ISO 26323:2009
(Main)Milk products — Determination of the acidification activity of dairy cultures by continuous pH measurement (CpH)
Milk products — Determination of the acidification activity of dairy cultures by continuous pH measurement (CpH)
ISO 26323|IDF 213:2009 specifies a method for the measurement of the acidification activity of lactic acid bacteria by continuous measurement of pH. The method is applicable to dairy starter cultures where these characteristic microorganisms are present. Two types of standardized milk are specified in the procedure: boiled milk with 9,5 % mass fraction dry matter (B-milk 9,5); and autoclaved milk with 9,5 % mass fraction dry matter (A-milk 9,5). It is possible that heat treatment of B-milk 9,5 does not inactivate all enzymes that are present, which can affect the activity of some cultures. In that case, cultures are tested with A-milk 9,5 in which all enzymes have been inactivated.
Produits laitiers — Détermination de l'activité acidifiante des cultures laitières par mesurage continu de pH (CpH)
General Information
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 26323
IDF
First edition
2009-07-01
Milk products — Determination of the
acidification activity of dairy cultures by
continuous pH measurement (CpH)
Produits laitiers — Détermination de l'activité acidifiante des cultures
laitières par mesurage continu de pH (CpH)
Reference numbers
IDF 213:2009(E)
©
ISO and IDF 2009
IDF 213:2009(E)
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. Neither the ISO Central
Secretariat nor the IDF accepts any liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies
and IDF national committees. In the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the ISO Central Secretariat at the
address given below.
© ISO and IDF 2009
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO or IDF at the respective
addresses below.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Published in Switzerland
ii © ISO and IDF 2009 – All rights reserved
IDF 213:2009(E)
Contents Page
Foreword .iv
Foreword .v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .1
4 Principle.2
5 Diluents, culture media and reagents .2
6 Apparatus.4
7 Sampling.5
8 Preparation.5
8.1 Milk preparation.5
8.2 Cleaning and calibration of pH electrodes .5
8.3 Protein and fat cleaning of the electrode.6
8.4 Stabilization and storage of the pH electrode .6
8.5 Calibration of the pH electrode .6
8.6 Disinfection of the pH electrode with ethanol .6
8.7 Decontamination of the pH electrode by heat treatment .6
9 Procedure.6
9.1 Frozen cultures.6
9.2 Freeze-dried products.8
9.3 Termination of the analysis.9
10 Precision.10
10.1 Interlaboratory test.10
10.2 Repeatability .10
10.3 Reproducibility .10
11 Test report.11
Annex A (informative) Interlaboratory test — A CpH ring trial.12
Bibliography.13
IDF 213:2009(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 26323⎪IDF 213 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF). It is being published jointly by ISO and
IDF.
iv © ISO and IDF 2009 – All rights reserved
IDF 213:2009(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a non-profit organization representing the dairy sector worldwide.
IDF membership comprises National Committees in every member country as well as regional dairy
associations having signed a formal agreement on cooperation with IDF. All members of IDF have the right to
be represented on the IDF Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the IDF National Committees casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 26323⎪IDF 213 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products. It is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the ISO-IDF Joint Action Team on Lactic acid bacteria and starters of the Standing
Committee on Microbiological methods of analysis under the aegis of its project leader, Mr. L. V. Jørgensen
(DK).
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 213:2009(E)
Milk products — Determination of the acidification activity of
dairy cultures by continuous pH measurement (CpH)
1 Scope
This International Standard specifies a method for the measurement of the acidification activity of lactic acid
bacteria by continuous measurement of pH.
NOTE The method is based on Reference [9].
The method is applicable to dairy starter cultures where these characteristic microorganisms are present.
