ISO 27105:2016

NORME ISO
INTERNATIONALE 27105
FIL
Première édition
2016-04-01
Lait et fromages — Détermination de
la teneur en lysozyme de blanc d’oeuf
par chromatographie liquide haute
performance
Milk and cheese — Determination of hen’s egg white lysozyme
content by high performance liquid chromatography
Numéros de référence
FIL 216:2016(F)
©
ISO et FIL 2016
FIL 216:2016(F)
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l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
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FIL 216:2016(F)
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Termes et définitions . 1
3 Principe . 1
4 Réactifs et substances de référence . 1
4.1 Réactifs et matériaux . 1
4.2 Lysozyme . 2
5 Appareillage . 2
6 Échantillonnage . 3
7 Mode opératoire. 3
7.1 Préparation de la solution étalon de lysozyme . 3
7.1.1 Solution étalon mère de lysozyme . 3
7.1.2 Solution étalon de travail de lysozyme . 3
7.2 Prise d’essai . 3
7.2.1 Lait . 3
7.2.2 Fromage . 3
7.2.3 Préparation de la solution pour essai . 3
7.3 Détermination par CLHP . 4
7.3.1 Conditions chromatographiques . 4
8 Calcul et expression des résultats . 5
8.1 Étalonnage à un seul point. 5
8.2 Expression des résultats . 6
9 Fidélité . 6
9.1 Essai interlaboratoires . 6
9.2 Répétabilité . 6
9.3 Reproductibilité . 6
10 Rapport d’essai . 6
Annexe A (informative) Vérification par chromatographie liquide couplée à la
spectrométrie de masse (CL-SM) . 8
Annexe B (informative) Essai interlaboratoires .10
Bibliographie .11
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FIL 216:2016(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers ainsi que la Fédération Internationale du Lait (FIL). Il est publié
conjointement par l’ISO et la FIL.
Cette première édition de l’ISO 27105|FIL 216 annule et remplace l’ISO/TS 27105|FIL/MR 216:2009, qui
a fait l’objet d’une révision technique.
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FIL 216:2016(F)
La FIL (Fédération internationale du lait) est une organisation privée à but non lucratif qui représente
les intérêts des divers acteurs de la filière laitière au niveau international. Les membres de la FIL sont
organisés en comités nationaux, qui sont des associations nationales composées de représentants de
groupes d’intérêt nationaux dans le secteur des produits laitiers, incluant des producteurs laitiers, des
acteurs de l’industrie de transformation des produits laitiers, des fournisseurs de produits laitiers, des
universitaires et des représentants des gouvernements/autorités chargées du contrôle des aliments.
L’ISO et la FIL collaborent étroitement sur toutes les activités de normalisation concernant les méthodes
d’analyse et d’échantillonnage du lait et des produits laitiers. Depuis 2001, l’ISO et la FIL publient
conjointement leurs Normes internationales en utilisant les logos et les numéros de référence des deux
organisations.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
L’ISO 27105|FIL 216 a été élaborée par le Comité permanent de la FIL chargé des Méthodes d’analyse des
additifs et contaminants et par le Comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5,
Lait et produits laitiers.
L’ensemble des travaux a été confié au groupe de projet mixte ISO/FIL, Détermination de la teneur en
lysozyme de blanc d’œuf par chromatographie liquide haute performance du Comité permanent chargé
des Méthodes d’analyse des additifs et contaminants, sous la conduite de leurs chefs de projet, T. Berger
(CH) et Prof. L. Pellegrino (IT).
Cette première édition de l’ISO 27105|FIL 216 annule et remplace l’ISO/TS 27105|FIL/MR 216:2009, qui
a fait l’objet d’une révision technique.
