ISO 10993-10:1995
(Main)Biological evaluation of medical devices — Part 10: Tests for irritation and sensitization
Biological evaluation of medical devices — Part 10: Tests for irritation and sensitization
Describes test methods to evaluate the potential of devices and their constituent materials to produce irritation and to produce sensitization. Also gives guidance for the preparation of materials specifically in relation to the above tests.
Évaluation biologique des dispositifs médicaux — Partie 10: Essais d'irritation et de sensibilisation
La présente partie de l'ISO 10993 décrit les méthodes d'essai a) pour évaluer le risque d'irritation que présentent les dispositifs et les matériaux qui les constituent; b) pour évaluer le risque de sensibilisation que présentent les dispositifs et les matériaux qui les constituent. Ces méthodes d'essais sont recommandées pour la plupart des catégories de dispositifs et de modes de contact donnés dans l'ISO 10993-1. Dans la liste des essais, choisir ceux qui sont en rapport avec l'utilisation finale du dispositif. Il est également indiqué des lignes directrices sur la préparation des matériaux concernant spécifiquement les essais précités. NOTE 1 L'annexe D donne des lignes directrices sur la conduite d'essais supplémentaires qui peuvent être spécifiquement requis pour l'évaluation de l'irritation orale, rectale, pénienne et vaginale.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL IS0
STANDARD 10993-10
First edition
1995-03-I 5
Biological evaluation of medical devices -
Part 10:
Tests for irritation and sensitization
ivaluation biologique des dispositifs mkdicaux -
Partie IO: Essais d ‘irrita tion et de sensibilisa tion
Reference number
IS0 10993-I 0:1995(E)
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IS0 10993-10:1995(E)
Contents
Page
1
..............................................................................................
1 Scope
1
.....................................................................
2 Normative references
1
.......................................................................................
3 Definitions
2
....................................
4 General principles, step-wise approach
2
............................................................................
5 Irritation tests
.... 2
5.1 Factors to be considered in design and selection of tests
3
...................................................................
5.2 Skin irritation test
5
................................................................
5.3 Ocular irritation test
8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.4 Intracutaneous (intradermal) reactivity test
10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .*.
6 Sensitization tests
. . 10
6.1 Factors to be considered in design and selection of tests
11
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.2 Maximization sensitization test
13
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
6.3 Closed patch sensitization test
Annexes
16
.......................................
A Preparation of materials for testing
......... 17
B Method for extraction of materials for biological tests
19
..........................................................
C Animals and husbandry
20
........................................................
D Additional irritation tests
27
.........................................................
E Background information
29
............................................................................
F Bibliography
0 IS0 1995
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying and
microfilm, without permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-1211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
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0 IS0 IS0 10993-10:1995(E)
Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national standards bodies (IS0 member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through IS0
technical committees. Each member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. IS0
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard IS0 10993-10 was prepared by Technical Commit-
tee lSO/TC 194, Biological evaluation of medical devices.
IS0 10993 consists of the following parts, under the general title Biological
evaluation of medical devices:
- Part 1: Guidance on selection of tests
- Part 2: Animal welfare requirements
- Part 3: Tests for genotoxicity, carcinogenicity and reproductive
toxicity
- Part 4: Selection of tests for interactions with blood
- Part 5: Tests for cytotoxicity: in vitro methods
- Part 6: Tests for local effects after implantation
- Part 7: Ethylene oxide sterilization residuals
- Part 9: Degradation of materials related to biological testing
[Technical Report]
- Part IO: Tests for irritation and sensitization
- Part 1 I: Tests for systemic toxicity
- Part 12: Sample preparation and reference materials
- Part 13: Identification and quantification of degradation products
from polymers
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
0 IS0
IS0 10993-10:1995(E)
- Part 14: /den tifica tion and quantification of degradation products
from ceramics
- Part 15: /den tification and quantification of degradation products
from coated and uncoated metals and alloys
- Part 16: General guidance on toxicokinetic study design for degra-
dation products and leachables
- Part 17: Glutaraldehyde and formaldehyde residues in industrially
sterilized medical devices
Future parts will deal with other relevant aspects of biological testing.
This part of IS0 10993 is a harmonization of numerous standards and
guidelines, including BS 5736, OECD Guidelines, U.S. Pharmacopeia and
the European Pharmacopoeia. It is intended to be the overall guidance
document for the selection and conduct of tests enabling evaluation of ir-
ritation and senitization responses relevant to material and device safety.
Annexes A, B and C form an integral part of this part of IS0 10993. An-
nexes D, E and F are for information only.
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0 IS0 IS0 10993-10:1995(E)
Introduction
This part of IS0 10993 assesses possible contact hazards from device-
released chemicals that may produce skin and mucosal irritation, eye irri-
tation, and delayed contact sensitization.
Some materials that are included in these devices have been tested, and
their skin or mucosal irritation or sensitization potential has been docu-
mented. Other materials and their chemical components have not been
tested and may act differently when exposed to biological tissues. It is
incumbent upon the manufacturer to evaluate each device for its human
toxic potential prior to marketing.
Traditionally, small animal tests are performed prior to human testing to
help predict human response. More recently, in vitro tests have been
added as an alternative. Despite progress and considerable effort in this
direction, a review of findings suggests that currently no satisfactory in
vitro test has been devised to eliminate the requirement for in vivo testing.
Where appropriate, the preliminary use of in vitro methods is encouraged
as screening tests prior to animal testing. In order to reduce the number
of animals used, these standards use a step-wise approach with review
and analysis of test results at each stage.
It is incumbent upon the investigator to conduct these studies using good
scientific laboratory practices, complying with regulations related to animal
welfare. Since the number of animals is restricted, the data obtained may
be insufficient to warrant the application of statistics.
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This page intentionally left blank
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INTERNATIONAL STANDARD 0 IS0 IS0 10993-10:1995(E)
Biological evaluation of medical devices -
Part 10:
Tests for irritation and sensitization
IS0 10993-I : 1992, Biological evaluation of medical
1 Scope
devices - Part 7: Guidance on selection of tests.
This part of IS0 10993 describes test methods:
I so 10993-I 2:--l), Biological evaluation of medical
devices
- Part 12: Sample preparation and reference
a) to evaluate the potential of devices and their con-
materials.
stituent materials to produce irritation; and
to evaluate the potential of devices and their con-
b)
stituent materials to produce sensitization.
3 Definitions
These test methods are recommended for most cat-
For the purposes of this part of IS0 10993, the defi-
egories of device and mode of body contact given in
nitions given in IS0 10993-I and the following defi-
IS0 10993-I. Of the tests listed, those appropriate to
nitions apply.
the end use of the device are to be selected. Guid-
ance is also given for the preparation of materials
3.1 (allergic contact) sensitization; delayed con-
specifically in relation to the above tests.
tact hypersensitivity: Allergic response involving
immunological systems that have been activated by
NOTE 1 Guidance on the conduct of supplementary tests
pnor exposure.
which may be required specifically for use in the oral, rectal,
penile and vaginal areas is given in annex D.
3.2 irritation: Localized inflammatory response to
single, repeated or continuous application of the test
substance, without involvement of an immunological
mechanism.
2 Normative references
3.3 oedema: Swelling due to abnormal infiltration
of fluid into the tissues.
The following standards contain provisions which,
through reference in this text, constitute provisions
3.4 erythema: Reddening of the skin or mucous
of this part of IS0 10993. At the time of publication,
membrane.
the editions indicated were valid. All standards are
subject to revision, and parties to agreements based
3.5 eschar: Scab or discoloured slough of skin.
on this part of IS0 10993 are encouraged to investi-
gate the possibility of applying the most recent edi-
tions of the standards indicated below. Members of 3.6 corrosion: Production of irreversible tissue
IEC and IS0 maintain registers of currently valid damage at the site of contact with the skin following
International Standards. the application of a test substance.
1) To be published.
1
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Q IS0
IS0 10993=10:1995(E)
sensitizers; guidance is therefore provided only in the
3.7 ulceration: Open sore representing loss of
conduct of in viva tests in species other than humans.
superficial tissue.
It is not necessary to use positive controls in every in
38 . necrosis: Death of cells and/or tissues.
vivo test. A positive control should be run periodically
to validate the test system and demonstrate a positive
3.9 negative control: Substance that closely re-
response.
sembles the test substance in form and, when tested
in accordance with this part of IS0 10993, is neither
If assessment is not possible using the above stages,
an irritant nor a sensitizer.
consideration should be given to non-invasive testing
in humans.
3.10 positive control: Substance that, when tested
in accordance with this part of IS0 10993, gives a re-
producible irritation or sensitization response.
5 Irritation tests
3.11 solvent: Substance (chemical, vehicle, me-
dium, etc.) used to moisten, dilute, suspend, extract
51 . Factors to be considered in design and
or dissolve the test substance.
selection of tests
3.12 reagent control: Solvent used to moisten, di-
Factors affecting the results of irritation studies in-
lute, suspend, extract or dissolve the test substance,
clude
which is evaluated concurrently with the moistened,
diluted, suspended, extracted or dissolved test sub-
the patch test unit;
a)
stance.
b) the degree of occlusion;
application of the test substance;
d
4 General principles, step-wise approach
d) the application site;
This part of IS0 10993 advocates a step-wise ap-
proach which may include any or all of the following:
e) the duration of exposure; and
literature review;
a)
the techniques used in evaluating the test.
f 1
in vitro tests (if available and when validated);
b)
Additional background information is provided in an-
nex E.
in viva tests;
d
While increased flexibility will allow the investigator
non-invasive human tests/clinical trials.
d)
to enhance the sensitivity of the test to suit conditions
of use and population exposure, consistency in pro-
The first stage is a literature review and shall include
cedure contributes to comparability of test results
an evaluation of chemical and physical properties, and
with different materials and from different labora-
information on structually related chemicals and ma-
tories.
terials. If not already known, the pH and pKa of the
material (liquid, solution or extracts of materials) shall
Provisions have been included in the test procedures
be measured prior to any in vivo or in vitro testing.
for evaluation of devices and materials that will have
repeated and/or prolonged exposure. The investigator,
The second stage provides for in vitro assessments.
in consultation with the device manufacturer, should
These should always be considered in preference to
design the study to exaggerate the anticipated con-
in vivo tests and should replace these as new in vitro
tact (time and/or concentration) in the clinical situ-
methods become available and validated.
ation. While use of an exaggerated concentration or
At the third stage acute in viva studies are undertaken extract of the material is acceptable, this should be
to test for materials not already classified as severe borne in mind during interpretation of the results.
irritants or strong sensitizers by stages a) or b). Ma-
For products intended to be used extensively on
terials that do not demonstrate an acute potential may
normal and abnormal skin, no substantial risk is
be further evaluated following repeated exposure.
