ISO 9233:1991
(Main)Cheese and cheese rind — Determination of natamycin content — Method by molecular absorption spectrometry and by high-performance liquid chromatography
Cheese and cheese rind — Determination of natamycin content — Method by molecular absorption spectrometry and by high-performance liquid chromatography
Specifies a method which is suitable to control a maximum tolerance of natamycin on the cheese rind at a content of 1 mg/dm^2. The limit of detection is 0,5 mg/kg. Describes reagents, apparatus, sampling, and test procedure. Annex A is for information only.
Fromage et croûtes de fromage — Détermination de la teneur en natamycine — Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire et par chromatographie liquide à haute performance
La présente Norme internationale prescrit une méthode de détermination de la teneur en natamycine de la croûte de fromage et du fromage situé à proximité de la croûte. La limite de détection est de 0,5 mg/kg. Cette méthode est adaptée à la vérification d'une tolérance maximale en natamycine dans la croûte de fromage, à une teneur de 1 mg/dm2 1). Cette méthode convient également à la détection de la migration de la natamycine vers l'intérieur du fromage.
General Information
Relations
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Standards Content (Sample)
ISO
INTERNATIONAL
STANDARD 9233
First edition
199 1-09-0 1
-7- -_-_--_.___- -- .-.---PP
Cheese and cheese rind - Determination of
natamycin content - Method by molecular
absorption spectrometry and by
high-performance liquid chromatography
Fromage et crotites de fromage - LXtermination de la teneur en
natamycine - Methode par spectrometrie d’absorpfion mokulaire et
par Chromatographie liquide A haute Performance
Reference number
ISO 9233:1991(E)
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ISO 9233:1991 (E)
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the
work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an Inter-
national Standard requires approval by at least 75 % of the member
bodies casting a vote.
International Standard ISO 9233 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 5, Milk and
milk products, in collaboration with the International Dairy Federation
(IDF) and the Association of Official Analytical Chemists (AOAC) and will
also be published by these organizations.
Annex A of this International Standard is for in form ation only.
0 ISO 1991
All rights reserved. No part of this publication may be reproduced or utilized in any form
or by any means, electronie or mechanical, including photocopying and microfilm, without
Permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 9233:1991(E)
Cheese and cheese rind - Determination of natamycin
content - Method by molecular absorption spectrometry and
by high-performance liquid chromatography
The natamycin content of cheese is expressed in
1 Scope
milligrams per kilogram. The natamycin content of
cheese rind is expressed in milligrams per Square
This International Standard specifies a method for
decimetre.
determining the natamycin content of cheese rind
and of the cheese adjacent to the rind.
3.2 cheese rind: Outer layer of 5 mm thickness of
the cheese, includinq the cheese coating layer, if
The limit of detection is 0,5 mg/kg. .
present.
The method is suitable to control a maximum toler-
ante of natamycin on the cheese rind at a content
of 1 mg/dmW
4 Principle
The method is also suitable to detect migration of
Extraction of a known quantity of Sample with
natamycin into the cheese.
methanol. Dilution of the extract with water followed
by cooling to between - 15 “C and - 20 OC, to pre-
cipitate most of the fat, and filtration.
2 Normative reference
Determination of the natamycin content in the filtrate
The following Standard contains provisions which,
if necessary) by a spectro-
(after concentration,
through reference in this text, constitute provisions
metric or high-performance liquid chromatographic
of this International Standard. At the time of publi-
(HPLC) method.
cation, the edition indicated was valid. All Standards
are subject to revision, and Parties to agreements
5 Reagents and reference substances
based on this International Standard are encour-
aged to investigate the possibility of applying the
All reagents used shall be of recognized analytical
most recent edition of the Standard indicated below.
grade. The water used shall be distilled or deionized
Members of IEC and ISO maintain registers of cur-
water.
rently valid International Standards.
ISO 707:1985, Milk and milk products - Methods of
5.1 Methanol.
sampling.
5.2 Methanol, aqueous Solution.
3 Definitions Mix 2 volumes of methanol with 1 volume of water.
For the purposes of this International Standard, the
5.3 Natamycin, Standard Solution corresponding to
following definitions apply.
5 mg of natamycin per litre.
3.1 natamycin content of cheese or cheese rind: lmmediately before use, dissolve in a 100 ml
volumetric flask a quantity of a natamycin prep-
The content of natamycin determined by the method
aration, of known natamycin content, corresponding
specified in this International Standard.
1) This content corresponds to a draft EEC limit for natamycin on cheese rind.
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ISO 9233:1991(E)
6.4 Warp knife, for cutting slices of cheese into
to 50 mg of pure natamycin in the methanol (5.1) and
small pieces.
make up to the mark-
In a 50 ml volumetric flask, dilute 5,0 ml of this sol-
6.5 Magnetit stirrer or shaking machine.
ution to 50 ml with the aqueous methanol (5.2).
