ISO 3890-2:2000
(Main)Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) - Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) - Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides) — Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de confirmation
General Information
Relations
Frequently Asked Questions
ISO 3890-2:2000 is a standard published by the International Organization for Standardization (ISO). Its full title is "Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) - Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation". This standard covers: Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) - Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) - Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
ISO 3890-2:2000 is classified under the following ICS (International Classification for Standards) categories: 67.100.01 - Milk and milk products in general. The ICS classification helps identify the subject area and facilitates finding related standards.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 3890-2
First edition
2000-08-01
Milk and milk products — Determination of
residues of organochlorine compounds
(pesticides) —
Part 2:
Test methods for crude extract purification
and confirmation
Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés
organochlorés (pesticides) —
Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de
confirmation
Reference number
©
ISO 2000
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ii © ISO 2000 – All rights reserved
Contents Page
Foreword.v
1 Scope .1
2 Normative reference .1
3 Method A: Liquid-liquid partitioning with acetonitrile and clean-up on a Florisil column
(see reference [3]).1
3.1 Principle.1
3.2 Reagents.1
3.3 Apparatus .3
3.4 Procedure .3
3.5 Gas chromatography.4
4 Method B: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on an
alumina column (see references [4], [5]) .4
4.1 Principle.4
4.2 Reagents.4
4.3 Apparatus .5
4.4 Procedure .5
4.5 Gas chromatography.6
5 Method C: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on a Florisil
column (see reference [6]).6
5.1 Principle.6
5.2 Reagents.6
5.3 Apparatus .7
5.4 Procedure .7
5.5 Gas chromatography.8
6 Method D: Column chromatography on aluminium oxide of precisely defined activity
(see reference [7]).8
6.1 Principle.8
6.2 Reagents.8
6.3 Apparatus .9
6.4 Procedure .9
6.5 Gas chromatography.10
7 Method E: Column chromatography on alumina column (see reference [8]).10
7.1 Principle.10
7.2 Reagents.10
7.3 Apparatus .11
7.4 Procedure .11
7.5 Gas chromatography.12
8 Method F: Column chromatography on partially deactivated Florisil
(see references [9], [10], [11]).12
8.1 Principle.12
8.2 Reagents.12
8.3 Apparatus .12
8.4 Procedure .13
8.5 Gas chromatography.14
9 Method G: Column chromatography on partially deactivated silica gel (see reference [12]).14
9.1 Principle.14
9.2 Reagents.14
9.3 Apparatus .14
9.4 Procedure .15
9.5 Gas chromatography.16
10 Method H: Gel-permeation chromatography .16
10.1 Principle.16
10.2 Reagents.16
10.3 Apparatus .16
10.4 Procedure .17
10.5 Gas chromatography.17
11 Confirmatory tests and additional clean-up procedure.17
11.1 Confirmatory test A: Determination of organochlorine compounds with glass-capillary gas
chromatography (see references [14], [15], [16]) .17
11.2 Confirmatory test B: Thin-layer chromatography of organochlorine compounds
(see reference [9]).19
11.3 Confirmatory test C: Chemical modifications (see references [17], [18], [19], [20], [21]).21
11.4 Confirmatory test D: Photochemical modifications (see reference [22]) .25
12 Additional clean-up procedure.25
12.1 Principle.26
12.2 Reagents.26
12.3 Apparatus .26
12.4 Procedure .26
Bibliography .27
iv © ISO 2000 – All rights reserved
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies (ISO
member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO technical
committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and non-governmental, in
liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the International Electrotechnical
Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 3.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this part of ISO 3890 may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
International Standard ISO 3890-2 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Agricultural food products,
Subcommittee SC 5, Milk and milk products, in collaboration with the International Dairy Federation (IDF) and
AOAC International, and will also be published by these organizations.
ISO 3890 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products — Determination of residues
of organochlorine compounds (pesticides):
— Part 1: General considerations and extraction methods
— Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
INTERNATIONAL STANDARD ISO 3890-2:2000(E)
Milk and milk products — Determination of residues of
organochlorine compounds (pesticides) —
Part 2:
Test methods for crude extract purification and confirmation
WARNING — The use of this part of ISO 3890 may involve hazardous materials, operations and equipment.