L
normally accepted; however, many products, in spite
of a potential to irritate, are fully acceptable because
At the present time there are no validated in vitro
of their inherent benefit.
tests (other than simple screens) to detect irritants or
2
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0 IS0 IS0 10993-10:1995(E)
5.2.4 Test procedure
If the pH of the test material is less than or equal to
2 or equal to or greater than 11,5, the material may
5.2.4.1 Preparation of animals
be declared an irritant and no further testing is re-
quired. However, experimental evidence suggests
On the day before the test, closely clip the fur on the
that acidity and alkalinity of the test material are not
backs of the animals a sufficient distance on both
the only factors to be considered in relation to the
sides of the spine for application and observation of
capacity of a substance to produce severe injury. The
all test sites (approximately 10 cm x 15 cm). Use only
concentration of the test material, its period of con-
animals with healthy intact skin.
tact, and many other physical and chemical properties
are also important.
NOTE 2 Abrasion of the test site is not necessary, as
evidence indicates similar responses between abraded and
As dose levels in test procedures can be exaggerated,
non-abraded sites.
a positive test does not necessarily exclude the ma-
terial from use.
If repeated exposure is required, follow the pro-
cedures in 5.2.4.2, 5.2.4.3 or 5.2.4.4, repeated for a
maximum of 21 days.
5.2 Skin irritation test
5.2.4.2 Powder or liquid sample
5.2.1 Principle
Apply 0,5 g or 0,5 ml of the test material directly to
each test skin site as shown in figure 1. If the sub-
Assessment of the potential of the material under test
stance is a powder, it should be slightly moistened
to produce dermal irritation.
with water or other suitable solvent before appli-
cation.
5.2.2 Test material
Cover the application sites with a 25 mm x 25 mm
non-occlusive dressing (such as a gauze patch) and
If the test material is either a solid or a liquid, it shall
then wrap the application site with a semi-occlusive
be prepared as specified in annex A.
bandage for a minimum of 4 h. At the end of the
contact time, remove the dressings and mark the
If the test material is to be tested as an extract, it shall
positions of the sites. Remove residual test substance
be prepared as specified in annex B.
by appropriate means, such as washing with luke-
warm water or other suitable, non-irritating solvent,
and careful drying.
5.2.3 Animals and husbandry
5.2.4.3 Extracts and extractants
Healthy young adult albino rabbits of either sex from
a single strain weighing not less than 2 kg shall be
the appropriate extract(s) to the
APPlY
used.
25 mm x 25 mm four-ply gauze patches (0,5 ml per
patch), one patch on each side of the animal as shown
cared for as
The animals shall be acclimatized and
in figure 1. Apply a control patch of gauze moistened
specified in annex C.
with the extracting medium to the other side.
One animal shall initia Ily be used to evaluate the test
Cover the application sites with a semi-occlusive
material.
bandage for a minimum of 4 h. At the end of the
contact time, remove the dressings and mark the
A well-defined response in th e one animal obviates
positions of the sites. Remove residual test substance
the need for additional testing.
by appropriate means, such as washing with luke-
Unless a well-defined response is observed for solid warm water or other suitable, non-irritating solvent,
or liquid materials, a minimum of two further animals and careful drying.
shall be used. For extracts, a minimum of two further
animals per extract shall be used. 5.2.4.4 Solid sample
If the response in the test using the minimum of three Apply the samples of the test material directly to the
animals is equivocal or not clear, additional testing skin on each side of each rabbit as shown in figure 1.
shall be considered. Similarly, apply the control samples to each rabbit.
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IS0 10993=10:1995(E)
Cranial
Y Clipped dorsal region
/- Test intact site
Test intact site ’
: LT
/- Control intact site1 )
Control intact site’)
Caudal
1 ) If sample preparation requires this type of control.
Figure 1 - Location of skin application sites
reversibility or irreversibility of the lesions: this need
When testing solids (which may be pulverized if con-
not exceed 14 days.
sidered necessary), the test substance shall be
moistened sufficiently with water or, where necess-
Describe and grade the skin reactions for erythema
ary, an alternative solvent, to ensure good contact
and oedema according to the classification system
with the skin. When solvents are used, the influence
given in table 1 for each application site at each time
of. the solvent on irritation of skin by the test sub-
interval and record the results for the test report.
stance shall be taken into account.
NOTE 3 Histological and non-invasive techniques may
Cover the application sites with 25 mm x 25 mm
assist in certain cases.
non-occlusive dressings (such as a gauze patch) and
then wrap the application sites with a semi-occlusive
bandage for a minimum of 4 h. At the end of the
contact time, remove the dressings and mark the
5.2.6 Evaluation of results
positions of the sites. Remove residual test substance
by appropriate means, such as washing with luke-
For acute exposure, determine the Primary Irritation
warm water or other suitable, non-irritating solvent,
Index (PII) as follows.
and careful drying.
For each animal, add together the Primary Irritation
Scores for the test material for both erythema and
oedema at each time specified and divide by the total
number of observations (six: two at each time speci-
5.2.5 Observation of animals
fied). When vehicle controls are used, calculate the
Primary Irritation Score for the vehicle controls and
For acute (single exposure) tests, record the appear-
subtract that score from the score for the test ma-
ance of each application site at 1 h, 24 h, 48 h and
terial to obtain the Primary Irritation Score.
72 h following removal of the patches. Extended ob-
servation may be necessary if there are persistent
Only use 24 h, 48 h and 72 h observations for calcu-
lesions, in order to evaluate the reversibility or
lations. Observations made prior to dosing or after
irreversibility of the lesions: this need not exceed
72 h, to monitor recovery, are not used in the deter-
14 days.
mination.
For repeated exposure, record the appearances of the
Add the scores for each animal and divide the total
application site at 1 h after removal of the patches and
by the number of animals. This value is the Primary
immediately prior to the next application. After the last
Irritation Index.
exposure, note the appearance of each application
site at 1 h, 24 h, 48 h and 72 h following removal of
For repeated exposure, determine the Cumulative Ir-
the patches. Extended observation may be necessary
ritation Index as follows.
if there are persistent lesions, in order to evaluate the
4
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Table 2 - Irritation response categories in rabbit
- Classification system for skin reaction
Table 1
Mean score
Numerical Response category
Reaction
grading
0 to 0,4
Negligible
Erythema and eschar formation
Slight 0,5 to I,9
0
No erythema
2 to 4,9
Moderate
1
Very slight erythema (barely perceptible)
5 to 8
Severe
2
Well-defined erythema
3
Moderate erythema
5.2.7 Presentation of results
Severe erythema (beet-redness) to
eschar formation preventing grading of
The test report shall include
4
erythema
Oedema formation
a) a description of the test material(s) or device;
0
No oedema
b) the intended use/application of the test material(s)
1
Very slight oedema (barely perceptible)
or device;
Well-defined oedema (edges of area
2
well-defined by definite raising)
c) a detailed description of the method employed in
Moderate oedema (raised approxi-
preparing the test material or device;
3
mately 1 mm)
Severe oedema (raised more than d) the test animals;
1 mm and extending beyond exposure
4
area)
e) method of application to the test sites;
8
Total possible score for irritation
f) how the site readings were performed and a rec-
ord of the observations;
NOTE - Other adverse changes at the skin sites shall
g) assessment of the results.
be recorded and reported.
5.3 Ocular irritation test
For each animal, add together the Irritation Scores for
both erythema and oedema at each time specified.
Divide this total by the total number of observations
5.3.1 Principle
to obtain the Irritation Score per animal.
Assessment of the potential of the material under test
Add the Irritation Scores of each animal and divide by
to produce ocular irritation.
the total number of animals. This value is the Cumu-
lative Irritation Index.
5.3.2 Exclusion from test
The Cumulative Irritation Index is compared to the
Materials and/or final products which have demon-
categories of Cumulative Irritation Index defined in
strated definite corrosion or severe irritation in a
table2 and the appropriate Category is recorded for
dermal study shall not be further tested for eye irri-
the report.
tation. Strongly acidic or alkaline substances (pH < 2
or 3 11,5) shall not be tested owing to their predictive
NOTE 4 The categories of Cumulative Irritation Index are
based on the data relating the Primary Irritation Index (PII) corrosive properties. These products shall be con-
for chemicals in rabbits to the primary irritation response in
sidered eye irritants.
humans for a number of chemicals that have been tested
in both species.
5.3.3 Test material
For any response, determine the Maximum Irritation
If the test material is a liquid, instil 0,l ml undiluted
Response, the time of onset of the response and the
into the lower conjunctival sac of one eye.
time to maximum response.
If the test material is a solid or granular product, grind
The Primary or Cumulative Irritation Index is charac-
to a fine dust. When gently compacted, instil that
terized by number and description in table2.
amount which occupies a volume of 0,l ml and does
5
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ophth al
100 mg into the lower conjunc- The use of an mosco Ipe, hand slit-lamp, or
not weigh more than
other suitable de vice, i S recom mended.
tival sac of one eye.
lnstil the test material as specified in 5.3.3.