In another 50 ml volumetric flask, dilute 5,0 ml of this
6.6 Conical flasks, of 100 ml and 200 ml capacity,
diluted Solution to 50 ml with the aqueous methanol
made of coloured glass and fitted with ground glass
(5.2). Stoppers.
1 ml of this Standard Solution contains 5 y_g of
6.7 Syringes, disposable, of 10 ml capacity.
natamycin. lt is necessary that the concentration of
this final Standard Solution be close to that of the
6.8 Membrane microfilters, of 0,20 pm and 0,45 prn
test Solution as measured in 9.3.1.2. Adjust the final
pore size, resistant to attack by alcoholic solutions.
dilution, if required.
6.9 Folded filter Papers 2), fast Speed, of 15 cm di-
5.4 Acetic acid, glacial.
ameter.
6 Apparatus
6.10 Funnel, approximately 7 cm in diameter.
Usual laboratory apparatus and, in particular, the
following.
6.11 Freezer, operating in the temperature range
- 15 OC to - 20 “C.
Slicer, or similar apparatus, for cutting portions
6.1
of cheese rind 5 mm thick and about 3 cm wide (see
6.12 Extraction cartridges type C$), to concentrate
figure 1 for an example).
the filtered extract, if necessary.
6.2 Fine-slicer, for cutting thin slices of cheese of
6.13 Spectrometer, suitable for recording an ultra-
maximum thickness 1 mm (see figure2 for an ex-
violet (UV) spectrum between 300 nm and 340 nm,
ample).
equipped with cells of 1 cm optical path length and
a recorder.
6.3 Grinder or blender.
6.14 Liquid chromatograph, with UV detector capa-
ble of measuring at 303 nm and equipped with a re-
corder and/or integrator.
6.15 Analytical column, of 150 mm length and
4,6 mm internal diameter-, type Cg4), having a particle
size of 5 Pm.
Knife
Figure 2 - Example of a fine-slicer for cutting
Figure 1 - Example of a slicer for cutting portions
of cheese rind 5 mm thick slices of cheese of maximum thickness 1 mm
2) S and S, No. 595 112, at-e examples of suitable products available commercially. This information is given for the con-
venience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of these products.
and Waters No. 51910 are examples of suitable products available commercially. This information is given
3) Sep-pack Cl8
for the convenience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of these prod-
ucts.
4) Lichrosorb RP 8 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the con-
venience of users of this International Standard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
2
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ISO 9233:1991(E)
6.16 Guard column, of 100 mm length and 2,l mm
9 Procedure
internal diameter, type Cg5), having a particle size
of 30 Pm to 40 Pm.
9.1 Test Portion
In the case of cheese rind, weigh, to the nearest
10 mg, about 10 g of the test Sample (8.1) into a
7 Sampling
200 ml conical flask (6.6).
Sampling shall have been carried out in accordance
In the case of cheese, weigh, to the nearest 10 mg,
with ISO 707.
about 5 g of the test Sample (8.2) into a 100 ml coni-
cal flask (6.6).
A whole cheese, or a Segment of a cheese rep-
resentative of the whole, shall be available to the
9.2 Preparation of the test solution
laboratory.
In the case of cheese rind, add 100 ml of the
methanol (5.1) to the test Portion and, in the case of
cheese, add 50 ml of the methanol (5.1) to the test
8 Preparation of the test Sample
Portion from a measuring cylinder. Stir the contents
of the conical flask for 90 min using a magnetic
stirrer (6.5), or Shake for 90 min in a shaking ma-
8.1 Cheese rind
chine (6.5).
If necessary, tut the Iaboratory Sample into small
In the case of cheese rind, add 50 ml of water and,
sections or portions so that the width of the cheese
in the case of cheese, add 25 ml of water from a
rind is not more than about 3 cm. Remove the whole
measuring cylinder.
rind, to a thickness of 5 mm, from all the sections
or portions thus obtained using the slicer (6.1).
Immediately place the conical flask in the freezer
(6.11) and allow it to stand for about 60 min.
From the rind obtained, tut a rectangular piece (be-
tween 20 cm* and 40 cm*) and determine its surface Filter the cold extract through a folded filter Paper
area, in Square centimetres. Determine its mass, in (6.9), discardinq the first 5 ml of the filtrate.
c
grams.
NOTE 1 The filtration has to be carried out while the
Grind carefully the whole rind, including the weighed Suspension is still cold, to avoid dissolution of the fat and
consequently turbid filtrates.
and measured piece, and mix thoroughly. Transfer
immediately to a Sample jar a quantity of the Sample
Bring the filtrate to room temperature.
thus prepared.
Take a Portion of the filtrate in a Syringe (6.7) and
After preparing each Sample, clean all tools which
filter through a microfilter of 0,45 vrn pore size and
have been in contact with the cheese or cheese rind,
then through a microfilter of 0,20 prn pore size (6.8).
first with hot water and then with methanol, and dry
thoroughly, for instance using a stream of com-
The minimum amount of filtrate required is 3 ml for
pressed air.
direct spectrometric measurement (9.3.1), 20 111 per
injection for direct chromatographic measurement
(9.3.2), and 25 ml and 50 ml for 5 times and 10 times
8.2 Interior of cheese
concentration respectively (9.3.3).
