareils volumétriques à piston. Il en va de
la responsabilité de l’utilisateur de sélectionner la méthode appropriée.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 2859-1, Règles d'échantillonnage pour les contrôles par attributs — Partie 1: Procédures
d'échantillonnage pour les contrôles lot par lot, indexés d'après le niveau de qualité acceptable (NQA)
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
ISO 3951-1, Règles d'échantillonnage pour les contrôles par mesures — Partie 1: Spécification pour les plans
d’échantillonnage simples indexés d’après un niveau de qualité acceptable (NQA) pour un contrôle lot par lot
pour une caractéristique qualité unique et un NQA unique
ISO 8655-1, Appareils volumétriques à piston — Partie 1: Définitions, exigences générales et
recommandations pour l'utilisateur
ISO 8655-2, Appareils volumétriques à piston — Partie 2: Pipettes
ISO 8655-3:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 3: Burettes
ISO 8655-4:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 4: Diluteurs
ISO 8655-5:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 5: Distributeurs
ISO 8655-6, Appareils volumétriques à piston — Partie 6: Mode opératoire de mesure gravimétrique de
référence pour la détermination de volumes
ISO 8655-8, Appareils volumétriques à piston — Partie 8: Mode opératoire de mesure photométrique de
référence pour la détermination de volumes
ISO 8655-9, Appareils volumétriques à piston — Partie 9: Seringues de laboratoire haute précision pour
utilisation manuelle
Guide ISO/IEC 2, Normalisation et activités connexes — Vocabulaire général
Guide ISO/IEC 99, Vocabulaire international de métrologie — Concepts fondamentaux et généraux et
termes associés (VIM)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 8655-1, le
Guide ISO/IEC 2, l’ISO/IEC Guide 99 ainsi que les suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
niveau de qualité acceptable
NQA
<échantillonnage acceptable> plus faible niveau de qualité tolérable
Note 1 à l'article: Ce concept s’applique uniquement en cas d’utilisation d’un plan d’échantillonnage contenant des
règles de permutation et d’interruption, comme dans l’ISO 2859-1, l’ISO 3951-1 ou dans l’ISO 3951-5.
Note 2 à l'article: Bien que la probabilité soit relativement élevée que des lots individuels ayant un niveau
de qualité acceptable puissent être acceptés, la désignation d’un niveau de qualité acceptable ne saurait laisser
entendre qu’il s’agit d’un niveau de qualité souhaitable. Les plans d’échantillonnage fournis dans des Normes
internationales, telles que l’ISO 2859-1, l’ISO 3951-1 ou l’ISO 3951-5, qui énoncent des règles de permutation
et d’interruption du contrôle de l’échantillonnage, sont conçus pour encourager les fournisseurs à maintenir une
qualité moyenne de procédé supérieure au NQA.
4 Exigences générales
4.1 Confirmation métrologique
La confirmation métrologique de tous les AVAP doit être réalisée régulièrement afin de s’assurer que
l’appareil satisfait aux exigences relatives à son usage prévu. Les exigences des méthodes et des modes
opératoires décrits dans le présent document sont adaptées à la confirmation métrologique des AVAP.
Dans le cadre de la confirmation métrologique, au moins dix mesurages répétés par volume sélectionné
doivent être réalisés et les modes opératoires de mesure du présent document doivent être validés par
comparaison à l’un des modes opératoires de mesure de référence décrits dans l’ISO 8655-6 ou dans
l’ISO 8655-8.
4.2 Incertitude de mesure
Lors des étalonnages (ISO 8655-1:2022, 6.4) conformément aux modes opératoires de mesure décrits
dans le présent document, l’incertitude de mesure élargie du volume distribué moyen pour chaque
volume sélectionné doit être estimée et consignée dans le rapport [voir l’Article 10 (m)].
Lors des essais (ISO 8655-1:2022, 6.4) ou des essais de routine (ISO 8655-1:2022, 6.5), l’estimation et la
consignation dans le rapport de l’incertitude de mesure élargie sont facultatives.
NOTE Pour plus d’informations relatives à l’incertitude des méthodes photométriques et gravimétriques,
[1] [2]
voir l’ISO/TR 16153 et l’ISO/TR 20461 respectivement.
4.3 Qualification de l’opérateur
Tout opérateur qui utilise un AVAP dans le cadre de transferts de volumes, procède à une confirmation
métrologique ou soumet l’AVAP à des essais de routine doit être correctement formé à l’utilisation
du type d’AVAP soumis à essai. Il convient de documenter la formation et les compétences des
opérateurs.
NOTE 1 Des AVAP étalonnés précédemment peuvent être utilisés à des fins de qualification des opérateurs.
NOTE 2 Des exigences de formation et de qualification des opérateurs d’AVAP sont destinées à être incluses
à l’ISO 8655-10.
5 Exigences de performance
5.1 Tolérances de performance
Les résultats de l’étalonnage et de l’essai de routine peuvent être consignés sans être comparés aux
tolérances de performance. Si les résultats sont vérifiés par rapport aux tolérances de performance,
ces tolérances doivent être indiquées dans le rapport d’essai/certificat.
Les tolérances de performance peuvent être fondées sur les tolérances du procédé de manipulation de
liquides de l’utilisateur ou sur les tolérances indiquées dans la partie de l’ISO 8655 correspondant au
type d’AVAP soumis à essai ou sur les tolérances spécifiées par le fabricant, sous réserve qu’elles soient
adaptées à l’usage prévu.
5.2 Impact de l’opérateur
Le mesurage des performances volumétriques inclut les erreurs systématiques et aléatoires de l’AVAP,
ainsi que les erreurs introduites par l’opérateur de l’appareil. Les performances d’une pipette manuelle
sont indissociables des performances de son opérateur.
NOTE L’ISO 8655-10 fournit de plus amples informations concernant l’influence de l’opérateur.
6 Conditions d’essai
6.1 Généralités
L’adéquation au mode opératoire ou à la méthode d’essai sélectionnée des conditions d’essai décrites
dans le présent article doit être validée. Les conditions d’essai, ainsi que l’équipement d’essai et le mode
opératoire d’essai détaillé influent sur l’incertitude de mesure. Des exemples de calcul de l’incertitude
élargie du volume moyen et de l’incertitude lors de l’utilisation d’un seul volume distribué sont fournis
[1] [2]
dans l’ISO/TR 16153 et dans l’ISO/TR 20461 .
6.2 Équipement d’essai
L’ensemble de l’équipement utilisé dans le cadre des essais des AVAP, y compris lors de la préparation
des solutions d’essai, doit être choisi de sorte à pouvoir obtenir l’incertitude de mesure requise.
L’ensemble de l’équipement d’essai utilisé doit présenter une précision d’affichage, une exactitude,
une reproductibilité et une stabilité adaptées, en accord avec l’incertitude de mesure élargie requise.
Tout écart par rapport à l’équipement d’essai indiqué dans le présent document doit être pris en compte
lors du calcul de l’incertitude élargie et il doit être prouvé que l’équipement d’essai sélectionné donne
des résultats de mesure adaptés à l’usage prévu.