NOTE 5 Some products may not be amenable to testing
directly in the eye. Mechanical damage can result in making
Following instillation hold the eyelids together for ap-
the test useless.
proximately 1 s.
If th e test material is contained in a pump spray, expel
NOTE 6 The contralateral eye of each animal serves as
and instil 0,l ml as for liquids.
an untreated control.
If the test material is contained in an aerosol con-
If repeated exposure of the material is anticipated and
tainer, examine by either
the test material has not demonstrated a significant
response in the acute test, a repeat exposure study
a) spraying a single burst of 1 s duration at a dis-
may be conducted. The duration of the exposure
tance of 10 cm directed at the open eye; or
should bear resemblance to the length of use of the
b) expelling the aerosol into a cool container and test material/device in the clinical situation.
treating as for a liquid.
5.3.6 Observation of animals
If the test material is such that it can only be applied
as an extract, prepare extracts as described in
For animals receiving a single instillation of test ma-
annex B. lnstil a 0,l ml aliquot of the extract into the
terial, examine both eyes of each animal approxi-
lower conjunctival sac of one eye.
mately 1 h, 24 h, 48 h and 72 I after instillation.
Under conditions identical with those used above,
Extended observation may be necessary if there are
prepare reagent controls, using both the polar and the
persistent lesions in order to ( etermine the progress
non-polar solvent, in the absence of the test material.
of the lesions or their reversal; this need not exceed
21 days. Extended observation cannot be justified for
5.3.4 Animals and husbandry
animals with severe lesions.
m
H ealthy adult albin o rabbits of either s ex fro
Young
Grade and record any reactions observed in accord-
ing 2 kg to 3 kg shall be used.
a single strain weigh
ance with the scale for grading ocular lesions given in
table 3.
The animals shall be acclimatized and cared for as
specified in annex C .
For animals receiving multiple instillations of test ma-
terial, examine both eyes of each animal immediately
to evaluate the test
One an imal shall initially be
before and approximately 1 h after each instillation.
materia
If there is evidence of irritation after the last treat-
A well-defined response in the one animal obviates
ment, the observations may be extended. Extended
the need for additional testing.
observation may be necessary if there is persistent
Unless a well-defined response is observed for solid
cornea1 involvement or other ocular irritation in order
or liquid materials, a minimum of two further animals
to determine the progress of the lesions and their
shall be used. For extracts, a minimum of two further
reversibility.
animals per extract shall be used.
Grade and record any reactions observed in accord-
If the response in the test using the minimum of three
ance with the scale for grading ocular lesions given in
animals is equivocal or not clear, additional testing
table 3.
shall be considered.
Withdraw an animal immediately from the study and
humanely kill it, if at any time it shows
5.3.5 Test procedure
a) very severe ocular damage (e.g. sloughing and
No longer than 24 h before commencement of the
ulceration of conjunctival membrane, cornea1 per-
test, visually examine both eyes of each rabbit for
evidence of ocular abnormality. If either eye shows foration, blood or pus in the anterior chamber); or
any abnormality, the rabbit shall be replaced.
b) blood-stained or purulent discharge; or
When the eyes are examined, sodium fluorescein
c) significant cornea1 ulceration.
2 %I BP may be used to visualize any cornea1 damage.
6
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0 IS0
IS0 10993-10:1995(E)
24h or maximum
Withdraw from the study any animal showing maxi- conjunctival inflammation
mum effects on the grading system in table3 - ab- khemosis grade 4 together with redness grade 3) -
sence of a light reflex (iridial response 2) or cornea1 without evidence of recovery within 48 h, and kill it
opacity (grade 4) without evidence of recovery within humanely.
Table 3 - Classification system for grading ocular lesions
Numerical
Reaction
grading
1. Cornea
Degree of opacity (most dense area used)
No opacity 0
Scattered or diffuse areas, details of iris clearly visible
I*
Easily discernible translucent areas, details of iris slightly obscured
2*
Opalescent areas, no details of iris visible, size of pupil barely discernible 3*
Opaque, iris invisible 4*
Area of cornea involved
One-quarter (or less), not zero
Greater than one-quarter, but less than half
Greater than half, but less than three-quarters
Greater than three-quarters, up to whole area
2. Iris
Normal 0
Folds above normal, congestion swelling, circumcorneal injection (any or all or combination of these), iris still
reacting to light (sluggish reaction is positive) I*
No reaction to light, haemorrhage gross destruction (any or all of these) 2*
3. Conjunctivae
Redness (refers to palpebral and bulbar conjunctiva excluding cornea and iris)
Vessels normal 0
Vessels definitely injected above normal
1
More diffuse, deeper crimson red, individual vessels not easily discernible
2*
Diffuse beefy red
3*
Chemosis
No swelling
0
Any swelling above normal (include nictitating membrane)
1
Obvious swelling with partial eversion of lids
2*
Swelling with lids about half-closed
3*
Swelling with lids about half-closed to completely closed
4*
Discharge
No discharge
...
Iso
NORME
10993-10
INTERNATIONALE
Première édition
1995-03-I 5
Évaluation biologique des dispositifs
médicaux -
Partie 10:
Essais d’irritation et de sensibilisation
Biological evaluation of medical devices -
Part 10: Tests for irritation and sensitization
Numéro de réfbence
ISO 10993-I 0: 1995(F)
---------------------- Page: 1 ----------------------
ISO 1099340:1995(F)
Sommaire
Page
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
1 Domaine d’application
..,.............................................................. 1
2 Références normatives
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
3 Définitions
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
4 Principes généraux, approche par étapes
2
5 Essais d’irritation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.1 Facteurs a prendre en consideration lors de la conception et
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
du choix des essais
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
5.2 Essai d’irritation de la peau
6
5.3 Essai d’irritation oculaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
5.4 Essai de réactivité intracutanée (intradermique)
6 Essais de sensibilisation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
6.1 Facteurs à prendre en considération lors de la conception et du
choix des essais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
6.2 Essai de maximisation de sensibilisation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
6.3 Essai de sensibilisation avec système occlusif
Annexes
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
A Préparation des matériaux pour les essais
B Méthode d’extraction des matériaux pour les essais biologiques 17
Les animaux et leur élevage . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
C
Essais d’irritation supplémentaires . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
D
.................................................................. 28
E Informations générales
.................................................................................. 31
F Bibliographie
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun
procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans
.
l’accord Rcrit de l’editeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 0 Suisse
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
0 ISO ISO 10993=10:1995(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO
collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale
(CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 10993-10 a été élaborée par le comité
technique lSO/TC 194, Évaluation biologique des dispositifs médicaux.
L’ISO 10993 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
général Évaluation biologique des dispositifs médicaux:
- Partie 1: Lignes directrices pour le choix des essais
- Partie 2: Exigences concernant la protection des animaux
- Partie 3: Essais concernant la génotoxicité, la cancérogénicité et la
toxicité sur la reproduction
- Partie 4: Choix des essais concernant les interactions avec le sang
- Partie 5: Essais de cyto toxicité: méthodes in vitro
- Partie 6: Essais concernant les effets locaux après implantation
- Partie 7: Résidus de stérilisation à I ‘oxyde d’é thyène
- Partie 9: Dégradation des matériaux relative aux essais biologiques
[Rapport technique]
- Partie 10: Essais d’irritation et de sensibilisation
- Partie II: Essais de toxicité systémique
- Partie 72: Préparation des échantillons et matériaux de référence
-
Partie 13: Identification et quan tification de produits de dégradation
de polymères
- Partie 14: Identification et quan tification de produits de dégradation
de céramiques
- Partie 7 5: Identification et quan tification de produits de dégradation
de métaux et alliages revêtus et non revêtus
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
- Partie 76: Lignes directrices générales concernant la conception de
l’étude toxicocinétique des produits de dégradation et des sub-
stances relargables
- Partie 17: Résidus de glutaraldéhyde et de formaldéhyde dans des
dispositifs médicaux stérilisés industriellement
Les prochaines parties traiteront des autres aspects relatifs aux essais
biologiques.
La présente partie de I’ISO 10993 est le résultat de l’harmonisation de
nombreuses normes et lignes directrices, y compris de la norme
britannique BS 5736, des lignes directrices de I’OCDE, de la Pharmacopée
des États-Unis et de la Pharmacopée européenne. Elle vise à constituer le
document global de référence pour la sélection et la conduite des essais
permettant d’évaluer les réactions d’irritation et de sensibilisation au
matériau et la sécurité du dispositif.
Les annexes A, B et C font partie intégrante de la présente partie de
I’ISO 10993. Les annexes D, E et F sont données uniquement à titre
d’information.
---------------------- Page: 4 ----------------------
0 ISO ISO 10993-10:1995(F)
Introduction
La présente partie de I’ISO 10993 évalue les risques éventuels dus au
contact des produits chimiques libérés par des dispositifs et pouvant
provoquer une irritation de la peau et des muqueuses, une irritation des
yeux et une sensibilisation retardée par contact.
Certains matériaux contenus dans ces dispositifs ont fait l’objet d’essais,
et le risque d’irritation ou de sensibilisation de la peau ou des muqueuses
qu’ils présentent a été documenté. D’autres matériaux ainsi que leurs
constituants chimiques n’ont pas fait l’objet d’essais et peuvent agir
différemment lorsque des tissus biologiques y sont exposés. II appartient
au fabricant d’évaluer le potentiel de toxicité humaine de chaque dispositif
avant de le commercialiser.