After removing the rind as described in 8.1, remove Proceed in accordance with 9.3.1, 9.3.2 or 9.3.3 as
a Slice of 1 mm maximum thickness from the whole appropriate.
of the outer section of the cheese using the fine-
slicer (6.2).
9.3 Determlnatlon
Cut all the slices of cheese into small pieces about
9,3,1 Spectrometric measurement
0,5 cm* and mix thoroughly. Transfer immediately to
a Sample jar a quantity of the Sample thus prepared.
9.3.1 .l Natamycin Standard solution
After preparing each Sample, clean all tools which
have been in contact with the cheese, first with hot Record the spectrum of the natamycin Standard sol-
water and then with methanol, and dry thoroughly, ution (5.3) in the range from 300 nm to 340 nm.
for instance using a stream of compressed air. Measure the absorbance at the maximum of about
commercially. This information
Perisorb RP 8 is an example of a suitable product available is given for the convenience
5)
ternational Stand ard and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
of users of this In
3
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ISO 9233:1991 (E)
317 nm, at the minimum of about 311 nm and at For examples of spectra of test solutions, see
329 nm exactly. Use the aqueous methanol (5.2) as
figure 4.
a blank.
NOTE 2 The presence of spices, particularly pepper, in
the cheese tan interfere Gth the resuit. This will he ob-
For an example of the spectrum of a Standard sol-
vious by distortion of the absor-bance graph, as shown in
ution, see figure 3.
figure 4.
As natamyci n is u nstable in aqueo us m ethanol,
carry out the measu rement as rapidly as po ssible.
The exact Position of the maximum at 317 nm and
the minimum at 311 nm may be slightly shifted, ow-
ing to variations in the calibration of the apparatus.
Always use the actual maximum and minimum val-
ues.
9.3.1.2 Test solution
Record the spectrum of the test Solution (9.2) in the
range 300 nm to 340 nm. Measure the absorbance
at the maximum of about 317 nm, at the minimum
of about 311 nm, and at 329 nm exactly. Use the
aqueous methanol (5.2) as a blank.
If the natamycin content of the Sample is so low that
detection is impossible or almost impossible
(signal-to-noise ratio less than 3) but determination
is nevertheless still required, proceed in accordance
with 9.3.3.
Standard Solution
t
06
,
03
l
329 350
Wavelength, nm
A Cheese rind, natamycin content 61 mg/kg
01
I
B Cheese rind, natamycin content 15 mg/kg
C Cheese, natamycin content 1,7 mg/kg
D Cheese, natamycin content 0,3 mg/kg
329 350
250
E Cheese, as C, af
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1991-09-01
:
.
Fromage et croûtes de fromage -
Détermination de la teneur en natamyciné -
Méthode par spedrométrie d’absorption
moléculaire et par chromatographie liquide à
haute performance
Cheese and cheese rind - Defermination of natamycin content --
Method by molecular absorption spectrometry and by high-performance
liquid chroma tography
-I----1_-------
---
Numéro de référence
ISO 9233:1991(F)
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ISO 9233:199j (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 b/a au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 9233 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produifs agricoles alimenfaires, sous-comité SC 5, Lait
ef produits laifiers, en collaboration avec la Fédération internationale
de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques officiels
(AOAC) et sera également publiée par ces organismes.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
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NORME INTERNATIONALE ISO 9233:1991 (F)
- Détermination de la teneur
Fromage et croûtes de fromage
en natamycine - Méthode par spectrométrie d’absorption
moléculaire et par chromatographie liquide à haute
performance
3.1 teneur en natamycine des fromages ou de la
1 Domaine d’application
croiite des fromages: Teneur en natamycine déter-
minée par la méthode spécifiée dans la présente
La présente Norme internationale prescrit une mé-
Norme internationale. La teneur en natamycine du
thode de détermination de la teneur en natamycine
fromage est exprimée en milligrammes par kilo-
de la croûte de fromage et du fromage situé à
gramme. La teneur en natamycine de la croûte de
proximité de la croûte.
fromage est exprimée en milligrammes par
décimètre carré.
La limite de détection est de 0,5 mg/kg.
Cette méthode est adaptée à la vérification d’une
3.2 croûte de fromage: Couche externe du fromage
tolérance maximale en natamycine dans la croûte
d’une épaisseur de 5 mm comprenant, le cas éché-
de fromage, à une teneur de 1 mg/dm*?
ant, la pellicule de protection.
Cette méthode convient également à la détection de
la migration de la natamycine vers l’intérieur du
4 Principe
fromage.