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FIL 216:2016(F)
Introduction
Le lysozyme (EC 3.2.1.17, muramidase) est une enzyme très répandue dans la nature; elle est présente,
par exemple, dans le blanc d’œuf (environ 3 % à 4 %), la salive et les larmes. Le lysozyme a un effet
conservateur en raison de l’activité lytique sur la paroi de la cellule de certaines bactéries. Le lysozyme
de blanc d’œuf est utilisé dans la fabrication du fromage afin d’empêcher le gonflement tardif des
fromages à pâte demi-dure ou dure.
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NORME INTERNATIONALE
FIL 216:2016(F)
Lait et fromages — Détermination de la teneur en
lysozyme de blanc d’oeuf par chromatographie liquide
haute performance
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode pour la détermination quantitative de la teneur
en lysozyme de blanc d’œuf dans le lait et les fromages.
La méthode est adaptée au mesurage de faibles niveaux de lysozyme de blanc d’œuf, avec une limite de
quantification de 10 mg/kg.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
2.1
teneur en lysozyme de blanc d’œuf
fraction massique de substance, déterminée selon le mode opératoire spécifié
Note 1 à l’article: La teneur en lysozyme est exprimée en milligrammes par kilogramme.
3 Principe
Précipitation isoélectrique de la caséine et des protéines de lactosérum dénaturé provenant du lait
et du fromage à pH 4,3 (fromage) ou à pH 2,2 (lait), puis détermination du lysozyme de blanc d’œuf
soluble dans l’acide par chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse et
détection par fluorescence. Le pic du lysozyme peut être vérifié par chromatographie liquide couplée à
la spectrométrie de masse (CL-SM) (voir Annexe A).
4 Réactifs et substances de référence
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et
uniquement de l’eau distillée ou de pureté équivalente.
4.1 Réactifs et matériaux
4.1.1 Solution de chlorure de sodium, c(NaCl) = 1 mol/l.
Dissoudre 58,44 g de chlorure de sodium dans 1 l d’eau.
4.1.2 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 1 mol/l.
Dissoudre 4,0 ml d’acide chlorhydrique de fraction massique 37 % dans une fiole jaugée à un trait de
50 ml. Compléter au trait de jauge avec de l’eau.
4.1.3 Hydroxyde de sodium, c(NaOH) = 1 mol/l.
Dissoudre 2,6 ml d’hydroxyde de sodium de fraction massique 50 % dans une fiole jaugée à un trait de
50 ml. Compléter au trait de jauge avec de l’eau.
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4.1.4 Acide trifluoroacétique (CF COOH), qualité analytique.
4.1.5 Acétonitrile, (CH CN), qualité CLHP.
4.1.6 Eau, qualité CLHP.
4.2 Lysozyme
1)
Lysozyme de blanc d’œuf pur . Un lysozyme suffisamment pur et caractérisé est difficile à obtenir. Il
est nécessaire de contrôler la variabilité d’un lot à l’autre.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, les matériels suivants:
5.1 pH-mètre, ayant une précision de 0,1 unité.
2)
5.2 Filtre cylindrique, de diamètre 15 cm .
3)
5.3 Membrane filtrante, de taille de pore 0,22 μm .
5.4 Balance, capable de peser à 100 mg près et d’une résolution de 10 mg.
5.5 Balance analytique, capable de peser à 0,1 mg près et d’une résolution de 0,01 mg.
5.6 Agitateur magnétique.
4)
5.7 Homogénéisateur , capable de tourner à une fréquence de rotation de 3 000 tr/min à
3 500 tr/min.
5.8 Matériel de CLHP.
5.8.1 Système de pompage permettant de réaliser une élution par gradient, capable de
fonctionner à une vitesse de 1,0 ml/min.
5.8.2 Injecteur manuel ou automatique, capable d’injecter des quantités de 50 μl.
5.8.3 Four à colonne, capable de maintenir une température de 45 °C ± 2 °C.
1) Lysozyme SIGMA L-6876 est un exemple de produit disponible sur le marché. Cette information est donnée par
souci de commodité à l’intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de
l’ISO ou de la FIL à l’égard de ce produit.

2) Fluted filter Schleich
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