Traditionnellement, des essais limités sur les petits animaux sont
effectués avant les essais sur l’homme, afin de faciliter la prévision de la
réaction humaine. Plus récemment, des essais in vitro ont été introduits
comme une alternative. Malgré les progrès réalisés et les efforts
considérables déployés dans ce sens, l’examen des résultats suggére que
la panoplie ne comporte à ce jour aucun essai in vitro suffisamment
satisfaisant pour éliminer la prescription d’essais in vivo. Lorsque c’est
possible, l’emploi préliminaire de méthodes in vitro est encouragé comme
essais de sélection préalables aux essais sur les animaux. Afin de réduire
le nombre des animaux employés, les présentes normes utilisent une
approche par étapes, avec examen et analyse des résultats des essais à
chaque étape.
II incombe au chercheur de conduire ces études en employant de bonnes
pratiques de laboratoire, conformes à la réglementation relative au bien-
être des animaux. Étant donné que le nombre des animaux est limité, les
informations obtenues peuvent ne pas être suffisantes pour justifier
l’application des méthodes statistiques.
---------------------- Page: 5 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 6 ----------------------
NORME INTERNATIONALE o ISO
ISO 10993=10:1995(F)
Évaluation biologique des dispositifs médicaux -
Partie 10:
Essais d’irritation et de sensibilisation
après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent
1 Domaine d’application
le registre des Normes internationales en vigueur à un
moment donné.
La présente partie de NS0 10993 décrit les méthodes
d’essai
ISO 10993-I : 1992, Évaluation biologique des dispo-
sitifs médita ux - Partie 1: Lignes directrices pour le
a) pour évaluer le risque d’irritation que présentent
choix des essais.
les dispositifs et les matériaux qui les constituent;
b) pour évaluer le risque de sensibilisation que pré-
ISO 10993-I 2: --l) Évaluation biologique des dispo-
sentent les dispositifs et les matériaux qui les
sitifs médicaux l Partie 12: Préparation des échan-
constituent. tillons et matériaux de référence.
Ces méthodes d’essais sont recommandées pour la
3 Définitions
plupart des catégories de dispositifs et de modes de
contact donnés dans I’ISO 10993-I. Dans la liste des
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 10993,
essais, choisir ceux qui sont en rapport avec I’utili-
les définitions données dans I’ISO 10993-I ainsi que
sation finale du dispositif. II est également indiqué des
les définitions suivantes s’appliquent.
lignes directrices sur la préparation des matériaux
concernant spécifiquement les essais précités.
3.1 sensibilisation (allergique par contact);
NOTE 1 L’annexe D donne des lignes directrices sur la
hypersensibilité retardée par contact: Réaction
conduite d’essais supplémentaires qui peuvent être spécifi-
allergique faisant intervenir des systèmes immuno-
quement requis pour l’évaluation de l’irritation orale,
logiques qui ont été activés par une exposition
rectale, pénienne et vaginale.
préalable.
3.2 irritation: Réaction inflammatoire localisée à
une application unique ou à l’application répétée ou
2 Références normatives
continue de la substance soumise à l’essai, sans mise
en cause d’un mécanisme immunologique.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
3.3 aedème: Gonflement dû à l’infiltration anormale
constituent des dispositions valables pour la présente
d’un fluide dans la peau.
partie de I’ISO 10993. Au moment de la publication,
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute norme
3.4 érythème: Rougissement de la peau ou d’une
est sujette à révision, et les parties prenantes des
membrane muqueuse.
accords fondés sur la présente partie de I’ISO 10993
sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les
3.5 escarre: Croûte ou lividité de la peau.
éditions les plus récentes des normes indiquées ci-
1) À publier.
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
3.6 corrosion: Détérioration irréversible des tissus Dans la troisième étape, des études sur la toxicité
au point de contact avec la peau, par suite de aiguë sont entreprises in vivo pour étudier des maté-
riaux qui n’ont pas déjà été classées comme des
l’application d’une substance à l’essai.
irritants sévères ou des sensibilisateurs puissants au
cours des étapes a) ou b). Les matériaux qui ne
ouverte représentant une perte
3.7 ulcération: Plaie
présentent pas de risque de toxicité aiguë peuvent
des tissus superficiels.
faire l’objet d’une évaluation plus approfondie avec
exposition répétée.
38 . nécrose: Mort de cellules et/ou de tissus.
II n’existe actuellement aucune méthode d’essai in
3.9 témoin négatif: Substance qui ressemble étroi-
vitro approuvée (en dehors des balayages simples)
tement par sa forme à la substance étudiée et qui,
pour détecter les irritants ou les sensibilisateurs; par
soumise à l’essai conformément à la présente partie
conséquent, les lignes directrices sont fournies pour
de I’ISO 10993, ne se révèle ni irritante, ni sensibi-
la conduite d’essais in vivo sur des espèces autres
lisatrice.
que l’espèce humaine.
3.10 témoin positif: Substance qui, soumise à
II n’est pas nécessaire d’utiliser des témoins positifs
l’essai conformément à la présente partie de
pour chaque essai in vivo. Un témoin positif doit être
I’ISO 10993, donne une réaction d’irritation ou de
employé périodiquement pour valider le système
sensibilisation reproductible.
d’essai et démontrer une réaction positive.
3.11 solvant: Substance (produit chimique, exci-
Si une évaluation n’est pas possible par les étapes ci-
pient, milieu, etc.) utilisée pour humidifier, diluer,
dessus, il convient d’envisager des essais non invasifs
mettre en suspension, extraire ou dissoudre la subs-
sur l’homme.
tance soumise à l’essai.
3.12 substance témoin: Solvant utilisé pour humi-
difier, diluer, mettre en suspension, extraire ou dis-
5 Essais d’irritation
soudre la substance étudiée et qui est soumis aux
essais en même temps que la substance étudiée
5.1 Facteurs à prendre en considération lors de
humidifiée, diluée, mise en suspension, extraite ou
la conception et du choix des essais
dissoute.
Les facteurs affectant les résultats des études d’irrita-
tion comportent
4 Principes généraux, approche par étapes
a) la compresse d’essai;
La présente partie de I’ISO 10993 préconise une
approche qui peut être composée des étapes
b) le degré d’occlusion;
suivantes:
c) l’application de la substance soumise à l’essai;
a) étude de la littérature;
d) la zone d’application;
b) essais in vitro (s’il en existe et s’ils ont été
e) la durée de l’exposition;
approuvés);
f) les techniques employées pour évaluer l’essai.
essais in vivo;
c)
essais non invas ifs sur I’hom me/essais cliniques.
dl Des informations complémentaires d’ordre général
figurent dans l’annexe E.
La première étape est une étude de la littérature et
elle doit comporter une évaluation des caractéris-
Tandis qu’une souplesse accrue permet au chercheur
tiques chimiques et physiques ainsi qu’une informa-
d’améliorer la sensibilité de l’essai pour simuler les
tion sur les produits chimiques et les matériaux
conditions d’utilisation et d’exposition de la popu-
structurellement associés. S’ils ne sont pas déjà
lation, l’homogénéité des modes opératoires contri-
connus, le pH et le pKa du matériau (liquide, solution
bue a la comparabilité des résultats des essais avec
ou extraits du matériau) doivent être mesurés avant
des matériaux différents provenant de laboratoires
tout essai in vivo ou in vitro.
différents.
La seconde étape prévoit des essais in vitro. Ces
Des dispositions ont été incluses dans les modes
derniers doivent toujours être envisagés de préfé-
opératoires d’essai pour l’évaluation des dispositifs et
rence aux essais in vivo qu’ils doivent remplacer,
des matériaux dont l’exposition est répétée et/ou
chaque fois que de nouvelles méthodes in vitro
prolongée. II convient que le chercheur, en consul-
apparaissent et sont approuvées.
tation avec le fabricant du dispositif, conçoive l’étude
2
---------------------- Page: 8 ----------------------
0 ISO ISO 10993=10:1995(F)
de manière à exagérer le contact (temps et/ou Pour les matériaux solides ou liquides, sauf si une
concentration) prévu en situation clinique. Bien que réaction bien définie a été observée, au moins deux
l’utilisation d’une concentration ou d’un extrait exa- animaux supplémentaires doivent être utilisés. Pour
géré de matériau soit acceptable, il convient d’en tenir les extraits, au moins deux animaux supplémentaires
compte lors de l’interprétation des résultats. par extrait doivent être utilisés.
Pour les produits destinés à être utilisés en grandes
Si, lors de l’essai avec au moins trois animaux, la
quantités sur peau normale ou anormale, aucun risque
réaction est douteuse ou équivoque, des essais
sérieux n’est généralement accepté; cependant, mal-
complémentaires doivent être envisagés.
gré leur tendance à irriter, un grand nombre de
produits sont tout à fait acceptables en raison des
5.2.4 Mode opératoire
avantages qui leur sont inhérents.
Si le pH du matériau soumis à l’essai est inférieur ou 5.2.4.1 Préparation des animaux
égal à 2 ou supérieur ou égal à 11,5, le matériau en
La veille de l’essai, tondre avec soin la fourrure sur le
question peut être déclaré irritant et des essais
dos des animaux sur une distance suffisante des deux
complémentaires sont superflus. Cependant, les
côtés de l’épine dorsale pour permettre l’application
résultats des expériences suggèrent que l’acidité et
et l’observation de toutes les zones d’essai (environ
I’alcalinité du matériau soumis à l’essai ne sont pas
10 cm x 15 cm). N’utiliser que des animaux dont la
les seuls facteurs à prendre en considération pour
peau est intacte et saine.
juger de la capacité d’une substance à affecter grave-
ment la santé. La concentration du matériau soumis à
NOTE 2 L’abrasion de la zone d’essai n’est pas nécessaire
l’essai, la durée du contact et de nombreuses autres
car l’expérience montre que les réactions sur les zones
caractéristiques physiques et chimiques sont égale-
abrasées et sur les zones non abrasées sont identiques.
ment importantes.