Extraction d’une quantité connue d’échantillon à
2 Référence normative
l’aide de méthanol. Dilution de l’extrait dans de
l’eau, suivie d’un refroidissement entre - 15 OC et
La norme suivante contient des dispositions qui, par
- 20 OC, pour précipiter la majeure partie des
suite de la référence qui en est faite, constituent des
graisses, puis filtration.
dispositions valables pour la présente Norme inter-
Determination de la teneur en natamycine du filtrat
nationale. Au moment de la publication, l’édition in-
(après concentration, si nécessaire) par spectromé-
diquée était en vigueur. Toute norme est sujette à
trie ou chromatographie liquide à haute perfor-
révision et les parties prenantes des accords fondés
sur la présente Norme internationale sont invitées mance.
à rechercher la possibilité d’appliquer l’édition la
plus récente de la norme indiquée ci-après. Les
membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre
5 RéactIfs et substances de référence
des Normes internationales en vigueur à un moment
donné.
Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité
analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être de
ISO 7073985, Laif et produits laifiers - Méthodes
l’eau distillée ou déionisée.
d’échantillonnage.
5.1 Méthanol.
3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internatio- 5.2 Méthanol, solution préparée en mélangeant
nale, les définitions suivantes s’appliquent. 2 volumes de méthanol avec 1 volume d’eau.
1) Cette teneur correspond à un projet CEE de teneur limite en natamycine de la croûte de fromage.
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ISO 9233:1991(F)
correspondant à 6.2 Appareil & trancher fin, pour découper de fines
5.3 Natamycine, solution étalon
tranches de fromage, d’une épaisseur maximale de
5 mg de natamycine par litre.
1 mm (voir figure 2, à titre d’exemple).
Immédiatement avant emploi, dissoudre dans une
fiole jaugée de 100 ml, une quantité d’une prépa-
6.3 Broyeur ou mélangeur.
ration à teneur connue en natamycine, correspon-
dant à 50 mg de natamycine pure dans du méthanol
6.4 Couteau aiguisé, pour découper des tranches
(5.1) et compléter au trait repère.
de fromage en petits morceaux.
Dans une fiole jaugée de 50 ml, diluer 5,0 ml de
cette solution à 50 ml avec la solution de methanoI
6.5 Agitateur magnétique ou appareil à secouer.
(5.2).
Dans une autre fiole jaugée de 50 ml, diluer 5,0 ml
6.6 Fioles coniques, de 100 ml et 200 ml de capa-
de cette solution diluée à 50 ml avec la solution de
cité, en verre teinté, et munies de bouchons en
méthanol (5.2).
verre rodé.
1 ml de cette solution étalon contient 5 pg de
6.7 Serlngues, jetables, de 10 ml de capacité.
natamycine.
II est nécessaire que la concentration de cette solu-
6.8 Microfiltres moldculaires, de 0,20 [km et
tion étalon finale soit proche de celle de la solution
0,45 pm, de grosseur des pores résistant à l’attaque
d’essai mesurée en 9.3.1.2. Ajuster la dilution finale,
par des solutions alcooliques.
si nécessaire.
6.9 Papiers filtres plissés”), à filtration rapide, de
5.4 Acide acétique, cristallisable.
15 cm de diamètre.
6.10 Entonnoir, d’environ 7 cm de diamètre.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire, et notamment
6.11 Congélateur, fonctionnant dans une gamme
de températures comprise entre - 15 OC et - 20 OC.
6.1 Appareil à trancher, ou appareil similaire pour
découper des portions de cro0te de fromage de
6.12 Cartouches d’extraction de type C183), pour
5 mm d’épaisseur et d’environ 3 cm de large (voir
concentrer l’extrait filtré, si nécessaire.
figure 1, à titre d’exemple).
6.13 Spectrométre, permettant d’opérer dans I’ul-
traviolet entre 300 nm et 340 nm, équipé de cuves
de 1 cm d’épaisseur et d’un enregistreur.
6.14 Chromatographe liquide a haute performance,
muni d’un détecteur UV pouvant mesurer à 303 nm
et équipé d’un enregistreur et/ou d’un intégrateur.
a
Figure 2 - Exemple d’appareil à trancher fin,
Figure 1 - Exemple d’appareil à trancher,
permettant de découper des tranches de fromage
permettant de découper des portions de croiite
d’une épaisseur de 1 mm
d’une épaisseur de 5 mm
2) S et S, N” 595 1/2 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à I’in-
tention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
Waters N* 51910, sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information
3) Sep-pak cl81
est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve
ou recommande l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
2
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ISO 9233:1991(F)
6.15 Colonne analytique, de 150 mm de longueur Après préparation de chaque échantillon, nettoyer
et de 4,6 mm de diamètre interne, de type Cg4), de tous les instruments ayant été en contact avec le
fromage, tout d’abord à l’eau chaude puis au mé-
5 pm de dimension de particules.
thanol et les sécher soigneusement, dans un flux
d’air comprimé, par exemple.
6.16 Colonne de garde, de 100 mm de longueur et
de 2,l mm de diamètre interne, de type C& de
30 pm à 40 pm de dimension de particules.