Two types of standardized milk are specified in the procedure: boiled milk with 9,5 % mass fraction dry matter
(B-milk 9,5); and autoclaved milk with 9,5 % mass fraction dry matter (A-milk 9,5). It is possible that heat
treatment of B-milk 9,5 does not inactivate all enzymes that are present, which can affect the activity of some
cultures. In that case, cultures are tested with A-milk 9,5 in which all enzymes have been inactivated.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6887-5, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 5: Specific rules for the preparation of milk and
1)
milk products
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
acidification activity
ability of a dairy starter culture to acidify standardized milk determined according to the procedure described in
this International Standard
NOTE The acidification activity can be quantified by the following parameters.
a) t — The time it takes to start acidifying the standardized milk, i.e. time for pH to drop 0,08 pH-units from initial
a
pH (after 15 min). Time t is measured in minutes from the inoculation time, t = 0. If the software collects data every
a
4 min, t is determined by interpolation.
a
b) pH — The pH after t h (e.g. 4 h, 6 h, 12 h or 16 h) of acidification in the standardized milk at 30 °C, 37 °C, 40 °C or
t h
43 °C. The actual time for the parameter depends on the characteristics of the starter culture.
c) t — The time it takes to acidify the standardized milk to a certain pH, e.g. pH 4,50. The actual time for the
pH x
parameter depends on the characteristics of the starter culture and the application for which it is used.
1) Supersedes ISO 8261⎪IDF 122.
IDF 213:2009(E)
4 Principle
A specified quantity of starter culture is diluted and inoculated in a specified amount of standardized milk. The
inoculated culture is incubated at a specified constant temperature of 30 °C, 37 °C, 40 °C or 43 °C for a given
time depending on the characteristics of the starter culture. During incubation, the acidification activity is
measured by continuous pH measurements using a pH electrode and a data logger. When the fermentation
curve is obtained, a number of curve parameters can be calculated or extracted.
5 Diluents, culture media and reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled or
demineralized water or water of equivalent purity. The water shall be free of substances likely to inhibit or
influence the growth of microorganisms in the reconstituted milk. If chlorinated water is used, neutralize the
chlorine prior to use.
Observe the following rules for the water quality: the cell count shall be below 50 cell/ml and conductivity
below 5 µS/cm. Tests to determine the suitability of water for microbiological applications appear in
[5]
ISO/TS 11133-1 .
5.1 Basic materials
SAFETY PRECAUTIONS — Take the required safety precautions when using the electrode cleaner
(5.1.2), potassium chloride solution (5.1.3) or diaphragm cleaner (5.1.4) as these can irritate skin and
eyes.
5.1.1 Buffer solutions
5.1.1.1 Buffer solution of pH 4,00, capable of buffering at 20 °C; e.g. Merck/VWR CertiPUR (Order No.
2)
1.09475) or equivalent.
5.1.1.2 Buffer solution of pH 7,00, capable of buffering at 20 °C; e.g. Merck/VWR CertiPUR (Order No.
2)
1.09477) or equivalent.
5.1.2 Electrode cleaner, capable of cleaning the electrode; e.g. pepsin/HCl solution from Mettler Toledo
2)
(Order no. 9891) or equivalent.
5.1.3 Potassium chloride solution, of concentration c(KCl) = 3 mol/l; e.g. Mettler Toledo (Order
2)
no. 9823) or equivalent.
5.1.4 Diaphragm cleaner, capable of cleaning the diaphragm; e.g. thiourea/HCl solution from Mettler
2)
Toledo (Order no. 9892) or equivalent.
5.1.5 Ethanol solution, ϕ (C H OH) = 70 % volume fraction in water, used for disinfection.
2 5
5.1.6 Medium-heat, low fat, spray-dried milk powder. Use medium-heat, low fat, spray-dried milk powder
produced from milk of good quality and with no detectable antibiotics residues. The spray-dried milk powder
shall be of good microbiological quality (see Reference [8]) having a natural, pleasant taste and flavour of
fresh skimmed milk and shall consist of the components specified in Table 1.
2) Example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
International Standard and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of this product. Other products may
be used if they can be shown to give similar results.
2 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved
IDF 213:2009(E)
a 3)
Table 1 — Medium-heat, low fat, spray-dried milk powder compound , e.g. from Chr. Hansen
Mass fraction
Component
%
Milk protein 34 to 38
Lactose 48 to 56
Milk fat < 1,25
Ash 7 to 9
Moisture <4
Titratable acidity, lactic acid < 0,15
a
The pH of a 10 % mass fraction solution should be in the range 6,5 to 6,8.
5.2 Substrates
5.2.1 QC-Milk 9,5
5.2.1.1 Composition. Use only standardized milk with a specified dry matter content prepared from
spray-dried skimmed milk powder according to the composition in Table 2.