Si une exposition répétée est requise, suivre le mode
Étant donné que les concentrations des doses des
opératoire de 52.42, 5.2.4.3 ou 5.2.4.4, répétée sur
modes opératoires d’essai peuvent être exagérées,
un maximum de 21 jours.
un essai positif n’exclut pas nécessairement I’utilisa-
tion du matériau en question.
5.2.4.2 Échantillon en poudre ou liquide
5.2 Essai d‘irritation de la peau
Appliquer 0,5 g ou 0,5 ml du matériau soumis à l’essai
directement sur chaque zone d’essai de la peau selon
5.2.1 Principe les indications de la figure 1. Si la substance est une
poudre, elle doit être légèrement humidifiée avec de
Évaluation du risque d’irritation dermique que pré- l’eau ou un autre solvant approprié avant l’application.
sente le matériau soumis à l’essai.
Couvrir les zones d’application d’un pansement non
occlusif (par exemple une compresse de gaze) de
5.2.2 Matériau soumis à l’essai
25 mm x 25 mm, puis envelopper la zone d’applica-
tion d’un bandage semi-occlusif qui doit être maintenu
Si le matériau soumis à l’essai est un solide ou un
pendant un minimum de 4 h. À la fin de cette période
liquide, il doit être préparé conformément à
de contact, enlever les pansements et repérer la
l’annexe A.
position des zones. Éliminer les résidus de la subs-
tance étudiée par les moyens appropriés, tels que
Si le matériau doit être soumis à l’essai sous forme
lavage à l’eau tiède ou avec tout autre solvant appro-
d’extrait, il doit être préparé conformément à
prié non irritant, et sécher soigneusement.
l’annexe B.
5.2.4.3 Extraits et agents d‘extraction
5.2.3 Les animaux et leur élevage
Appliquer l’extrait ou les extraits appropriés sur les
Des lapins albinos, adultes, sains et jeunes, des deux
compresses de gaze quatre plis de 25 mm x 25 mm
sexes et de même race pesant au minimum 2 kg
(O,5 ml par compresse), une compresse de gaze étant
doivent être utilisés.
appliquée sur chaque côté de l’animal selon les
indications de la figure 1. Appliquer une compresse de
Les animaux doivent être acclimatés et soignés
gaze témoin humidifié avec le milieu d’extraction sur
conformément à l’annexe C.
l’autre côté.
Au départ, un animal doit être utilisé pour évaluer le
matériau soumis à l’essai.
Envelopper la zone d’application d’un bandage semi-
occlusif qui doit être maintenu pendant un minimum
Une réaction bien définie chez un animal évite la
de 4 h. A la fin de cette période de contact, enlever
nécessité de poursuivre les essais.
les pansements et repérer la position des zones.
3
---------------------- Page: 9 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
Éliminer les résidus de la substance soumise à l’essai pendant un minimum de 4 h. À la fin de cette période
par les moyens appropriés, tels que lavage à l’eau de contact, enlever les pansements et repérer la
tiède ou avec tout autre solvant approprié non irritant, position des zones. Éliminer les résidus de la subs-
et sécher soigneusement. tance soumise à l’essai par les moyens appropriés,
tels que lavage à l’eau tiède ou avec tout autre solvant
approprié non irritant, et sécher soigneusement.
5.2.4.4 Échantillon solide
5.2.5 Observation des animaux
Appliquer les échantillons du matériau soumis à
l’essai directement sur la peau des côtés de chaque
Pour les études de toxicité aiguë (une seule exposi-
lapin selon les indications de la figure 1. De la même
tion), noter l’aspect de chaque zone d’application à
manière, appliquer les échantillons témoins sur cha-
1 h, 24 h, 48 h et 72 h après avoir enlevé les
que lapin.
compresses. La période d’observation peut être pro-
longée en cas de lésions persistantes, afin de déter-
Lorsqu’on fait un essai avec des solides (qui peuvent
miner s’il s’agit de lésions réversibles ou irréversibles,
être pulvérisés si on le juge nécessaire), la substance
mais ne doit pas dépasser 14 jours.
soumise à l’essai doit être suffisamment humidifiée
avec de l’eau ou, suivant le cas, avec un autre solvant,
pour assurer un bon contact avec la peau. En cas Pour l’exposition répétée, noter l’aspect de la zone
d’utilisation de solvants, l’influence du solvant sur d’application 1 h après avoir enlevé les compresses et
l’irritation de la peau par la substance soumise à immédiatement avant l’application suivante. Après la
l’essai doit être prise en considération. dernière exposition, noter l’aspect de chaque zone
d’application 1 h, 24 h, 48 h et 72 h après avoir enlevé
les compresses. La période d’observation peut être
Couvrir les zones d’application de pansements non
prolongée en cas de lésions persistantes, afin de
occlusifs de 25 mm x 25 mm (par exemple une com-
déterminer s’il s’agit de lésions réversibles ou irréver-
presse de gaze) puis envelopper la zone d’application
sibles, mais ne doit pas dépasser 14 jours.
d’un bandage semi-occlusif qui doit être maintenu
Region dorsale tondue
Zone intacte d’essai
Zone intacte d’essai
/- Zone intacte temoin l)
Zone intacte témoin
+El rr
1) Si la préparation de l’echantillon Mcessite ce type de temoin
- Position des zones d’application sur la peau
Figure 1
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F)
0 ISO
veiller la guérison ne sont pas utilisées pour cette
Décrire et classer les réactions d’érythème et
détermination.
d’œdème de la peau selon le système de classifi-
cation donné dans le tableau 1 pour chaque zone
d’application et à chaque intervalle de temps et Faire la somme des résultats obtenus pour chacun
enregistrer les résultats pour le procès-verbal d’essai. des animaux et diviser le total par le nombre des
animaux. Cette valeur est l’indice d’irritation primaire.
NOTE 3 Dans certains cas, on peut recourir a des tech-
niques histologiques non invasives.
Pour l’exposition répétée, déterminer l’indice d’irrita-
tion cumulé en procédant de la manière suivante.
- Système de classification des réactions
Tableau 1
de la peau
Pour chaque animal, faire la somme des résultats
d’irritation (pour à la fois érythème et oedème), à la fin
Classification
Réaction
de chaque période prescrite. Diviser le total obtenu
numérique
par le nombre total des observations pour obtenir le
Formation d’érythème et d’escarre
résultat d’irritation par animal.
Pas d’érythème
Faire la somme des résultats d’irritation de chacun
Très léger érythème (à peine per-
des animaux et diviser par le nombre total des
ceptible)
animaux. La valeur obtenue est l’indice d’irritation
Érythème bien défini
cumulé.
Érythème modéré
Érythème grave (couleur rouge bet-
L’indice d’irritation cumulé est alors comparé aux
terave) à formation d’escarre empê-
catégories d’indices d’irritation cumulés définies dans
chant la dégradation de l’érythème
le tableau 2 et la catégorie appropriée est enregistrée
Formation d’oedème
pour le rapport.
Pas d’oedème
NOTE 4 Les catégories d’indices d’irritation cumulés ont
CEdème très léger (à peine percep-
pour base les informations associant l’indice d’irritation
tible)
primaire (IIP) pour les produits chimiques chez les lapins à
Edème bien défini (bords de la zone
la réaction d’irritation primaire chez l’homme pour un
bien délimités par un gonflement
certain nombre de produits chimiques qui ont été essayés
net)
sur les deux espèces.
3
Edème modéré (gonflement d’envi-
ron 1 mm)
Pour toute réaction, déterminer la réaction d’irritation
Edème grave (gonflement de plus
maximale, le délai d’apparition de la réaction et le délai
4
de 1 mm se prolongeant au-delà de
de réaction maximale.
la zone d’exposition)
L’indice d’irritation primaire ou l’indice d’irritation
Résultat total possible pour l’irritation 8
cumulé sont caractérisés par l’un des nombres et par
NOTE - Toute autre modification préjudiciable sur les zones de
l’une des descriptions du tableau 2.
peau concernées doit être enregistrée et consignée dans le
rapport.
Tableau 2 - Catégories de réactions d’irritation chez
le lapin
5.2.6 Évaluation des résultats
Résultat moyen
Catégorie de la réaction
En cas d’exposition aiguë, déterminer l’indice d’irrita-
Négligeable 0 à 0,4
tion primaire (IIP) en procédant de la manière sui-
vante.
Légère 0,5 à 1,9
Modérée 2 à 4,9
Pour chaque animal, faire la somme des résultats
d’irritation primaire obtenus avec le matériau étudié
5à8
Grave
pour les réactions d’oedème et d’érythème à la fin de
chaque période prescrite et diviser le résultat par le
nombre total des observations (six; deux à la fin de
5.2.7 Présentation des résultats
chaque période prescrite). Si des excipients témoins
sont utilisés, calculer le résultat d’irritation primaire
Le rapport d’essai doit comporter
pour l’excipient témoin et soustraire ce résultat du
résultat du matériau soumis à essai pour obtenir le
a) une description du (ou des) matériau(x) ou du
résultat d’irritation primaire.
dispositif soumis à essai;
b) l’utilisation ou l’application auxquelles sont desti-
N’utiliser pour les calculs que les observations faites
nés le (ou les) matériau(x) ou le dispositif soumis à
au bout de 24 h, 48 h et 72 h. Les observations faites
l’essai;
avant l’administration ou au-delà de 72 h pour sur-
5
---------------------- Page: 11 ----------------------
0 ISO
ISO 1099340:1995(F)
Si le matériau soumis à l’essai est tel qu’il ne puisse
c) une description détaillée de la méthode utilisée
être appliqué que sous forme d’extrait, préparer les
pour préparer le matériau ou le dispositif soumis à
extraits selon les indications de l’annexe B. Instiller un
essai;
aliquote de 0,l ml de l’extrait dans le sac conjonctival
les animaux de l’essai;
dl
inférieur d’un œil.
la méthode d’application sur les zones d’essai;
e)
Préparer les substances témoins dans des conditions
identiques à celles décrites ci-dessus, en utilisant et le
f) la manière dont l’examen visuel des zones concer-
solvant polaire, et le solvant non polaire, en l’absence
nées a été effectué et un enregistrement des
de matériau soumis à l’essai.
observations;
g) l’évaluation des résultats.