9 Mode opératoire
7 Échantillonnage
9.1 Prise d’essai
L’échantillonnage doit avoir été effectue conformk
Pour la croûte de fromage, peser à 10 mg près, en-
ment à I’ISO 707.
viron 10 g de l’échantillon pour essai (8.1) et les
transférer dans une fiole conique de 200 ml (6.6).
Un fromage entier, ou une portion représentative de
l’ensemble, doit être présenté au laboratoire.
Pour le fromage, peser, à 10 mg près, environ 5 g
de l’échantillon pour essai (8.2) et les transférer
8 Préparation de l’échantillon pour essai dans une fiole conique de 100 ml (6.6).
8.1 CroQte
9.2 Préparation de la solution d’essai
Si nécessaire, couper l’échantillon pour laboratoire
Pour la croûte de fromage, ajouter 100 ml de mé-
en petites sections ou portions afin que la largeur
thanol (5.1) et pour le fromage, ajouter 50 ml de
de la croûte ne soit pas supérieure à 3 cm. Retirer
m’éthanol (5.1) à l’aide d’une éprouvette.
la totalité de la croûte sur une épaisseur de 5 mm
de toutes les sections ou portions ainsi obtenues, Mélanger le contenu de la fiole conique pendant
en utilisant la machine à trancher (6.1). 90 min à l’aide de l’agitateur magnétique (6.5) ou
secouer pendant 90 min dans l’appareil à secouer
A partir de la croûte obtenue, découper un morceau
(6.5).
rectangulaire (entre 20 cm* et 40 cm*). Déterminer
sa surface en centimètres carrés et sa masse, en Pour la croûte, ajouter 50 ml d’eau et pour le fro-
grammes. mage, ajouter 25 ml d’eau, à l’aide d’une éprou-
vette.
Broyer soigneusement toute la croûte, y compris le
morceau pesé et mesuré et bien mélanger. Trans- Placer immédiatement la fiole conique au congéla-
férer immédiatement dans un récipient une quantité teur (6.11) et la laisser reposer pendant environ
de l’échantillon ainsi préparé. 60 min.
Après préparation de chaque échantillon, nettoyer Filtrer l’extrait froid à travers un papier-filtre plissé
tous les instruments ayant été en contact avec le (6.9) en éliminant les 5 premiers millilitres de fïltrat.
fromage ou la croûte, tout d’abord à l’eau chaude
NOTE 1 II est nécessaire d’effectuer la filtration lorsque
puis au méthanol, et les sécher soigneusement,
la suspension est encore froide pour éviter la dissolution
dans un flux d’air comprimé, par exemple.
des matières grasses et éviter ainsi d’avoir des filtrats
troubles.
8.2 Intérieur du fromage
Amener le filtrat à température ambiante.
Après avoir retiré la croûte comme indiqué en 8.1,
Prélever une partie du filtrat dans une seringue
prélever une tranche d’une épaisseur maximale de
(6.7) et filtrer sur un microfiltre de 0,45 prn de di-
1 mm sur toute la section externe du fromage en
mension des pores, puis sur un microfiltre de
utilisant la machine à trancher fin (6.2).
0,20 pm de grosseur de pore (6.8).
Découper toutes les tranches de fromage en petits
morceaux d’environ 0,5 cm* et mélanger soi- La quantité minimale de filtrat requise est 3 ml pour
gneusement. Transférer immédiatement dans un une mesure spectrométrique directe (9.3.1), 20 ~1
récipient une quantité de l’échantillon ainsi préparé. par injection pour une mesure directe (9.3.2) et
4) Lichrosorb RP8 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention
des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
5) Perisorb RP8 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention
des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
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ISO 9233:1991 (F)
9.3.1.2 Solution d’essai
25 ml et 50 ml, respectivement, pour des concen-
trations de 5 fois et de 10 fois (9.3.3).
Enregistrer le spectre de la solution d’essai (9.2) de
Procéder ensuite, conformément à 9.3.1, 9.3.2 ou
300 nm à 340 nm. Mesurer I’absorbance au maxi-
9.3.3, suivant le cas.
mum à environ 317 nm, au minimum à environ
311 nm et à 329 nm exactement. Utiliser la solution
de méthanol (5.2) comme blanc.
9.3 Détermination
Si la teneur en natamycine de l’échantillon est faible
au point de rendre la détection impossible ou prati-
9.3.1 Mesure spectrométrique
quement impossible (rapport signal sur bruit infé-
rieur à 3), mais s’il est néanmoins nécessaire
9.3.1 .l Solution étalon de natamycine
d’effectuer la détermination, opérer conformément
à 9.3.3.
Enregistrer le spectre de la solution étalon de
natamycine (5.3) de 300 nm à 340 nm. Mesurer I’ab-
sorbance au maximum à environ 337 nm, au mini-
mum à environ 311 nm et à 329 nm exactement.
Utiliser la solution de méthanol (5.2) comme blanc.
Un exemple de spectre d’une solution étalon est
donné en figure 3.