The prepared amount may be smaller than that specified in Table 2. However, do not prepare less
than ∼1,1 kg of milk. If using a small amount, use the analytical balance (6.1) to weigh the milk powder to the
nearest 1 mg.
The aim is to prepare milk with a dry matter content of 9,5 % ± 0,2 % mass fraction, similar to that of bottled
and sterilized milk.
Table 2 — Composition of milk made up from spray-dried milk powder
Mass
Component
kg
a
10,9 to 11,2
Medium-heat milk powder
Water 100,0
a
The quantity varies due to water content of milk powder
and water loss during the preparation and heat treatment.
5.2.1.2 Preparation. Dissolve the medium-heat milk powder in water for not more than 30 min. If needed,
warm the water up to 40 °C to completely dissolve the powder.
Dispense the milk obtained into cylindrical bottles to reach a volume of 200 ml after heat treatment. Check the
volume by weighing the bottle until it reaches a net mass of 207 g ± 2 g (total mass minus that of the bottle).
The density of QC-milk 9,5 is 1,033 g/ml.
Alternatively, dispense the milk obtained into cylindrical bottles to reach a mass of 200 g ± 2 g (net mass).
Compensate for the mass difference in the inoculation procedure.
3) Example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of users of this
International Standard and does not constitute an endorsement by either ISO or IDF of this product. Other products may
be used if they can be shown to give similar results.
IDF 213:2009(E)
5.2.2 Heat treatment of B-milk 9,5. Heat treat the prepared milk (5.2.1.2) according to the temperature
programme in Table 3.
Table 3 — Temperature programme for heat treating B-milk 9,5
Procedure Temperature Time
°C min
Heating > 99 ± 1 < 20
Holding 99 ± 1 30 ± 1
Cooling
99 ± 1 to 40 ± 5 < 40
Then, store the B-milk 9,5 obtained at below 7 °C for at least 16 h.
Record the evaporation during heat treatment and the tolerance of mass after the heat treatment.
5.2.3 Shelf life of B-milk 9,5. Before use, store the B-milk 9,5 (5.2.2) for a minimum of 16 h and a
maximum of 12 d.
Enzymes such as proteases may not have been inactivated and can affect acidification activity of some
cultures.
5.2.4 Heat treatment of A-milk 9,5. Use A-milk 9,5 for cultures where B-milk 9,5 does not give the required
repeatability, e.g. due to residual protease activity.
Sterilize the prepared milk (5.2.1.2) according to the temperature programme in Table 4.
Table 4 — Temperature programme for heat treating A-milk 9,5
Procedure Temperature Time
°C min
Heating
115 ± 1 < 20
Holding 115 ± 1 15 ± 1
Cooling 115 ± 1 to 40 ± 5 < 40
Then, store the A-milk 9,5 obtained at below 7 °C for at least 16 h.
Record the evaporation during heat treatment and the tolerance of mass after that treatment.
5.2.5 Shelf life of A-milk 9,5. Before use, store the A-milk 9,5 (5.2.4) for a minimum of 16 h and a
maximum of 12 d.
6 Apparatus
Usual microbiological laboratory equipment and, in particular, the equipment required for the preparation of
test samples and dilutions specified in ISO 6887-5, as well as the following.
6.1 Analytical balances, capable of weighing to the nearest 0,01 g and 1 mg (see 5.2.1.1), respectively.
6.2 Autoclave, capable of operating at 99 °C ± 1 °C and 115 °C ± 1 °C.
4 © ISO and IDF 2009 – All rights reserved
IDF 213:2009(E)
6.3 Water baths, capable of being maintained at 21 °C ± 1 °C, 30,0 °C ± 0,2 °C, 37,0 °C ± 0,2 °C,
40,0 °C ± 0,2 °C and 43,0 °C ± 0,2 °C, under thermostat control.
4)
6.4 pH electrodes, suitable for measuring the required pH; e.g. Mettler Toledo 405-DPAS-SC-K8S/150
or equivalent electrodes.