6.3 Laboratoire d’essai et conditions environnementales
Les conditions suivantes s’appliquent:
a) il convient de maintenir le laboratoire d’essai à une température constante tout au long de la durée
d’équilibrage de l’équipement d’essai et de l’AVAP (±1 °C) et tout au long de la durée de l’essai de
l’AVAP (±0,5 °C). L’équipement d’essai, l’AVAP, les pièces interchangeables (cônes pour pipettes,
par exemple), ainsi que les réactifs utilisés doivent tous être amenés à la température du laboratoire
d’essai;
b) la température de l’air, l’humidité relative et la pression barométrique au moment de l’essai doivent
être enregistrées. Au début et à la fin de n mesurages répétés, la température du liquide d’essai doit
être enregistrée;
NOTE 1 La température de l’air et la pression barométrique sont nécessaires pour la conversion de la
masse de liquide en volume (voir l’Annexe F), tandis que l’humidité relative est nécessaire pour la stabilité
des conditions de la pièce et pour la documentation dans le rapport d’essai.
c) afin de faciliter l’évaluation de l’adéquation à l’usage prévu d’un AVAP, il convient que les conditions
du laboratoire d’essai (température, humidité relative et pression barométrique) reflètent les
conditions environnementales dans lesquelles l’AVAP est utilisé en respectant les contraintes
mentionnées en a). Il est possible d’y parvenir lorsqu’un AVAP est soumis à essai dans le laboratoire
où il est utilisé. D’autres facteurs environnementaux et non environnementaux peuvent influencer
l’adéquation à l’usage prévu d’un AVAP;
d) il convient que l’environnement d’essai ne soit pas exposé aux courants d’air;
e) avant de procéder à l’essai, l’appareil à soumettre à essai, l’ensemble de l’équipement d’essai et les
solutions d’essai doivent être maintenus dans les conditions du laboratoire d’essai pendant une
durée suffisante pour atteindre l’équilibre avec les conditions du laboratoire d’essai;
f) les conditions environnementales, la température et l’humidité de l’air doivent se situer dans
les limites spécifiées pour le laboratoire d’essai pendant au moins 2 h avant le début de l’essai
(temps d’équilibrage minimum) et pendant l’essai lui-même.
NOTE 2 Il est peu probable que ce temps d’équilibrage minimum soit inférieur à 2 h ou qu’il puisse être
considérablement plus long.
NOTE 3 Les laboratoires d’étalonnage dans les centres d’essai ou les laboratoires de contrôle qualité
du fabricant de pipettes peuvent souvent contrôler les conditions environnementales avec précision pour
atteindre les conditions normalisées souhaitées. Il peut être très difficile de reproduire ces résultats dans
d’autres conditions environnementales.
6.4 Volumes d’essai
6.4.1 AVAP à volume fixe
Dans le cas d’un AVAP à volume fixe, le volume sélectionné V est le volume nominal V et est le seul
S Nom
volume d’essai.
6.4.2 AVAP à volume variable
a) Dans le cadre des étalonnages et des essais, les AVAP à volume variable doivent être soumis à essai
à trois volumes différents au minimum:
— au volume nominal.
— à 50 % du volume nominal ou à la valeur s’en rapprochant le plus (en cas de valeurs équidistantes,
utiliser la valeur supérieure).
— à la limite inférieure de la plage de volume utile ou à 10 % du volume nominal (la valeur la plus
élevée étant retenue).
Le mesurage d’autres volumes est facultatif.
b) Pour les essais de routine, moins de trois volumes peuvent être soumis à essai.
S’il est décidé de soumettre l’AVAP à essai à deux volumes uniquement, le volume nominal et la limite
inférieure de la plage de volume ou le volume correspondant à 10 % du volume nominal (la valeur la
plus élevée étant retenue) doivent être utilisés.
NOTE La linéarité des volumes distribués entre ces deux points d’essai est inconnue, ce qui est susceptible
d’accroître le risque d’erreurs volumétriques par rapport à un essai à trois volumes.
Si l’AVAP est soumis à essai à un seul volume, il doit être soumis à essai à son volume nominal ou au
volume auquel il est destiné à être utilisé.
6.5 Nombre de mesurages par volume d’essai
La confiance accordée à la confirmation métrologique augmente avec le nombre de répétitions de
mesurages pour chaque volume d’essai. Les modes opératoires de mesure de référence spécifiés dans
l’ISO 8655-6 et dans l’ISO 8655-8 requièrent d’effectuer au moins 10 mesurages par volume. Pour les
tests de routine recommandent d’utiliser 10 mesurages, mais un nombre inférieur de répétitions peut
être accepté si l’incertitude élargie de l’AVAP est adaptée à l’usage prévu. Le nombre de répétitions ne
doit pas être inférieur à 4.
Après réparation ou ajustage de l’AVAP, au moins 10 mesurages doivent être effectués.
Les répétitions de mesurages de volumes doivent être utilisées pour calculer l’erreur systématique
et l’erreur aléatoire du mesurage conformément à l’Article 8. Le cas échéant, l’incertitude consignée
dans le rapport doit être fondée sur le nombre de répétitions.
6.6 Liquides d’essai
Les AVAP sont généralement fournis avec des ajustages effectués à l’aide d’eau. Les étalonnages ou les
essais de routine peuvent être réalisés au moyen d’autres liquides ou solutions. Pour les besoins du
présent document, le terme «liquide d’essai» est utilisé pour désigner des solvants purs, ainsi qu’une
solution de chromophore préparée ou d’autres solutions. Le liquide d’essai utilisé doit être décrit de
manière suffisamment détaillée pour permettre la reproduction de l’essai et l’interprétation des
résultats.
Les caractéristiques suivantes du liquide d’essai doivent être prises en compte lors de la détermination
du volume mesuré: le facteur Z lors du pesage, les absorbances des chromophores en cas de recours à des
méthodes photométriques, ainsi que la conductivité et la réactivité lors du titrage potentiométrique.
En fonction du type d’AVAP, les paramètres suivants peuvent influencer la quantité de liquide aspiré et/
ou distribué: la viscosité, la masse volumique, la composition chimique et la tension de surface.
La stabilité de chaque liquide d’essai doit être connue s’il est destiné à être conservé pour une durée
indéterminée. Se reporter au mode opératoire spécifique pour la préparation et le stockage des
solutions de réactifs.
Le liquide d’essai utilisé doit être consigné. L’influence du liquide d’essai sur l’incertitude de mesure
élargie doit être prise en compte lors des étalonnages.
7 Évaluation
7.1 Volume moyen
Additionner les n volumes d’essai distribués V (i) (où i = 1 à n) et diviser la somme par n pour obtenir
T
le volume moyen V distribué à la température d’essai, comme illustré à la Formule (1). Cette valeur
peut être exprimée en microlitres ou en millilitres:
n
V= Vi() (1)
∑
T
n
i=1
où
est le volume moyen;
V
n est le nombre de répétitions de distributions du volume d’essai;
V (i) est le volume de liquide d’essai distribué pour chaque répétition, i = 1 à n.
T
7.2 Erreur systématique de mesure
Calculer l’erreur systématique de mesure e des appareils volumétriques à piston à l’aide de la
S
Formule (2):
eV=−V (2)
ss
où
e est l’erreur systématique absolue de mesure, exprimée en unités de volume;
S
V est le volume d’essai sélectionné de l’AVAP soumis à essai.
S
Cette erreur systématique de mesure peut être exprimée en pourcentage à l’aide de la Formule (3):
()VV−
S
η = ×100 % (3)
S
V
S
où η est l’erreur systématique relative de mesure, exprimée en pourcentage.