This standard does not purport to address all the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this standard to establish safety and health practices and determine the
applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 3890 specifies test methods for the purification of the crude extracts obtained by the general
methods given in ISO 3890-1. It also gives recommended methods for the determination of the residues of
organochlorine compounds in milk and milk products, together with confirmatory tests and clean-up procedures.
2 Normative reference
The following normative document contains provisions which, through reference in this text, constitute provisions of
this part of ISO 3890. For dated references, subsequent amendments to, or revisions of, this publication do not
apply. However, parties to agreement based on this part of ISO 3890 are encouraged to investigate the possibility
of applying the most recent edition of the normative document indicated below. For undated references, the latest
edition of the normative document referred to applies. Members of ISO and IEC maintain registers of currently valid
International Standards.
ISO 3890-1:2000, Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) —
Part 1: General considerations and extraction methods.
3 Method A: Liquid-liquid partitioning with acetonitrile and clean-up on a Florisil
column (see reference [3])
3.1 Principle
The organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the sample by one of the procedures
described in ISO 3890-1. The extract is concentrated almost to dryness, then redissolved in light petroleum and the
organochlorine compounds are partitioned into acetonitrile. After mixing the acetonitrile with an excess of water, the
organochlorine compounds are partitioned into light petroleum. This organic phase is purified chromatographically
on a Florisil column using light petroleum/diethyl ether as eluting solvent. The eluates are concentrated then
examined by GLC.
A special method is described for cheese.
3.2 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
3.2.1 Light petroleum, boiling range 40�Cto60�C.
Distil over potassium hydroxide or sodium hydroxide pellets.
3.2.2 Acetonitrile (CH CN), saturated with light petroleum.
To purify, mix 4 l of acetonitrile with 1 ml of orthophosphoric acid and 30 g of phosphorus pentoxide in a round-
bottomed glass flask. Add glass beads and distil at a temperature of between 81 �C and 82 �C. Do not allow the
temperature to exceed 82�C.
Mix the purified acetonitrile with light petroleum until phase separation just occurs.
3.2.3 Diethyl ether (C H OC H ), peroxide-free.
2 5 2 5
Distil and stabilize with 2,0 % of its volume of absolute ethanol (C H OH).
2 5
3.2.4 Eluting solvent A: mixture of diethyl ether (3.2.3) and light petroleum (3.2.1) (6:94 by volume).
Dry over 10 g to 25 g of anhydrous sodium sulfate (3.2.6).
3.2.5 Eluting solvent B: mixture of diethyl ether (3.2.3) and light petroleum (3.2.1) (15:85 by volume).
Dry over 10 g to 25 g of anhydrous sodium sulfate (3.2.6).
3.2.6 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500�C� 25 °C for 4 h. Cool and store in a stoppered bottle.
1)
3.2.7 Adsorbent: Florisil (Floridin Co ), 60 to 100 mesh.
Activate by heating at 650�C� 25 °C for 4 h and immediately pour the adsorbent into well-stoppered bottles and
store in the dark. Before use, heat to 130�C for at least 5 h.
The adsorbent should be stored either at 130�C� 2 °C or at room temperature in a desiccator. In the latter case it
should, however, be heated to 130�C� 2 °C every 2 days.
Each batch of adsorbent should be checked from time to time as follows.
Pass 1 ml of a standard hexane solution containing 0,1 mg/l of lindane, heptachlor epoxide, aldrin and dieldrin, and
0,3 mg/l of endrin through the adsorption column (see ISO 3890-1:2000, 9.3). Elute and concentrate as described
in 3.4.3. Determine by gas chromatography.
The adsorbent is satisfactory if lindane, heptachlor, aldrin and heptachlor epoxide are found quantitatively in the
eluting solvent A (3.2.4) and dieldrin and endrin in the eluting solvent B (3.2.5).