6.5 Cylindrical bottles, capacity 250 ml, of height 16,5 cm and internal diameter 5,5 cm.
6.6 Temperature probes, calibration of accuracy ± 0,1 °C.
6.7 Data logger, equipped with pH and temperature channels; connected to a computer capable of logging
data from pH and temperature probes.
7 Sampling
Sampling is not part of the method specified in this International Standard. A recommended sampling method
[1]
is given in ISO 707⏐IDF 50 .
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
8 Preparation
8.1 Milk preparation
At least 16 h before starting the analysis, loosen the lids of
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 26323
IDF
Первое издание
2009-07-01
Молочные продукты. Определение
сквашивающей активности молочных
культур путем постоянного измерения
рН (СрН)
Milk products — Determination of the acidification activity of dairy
cultures by continuous pH measurement (CpH)
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочные номера
IDF 213:2009(R)
©
ISO и IDF 2009
IDF 213:2009(R)
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или вывести на экран, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на загрузку интегрированных шрифтов в компьютер, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Ни Центральный секретариат ISO, ни IDF не несут никакой ответственности в этом отношении.
Adobe торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO и национальными комитетами IDF. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба
проинформировать Центральный секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO и IDF 2009
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO или IDF по соответствующему адресу, указанному ниже.
ISO copyright office International Dairy Federation
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20 Diamant Building • Boulevard Auguste Reyers 80 • B-1030 Brussels
Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88
Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13
E-mail copyright@iso.org E-mail info@fil-idf.org
Web www.iso.org Web www.fil-idf.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются
IDF 213:2009(R)
Содержание Страница
Предисловие .iv
Предисловие .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Сущность метода.2
5 Разбавители, культурные среды и реактивы.2
6 Оборудование .5
7 Отбор проб.5
8 Приготовление .6
8.1 Приготовление молока.6
8.2 Очистка и калибровка pH электродов.6
8.3 Очистка электродов от белка и жира .6
8.4 Стабилизация и хранение pH электрода .6
8.5 Калибровка pH электрода.7
8.6 Дезинфекция pH электрода этанолом.7
8.7 Обеззараживание pH электрода тепловой обработкой.7
9 Процедура.7
9.1 Замороженные культуры.7
9.2 Продукты сублимационной сушки (лиофилизированные) .9
9.3 Окончание анализа.11
10 Прецизионность.11
10.1 Межлабораторное испытание.11
10.2 Повторяемость .11
10.3 Воспроизводимость .12
11 Протокол испытания.13
Приложение A (информативное) Межлабораторный анализ. Кольцевое испытание CpH .14
Библиография.15
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются iii
IDF 213:2009(R)
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией
национальных организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных
стандартов обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть
представленным в этом комитете. Международные правительственные и неправительственные
организации, имеющие связи с ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации
в области электротехники, ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной
электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются по правилам, указанным в Директивах ISO/IEC,
Часть 2.
Главная задача технических комитетов состоит в разработке международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов требует одобрения, по
меньшей мере, 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Обращается внимание на возможность патентования некоторых элементов данного международного
стандарта. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо или всех таких патентных
прав.
ISO 26323|IDF 213 был подготовлен Техническим комитетом ISO/ТС 34, Пищевые продукты,
Подкомитетом SC 5, Молоко и молочные продукты, и Международной молочной федерацией (IDF). Он
публикуется совместно ISO и IDF.
iv © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются
IDF 213:2009(R)
Предисловие
Международная молочная федерация (IDF) является некоммерческой организацией,
представляющей мировой молочный сектор. Членами IDF являются национальные комитеты в каждой
стране-члене, а также региональные молочные ассоциации, подписавшие официальное соглашение о
сотрудничестве с IDF. Все члены IDF имеют право быть представленными в постоянных комитетах IDF,
выполняющих техническую работу. IDF сотрудничает с ISO в разработке стандартных методов
анализа и отбора проб молока и молочных продуктов.
Главной задачей постоянных комитетов является разработка международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые рабочими группами и постоянными комитетами рассылаются
национальным комитетам на голосование. Их опубликование в качестве международных стандартов
требует одобрения не менее 50% национальных комитетов, принимающих участие в голосовании.
Следует иметь в виду, что некоторые элементы настоящего международного стандарта могут быть
объектом патентных прав. IDF не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или
всех патентных прав.