S
Dans le cas d’un AVAP à volume fixe, le volume d’essai sélectionné V correspond au volume nominal.
S
L’erreur systématique de mesure dans la série de normes ISO 8655 s’appuie sur la convention historique
au sein du secteur du pipetage et utilise le signe inverse par rapport à la définition décrite dans
l’ISO guide 99:2007, 2.17. Pour plus d’informations, voir l’ISO 8655-1:2022, 6.2.
7.3 Erreur de mesurage aléatoire
Calculer l’erreur aléatoire de l’AVAP comme l’écart-type de répétabilité s à l’aide de la Formule (4):
r
n
((Vi))−V
∑
T
i=1
s = (4)
r
n−1
où s est l’écart-type, exprimé en unités de volume.
r
Cette erreur aléatoire peut aussi être exprimée en pourcentage grâce au coefficient de variation, C ,
V
à l’aide de la Formule (5).
s
r
C =×100 % (5)
V
V
où C est le coefficient de variation, exprimé en pourcentage.
V
8 Méthodes d’essais
8.1 Généralités
Le présent document décrit cinq méthodes d’essai, ainsi que les modes opératoires d’essai
correspondants: la gravimétrie, la photométrie ratiométrique à deux colorants, la photométrie à un
seul colorant, une méthode hybride associant la photométrie et la gravimétrie, et le titrage.
Le choix des liquides d’essai et des récipients collecteurs dépend de la méthode sélectionnée. Les modes
opératoires d’essai correspondant aux méthodes d’essai sélectionnées sont décrits dans l’Annexe A à
l’Annexe E respectivement, et doivent être respectés pour préparer les liquides d’essai. Les récipients
accueillant les liquides d’essai doivent être conformes à ceux spécifiés dans le mode opératoire d’essai
correspondant.
Les produits chimiques utilisés lors de la préparation des liquides d’essai, ainsi que leur numéro
d’enregistrement auprès du CAS sont répertoriés dans le Tableau 1.
Tableau 1 — Numéros d’enregistrement CAS
Produit chimique N° CAS
chlorure de cuivre(II) dihydraté 10125–13–0
hydrogénophosphate de disodium dihydraté 10028–24–7
acide chlorhydrique 7647–01–0
acide nitrique 7697–37–2
4-nitrophénol 100–02–7
Orange G 1936–15–8
Ponceau S 6226–79–5
chlorure de potassium 7447–40–7
hydrogénophtalate de potassium 877–24–7
nitrate de potassium 7757–79–1
nitrate d’argent 7761–88–8
chlorure de sodium 7647–14–5
hydroxyde de sodium 1310–73–2
acide sulfurique 7664–93–9
Tartrazine 1934–21–0
acide éthylènediaminetétraacétique tétrasodique dihydraté 10378–23–1
eau 7732–18–5
8.2 Méthode gravimétrique
Cette méthode consiste à mesurer la masse du volume d’essai distribué à l’aide d’une balance. Elle peut
être utilisée pour évaluer les performances volumétriques d’un AVAP pour de multiples liquides d’essai,
sous réserve que la masse volumique du liquide d’essai en question soit connue.
Le mode opératoire gravimétrique est décrit à l’Annexe A.
Cette méthode peut être adaptée en vue de l’utilisation de balances compatibles avec les AVAP
multicanaux, qui permettent la distribution simultanée de liquide d’essai à l’aide de l’AVAP multicanaux.
La section A.2 s’applique en cas d’écart par rapport aux exigences spécifiées dans le mode opératoire de
mesure gravimétrique de référence spécifié dans l’ISO 8655-6.
8.3 Méthode photométrique ratiométrique à deux colorants
Cette méthode utilise deux solutions de chromophore: la solution d’essai contenant du Ponceau S est
distribuée dans une solution de chlorure de cuivre(II), et le degré de dilution des deux chromophores
est calculé à partir des mesurages photométriques à 520 nm et à 730 nm.
Le mode opératoire photométrique ratiométrique décrit à l’Annexe B convient pour des volumes d’essai
compris entre 0,1 µl et 5 000 µl.
Cette méthode peut être adaptée pour soumettre à essai des AVAP multicanaux en distribuant les
solutions de chromophore à partir de tous les canaux simultanément dans des microplaques de 96 puits
ou de 384 puits (voir la Référence [3] Article 5.2.1 et Annexe B).
La section B.2 s’applique en cas d’écart par rapport aux exigences spécifiées dans le mode opératoire
de mesure photométrique de référence spécifié dans l’ISO 8655-8.
8.4 Méthode photométrique à un seul colorant
Dans le cadre de cette méthode, la dilution d’une solution de chromophore (solution d’essai) est calculée
à partir de l’absorbance mesurée de la solution d’essai distribuée. Les chromophores suivants peuvent
être utilisés pour cette méthode: Ponceau S, Orange G, tartrazine et 4-nitrophénol.
Le mode opératoire photométrique décrit à l’Annexe C s’appuie sur l’utilisation de Ponceau S comme
chromophore et convient pour des volumes d’essai compris entre 2 µl et 200 µl.
8.5 Méthode hybride photométrique/gravimétrique pour les AVAP multicanaux
Cette méthode permet d’évaluer les performances volumétriques des AVAP multicanaux en associant
un mesurage gravimétrique et un mesurage photométrique. Du liquide d’essai contenant soit de la
tartrazine, de l’Orange G ou du 4-nitrophénol comme chromophore est distribué par tous les canaux
simultanément dans des microplaques de 96 puits ou de 384 puits.
Le mode opératoire décrit à l’Annexe D convient, en général, pour des volumes d’essai compris entre
1 µl et 100 µl dans le cas de plaques de 96 puits et entre 1 µl et 50 µl pour les plaques de 384 puits.
8.6 Méthode par titrage
Cette méthode est adaptée à des volumes d’essai supérieurs à 500 µl et utilise une solution de chlorure
de sodium (NaCl) comme liquide d’essai, qui est titré avec une solution de nitrate d’argent (AgNO ).
Le point d’équivalence est déterminé par détection potentiométrique, par exemple avec une électrode
d’argent.
Le mode opératoire de titrage potentiométrique est décrit à l’Annexe E.
8.7 Contrôle par lots
Des approches statistiques fondées sur des essais aléatoires et un contrôle d’échantillons peuvent être
utilisées pour faciliter le contrôle par lots des AVAP dès lors que toutes les dispositions du présent
paragraphe sont respectées. Les utilisateurs de cette analyse doivent garder un contrôle total sur tous
les composants déterminant le volume de l’AVAP, y compris les tolérances et le processus d’assemblage.
La production de ces éléments doit être au stade de la production en série.
L’historique intégral de production et de performance d’un lot complet d’AVAP issus d’une gamme de
produits présentant des caractéristiques volumétriques identiques (même volume nominal, même
appareil à volume fixe ou variable, nombre de canaux identique, par exemple) doit être conservé.
De plus, l’homogénéité des performances de l’AVAP doit être assurée au sein des limites de performance
spécifiques. Les performances des éléments de détermination du volume doivent être déterminées
par le biais de mesurages réalisés conformément à l’un des modes opératoires de mesure de référence
[4]
spécifiés dans l’ISO 8655-6 ou dans l’ISO 8655-8 dans un laboratoire compétent en la matière .