5.3.4 Les animaux et leur élevage
Utiliser des lapins albinos, adultes jeunes et sains, des
5.3 Essai d’irritation oculaire
deux sexes et de même race, pesant entre 2 kg et
.
3 kg
5.3.1 Principe
Les animaux doivent être acclimatés et soignés
Évaluation du risque d’irritation oculaire que présen te
conformément aux modes opératoires prescrits dans
le matériau so umis à l’essai.
l’annexe C.
5.3.2 Matériaux exclus de l’essai
r un animal pour évaluer le matériau
Au départ, utilise
soumis à l’essai.
Les matériaux et/ou produits finaux dont une étude
dermique a démontre des propriétés corrosives
Une réaction bien définie chez un animal ne nécessite
nettes ou un pouvoir d’irritation grave n’ont pas à faire
pas la poursuite des essais.
l’objet d’essais complémentaires d’irritation oculaire.
Les substances fortement acides ou alcalines (pH G 2
Pour les matériaux solides ou liquides, sauf s’il a été
ou pH 2 11,5) ne doivent pas être soumises à ces
observé une réaction bien définie, prévoir au mini-
essais car leurs propriétés corrosives sont prévisibles.
mum deux animaux supplémentaires. Pour les
Ces produits doivent être considérés comme irritants
extraits, prévoir au minimum deux animaux supplé-
pour les yeux.
mentaires par extrait.
5.3.3 Matériau soumis à l’essai
Si, lors de l’essai avec au moins trois animaux, la
réaction est douteuse ou équivoque des essais
Si le matériau soumis à l’essai est un liquide, instiller
complémentaires doivent être envisagés.
0,l ml de cette substance non diluée dans le sac
conjonctival inférieur d’un œil.
5.3.5 Mode opératoire
Si le matériau soumis à l’essai e
...
Iso
NORME
10993-10
INTERNATIONALE
Première édition
1995-03-I 5
Évaluation biologique des dispositifs
médicaux -
Partie 10:
Essais d’irritation et de sensibilisation
Biological evaluation of medical devices -
Part 10: Tests for irritation and sensitization
Numéro de réfbence
ISO 10993-I 0: 1995(F)
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ISO 1099340:1995(F)
Sommaire
Page
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
1 Domaine d’application
..,.............................................................. 1
2 Références normatives
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
3 Définitions
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
4 Principes généraux, approche par étapes
2
5 Essais d’irritation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5.1 Facteurs a prendre en consideration lors de la conception et
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
du choix des essais
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
5.2 Essai d’irritation de la peau
6
5.3 Essai d’irritation oculaire . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
5.4 Essai de réactivité intracutanée (intradermique)
6 Essais de sensibilisation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
6.1 Facteurs à prendre en considération lors de la conception et du
choix des essais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
6.2 Essai de maximisation de sensibilisation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
6.3 Essai de sensibilisation avec système occlusif
Annexes
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
A Préparation des matériaux pour les essais
B Méthode d’extraction des matériaux pour les essais biologiques 17
Les animaux et leur élevage . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
C
Essais d’irritation supplémentaires . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
D
.................................................................. 28
E Informations générales
.................................................................................. 31
F Bibliographie
0 ISO 1995
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun
procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans
.
l’accord Rcrit de l’editeur.
Organisation internationale de normalisation
Case postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 0 Suisse
Imprimé en Suisse
ii
---------------------- Page: 2 ----------------------
0 ISO ISO 10993=10:1995(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comité technique créé a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO
collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale
(CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comités membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale ISO 10993-10 a été élaborée par le comité
technique lSO/TC 194, Évaluation biologique des dispositifs médicaux.
L’ISO 10993 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre
général Évaluation biologique des dispositifs médicaux:
- Partie 1: Lignes directrices pour le choix des essais
- Partie 2: Exigences concernant la protection des animaux
- Partie 3: Essais concernant la génotoxicité, la cancérogénicité et la
toxicité sur la reproduction
- Partie 4: Choix des essais concernant les interactions avec le sang
- Partie 5: Essais de cyto toxicité: méthodes in vitro
- Partie 6: Essais concernant les effets locaux après implantation
- Partie 7: Résidus de stérilisation à I ‘oxyde d’é thyène
- Partie 9: Dégradation des matériaux relative aux essais biologiques
[Rapport technique]
- Partie 10: Essais d’irritation et de sensibilisation
- Partie II: Essais de toxicité systémique
- Partie 72: Préparation des échantillons et matériaux de référence
-
Partie 13: Identification et quan tification de produits de dégradation
de polymères
- Partie 14: Identification et quan tification de produits de dégradation
de céramiques
- Partie 7 5: Identification et quan tification de produits de dégradation
de métaux et alliages revêtus et non revêtus
. . .
III
---------------------- Page: 3 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
- Partie 76: Lignes directrices générales concernant la conception de
l’étude toxicocinétique des produits de dégradation et des sub-
stances relargables
- Partie 17: Résidus de glutaraldéhyde et de formaldéhyde dans des
dispositifs médicaux stérilisés industriellement
Les prochaines parties traiteront des autres aspects relatifs aux essais
biologiques.
La présente partie de I’ISO 10993 est le résultat de l’harmonisation de
nombreuses normes et lignes directrices, y compris de la norme
britannique BS 5736, des lignes directrices de I’OCDE, de la Pharmacopée
des États-Unis et de la Pharmacopée européenne. Elle vise à constituer le
document global de référence pour la sélection et la conduite des essais
permettant d’évaluer les réactions d’irritation et de sensibilisation au
matériau et la sécurité du dispositif.
Les annexes A, B et C font partie intégrante de la présente partie de
I’ISO 10993. Les annexes D, E et F sont données uniquement à titre
d’information.
---------------------- Page: 4 ----------------------
0 ISO ISO 10993-10:1995(F)
Introduction
La présente partie de I’ISO 10993 évalue les risques éventuels dus au
contact des produits chimiques libérés par des dispositifs et pouvant
provoquer une irritation de la peau et des muqueuses, une irritation des
yeux et une sensibilisation retardée par contact.
Certains matériaux contenus dans ces dispositifs ont fait l’objet d’essais,
et le risque d’irritation ou de sensibilisation de la peau ou des muqueuses
qu’ils présentent a été documenté. D’autres matériaux ainsi que leurs
constituants chimiques n’ont pas fait l’objet d’essais et peuvent agir
différemment lorsque des tissus biologiques y sont exposés. II appartient
au fabricant d’évaluer le potentiel de toxicité humaine de chaque dispositif
avant de le commercialiser.
Traditionnellement, des essais limités sur les petits animaux sont
effectués avant les essais sur l’homme, afin de faciliter la prévision de la
réaction humaine. Plus récemment, des essais in vitro ont été introduits
comme une alternative. Malgré les progrès réalisés et les efforts
considérables déployés dans ce sens, l’examen des résultats suggére que
la panoplie ne comporte à ce jour aucun essai in vitro suffisamment
satisfaisant pour éliminer la prescription d’essais in vivo. Lorsque c’est
possible, l’emploi préliminaire de méthodes in vitro est encouragé comme
essais de sélection préalables aux essais sur les animaux. Afin de réduire
le nombre des animaux employés, les présentes normes utilisent une
approche par étapes, avec examen et analyse des résultats des essais à
chaque étape.
II incombe au chercheur de conduire ces études en employant de bonnes
pratiques de laboratoire, conformes à la réglementation relative au bien-
être des animaux. Étant donné que le nombre des animaux est limité, les
informations obtenues peuvent ne pas être suffisantes pour justifier
l’application des méthodes statistiques.
---------------------- Page: 5 ----------------------
Page blanche
---------------------- Page: 6 ----------------------
NORME INTERNATIONALE o ISO
ISO 10993=10:1995(F)
Évaluation biologique des dispositifs médicaux -
Partie 10:
Essais d’irritation et de sensibilisation
après. Les membres de la CEI et de I’ISO possèdent
1 Domaine d’application
le registre des Normes internationales en vigueur à un
moment donné.
La présente partie de NS0 10993 décrit les méthodes
d’essai
ISO 10993-I : 1992, Évaluation biologique des dispo-
sitifs médita ux - Partie 1: Lignes directrices pour le
a) pour évaluer le risque d’irritation que présentent
choix des essais.
les dispositifs et les matériaux qui les constituent;
b) pour évaluer le risque de sensibilisation que pré-
ISO 10993-I 2: --l) Évaluation biologique des dispo-
sentent les dispositifs et les matériaux qui les
sitifs médicaux l Partie 12: Préparation des échan-
constituent. tillons et matériaux de référence.
Ces méthodes d’essais sont recommandées pour la
3 Définitions
plupart des catégories de dispositifs et de modes de
contact donnés dans I’ISO 10993-I. Dans la liste des
Pour les besoins de la présente partie de I’ISO 10993,
essais, choisir ceux qui sont en rapport avec I’utili-
les définitions données dans I’ISO 10993-I ainsi que
sation finale du dispositif. II est également indiqué des
les définitions suivantes s’appliquent.
lignes directrices sur la préparation des matériaux
concernant spécifiquement les essais précités.