ISO 26323⏐IDF 213 был подготовлен Международной молочной федерацией (IDF) и Техническим
комитетом ISO/TC 34 Пищевые продукты, Подкомитетом SC 5 Молоко и молочные продукты. Этот
стандарт публикуется совместно IDF и ISO.
Вся работа была проделана Совместной инициативной группой ISO-IDF по молочнокислым бактериям
и закваскам Постоянного комитета по Микробиологическим методам анализа под руководством
разработчика проекта L. V. Jørgensen (Дания)
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются v
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ
IDF 213:2009(R)
Молочные продукты. Определение сквашивающей
активности молочных культур путем постоянного
измерения рН (СрН)
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод определения сквашивающей активности
молочнокислых бактерий путем непрерывного измерения pH.
ПРИМЕЧАНИЕ Метод основан на Ссылке [9].
Настоящий метод применяется к молочным заквасочным культурам, в которых присутствуют эти
специфические микроорганизмы.
Для испытания установлены два типа нормализованного молока: кипяченое молоко с массовой долей
сухого вещества 9,5 % (B-молоко 9,5); и автоклавированное (стерилизованное в автоклаве) молоко с
массовой долей сухого вещества 9,5 % (А-молоко 9,5). Возможно, что тепловая обработка B-молока
9,5 не инактивирует все присутствующие ферменты, которые могут влиять на активность некоторых
культур. В этом случае культуры испытывают на A-молоке 9,5, в котором все ферменты были
инактивированы.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные нормативные документы являются обязательными при применении данного
документа. Для жестких ссылок применяется только цитированное издание документа. Для плавающих
ссылок необходимо использовать самое последнее издание нормативного ссылочного документа
(включая любые изменения).
ISO 6887-5, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для
анализа, первоначальных суспензий и десятичных разведений для микробиологического
1)
исследования. Часть 5. Специальные правила для приготовления молока и молочных продуктов
3 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются следующие термины и определения.
3.1
сквашивающая активность
acidification activity
способность молочной заквасочной культуры сквашивать стандартизованное молоко, определенная
методом, описанным в настоящем международном стандарте
ПРИМЕЧАНИЕ Сквашивающая активность может быть измерена посредством следующих параметров.
1) Заменяет ISO 8261⎪IDF 122.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 1
IDF 213:2009(R)
a) t — Время, которое требуется, чтобы началось скисание нормализованного молока, т.е. время для
a
понижения pH на 0,08 pH-единиц от первоначального pH (через 15 мин). Время t измеряется в минутах от
a
времени инокуляции, t = 0. Если программные данные собираются каждые 4 мин, t определяется путем
a
интерполяции.
b) pH —pH через t ч (например, 4 ч, 6 ч, 12 ч или 16 ч) скисания нормализованного молока при 30 °C, 37 °C,
t h
40 °C или 43 °C. Фактическое время для этого параметра зависит от характеристик закваски.
c) t — Время, которое требуется для скисания нормализованного молока до определенного pH, например
pH x
pH 4,50. Фактическое время для этого параметра зависит от характеристик закваски и от цели, для которой
она используется.
4 Сущность метода
Установленное количество закваски разводят и инокулируют в определенное количество
нормализованного молока. Посеянную культуру инкубируют при заданной постоянной температуре
30 °C, 37 °C, 40 °C или 43 °C в течение определенного периода времени в зависимости от
характеристик закваски. Во время инкубации сквашивающую активность определяют посредством
непрерывного измерения pH, используя pH электрод и регистратор данных. Когда кривая ферментации
получена, можно вычислить или извлечь ряд параметров кривой.
5 Разбавители, культурные среды и реактивы
Используются реактивы только признанной аналитической чистоты, если нет других указаний, и только
дистиллированная и деминерализованная вода или вода эквивалентной чистоты. Вода не должна
содержать вещества, которые могут тормозить или иначе влиять на рост микроорганизмов в
восстановленном молоке. Если используется хлорированная вода, хлор нейтрализуют заранее.
Необходимо соблюдать следующие правила для качества воды: число клеток должно быть ниже
50 клеток/мл, а проводимость 5 мкСм/см. Испытания для определения пригодности воды для
[5]
микробиологических исследований приведены в ISO/TS 11133-1 .