Les AVAP soumis à un contrôle par lots conformément au présent document doivent être fabriqués
[5]
par une organisation pourvue d’un système de management de la qualité reconnu, comme ISO 9001
[6]
ou ISO 13485 . Le plan d’échantillonnage pour cette méthode doit respecter l’ISO 2859-1 ou l’ISO 3951-1
et prévoir un niveau de qualité acceptable (NQA) approprié.
Les détails du plan d’échantillonnage sélectionné et le NQA, y compris une référence à la norme ISO
correspondante, doivent être consignés dans le rapport.
9 Modes opératoires de distribution
9.1 Généralités
Le liquide d’essai doit être distribué dans le récipient collecteur selon les modes opératoires spécifiques
décrits de 9.2 à 9.9, à moins que les instructions du fabricant de l’AVAP ne spécifient un autre mode
opératoire de distribution, auquel cas ce mode opératoire (instructions du fabricant) peut être utilisé.
En cas d’utilisation des instructions du fabricant, ce mode opératoire doit être documenté dans le
rapport d’essai de manière suffisamment détaillée pour pouvoir reproduire l’essai.
9.2 Préparation
Préparer l’équipement d’essai, le liquide d’essai et le récipient destiné à recevoir le liquide d’essai
conformément au mode opératoire sélectionné.
Laisser l’AVAP soumis à essai, l’équipement d’essai, les pièces interchangeables et les liquides d’essai
atteindre l’équilibre thermique.
Si un AVAP à volume variable est utilisé, sélectionner le volume d’essai; ce réglage ne doit pas être
modifié au cours du cycle d’essai de tous les mesurages répliqués.
Dans le cadre d’essais impliquant une burette, un diluteur ou un distributeur, placer l’AVAP à l’essai,
avec son réservoir déjà rempli de liquide d’essai, de manière à pouvoir distribuer le liquide d’essai
directement dans le récipient collecteur. Amorcer l’AVAP soumis à essai conformément aux instructions
du fabricant afin d’éliminer toute bulle d’air à l’intérieur des tubes et des vannes. Régler la vitesse de
distribution conformément aux instructions du fabricant. Il peut être nécessaire de jeter les premières
gouttes de liquide avant de commencer l’étalonnage si cela est indiqué par le fabricant.
9.3 Pipettes monocanal à déplacement d’air (conformément à l’ISO 8655-2)
9.3.1 Généralités
Dans le cas de pipettes électroniques motorisées, l’aspiration et la distribution du liquide d’essai sont
automatiques. Le reste du mode opératoire est réalisé en suivant les étapes décrites en 9.3.2. Il convient
que l’utilisateur consulte le manuel d’utilisation pour connaître les réglages de la vitesse d’aspiration
et de distribution.
NOTE Pour plus d’informations sur ce type de pipettes à piston, se reporter à l’ISO 8655-2:2022, Annexe B.
9.3.2 Cycle d’essai
Réaliser le cycle d’essai comme suit:
a) installer le cône sélectionné sur la pipette à piston;
b) humidifier le cône pour pipette en aspirant la solution d’essai et en l’expulsant dans un bécher
à déchets à cinq reprises pour atteindre une humidité d’équilibre dans le volume mort de la pipette
à piston à déplacement d’air;
c) appuyer sur le piston;
d) en maintenant la pipette en position verticale, immerger le cône dans la solution d’essai à la
profondeur appropriée sous la surface de la solution d’essai (voir le Tableau 2);
Tableau 2 — Profondeurs d’immersion au cours de l’aspiration et temps d’attente
[7, 8]
après aspiration du liquide d’essai
Volume Profondeur d’immersion Temps d’attente
µl mm s
≤ 1 1 à 2 1
> 1 à 100 2 à 3 1
> 100 à 1 000 2 à 4 1
> 1 000 à 20 000 3 à 6 3
e) relâcher lentement le piston s’il est actionné manuellement;
f) patienter pendant la durée recommandée (voir le Tableau 2);
g) retirer le cône avec précaution de la solu
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 8655-7
Deuxième édition
2022-04
Appareils volumétriques à piston —
Partie 7:
Modes opératoires de mesure
alternatifs pour la détermination de
volumes
Piston-operated volumetric apparatus —
Part 7: Alternative measurement procedures for the determination of
volume
Numéro de référence
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publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
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CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii
Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vii
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions . 2
4 Exigences générales . .2
4.1 Confirmation métrologique . 2
4.2 Incertitude de mesure . 2
4.3 Qualification de l’opérateur . 3
5 Exigences de performance .3
5.1 Tolérances de performance . 3
5.2 Impact de l’opérateur . 3
6 Conditions d’essai . 3
6.1 Généralités . 3
6.2 Équipement d’essai . 3
6.3 Laboratoire d’essai et conditions environnementales . 4
6.4 Volumes d’essai. 4
6.4.1 AVAP à volume fixe . 4
6.4.2 AVAP à volume variable . 4
6.5 Nombre de mesurages par volume d’essai . 5
6.6 Liquides d’essai . 5
7 Évaluation . 6
7.1 Volume moyen . 6
7.2 Erreur systématique de mesure . 6
7.3 Erreur de mesurage aléatoire . 6
8 Méthodes d’essais. 7
8.1 Généralités . 7
8.2 Méthode gravimétrique . 7
8.3 Méthode photométrique ratiométrique à deux colorants . 8
8.4 Méthode photométrique à un seul colorant . 8
8.5 Méthode hybride photométrique/gravimétrique pour les AVAP multicanaux . 8
8.6 Méthode par titrage . 8
8.7 Contrôle par lots . . 8
9 Modes opératoires de distribution . 9
9.1 Généralités . 9
9.2 Préparation . 9
9.3 Pipettes monocanal à déplacement d’air (conformément à l’ISO 8655-2) . 9
9.3.1 Généralités . 9
9.3.2 Cycle d’essai . 10
9.4 Pipettes multicanaux (conformément à l’ISO 8655-2) . 11
9.5 Pipettes à déplacement positif (conformément à l’ISO 8655-2) . .12
9.6 Burettes (conformément à l’ISO 8655-3) .12
9.7 Diluteurs (conformément à l’ISO 8655-4) .12
9.7.1 Généralités .12
9.7.2 Cycle d’essai .13
9.8 Distributeurs (conformément à l’ISO 8655-5) . 13
9.9 Seringues (conformément à l’ISO 8655-9) . 14
9.9.1 Généralités . 14
9.9.2 Cycle d’essai . 14
10 Consignation des résultats .14
iii
Annexe A (normative) Mode opératoire gravimétrique .16
Annexe B (normative) Mode opératoire photométrique ratiométrique à deux colorants .21
Annexe C (normative) Mode opératoire photométrique à un seul colorant .29
Annexe D (normative) Mode opératoire hybride photométrique/gravimétrique .34
Annexe E (normative) Mode opératoire titrimétrique.43
Annexe F (normative) Conversion de la masse de liquide en volume .47
Bibliographie .50
iv
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www.iso.org/iso/fr/avant-propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 48, Équipement de laboratoire, en
collaboration avec le comité technique CEN/TC 332, Équipement de laboratoire, du Comité européen de
normalisation (CEN) conformément à l’accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de
Vienne).