3.1 sensibilisation (allergique par contact);
NOTE 1 L’annexe D donne des lignes directrices sur la
hypersensibilité retardée par contact: Réaction
conduite d’essais supplémentaires qui peuvent être spécifi-
allergique faisant intervenir des systèmes immuno-
quement requis pour l’évaluation de l’irritation orale,
logiques qui ont été activés par une exposition
rectale, pénienne et vaginale.
préalable.
3.2 irritation: Réaction inflammatoire localisée à
une application unique ou à l’application répétée ou
2 Références normatives
continue de la substance soumise à l’essai, sans mise
en cause d’un mécanisme immunologique.
Les normes suivantes contiennent des dispositions
qui, par suite de la référence qui en est faite,
3.3 aedème: Gonflement dû à l’infiltration anormale
constituent des dispositions valables pour la présente
d’un fluide dans la peau.
partie de I’ISO 10993. Au moment de la publication,
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute norme
3.4 érythème: Rougissement de la peau ou d’une
est sujette à révision, et les parties prenantes des
membrane muqueuse.
accords fondés sur la présente partie de I’ISO 10993
sont invitées à rechercher la possibilité d’appliquer les
3.5 escarre: Croûte ou lividité de la peau.
éditions les plus récentes des normes indiquées ci-
1) À publier.
---------------------- Page: 7 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
3.6 corrosion: Détérioration irréversible des tissus Dans la troisième étape, des études sur la toxicité
au point de contact avec la peau, par suite de aiguë sont entreprises in vivo pour étudier des maté-
riaux qui n’ont pas déjà été classées comme des
l’application d’une substance à l’essai.
irritants sévères ou des sensibilisateurs puissants au
cours des étapes a) ou b). Les matériaux qui ne
ouverte représentant une perte
3.7 ulcération: Plaie
présentent pas de risque de toxicité aiguë peuvent
des tissus superficiels.
faire l’objet d’une évaluation plus approfondie avec
exposition répétée.
38 . nécrose: Mort de cellules et/ou de tissus.
II n’existe actuellement aucune méthode d’essai in
3.9 témoin négatif: Substance qui ressemble étroi-
vitro approuvée (en dehors des balayages simples)
tement par sa forme à la substance étudiée et qui,
pour détecter les irritants ou les sensibilisateurs; par
soumise à l’essai conformément à la présente partie
conséquent, les lignes directrices sont fournies pour
de I’ISO 10993, ne se révèle ni irritante, ni sensibi-
la conduite d’essais in vivo sur des espèces autres
lisatrice.
que l’espèce humaine.
3.10 témoin positif: Substance qui, soumise à
II n’est pas nécessaire d’utiliser des témoins positifs
l’essai conformément à la présente partie de
pour chaque essai in vivo. Un témoin positif doit être
I’ISO 10993, donne une réaction d’irritation ou de
employé périodiquement pour valider le système
sensibilisation reproductible.
d’essai et démontrer une réaction positive.
3.11 solvant: Substance (produit chimique, exci-
Si une évaluation n’est pas possible par les étapes ci-
pient, milieu, etc.) utilisée pour humidifier, diluer,
dessus, il convient d’envisager des essais non invasifs
mettre en suspension, extraire ou dissoudre la subs-
sur l’homme.
tance soumise à l’essai.
3.12 substance témoin: Solvant utilisé pour humi-
difier, diluer, mettre en suspension, extraire ou dis-
5 Essais d’irritation
soudre la substance étudiée et qui est soumis aux
essais en même temps que la substance étudiée
5.1 Facteurs à prendre en considération lors de
humidifiée, diluée, mise en suspension, extraite ou
la conception et du choix des essais
dissoute.
Les facteurs affectant les résultats des études d’irrita-
tion comportent
4 Principes généraux, approche par étapes
a) la compresse d’essai;
La présente partie de I’ISO 10993 préconise une
approche qui peut être composée des étapes
b) le degré d’occlusion;
suivantes:
c) l’application de la substance soumise à l’essai;
a) étude de la littérature;
d) la zone d’application;
b) essais in vitro (s’il en existe et s’ils ont été
e) la durée de l’exposition;
approuvés);
f) les techniques employées pour évaluer l’essai.
essais in vivo;
c)
essais non invas ifs sur I’hom me/essais cliniques.
dl Des informations complémentaires d’ordre général
figurent dans l’annexe E.
La première étape est une étude de la littérature et
elle doit comporter une évaluation des caractéris-
Tandis qu’une souplesse accrue permet au chercheur
tiques chimiques et physiques ainsi qu’une informa-
d’améliorer la sensibilité de l’essai pour simuler les
tion sur les produits chimiques et les matériaux
conditions d’utilisation et d’exposition de la popu-
structurellement associés. S’ils ne sont pas déjà
lation, l’homogénéité des modes opératoires contri-
connus, le pH et le pKa du matériau (liquide, solution
bue a la comparabilité des résultats des essais avec
ou extraits du matériau) doivent être mesurés avant
des matériaux différents provenant de laboratoires
tout essai in vivo ou in vitro.
différents.
La seconde étape prévoit des essais in vitro. Ces
Des dispositions ont été incluses dans les modes
derniers doivent toujours être envisagés de préfé-
opératoires d’essai pour l’évaluation des dispositifs et
rence aux essais in vivo qu’ils doivent remplacer,
des matériaux dont l’exposition est répétée et/ou
chaque fois que de nouvelles méthodes in vitro
prolongée. II convient que le chercheur, en consul-
apparaissent et sont approuvées.
tation avec le fabricant du dispositif, conçoive l’étude
2
---------------------- Page: 8 ----------------------
0 ISO ISO 10993=10:1995(F)
de manière à exagérer le contact (temps et/ou Pour les matériaux solides ou liquides, sauf si une
concentration) prévu en situation clinique. Bien que réaction bien définie a été observée, au moins deux
l’utilisation d’une concentration ou d’un extrait exa- animaux supplémentaires doivent être utilisés. Pour
géré de matériau soit acceptable, il convient d’en tenir les extraits, au moins deux animaux supplémentaires
compte lors de l’interprétation des résultats. par extrait doivent être utilisés.
Pour les produits destinés à être utilisés en grandes
Si, lors de l’essai avec au moins trois animaux, la
quantités sur peau normale ou anormale, aucun risque
réaction est douteuse ou équivoque, des essais
sérieux n’est généralement accepté; cependant, mal-
complémentaires doivent être envisagés.
gré leur tendance à irriter, un grand nombre de
produits sont tout à fait acceptables en raison des
5.2.4 Mode opératoire
avantages qui leur sont inhérents.
Si le pH du matériau soumis à l’essai est inférieur ou 5.2.4.1 Préparation des animaux
égal à 2 ou supérieur ou égal à 11,5, le matériau en
La veille de l’essai, tondre avec soin la fourrure sur le
question peut être déclaré irritant et des essais
dos des animaux sur une distance suffisante des deux
complémentaires sont superflus. Cependant, les
côtés de l’épine dorsale pour permettre l’application
résultats des expériences suggèrent que l’acidité et
et l’observation de toutes les zones d’essai (environ
I’alcalinité du matériau soumis à l’essai ne sont pas
10 cm x 15 cm). N’utiliser que des animaux dont la
les seuls facteurs à prendre en considération pour
peau est intacte et saine.
juger de la capacité d’une substance à affecter grave-
ment la santé. La concentration du matériau soumis à
NOTE 2 L’abrasion de la zone d’essai n’est pas nécessaire
l’essai, la durée du contact et de nombreuses autres
car l’expérience montre que les réactions sur les zones
caractéristiques physiques et chimiques sont égale-
abrasées et sur les zones non abrasées sont identiques.
ment importantes.
Si une exposition répétée est requise, suivre le mode
Étant donné que les concentrations des doses des
opératoire de 52.42, 5.2.4.3 ou 5.2.4.4, répétée sur
modes opératoires d’essai peuvent être exagérées,
un maximum de 21 jours.
un essai positif n’exclut pas nécessairement I’utilisa-
tion du matériau en question.
5.2.4.2 Échantillon en poudre ou liquide
5.2 Essai d‘irritation de la peau
Appliquer 0,5 g ou 0,5 ml du matériau soumis à l’essai
directement sur chaque zone d’essai de la peau selon
5.2.1 Principe les indications de la figure 1. Si la substance est une
poudre, elle doit être légèrement humidifiée avec de
Évaluation du risque d’irritation dermique que pré- l’eau ou un autre solvant approprié avant l’application.
sente le matériau soumis à l’essai.
Couvrir les zones d’application d’un pansement non
occlusif (par exemple une compresse de gaze) de
5.2.2 Matériau soumis à l’essai
25 mm x 25 mm, puis envelopper la zone d’applica-
tion d’un bandage semi-occlusif qui doit être maintenu
Si le matériau soumis à l’essai est un solide ou un
pendant un minimum de 4 h. À la fin de cette période
liquide, il doit être préparé conformément à
de contact, enlever les pansements et repérer la
l’annexe A.
position des zones. Éliminer les résidus de la subs-
tance étudiée par les moyens appropriés, tels que
Si le matériau doit être soumis à l’essai sous forme
lavage à l’eau tiède ou avec tout autre solvant appro-
d’extrait, il doit être préparé conformément à
prié non irritant, et sécher soigneusement.
l’annexe B.
5.2.4.3 Extraits et agents d‘extraction
5.2.3 Les animaux et leur élevage
Appliquer l’extrait ou les extraits appropriés sur les
Des lapins albinos, adultes, sains et jeunes, des deux
compresses de gaze quatre plis de 25 mm x 25 mm
sexes et de même race pesant au minimum 2 kg
(O,5 ml par compresse), une compresse de gaze étant
doivent être utilisés.
appliquée sur chaque côté de l’animal selon les
indications de la figure 1. Appliquer une compresse de
Les animaux doivent être acclimatés et soignés
gaze témoin humidifié avec le milieu d’extraction sur
conformément à l’annexe C.
l’autre côté.