5.1 Основные материалы
МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ — Соблюдать необходимые меры безопасности при использовании
очистителя электродов (5.1.2), раствора хлорида калия (5.1.3) или очистителя диафрагмы (5.1.4),
которые могут оказывать раздражающее воздействие на кожу или глаза.
5.1.1 Буферные растворы
5.1.1.1 Буферный раствор с pH 4,00, обеспечивающий буферизацию при 20 °C; например,
2)
Merck/VWR CertiPUR (Порядковый номер 1.09475) , или аналогичный.
5.1.1.2 Буферный раствор с pH 7,00, обеспечивающий буферизацию при 20 °C; например,
2)
Merck/VWR CertiPUR (Порядковый номер 1.09477) или аналогичный.
5.1.2 Очиститель электродов, средство, обеспечивающее очистку электрода; например, раствор
2)
пепсина/HCl из Mettler Toledo (Порядковый номер 9891) , или аналогичный.
2) Пример подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей
данного международного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO или IDF. Можно
использовать другие продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
2 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются
IDF 213:2009(R)
5.1.3 Раствор хлорида калия, концентрацией c(KCl) = 3 моль/л; например, Mettler Toledo
2)
(Порядковый номер 9823) , или аналогичный.
5.1.4 Очиститель диафрагмы, обеспечивающий очистку диафрагмы; например, раствор
2)
тиомочевины/HCl из Mettler Toledo (Порядковый номер 9892) , или аналогичный.
5.1.5 Раствор этанола, ϕ (C H OH) = 70 % объемной доли в воде, используемый для дезинфекции.
2 5
5.1.6 Сухое молоко с малым содержанием жира, полученное распылением при среднем
нагреве. Использовать сухое молоко с малым содержанием жира, полученное распылением при
среднем нагреве из молока хорошего качества и без детектируемых остаточных содержаний
антибиотиков. Сухое молоко, полученное распылением, должно быть хорошего микробиологического
качества (см. ссылку [8]), иметь натуральный приятный вкус, запах свежего молока низкой жирности и
состоять из компонентов, установленных в Таблице 1.
Таблица 1 — Состав сухого молока с малым содержанием жира, полученного распылением при
a 3)
среднем нагреве , например из Chr. Hansen
Массовая доля
Компонент
%
Молочный белок 34 до 38
Лактоза 48 до56
Молочный жир < 1,25
Зола 7 до 9
Влага <4
Титруемая кислотность, молочная кислота < 0,15
a
pH раствора массовой долей 10 % должен быть в диапазоне от 6,5 до
6,8.
5.2 Субстраты
5.2.1 QC (нормализованное)-молоко 9,5
5.2.1.1 Состав. Использовать только нормализованное молоко с установленным содержанием
сухого вещества, приготовленное из сухого молока низкой жирности, полученного распылением,
согласно составу в Таблице 2.
Приготовленное количество может быть меньше количества, установленного в Таблице 2. Однако не
должно быть меньше ∼1,1 кг молока. При использовании небольших количеств используют
аналитические весы (6.1) для взвешивания сухого молока с точностью до 1 мг.
Цель в том, чтобы приготовить молоко с содержанием сухого вещества 9,5 % ± 0,2 % массовой доли,
аналогичное по составу бутилированному и стерилизованному молоку.
3) Пример подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей
данного международного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO или IDF. Можно
использовать другие продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 3
IDF 213:2009(R)
Таблица 2 — Состав молока, приготовленного из сухого молока, полученного распылением
Масса
Компонент
кг
a
10,9 до 11,2
Сухое молоко среднего нагрева
Вода 100,0
a
Количество меняется в зависимости от содержания воды в сухом молоке и
от потери воды во время приготовления и тепловой обработки.
5.2.1.2 Приготовление. Сухое молоко среднего нагрева растворяют в воде не более чем 30 мин.
При необходимости нагревают воду до 40 °C, чтобы полностью растворить порошок.