La présente deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 8655-7:2005), qui a fait l’objet
d’une révision technique. Elle intègre également le Rectificatif technique ISO 8655-7:2005/Cor.1:2008.
Les principales modifications sont les suivantes:
— une méthode d’essai gravimétrique a été ajoutée (voir 8.2);
— une méthode d’essai hybride photométrique/gravimétrique a été ajoutée (voir 8.5);
— une méthode d’essai par lots a été ajoutée (voir 8.7);
— les modes opératoires de mesure pour toutes les méthodes sont fournis dans les Annexes A à E
normatives;
— les modes opératoires de distribution normalisés pour les AVAP décrits dans l’ISO 8655-2,
l’ISO 8655−3, l’ISO 8655−4, l’ISO 8655−5 et dans l’ISO 8655−9 ont été ajoutés (voir l’Article 9);
— les exigences relatives à la qualification des opérateurs ont été ajoutées (voir 4.3);
— les exigences relatives aux essais d’AVAP multicanaux sont décrites en détail et accompagnées de
modes opératoires spécifiques pour ces appareils (voir 8.5 et l’Annexe D);
— les Annexes A, B et C de la première édition ont été supprimées et remplacées.
v
Une liste de toutes les parties de la série ISO 8655 se trouve sur le site web de l’ISO.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www.iso.org/fr/members.html.
vi
Introduction
La série de normes ISO 8655 répond aux besoins des personnes suivantes:
— fabricants, en servant de base pour le contrôle de la qualité y compris, le cas échéant, la publication
des déclarations du fabricant;
— laboratoires d’étalonnage, laboratoires d’essai, utilisateurs de l’équipement et autres organismes,
en servant de base pour les étalonnages indépendants, les essais, les vérifications et les essais
de routine.
Les essais spécifiés dans la série de normes ISO 8655 sont destinés à être réalisés par du personnel
qualifié.
vii
NORME INTERNATIONALE ISO 8655-7:2022(F)
Appareils volumétriques à piston —
Partie 7:
Modes opératoires de mesure alternatifs pour la
détermination de volumes
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie des modes opératoires de mesure alternatifs pour la détermination
du volume des appareils volumétriques à piston.
Les modes opératoires sont applicables à des systèmes complets comprenant l’appareil de base et toutes
les parties sélectionnées pour être utilisées avec l’appareil, à usage unique ou réutilisables, impliqués
dans le mesurage par procédé de distribution (Ex). Les méthodes décrites dans le présent document
sont adaptées à différents volumes nominaux maximum d’appareils volumétriques à piston. Il en va de
la responsabilité de l’utilisateur de sélectionner la méthode appropriée.
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
ISO 2859-1, Règles d'échantillonnage pour les contrôles par attributs — Partie 1: Procédures
d'échantillonnage pour les contrôles lot par lot, indexés d'après le niveau de qualité acceptable (NQA)
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
ISO 3951-1, Règles d’échantillonnage pour les contrôles par mesures — Partie 1: Spécification pour les plans
d’échantillonnage simples indexés d’après une limite de qualité acceptable (LQA) pour un contrôle lot par lot
pour une caractéristique-qualité unique et une LQA unique
ISO 8655-1, Appareils volumétriques à piston — Partie 1: Définitions, exigences générales et
recommandations pour l’utilisateur
ISO 8655-2, Appareils volumétriques à piston — Partie 2: Pipettes
ISO 8655-3:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 3: Burettes
ISO 8655-4:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 4: Diluteurs
ISO 8655-5:2022, Appareils volumétriques à piston — Partie 5: Distributeurs
ISO 8655-6, Appareils volumétriques à piston — Partie 6: Mode opératoire de mesure gravimétrique de
référence pour la détermination de volumes
ISO 8655-8, Appareils volumétriques à piston — Partie 8: Mode opératoire de mesure photométrique de
référence pour la détermination de volumes
ISO 8655-9, Appareils volumétriques à piston — Partie 9: Seringues de laboratoire haute précision pour
utilisation manuelle
Guide ISO/IEC 2, Normalisation et activités connexes — Vocabulaire général
Guide ISO/IEC 99, Vocabulaire international de métrologie — Concepts fondamentaux et généraux et
termes associés (VIM)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l’ISO 8655-1, le
Guide ISO/IEC 2, l’ISO/IEC Guide 99 ainsi que les suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/
3.1
niveau de qualité acceptable
NQA
<échantillonnage acceptable> plus faible niveau de qualité tolérable
Note 1 à l'article: Ce concept s’applique uniquement en cas d’utilisation d’un plan d’échantillonnage contenant des
règles de permutation et d’interruption, comme dans l’ISO 2859-1, l’ISO 3951-1 ou dans l’ISO 3951-5.
Note 2 à l'article: Bien que la probabilité soit relativement élevée que des lots individuels ayant un niveau
de qualité acceptable puissent être acceptés, la désignation d’un niveau de qualité acceptable ne saurait laisser
entendre qu’il s’agit d’un niveau de qualité souhaitable. Les plans d’échantillonnage fournis dans des Normes
internationales, telles que l’ISO 2859-1, l’ISO 3951-1 ou l’ISO 3951-5, qui énoncent des règles de permutation
et d’interruption du contrôle de l’échantillonnage, sont conçus pour encourager les fournisseurs à maintenir une
qualité moyenne de procédé supérieure au NQA.
4 Exigences générales
4.1 Confirmation métrologique
La confirmation métrologique de tous les AVAP doit être réalisée régulièrement afin de s’assurer que
l’appareil satisfait aux exigences relatives à son usage prévu. Les exigences des méthodes et des modes
opératoires décrits dans le présent document sont adaptées à la confirmation métrologique des AVAP.
Dans le cadre de la confirmation métrologique, au moins dix mesurages répétés par volume sélectionné
doivent être réalisés et les modes opératoires de mesure du présent document doivent être validés par
comparaison à l’un des modes opératoires de mesure de référence décrits dans l’ISO 8655-6 ou dans
l’ISO 8655-8.
4.2 Incertitude de mesure
Lors des étalonnages (ISO 8655-1:2022, 6.4) conformément aux modes opératoires de mesure décrits
dans le présent document, l’incertitude de mesure élargie du volume distribué moyen pour chaque
volume sélectionné doit être estimée et consignée dans le rapport [voir l’Article 10 (m)].
Lors des essais (ISO 8655-1:2022, 6.4) ou des essais de routine (ISO 8655-1:2022, 6.5), l’estimation et la
consignation dans le rapport de l’incertitude de mesure élargie sont facultatives.
NOTE Pour plus d’informations relatives à l’incertitude des méthodes photométriques et gravimétriques,
[1] [2]
voir l’ISO/TR 16153 et l’ISO/TR 20461 respectivement.
4.3 Qualification de l’opérateur
Tout opérateur qui utilise un AVAP dans le cadre de transferts de volumes, procède à une confirmation
métrologique ou soumet l’AVAP à des essais de routine doit être correctement formé à l’utilisation
du type d’AVAP soumis à essai. Il convient de documenter la formation et les compétences des
opérateurs.
NOTE 1 Des AVAP étalonnés précédemment peuvent être utilisés à des fins de qualification des opérateurs.
NOTE 2 Des exigences de formation et de qualification des opérateurs d’AVAP sont destinées à être incluses
à l’ISO 8655-10.