3.2.8 Sodium chloride solution (NaCl), 2 % solution.
Heat solid sodium chloride at 500�C� 25 °C for 4 h before making up the solution.
3.2.9 Ethanol (C H OH), absolute.
2 5
3.2.10 Sodium oxalate (Na C O )or potassium oxalate (K C O )
2 2 4 2 2 4
1) Floridin Co is an example of suitable a product available commercially. This information is given for the convenience of
users of this part of ISO 3890 and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
2 © ISO 2000 – All rights reserved
3.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
3.3.1 Chromatographic columns, of internal diameter 20 mm and length 300 mm, and with PTFE stopcocks
and sintered glass discs or glass wool plugs.
2)
3.3.2 Rotary evaporator (Kuderna-Danish or equivalent), with flask of capacity 500 ml, and with graduated
tube attached.
3.3.3 High-speed blender
3.3.4 Separating funnels, of capacities 125 ml and 1 000 ml.
3.4 Procedure
3.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
3.4.1.1 General methods.
See ISO 3890-1:2000, annex A.
3.4.1.2 Special method for cheese
Place enough diced sample (to provide 3 g of fat), about 2 g of sodium or potassium oxalate (3.2.10) and 100 ml of
ethanol (3.2.9) in a high-speed blender (3.3.3) and blend for 2 min to 3 min. (If experience with the product
indicates that emulsions will not be broken by centrifuging, add 1 ml of water per 2 g of sample before blending.)
Pour the homogenized slurry into a 500 ml centrifuge bottle, add 50 ml of diethyl ether (3.2.3), and shake
vigorously for 1 min. Add 50 ml of light petroleum (3.2.1) and shake vigorously for 1 min to 2 min (or divide between
two 250 ml bottles and extract each by shaking vigorously for 1 min to 2 min with 25 ml of light petroleum. Proceed
as in ISO 3890-1:2000, A.6.3.3.
3.4.2 Liquid-liquid partitioning
Weigh, to the nearest 0,01 g, 1 g to 3 g of the extracted fat into a 125 ml separating funnel (3.3.4) and dissolve in
15 ml of light petroleum (3.2.1). Add 30 ml of acetonitrile saturated with light petroleum (3.2.2) and shake vigorously
for 1 min to 2 min. After phase separation, run the lower acetonitrile layer into a 1 000 ml separating funnel (3.3.4)
containing 700 ml of sodium chloride solution (3.2.8) and 100 ml of light petroleum (3.2.1). Vigorously shake the
light petroleum layer left in the 125 ml separating funnel three times with 30 ml portions of the acetonitrile (3.2.2).
Combine the acetonitrile extracts in the 1 000 ml separating funnel and then shake carefully. Drain the lower,
aqueous phase into a second 1000 ml separating funnel and shake it for 12 s with 100 ml of light petroleum.
Combine the light petroleum phases from the two 1 000 ml separating funnels. Wash twice with 100 ml portions of
water or the sodium chloride solution (3.2.8). Dry over sodium sulfate (3.2.6) and filter into the 500 ml rotary
evaporator flask (3.3.2) with attached graduated tube. Rinse the sodium sulfate three times with 10 ml portions of
light petroleum (3.2.1). Then concentrate the light petroleum solution to 10 ml using the rotary evaporator (3.3.2).
3.4.3 Clean-up on Florisil
Add to a chromatographic column (3.3.1) a 100 mm layer of adsorbent (3.2.7). Cover with a 10 mm layer of sodium
sulfate (3.2.6) and rinse with 40 ml to 50 ml of light petroleum (3.2.1). Pipette 10 ml of the light petroleum
concentrate (3.4.2) onto the column (3.3.1), rinsing the container twice with approximately 5 ml portions of light
petroleum. Elute into an evaporator flask (3.3.2) with attached graduated tube, using 200 ml of the eluting solvent A
(3.2.4). The elution rate should not exceed 5 ml/min. Change the receivers and elute in the same way using 200 ml
of the eluting solvent B (3.2.5).
2) Kuderna-Danish is an example of suitable equipment available commercially. This information is given for the convenience
of users of this part of ISO 3890 and does not constitute an endorsement by ISO of this equipment.