Приготовленное молоко разливают в цилиндрические бутылки, чтобы после тепловой обработки
получить объем 200 мл. Объем контролируют, взвешивая бутылку, пока она не достигнет массы нетто
207 г ± 2 г (общая масса минус масса бутылки). Плотность QC-молока 9,5 составляет 1,033 г/мл.
В качестве альтернативы приготовленное молоко разливают в цилиндрические бутылки, чтобы
получить массу 200 г ± 2 г (масса нетто). Разницу масс компенсируют в процедуре инокуляции.
5.2.2 Тепловая обработка B-молока 9,5. Приготовленное молоко (5.2.1.2) подвергают тепловой
обработке согласно температурной программе в Таблице 3.
Таблица 3 — Температурная программа для тепловой обработки B-молока 9,5
Процедура Температура Время
°C мин
Нагрев > 99 ± 1 < 20
Выдержка
99 ± 1 30 ± 1
Охлаждение
99 ± 1 до 40 ± 5 < 40
Затем полученное B-молоко 9,5 хранят при температуре ниже 7 °C как минимум 16 ч.
Регистрируют испарение во время тепловой обработки и допуск на массу после тепловой обработки.
5.2.3 Срок годности B-молока 9,5. Перед использованием B-молоко 9,5 (5.2.2) можно хранить не
менее 16 ч и не более 12 дней.
Некоторые ферменты, например протеазы, возможно, не были инактивированы и могут влиять на
сквашивающую активность некоторых культур.
5.2.4 Тепловая обработка A-молока 9,5. A-молоко 9,5 используют для культур в тех случаях, когда
B-молоко 9,5 не дает требуемой повторяемости, например из-за активности остаточной протеазы.
Приготовленное молоко (5.2.1.2) стерилизуют согласно температурной программе в Таблице 4.
4 © ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются
IDF 213:2009(R)
Таблица 4 — Температурная программа для тепловой обработки A-молока 9,5
Процедура Температура Время
°C мин
Нагрев 115 ± 1 < 20
Выдержка 115 ± 1 15 ± 1
Охлаждение 115 ± 1 до 40 ± 5 < 40
Затем полученное А-молоко 9,5 хранят при температуре ниже 7 °C как минимум 16 ч.
Регистрируют испарение во время тепловой обработки и допуск на массу после тепловой обработки.
5.2.5 Срок годности А-молока 9,5. Перед использованием А-молоко 9,5 (5.2.2) можно хранить не
менее 16 ч и не более 12 дней.
6 Оборудование
Используется обычное оборудование микробиологической лаборатории и, в частности, оборудование,
требуемое для приготовления испытательных образцов и разбавителей, установленное в ISO 6887-5,
а также следующее.
6.1 Аналитические весы, обеспечивающие взвешивание с точностью до 0,01 г и 1 мг (см. 5.2.1.1)
соответственно.
6.2 Автоклав, обеспечивающий работу при 99 °C ± 1 °C и 115 °C ± 1 °C.
6.3 Водяные бани, способные поддерживать температуру 21 °C ± 1 °C, 30,0 °C ± 0,2 °C,
37,0 °C ± 0,2 °C, 40,0 °C ± 0,2 °C и 43,0 °C ± 0,2 °C при термостатическом регулировании.
4)
6.4 pH электроды, подходящие для измерения требуемого pH; например, Mettler Toledo 405-
DPAS-SC-K8S/150 или аналогичные электроды.
6.5 Цилиндрические бутылки, вместимостью 250 мл, высотой 16,5 см и внутренним диаметром
5,5 см.
6.6 Температурные датчики, калибровка точности ± 0,1 °C.
6.7 Регистратор данных, оснащенный каналами для pH и температуры; присоединен к компьютеру,
обеспечивает регистрацию данных от датчиков pH и температуры.
7 Отбор проб
Отбор проб не является частью метода, установленного в этом международном стандарте.
[1]
Рекомендованный метод отбора проб дан в ISO 707⏐IDF 50 .
4) Пример подходящего продукта, имеющегося в продаже. Эта информация дается для удобства пользователей
данного международного стандарта и не является поддержкой этого продукта со стороны ISO или IDF. Можно
использовать другие продукты, если есть данные, что они дают такие же результаты.
© ISO и IDF 2009 – Все права сохраняются 5
-----
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.
Loading comments...