5 Exigences de performance
5.1 Tolérances de performance
Les résultats de l’étalonnage et de l’essai de routine peuvent être consignés sans être comparés aux
tolérances de performance. Si les résultats sont vérifiés par rapport aux tolérances de performance,
ces tolérances doivent être indiquées dans le rapport d’essai/certificat.
Les tolérances de performance peuvent être fondées sur les tolérances du procédé de manipulation de
liquides de l’utilisateur ou sur les tolérances indiquées dans la partie de l’ISO 8655 correspondant au
type d’AVAP soumis à essai ou sur les tolérances spécifiées par le fabricant, sous réserve qu’elles soient
adaptées à l’usage prévu.
5.2 Impact de l’opérateur
Le mesurage des performances volumétriques inclut les erreurs systématiques et aléatoires de l’AVAP,
ainsi que les erreurs introduites par l’opérateur de l’appareil. Les performances d’une pipette manuelle
sont indissociables des performances de son opérateur.
NOTE L’ISO 8655-10 fournit de plus amples informations concernant l’influence de l’opérateur.
6 Conditions d’essai
6.1 Généralités
L’adéquation au mode opératoire ou à la méthode d’essai sélectionnée des conditions d’essai décrites
dans le présent article doit être validée. Les conditions d’essai, ainsi que l’équipement d’essai et le mode
opératoire d’essai détaillé influent sur l’incertitude de mesure. Des exemples de calcul de l’incertitude
élargie du volume moyen et de l’incertitude lors de l’utilisation d’un seul volume distribué sont fournis
[1] [2]
dans l’ISO/TR 16153 et dans l’ISO/TR 20461 .
6.2 Équipement d’essai
L’ensemble de l’équipement utilisé dans le cadre des essais des AVAP, y compris lors de la préparation
des solutions d’essai, doit être choisi de sorte à pouvoir obtenir l’incertitude de mesure requise.
L’ensemble de l’équipement d’essai utilisé doit présenter une précision d’affichage, une exactitude,
une reproductibilité et une stabilité adaptées, en accord avec l’incertitude de mesure élargie requise.
Tout écart par rapport à l’équipement d’essai indiqué dans le présent document doit être pris en compte
lors du calcul de l’incertitude élargie et il doit être prouvé que l’équipement d’essai sélectionné donne
des résultats de mesure adaptés à l’usage prévu.
6.3 Laboratoire d’essai et conditions environnementales
Les conditions suivantes s’appliquent:
a) il convient de maintenir le laboratoire d’essai à une température constante tout au long de la durée
d’équilibrage de l’équipement d’essai et de l’AVAP (±1 °C) et tout au long de la durée de l’essai de
l’AVAP (±0,5 °C). L’équipement d’essai, l’AVAP, les pièces interchangeables (cônes pour pipettes,
par exemple), ainsi que les réactifs utilisés doivent tous être amenés à la température du laboratoire
d’essai;
b) la température de l’air, l’humidité relative et la pression barométrique au moment de l’essai doivent
être enregistrées. Au début et à la fin de n mesurages répétés, la température du liquide d’essai doit
être enregistrée;
NOTE 1 La température de l’air et la pression barométrique sont nécessaires pour la conversion de la
masse de liquide en volume (voir l’Annexe F), tandis que l’humidité relative est nécessaire pour la stabilité
des conditions de la pièce et pour la documentation dans le rapport d’essai.
c) afin de faciliter l’évaluation de l’adéquation à l’usage prévu d’un AVAP, il convient que les conditions
du laboratoire d’essai (température, humidité relative et pression barométrique) reflètent les
conditions environnementales dans lesquelles l’AVAP est utilisé en respectant les contraintes
mentionnées en a). Il est possible d’y parvenir lorsqu’un AVAP est soumis à essai dans le laboratoire
où il est utilisé. D’autres facteurs environnementaux et non environnementaux peuvent influencer
l’adéquation à l’usage prévu d’un AVAP;
d) il convient que l’environnement d’essai ne soit pas exposé aux courants d’air;
e) avant de procéder à l’essai, l’appareil à soumettre à essai, l’ensemble de l’équipement d’essai et les
solutions d’essai doivent être maintenus dans les conditions du laboratoire d’essai pendant une
durée suffisante pour atteindre l’équilibre avec les conditions du laboratoire d’essai;
f) les conditions environnementales, la température et l’humidité de l’air doivent se situer dans
les limites spécifiées pour le laboratoire d’essai pendant au moins 2 h avant le début de l’essai
(temps d’équilibrage minimum) et pendant l’essai lui-même.
NOTE 2 Il est peu probable que ce temps d’équilibrage minimum soit inférieur à 2 h ou qu’il puisse être
considérablement plus long.
NOTE 3 Les laboratoires d’étalonnage dans les centres d’essai ou les laboratoires de contrôle qualité
du fabricant de pipettes peuvent souvent contrôler les conditions environnementales avec précision pour
atteindre les conditions normalisées souhaitées. Il peut être très difficile de reproduire ces résultats dans
d’autres conditions environnementales.
6.4 Volumes d’essai
6.4.1 AVAP à volume fixe
Dans le cas d’un AVAP à volume fixe, le volume sélectionné V est le volume nominal V et est le seul
S Nom
volume d’essai.
6.4.2 AVAP à volume variable
a) Dans le cadre des étalonnages et des essais, les AVAP à volume variable doivent être soumis à essai
à trois volumes différents au minimum:
— au volume nominal.
— à 50 % du volume nominal ou à la valeur s’en rapprochant le plus (en cas de valeurs équidistantes,
utiliser la valeur supérieure).
— à la limite inférieure de la plage de volume utile ou à 10 % du volume nominal (la valeur la plus
élevée étant retenue).
Le mesurage d’autres volumes est facultatif.
b) Pour les essais de routine, moins de trois volumes peuvent être soumis à essai.
S’il est décidé de soumettre l’AVAP à essai à deux volumes uniquement, le volume nominal et la limite
inférieure de la plage de volume ou le volume correspondant à 10 % du volume nominal (la valeur la
plus élevée étant retenue) doivent être utilisés.
NOTE La linéarité des volumes distribués entre ces deux points d’essai est inconnue, ce qui est susceptible
d’accroître le risque d’erreurs volumétriques par rapport à un essai à trois volumes.
Si l’AVAP est soumis à essai à un seul volume, il doit être soumis à essai à son volume nominal ou au
volume auquel il est destiné à être utilisé.
6.5 Nombre de mesurages par volume d’essai
La confiance accordée à la confirmation métrologique augmente avec le nombre de répétitions de
mesurages pour chaque volume d’essai. Les modes opératoires de mesure de référence spécifiés dans
l’ISO 8655-6 et dans l’ISO 8655-8 requièrent d’effectuer au moins 10 mesurages par volume. Pour les
tests de routine recommandent d’utiliser 10 mesurages, mais un nombre inférieur de répétitions peut
être accepté si l’incertitude élargie de l’AVAP est adaptée à l’usage prévu. Le nombre de répétitions ne
doit pas être inférieur à 4.
Après réparation ou ajustage de l’AVAP, au moins 10 mesurages doivent être effectués.
Les répétitions de mesurages de volumes doivent être utilisées pour calculer l’erreur systématique
et l’erreur aléatoire du mesurage conformément à l’Article 8. Le cas échéant, l’incertitude consignée
dans le rapport doit être fondée sur le nombre de répétitions.