Au départ, un animal doit être utilisé pour évaluer le
matériau soumis à l’essai.
Envelopper la zone d’application d’un bandage semi-
occlusif qui doit être maintenu pendant un minimum
Une réaction bien définie chez un animal évite la
de 4 h. A la fin de cette période de contact, enlever
nécessité de poursuivre les essais.
les pansements et repérer la position des zones.
3
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ISO 10993-10:1995(F) 0 ISO
Éliminer les résidus de la substance soumise à l’essai pendant un minimum de 4 h. À la fin de cette période
par les moyens appropriés, tels que lavage à l’eau de contact, enlever les pansements et repérer la
tiède ou avec tout autre solvant approprié non irritant, position des zones. Éliminer les résidus de la subs-
et sécher soigneusement. tance soumise à l’essai par les moyens appropriés,
tels que lavage à l’eau tiède ou avec tout autre solvant
approprié non irritant, et sécher soigneusement.
5.2.4.4 Échantillon solide
5.2.5 Observation des animaux
Appliquer les échantillons du matériau soumis à
l’essai directement sur la peau des côtés de chaque
Pour les études de toxicité aiguë (une seule exposi-
lapin selon les indications de la figure 1. De la même
tion), noter l’aspect de chaque zone d’application à
manière, appliquer les échantillons témoins sur cha-
1 h, 24 h, 48 h et 72 h après avoir enlevé les
que lapin.
compresses. La période d’observation peut être pro-
longée en cas de lésions persistantes, afin de déter-
Lorsqu’on fait un essai avec des solides (qui peuvent
miner s’il s’agit de lésions réversibles ou irréversibles,
être pulvérisés si on le juge nécessaire), la substance
mais ne doit pas dépasser 14 jours.
soumise à l’essai doit être suffisamment humidifiée
avec de l’eau ou, suivant le cas, avec un autre solvant,
pour assurer un bon contact avec la peau. En cas Pour l’exposition répétée, noter l’aspect de la zone
d’utilisation de solvants, l’influence du solvant sur d’application 1 h après avoir enlevé les compresses et
l’irritation de la peau par la substance soumise à immédiatement avant l’application suivante. Après la
l’essai doit être prise en considération. dernière exposition, noter l’aspect de chaque zone
d’application 1 h, 24 h, 48 h et 72 h après avoir enlevé
les compresses. La période d’observation peut être
Couvrir les zones d’application de pansements non
prolongée en cas de lésions persistantes, afin de
occlusifs de 25 mm x 25 mm (par exemple une com-
déterminer s’il s’agit de lésions réversibles ou irréver-
presse de gaze) puis envelopper la zone d’application
sibles, mais ne doit pas dépasser 14 jours.
d’un bandage semi-occlusif qui doit être maintenu
Region dorsale tondue
Zone intacte d’essai
Zone intacte d’essai
/- Zone intacte temoin l)
Zone intacte témoin
+El rr
1) Si la préparation de l’echantillon Mcessite ce type de temoin
- Position des zones d’application sur la peau
Figure 1
---------------------- Page: 10 ----------------------
ISO 10993-10:1995(F)
0 ISO
veiller la guérison ne sont pas utilisées pour cette
Décrire et classer les réactions d’érythème et
détermination.
d’œdème de la peau selon le système de classifi-
cation donné dans le tableau 1 pour chaque zone
d’application et à chaque intervalle de temps et Faire la somme des résultats obtenus pour chacun
enregistrer les résultats pour le procès-verbal d’essai. des animaux et diviser le total par le nombre des
animaux. Cette valeur est l’indice d’irritation primaire.
NOTE 3 Dans certains cas, on peut recourir a des tech-
niques histologiques non invasives.
Pour l’exposition répétée, déterminer l’indice d’irrita-
tion cumulé en procédant de la manière suivante.
- Système de classification des réactions
Tableau 1
de la peau
Pour chaque animal, faire la somme des résultats
d’irritation (pour à la fois érythème et oedème), à la fin
Classification
Réaction
de chaque période prescrite. Diviser le total obtenu
numérique
par le nombre total des observations pour obtenir le
Formation d’érythème et d’escarre
résultat d’irritation par animal.
Pas d’érythème
Faire la somme des résultats d’irritation de chacun
Très léger érythème (à peine per-
des animaux et diviser par le nombre total des
ceptible)
animaux. La valeur obtenue est l’indice d’irritation
Érythème bien défini
cumulé.
Érythème modéré
Érythème grave (couleur rouge bet-
L’indice d’irritation cumulé est alors comparé aux
terave) à formation d’escarre empê-
catégories d’indices d’irritation cumulés définies dans
chant la dégradation de l’érythème
le tableau 2 et la catégorie appropriée est enregistrée
Formation d’oedème
pour le rapport.
Pas d’oedème
NOTE 4 Les catégories d’indices d’irritation cumulés ont
CEdème très léger (à peine percep-
pour base les informations associant l’indice d’irritation
tible)
primaire (IIP) pour les produits chimiques chez les lapins à
Edème bien défini (bords de la zone
la réaction d’irritation primaire chez l’homme pour un
bien délimités par un gonflement
certain nombre de produits chimiques qui ont été essayés
net)
sur les deux espèces.
3
Edème modéré (gonflement d’envi-
ron 1 mm)
Pour toute réaction, déterminer la réaction d’irritation
Edème grave (gonflement de plus
maximale, le délai d’apparition de la réaction et le délai
4
de 1 mm se prolongeant au-delà de
de réaction maximale.
la zone d’exposition)
L’indice d’irritation primaire ou l’indice d’irritation
Résultat total possible pour l’irritation 8
cumulé sont caractérisés par l’un des nombres et par
NOTE - Toute autre modification préjudiciable sur les zones de
l’une des descriptions du tableau 2.
peau concernées doit être enregistrée et consignée dans le
rapport.
Tableau 2 - Catégories de réactions d’irritation chez
le lapin
5.2.6 Évaluation des résultats
Résultat moyen
Catégorie de la réaction
En cas d’exposition aiguë, déterminer l’indice d’irrita-
Négligeable 0 à 0,4
tion primaire (IIP) en procédant de la manière sui-
vante.
Légère 0,5 à 1,9
Modérée 2 à 4,9
Pour chaque animal, faire la somme des résultats
d’irritation primaire obtenus avec le matériau étudié
5à8
Grave
pour les réactions d’oedème et d’érythème à la fin de
chaque période prescrite et diviser le résultat par le
nombre total des observations (six; deux à la fin de
5.2.7 Présentation des résultats
chaque période prescrite). Si des excipients témoins
sont utilisés, calculer le résultat d’irritation primaire
Le rapport d’essai doit comporter
pour l’excipient témoin et soustraire ce résultat du
résultat du matériau soumis à essai pour obtenir le
a) une description du (ou des) matériau(x) ou du
résultat d’irritation primaire.
dispositif soumis à essai;
b) l’utilisation ou l’application auxquelles sont desti-
N’utiliser pour les calculs que les observations faites
nés le (ou les) matériau(x) ou le dispositif soumis à
au bout de 24 h, 48 h et 72 h. Les observations faites
l’essai;
avant l’administration ou au-delà de 72 h pour sur-
5
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0 ISO
ISO 1099340:1995(F)
Si le matériau soumis à l’essai est tel qu’il ne puisse
c) une description détaillée de la méthode utilisée
être appliqué que sous forme d’extrait, préparer les
pour préparer le matériau ou le dispositif soumis à
extraits selon les indications de l’annexe B. Instiller un
essai;
aliquote de 0,l ml de l’extrait dans le sac conjonctival
les animaux de l’essai;
dl
inférieur d’un œil.
la méthode d’application sur les zones d’essai;
e)
Préparer les substances témoins dans des conditions
identiques à celles décrites ci-dessus, en utilisant et le
f) la manière dont l’examen visuel des zones concer-
solvant polaire, et le solvant non polaire, en l’absence
nées a été effectué et un enregistrement des
de matériau soumis à l’essai.
observations;
g) l’évaluation des résultats.
5.3.4 Les animaux et leur élevage
Utiliser des lapins albinos, adultes jeunes et sains, des
5.3 Essai d’irritation oculaire
deux sexes et de même race, pesant entre 2 kg et
.
3 kg
5.3.1 Principe
Les animaux doivent être acclimatés et soignés
Évaluation du risque d’irritation oculaire que présen te
conformément aux modes opératoires prescrits dans
le matériau so umis à l’essai.
l’annexe C.
5.3.2 Matériaux exclus de l’essai
r un animal pour évaluer le matériau
Au départ, utilise
soumis à l’essai.
Les matériaux et/ou produits finaux dont une étude
dermique a démontre des propriétés corrosives
Une réaction bien définie chez un animal ne nécessite
nettes ou un pouvoir d’irritation grave n’ont pas à faire
pas la poursuite des essais.
l’objet d’essais complémentaires d’irritation oculaire.
Les substances fortement acides ou alcalines (pH G 2
Pour les matériaux solides ou liquides, sauf s’il a été
ou pH 2 11,5) ne doivent pas être soumises à ces
observé une réaction bien définie, prévoir au mini-
essais car leurs propriétés corrosives sont prévisibles.
mum deux animaux supplémentaires. Pour les
Ces produits doivent être considérés comme irritants
extraits, prévoir au minimum deux animaux supplé-
pour les yeux.
mentaires par extrait.
5.3.3 Matériau soumis à l’essai
Si, lors de l’essai avec au moins trois animaux, la
réaction est douteuse ou équivoque des essais
Si le matériau soumis à l’essai est un liquide, instiller
complémentaires doivent être envisagés.
0,l ml de cette substance non diluée dans le sac
conjonctival inférieur d’un œil.
5.3.5 Mode opératoire
Si le matériau soumis à l’essai e
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.