La natamycine étant instable dans la solution de
méthanol, effectuer la mesure aussi rapidement que
possible.
Les emplacements exacts du maximum à 317 nm et
du minimum à 311 nm peuvent être légèrement
modifiés en raison des variations intervenant lors
de l’étalonnage de l’appareil. Utiliser toujours les
valeurs minimale et maximale réelles.
Solution étalon
i
f
06
0
05
8
04
.
03
#
250 329 350
02
,
Longueur d’onde, nm
A Croûte de fromage, à 61 mg/kg de teneur en natamycine
01
I
B Croûte de fromage, à 15 mg/kg de teneur en natamycine
C Fromage, à 1,7 mg/kg de teneur en natamycine
D Fromage, à 0,3 mg/kg de teneur en natamycine
250 329 350
E Fromage, comme en C, après concentration x5
F Fromage, comme en D, après concentration x 10
Longueur d’onde,
...
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1991-09-01
:
.
Fromage et croûtes de fromage -
Détermination de la teneur en natamyciné -
Méthode par spedrométrie d’absorption
moléculaire et par chromatographie liquide à
haute performance
Cheese and cheese rind - Defermination of natamycin content --
Method by molecular absorption spectrometry and by high-performance
liquid chroma tography
-I----1_-------
---
Numéro de référence
ISO 9233:1991(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 9233:199j (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres
de I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre inté-
ressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique créé
à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec I’ISO participent également aux tra-
vaux. L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique
internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotech-
nique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techni-
ques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication
comme Normes internationales requiert l’approbation de 75 b/a au moins
des comités membres votants.
La Norme internationale ISO 9233 a été élaborée par le comité techni-
que ISO/TC 34, Produifs agricoles alimenfaires, sous-comité SC 5, Lait
ef produits laifiers, en collaboration avec la Fédération internationale
de laiterie (FIL) et l’Association des chimistes analytiques officiels
(AOAC) et sera également publiée par ces organismes.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1991
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être repro-
duite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou
mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-1211 Genève 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
NORME INTERNATIONALE ISO 9233:1991 (F)
- Détermination de la teneur
Fromage et croûtes de fromage
en natamycine - Méthode par spectrométrie d’absorption
moléculaire et par chromatographie liquide à haute
performance
3.1 teneur en natamycine des fromages ou de la
1 Domaine d’application
croiite des fromages: Teneur en natamycine déter-
minée par la méthode spécifiée dans la présente
La présente Norme internationale prescrit une mé-
Norme internationale. La teneur en natamycine du
thode de détermination de la teneur en natamycine
fromage est exprimée en milligrammes par kilo-
de la croûte de fromage et du fromage situé à
gramme. La teneur en natamycine de la croûte de
proximité de la croûte.
fromage est exprimée en milligrammes par
décimètre carré.
La limite de détection est de 0,5 mg/kg.
Cette méthode est adaptée à la vérification d’une
3.2 croûte de fromage: Couche externe du fromage
tolérance maximale en natamycine dans la croûte
d’une épaisseur de 5 mm comprenant, le cas éché-
de fromage, à une teneur de 1 mg/dm*?
ant, la pellicule de protection.
Cette méthode convient également à la détection de
la migration de la natamycine vers l’intérieur du
4 Principe
fromage.
Extraction d’une quantité connue d’échantillon à
2 Référence normative
l’aide de méthanol. Dilution de l’extrait dans de
l’eau, suivie d’un refroidissement entre - 15 OC et
La norme suivante contient des dispositions qui, par
- 20 OC, pour précipiter la majeure partie des
suite de la référence qui en est faite, constituent des
graisses, puis filtration.
dispositions valables pour la présente Norme inter-
Determination de la teneur en natamycine du filtrat
nationale. Au moment de la publication, l’édition in-
(après concentration, si nécessaire) par spectromé-
diquée était en vigueur. Toute norme est sujette à
trie ou chromatographie liquide à haute perfor-
révision et les parties prenantes des accords fondés
sur la présente Norme internationale sont invitées mance.
à rechercher la possibilité d’appliquer l’édition la
plus récente de la norme indiquée ci-après. Les
membres de la CEI et de I’ISO possèdent le registre
5 RéactIfs et substances de référence
des Normes internationales en vigueur à un moment
donné.
Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité
analytique reconnue.
L’eau utilisée doit être de
ISO 7073985, Laif et produits laifiers - Méthodes
l’eau distillée ou déionisée.
d’échantillonnage.
5.1 Méthanol.
3 Définitions
Pour les besoins de la présente Norme internatio- 5.2 Méthanol, solution préparée en mélangeant
nale, les définitions suivantes s’appliquent. 2 volumes de méthanol avec 1 volume d’eau.
1) Cette teneur correspond à un projet CEE de teneur limite en natamycine de la croûte de fromage.