6.6 Liquides d’essai
Les AVAP sont généralement fournis avec des ajustages effectués à l’aide d’eau. Les étalonnages ou les
essais de routine peuvent être réalisés au moyen d’autres liquides ou solutions. Pour les besoins du
présent document, le terme «liquide d’essai» est utilisé pour désigner des solvants purs, ainsi qu’une
solution de chromophore préparée ou d’autres solutions. Le liquide d’essai utilisé doit être décrit de
manière suffisamment détaillée pour permettre la reproduction de l’essai et l’interprétation des
résultats.
Les caractéristiques suivantes du liquide d’essai doivent être prises en compte lors de la détermination
du volume mesuré: le facteur Z lors du pesage, les absorbances des chromophores en cas de recours à des
méthodes photométriques, ainsi que la conductivité et la réactivité lors du titrage potentiométrique.
En fonction du type d’AVAP, les paramètres suivants peuvent influencer la quantité de liquide aspiré et/
ou distribué: la viscosité, la masse volumique, la composition chimique et la tension de surface.
La stabilité de chaque liquide d’essai doit être connue s’il est destiné à être conservé pour une durée
indéterminée. Se reporter au mode opératoire spécifique pour la préparation et le stockage des
solutions de réactifs.
Le liquide d’essai utilisé doit être consigné. L’influence du liquide d’essai sur l’incertitude de mesure
élargie doit être prise en compte lors des étalonnages.
7 Évaluation
7.1 Volume moyen
Additionner les n volumes d’essai distribués V (i) (où i = 1 à n) et diviser la somme par n pour obtenir
T
le volume moyen V distribué à la température d’essai, comme illustré à la Formule (1). Cette valeur
peut être exprimée en microlitres ou en millilitres:
n
V= Vi() (1)
∑
T
n
i=1
où
est le volume moyen;
V
n est le nombre de répétitions de distributions du volume d’essai;
V (i) est le volume de liquide d’essai distribué pour chaque répétition, i = 1 à n.
T
7.2 Erreur systématique de mesure
Calculer l’erreur systématique de mesure e des appareils volumétriques à piston à l’aide de la
S
Formule (2):
eV=−V (2)
ss
où
e est l’erreur systématique absolue de mesure, exprimée en unités de volume;
S
V est le volume d’essai sélectionné de l’AVAP soumis à essai.
S
Cette erreur systématique de mesure peut être exprimée en pourcentage à l’aide de la Formule (3):
()VV−
S
η = ×100 % (3)
S
V
S
où η est l’erreur systématique relative de mesure, exprimée en pourcentage.
S
Dans le cas d’un AVAP à volume fixe, le volume d’essai sélectionné V correspond au volume nominal.
S
L’erreur systématique de mesure dans la série de normes ISO 8655 s’appuie sur la convention historique
au sein du secteur du pipetage et utilise le signe inverse par rapport à la définition décrite dans
l’ISO guide 99:2007, 2.17. Pour plus d’informations, voir l’ISO 8655-1:2022, 6.2.
7.3 Erreur de mesurage aléatoire
Calculer l’erreur aléatoire de l’AVAP comme l’écart-type de répétabilité s à l’aide de la Formule (4):
r
n
((Vi))−V
∑
T
i=1
s = (4)
r
n−1
où s est l’écart-type, exprimé en unités de volume.
r
Cette erreur aléatoire peut aussi être exprimée en pourcentage grâce au coefficient de variation, C ,
V
à l’aide de la Formule (5).
s
r
C =×100 % (5)
V
V
où C est le coefficient de variation, exprimé en pourcentage.
V
8 Méthodes d’essais
8.1 Généralités
Le présent document décrit cinq méthodes d’essai, ainsi que les modes opératoires d’essai
correspondants: la gravimétrie, la photométrie ratiométrique à deux colorants, la photométrie à un
seul colorant, une méthode hybride associant la photométrie et la gravimétrie, et le titrage.
Le choix des liquides d’essai et des récipients collecteurs dépend de la méthode sélectionnée. Les modes
opératoires d’essai correspondant aux méthodes d’essai sélectionnées sont décrits dans l’Annexe A à
l’Annexe E respectivement, et doivent être respectés pour préparer les liquides d’essai. Les récipients
accueillant les liquides d’essai doivent être conformes à ceux spécifiés dans le mode opératoire d’essai
correspondant.
Les produits chimiques utilisés lors de la préparation des liquides d’essai, ainsi que leur numéro
d’enregistrement auprès du CAS sont répertoriés dans le Tableau 1.
Tableau 1 — Numéros d’enregistrement CAS
Produit chimique N° CAS
chlorure de cuivre(II) dihydraté 10125–13–0
hydrogénophosphate de disodium dihydraté 10028–24–7
acide chlorhydrique 7647–01–0
acide nitrique 7697–37–2
4-nitrophénol 100–02–7
Orange G 1936–15–8
Ponceau S 6226–79–5
chlorure de potassium 7447–40–7
hydrogénophtalate de potassium 877–24–7
nitrate de potassium 7757–79–1
nitrate d’argent 7761–88–8
chlorure de sodium 7647–14–5
hydroxyde de sodium 1310–73–2
acide sulfurique 7664–93–9
Tartrazine 1934–21–0
acide éthylènediaminetétraacétique tétrasodique dihydraté 10378–23–1
eau 7732–18–5
8.2 Méthode gravimétrique
Cette méthode consiste à mesurer la masse du volume d’essai distribué à l’aide d’une balance. Elle peut
être utilisée pour évaluer les performances volumétriques d’un AVAP pour de multiples liquides d’essai,
sous réserve que la masse volumique du liquide d’essai en question soit connue.
Le mode opératoire gravimétrique est décrit à l’Annexe A.
Cette méthode peut être adaptée en vue de l’utilisation de balances compatibles avec les AVAP
multicanaux, qui permettent la distribution simultanée de liquide d’essai à l’aide de l’AVAP multicanaux.
La section A.2 s’applique en cas d’écart par rapport aux exigences spécifiées dans le mode opératoire de
mesure gravimétrique de référence spécifié dans l’ISO 8655-6.
8.3 Méthode photométrique ratiométrique à deux colorants
Cette méthode utilise deux solutions de chromophore: la solution d’essai contenant du Ponceau S est
distribuée dans une solution de chlorure de cuivre(II), et le degré de dilution des deux chromophores
est calculé à partir des mesurages photométriques à 520 nm et à 730 nm.
Le mode opératoire photométrique ratiométrique décrit à l’Annexe B convient pour des volumes d’essai
compris entre 0,1 µl et 5 000 µl.
Cette méthode peut être adaptée pour soumettre à essai des AVAP multicanaux en distribuant les
solutions de chromophore à partir de tous les canaux simultanément dans des microplaques de 96 puits
ou de 384 puits (voir la Référence [3] Article 5.2.1 et Annexe B).
La section B.2 s’applique en cas d’écart par rapport aux exigences spécifiées dans le mode opératoire
de mesure photométrique de référence spécifié dans l’ISO 8655-8.
8.4 Méthode photométrique à un seul colorant
Dans le cadre de cette méthode, la dilution d’une solution de chromophore (solution d’essai) est calculée
à partir de l’absorbance mesurée de la solution d’essai distribuée. Les chromophores suivants peuvent
être utilisés pour cette méthode: Ponceau S, Orange G, tartrazine et 4-nitrophénol.
Le mode opératoire photométrique décrit à l’Annexe C s’appuie sur l’utilisation de Ponceau S comme
chromophore et convient pour des volumes d’essai compris entre 2 µl et 200 µl.
8.5 Méthode hybride photométrique/gravimétrique pour les AVAP multicanaux
Cette méthode permet d’évaluer les performances volumétriques des AVAP multicanaux en associant
un mesurage gravimétrique et un mesurage photométrique. Du liquide d’essai contenant soit de la
tartrazine, de l’Orange G ou du 4-nitrophénol comme chromophore est distribué par tous les canaux
simultanément dans des microplaques de 96 puits ou de 384 puits.
Le mode opératoire décrit à l’Annexe D convient, en général, pour des volumes d’essai compris entre
1 µl et 100 µl dans le cas de plaques de 96 puits et entre 1 µl et 50 µl pour les plaques de 384 puits.
8.6 Méthode par titrage
Cette méthode est adaptée à des volumes d’essai supérieurs à 500 µl et utilise une solution de chlorure
de sodium (NaCl) comme liquide d’essai, qui est titré avec une solution de nitrate d’argent (AgNO ).
Le point d’équivalence est déterminé par détection potentiométrique, par exemple avec une électrode
d’argent.
Le mode opératoire de titrage potentiométrique est décrit à l’Annexe E.
8.7 Contrôle par lots
Des approches statistiques fondées sur des essais aléatoires et un contrôle d’échantillons peuvent être
utilisées pour faciliter le contrôle par lots des AVAP dès lors que toutes les dispositions du présent
paragraphe sont respectées. Les utilisateurs de cette analyse doivent garder un contrôle total sur tous
les composants déterminant le volume de l’AVAP, y compris les tolérances et le processus d’assemblage.
La production de ces éléments doit être au stade de la production en série.
L’historique intégral de production et de performance d’un lot complet d’AVAP issus d’une gamme de
produits présentant des caractéristiques volumétriques identiques (même volume nominal, même
appareil à volume fixe ou variable, nombre de canaux identique, par exemple) doit être conservé.
De plus, l’homogénéité des performances de l’AVAP doit être assurée au sein des limites de performance
spécifiques. Les performances des éléments de détermination du volume doivent être déterminées
par le biais de mesurages réalisés conformément à l’un des modes opératoires de mesure de référence
[4]
spécifiés dans l’ISO 8655-6 ou dans l’ISO 8655-8 dans un laboratoire compétent en la matière .
Les AVAP soumis à un contrôle par lots conformément au présent document doivent être fabriqués
[5]
par une organisation pourvue d’un système de management de la qualité reconnu, comme ISO 9001
[6]
ou ISO 13485 . Le plan d’échantillonnage pour cette méthode doit respecter l’ISO 2859-1 ou l’ISO 3951-1
et prévoir un niveau de qualité acceptable (NQA) approprié.
Les détails du plan d’échantillonnage sélectionné et le NQA, y compris une référence à la norme ISO
correspondante, doivent être consignés dans le rapport.
9 Modes opératoires de distribution
9.1 Généralités
Le liquide d’essai doit être distribué dans le récipient collecteur selon les modes opératoires spécifiques
décrits de 9.2 à 9.9, à moins que les instructions du fabricant de l’AVAP ne spécifient un autre mode
opératoire de distribution, auquel cas ce mode opératoire (instructions du fabricant) peut être utilisé.
En cas d’utilisation des instructions du fabricant, ce mode opératoire doit être documenté dans le
rapport d’essai de manière suffisamment détaillée pour pouvoir reproduire l’essai.
9.2 Préparation
Préparer l’équipement d’essai, le liquide d’essai et le récipient destiné à recevoir le liquide d’essai
conformément au mode opératoire sélectionné.
Laisser l’AVAP soumis à essai, l’équipement d’essai, les pièces interchangeables et les liquides d’essai
atteindre l’équilibre thermique.
Si un AVAP à volume variable est utilisé, sélectionner le volume d’essai; ce réglage ne doit pas être
modifié au cours du cycle d’essai de tous les mesurages répliqués.
Dans le cadre d’essais impliquant une burette, un diluteur ou un distributeur, placer l’AVAP à l’essai,
avec son réservoir déjà rempli de liquide d’essai, de manière à pouvoir distribuer le liquide d’essai
directement dans le récipient collecteur. Amorcer l’AVAP soumis à essai conformément aux instructions
du fabricant afin d’éliminer toute bulle d’air à l’intérieur des tubes et des vannes. Régler la vitesse de
distribution conformément aux instructions du fabricant. Il peut être nécessaire de jeter les premières
gouttes de liquide avant de commencer l’étalonnage si cela est indiqué par le fabricant.
9.3 Pipettes monocanal à déplacement d’air (conformément à l’ISO 8655-2)
9.3.1 Généralités
Dans le cas de pipettes électroniques motorisées, l’aspiration et la distribution du liquide d’essai sont
automatiques. Le reste du mode opératoire est réalisé en suivant les étapes décrites en 9.3.2. Il convient
que l’utilisateur consulte le manuel d’utilisation pour connaître les réglages de la vitesse d’aspiration
et de distribution.
NOTE Pour plus d’informations sur ce type de pipettes à piston, se reporter à l’ISO 8655-2:2022, Annexe B.
9.3.2 Cycle d’essai
Réaliser le cycle d’essai comme suit:
a) installer le cône sélectionné sur la pipette à piston;
b) humidifier le cône pour pipette en aspirant la solution d’essai et en l’expulsant dans un bécher
à déchets à cinq reprises pour atteindre une humidité d’équilibre dans le volume mort de la pipette
à piston à déplacement d’air;
c) appuyer sur le piston;
d) en maintenant la pipette en position verticale, immerger le cône dans la solution d’essai à la
profondeur appropriée sous la surface de la solution d’essai (voir le Tableau 2);
Tableau 2 — Profondeurs d’immersion au cours de l’aspiration et temps d’attente
[7, 8]
après aspiration du liquide d’essai
Volume Profondeur d’immersion Temps d’attente
µl mm s
≤ 1 1 à 2 1
> 1 à 100 2 à 3 1
> 100 à 1 000 2 à 4 1
> 1 000 à 20 000 3 à 6 3
e) relâcher lentement le piston s’il est actionné manuellement;
f) patienter pendant la durée recommandée (voir le Tableau 2);
g) retirer le cône avec précaution de la solution d’essai en le maintenant à la verticale;
h) essuyer le cône à l’intérieur du récipient collecteur à un angle d’environ 30° à 45°;
i) appuyer sur le piston et distribuer le contenu de la pipette dans le récipient collecteur;
j) le cas échéant, utiliser la purge de la pipette à piston (deuxième butée, en fonction du type de
pipette) pour expulser la dernière goutte de liquide;
k) essuyer le cône le long de la paroi interne du récipient collecteur sur environ 8 mm à 10 mm pour
éliminer les gouttelettes au niveau ou autour de l’orifice du cône;
l) retirer le cône du récipient collecteur;
m) relâcher le piston;
n) fermer le couvercle du récipient collecteur, le cas échéant;
o) suivre le mode opératoire de mesure sélectionné pour mesurer le volume de solution d’essai
...