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 9233:1991(F)
correspondant à 6.2 Appareil & trancher fin, pour découper de fines
5.3 Natamycine, solution étalon
tranches de fromage, d’une épaisseur maximale de
5 mg de natamycine par litre.
1 mm (voir figure 2, à titre d’exemple).
Immédiatement avant emploi, dissoudre dans une
fiole jaugée de 100 ml, une quantité d’une prépa-
6.3 Broyeur ou mélangeur.
ration à teneur connue en natamycine, correspon-
dant à 50 mg de natamycine pure dans du méthanol
6.4 Couteau aiguisé, pour découper des tranches
(5.1) et compléter au trait repère.
de fromage en petits morceaux.
Dans une fiole jaugée de 50 ml, diluer 5,0 ml de
cette solution à 50 ml avec la solution de methanoI
6.5 Agitateur magnétique ou appareil à secouer.
(5.2).
Dans une autre fiole jaugée de 50 ml, diluer 5,0 ml
6.6 Fioles coniques, de 100 ml et 200 ml de capa-
de cette solution diluée à 50 ml avec la solution de
cité, en verre teinté, et munies de bouchons en
méthanol (5.2).
verre rodé.
1 ml de cette solution étalon contient 5 pg de
6.7 Serlngues, jetables, de 10 ml de capacité.
natamycine.
II est nécessaire que la concentration de cette solu-
6.8 Microfiltres moldculaires, de 0,20 [km et
tion étalon finale soit proche de celle de la solution
0,45 pm, de grosseur des pores résistant à l’attaque
d’essai mesurée en 9.3.1.2. Ajuster la dilution finale,
par des solutions alcooliques.
si nécessaire.
6.9 Papiers filtres plissés”), à filtration rapide, de
5.4 Acide acétique, cristallisable.
15 cm de diamètre.
6.10 Entonnoir, d’environ 7 cm de diamètre.
6 Appareillage
Matériel courant de laboratoire, et notamment
6.11 Congélateur, fonctionnant dans une gamme
de températures comprise entre - 15 OC et - 20 OC.
6.1 Appareil à trancher, ou appareil similaire pour
découper des portions de cro0te de fromage de
6.12 Cartouches d’extraction de type C183), pour
5 mm d’épaisseur et d’environ 3 cm de large (voir
concentrer l’extrait filtré, si nécessaire.
figure 1, à titre d’exemple).
6.13 Spectrométre, permettant d’opérer dans I’ul-
traviolet entre 300 nm et 340 nm, équipé de cuves
de 1 cm d’épaisseur et d’un enregistreur.
6.14 Chromatographe liquide a haute performance,
muni d’un détecteur UV pouvant mesurer à 303 nm
et équipé d’un enregistreur et/ou d’un intégrateur.
a
Figure 2 - Exemple d’appareil à trancher fin,
Figure 1 - Exemple d’appareil à trancher,
permettant de découper des tranches de fromage
permettant de découper des portions de croiite
d’une épaisseur de 1 mm
d’une épaisseur de 5 mm
2) S et S, N” 595 1/2 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à I’in-
tention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif du produit ainsi désigné.
Waters N* 51910, sont des exemples de produits appropriés disponibles sur le marché. Cette information
3) Sep-pak cl81
est donnée à l’intention des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve
ou recommande l’emploi exclusif des produits ainsi désignés.
2
---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 9233:1991(F)
6.15 Colonne analytique, de 150 mm de longueur Après préparation de chaque échantillon, nettoyer
et de 4,6 mm de diamètre interne, de type Cg4), de tous les instruments ayant été en contact avec le
fromage, tout d’abord à l’eau chaude puis au mé-
5 pm de dimension de particules.
thanol et les sécher soigneusement, dans un flux
d’air comprimé, par exemple.
6.16 Colonne de garde, de 100 mm de longueur et
de 2,l mm de diamètre interne, de type C& de
30 pm à 40 pm de dimension de particules.
9 Mode opératoire
7 Échantillonnage
9.1 Prise d’essai
L’échantillonnage doit avoir été effectue conformk
Pour la croûte de fromage, peser à 10 mg près, en-
ment à I’ISO 707.
viron 10 g de l’échantillon pour essai (8.1) et les
transférer dans une fiole conique de 200 ml (6.6).
Un fromage entier, ou une portion représentative de
l’ensemble, doit être présenté au laboratoire.
Pour le fromage, peser, à 10 mg près, environ 5 g
de l’échantillon pour essai (8.2) et les transférer
8 Préparation de l’échantillon pour essai dans une fiole conique de 100 ml (6.6).
8.1 CroQte
9.2 Préparation de la solution d’essai
Si nécessaire, couper l’échantillon pour laboratoire
Pour la croûte de fromage, ajouter 100 ml de mé-
en petites sections ou portions afin que la largeur
thanol (5.1) et pour le fromage, ajouter 50 ml de
de la croûte ne soit pas supérieure à 3 cm. Retirer
m’éthanol (5.1) à l’aide d’une éprouvette.
la totalité de la croûte sur une épaisseur de 5 mm
de toutes les sections ou portions ainsi obtenues, Mélanger le contenu de la fiole conique pendant
en utilisant la machine à trancher (6.1). 90 min à l’aide de l’agitateur magnétique (6.5) ou
secouer pendant 90 min dans l’appareil à secouer
A partir de la croûte obtenue, découper un morceau
(6.5).
rectangulaire (entre 20 cm* et 40 cm*). Déterminer
sa surface en centimètres carrés et sa masse, en Pour la croûte, ajouter 50 ml d’eau et pour le fro-
grammes. mage, ajouter 25 ml d’eau, à l’aide d’une éprou-
vette.
Broyer soigneusement toute la croûte, y compris le
morceau pesé et mesuré et bien mélanger. Trans- Placer immédiatement la fiole conique au congéla-
férer immédiatement dans un récipient une quantité teur (6.11) et la laisser reposer pendant environ
de l’échantillon ainsi préparé. 60 min.
Après préparation de chaque échantillon, nettoyer Filtrer l’extrait froid à travers un papier-filtre plissé
tous les instruments ayant été en contact avec le (6.9) en éliminant les 5 premiers millilitres de fïltrat.
fromage ou la croûte, tout d’abord à l’eau chaude
NOTE 1 II est nécessaire d’effectuer la filtration lorsque
puis au méthanol, et les sécher soigneusement,
la suspension est encore froide pour éviter la dissolution
dans un flux d’air comprimé, par exemple.
des matières grasses et éviter ainsi d’avoir des filtrats
troubles.
8.2 Intérieur du fromage
Amener le filtrat à température ambiante.
Après avoir retiré la croûte comme indiqué en 8.1,
Prélever une partie du filtrat dans une seringue
prélever une tranche d’une épaisseur maximale de
(6.7) et filtrer sur un microfiltre de 0,45 prn de di-
1 mm sur toute la section externe du fromage en
mension des pores, puis sur un microfiltre de
utilisant la machine à trancher fin (6.2).
0,20 pm de grosseur de pore (6.8).
Découper toutes les tranches de fromage en petits
morceaux d’environ 0,5 cm* et mélanger soi- La quantité minimale de filtrat requise est 3 ml pour
gneusement. Transférer immédiatement dans un une mesure spectrométrique directe (9.3.1), 20 ~1
récipient une quantité de l’échantillon ainsi préparé. par injection pour une mesure directe (9.3.2) et
4) Lichrosorb RP8 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention
des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
5) Perisorb RP8 est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l’intention
des utilisateurs de la présente Norme internationale et ne signifie nullement que I’ISO approuve ou recommande l’emploi
exclusif du produit ainsi désigné.
---------------------- Page: 5 ----------------------
ISO 9233:1991 (F)
9.3.1.2 Solution d’essai
25 ml et 50 ml, respectivement, pour des concen-
trations de 5 fois et de 10 fois (9.3.3).
Enregistrer le spectre de la solution d’essai (9.2) de
Procéder ensuite, conformément à 9.3.1, 9.3.2 ou
300 nm à 340 nm. Mesurer I’absorbance au maxi-
9.3.3, suivant le cas.
mum à environ 317 nm, au minimum à environ
311 nm et à 329 nm exactement. Utiliser la solution
de méthanol (5.2) comme blanc.
9.3 Détermination
Si la teneur en natamycine de l’échantillon est faible
au point de rendre la détection impossible ou prati-
9.3.1 Mesure spectrométrique
quement impossible (rapport signal sur bruit infé-
rieur à 3), mais s’il est néanmoins nécessaire
9.3.1 .l Solution étalon de natamycine
d’effectuer la détermination, opérer conformément
à 9.3.3.
Enregistrer le spectre de la solution étalon de
natamycine (5.3) de 300 nm à 340 nm. Mesurer I’ab-
sorbance au maximum à environ 337 nm, au mini-
mum à environ 311 nm et à 329 nm exactement.
Utiliser la solution de méthanol (5.2) comme blanc.
Un exemple de spectre d’une solution étalon est
donné en figure 3.
La natamycine étant instable dans la solution de
méthanol, effectuer la mesure aussi rapidement que
possible.
Les emplacements exacts du maximum à 317 nm et
du minimum à 311 nm peuvent être légèrement
modifiés en raison des variations intervenant lors
de l’étalonnage de l’appareil. Utiliser toujours les
valeurs minimale et maximale réelles.
Solution étalon
i
f
06
0
05
8
04
.
03
#
250 329 350
02
,
Longueur d’onde, nm
A Croûte de fromage, à 61 mg/kg de teneur en natamycine
01
I
B Croûte de fromage, à 15 mg/kg de teneur en natamycine
C Fromage, à 1,7 mg/kg de teneur en natamycine
D Fromage, à 0,3 mg/kg de teneur en natamycine
250 329 350
E Fromage, comme en C, après concentration x5
F Fromage, comme en D, après concentration x 10
Longueur d’onde,
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.