Concentrate the two eluates separately to the required small volume using the rotary evaporator (3.3.2). Examine
each eluate by GLC. Should further purification be necessary, this can be carried out on a second, freshly prepared
adsorbent column or as in ISO 3890-1:2000, annex A.
The first eluate contains any HCB, the HCH isomers, heptachlor, heptachlor epoxide, aldrin, DDE, TDE and DDT.
The second eluate contains dieldrin and endrin.
3.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1:2000, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1:2000, clauses 10 to 14.
4 Method B: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on
an alumina column (see references [4], [5])
4.1 Principle
The organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the test sample by the procedure
described in ISO 3890-1:2000, clause A.6, then the residues are partitioned with dimethylformamide. After addition
of sodium sulfate solution, the organochlorine compounds are further partitioned into n-hexane. The organic phase
is purified by chromatography on neutral aluminium oxide using n-hexane as the eluting solvent. The eluate is
concentrated then examined by GLC.
Special methods are described for milk and butter.
4.2 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
4.2.1 n-Hexane [CH (CH ) CH ], boiling range 68�Cto70�C.
3 2 4 3
Examine for gas chromatographic purity under working column conditions. Distil over potassium hydroxide, if
necessary.
4.2.2 Acetone (CH COCH ), general-purpose, reagent grade.
3 3
4.2.3 Dimethylformamide (DMF)
Examine an n-hexane extract of a dilute aqueous solution for interference peaks by GLC. Redistil the solvent, if
necessary, and collect the fraction with boiling range 152�Cto154�C.
4.2.4 n-Hexane, saturated with dimethylformamide.
4.2.5 Dimethylformamide, saturated with n-hexane.
4.2.6 Sand, acid washed.
Heat at 500�C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
4.2.7 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500�C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
4.2.8 Aluminium oxide (Al O ), neutral, activated.
2 3
4 © ISO 2000 – All rights reserved
Heat aluminium oxide to 500�C for 4 h, then cool. Carefully add 7 parts of water to 93 parts of aluminium oxide
(mass fraction) and mix the solid thoroughly in a closed vessel for at least 90 min. Keep the vessel well stoppered
and use the aluminium oxide within 10 days.
4.2.9 Sodium sulfate solution, 2 % solution.
4.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
4.3.1 Soxhlet extraction apparatus
2)
4.3.2 Rotary evaporator (Kuderna-Danish or equivalent), with flask of capacity 500 ml, and with graduated
tube attached.
4.3.3 High-speed blender
4.3.4 Chromatographic columns, of internal diameter 12 mm and length 300 mm, with PTFE stopcocks.
3)
4.3.5 Micro-Snyder columns
4.4 Procedure
4.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
4.4.1.1 General methods
See ISO 3890-1:2000, annex A.
4.4.1.2 Special methods
a) Milk
Transfer in the following order, 40 ml of well-mixed milk, 80 ml of acetone (4.2.2) and 80 ml of n-hexane (4.2.1)
to a 250 ml vortex beaker. Homogenize the mixture for 3 min. Transfer it immediately to a 250 ml centrifuge
tube, washing the mixer blades with 10 ml of n-hexane, then with 5 ml of water, and add the washings to the
tube.
–1
Spin the tube in a centrifuge at a rotational frequency of 2 500 min for 5 min. Separate the n-hexane solvent
layer and pass it through a short column of anhydrous sodium sulfate (4.2.7). Wash the contents of the tube
with two successive 25 ml portions of n-hexane and run the washings through the column. Reduce the
combined extracts to about 15 ml in the rotary evaporator (4.3.2). Transfer the solution to a 100 ml separating
funnel graduated at 25 ml and adjust the volume to 25 ml. [See also method E, 7.4.1.2 b) for milk.]
b) Butter
Dissolve 5 g of clarified butterfat (melted and decanted through a filter) in 10 ml of n-hexane. Transfer the
solution to a 100 ml separating funnel using three successive 5 ml portions of n-hexane.
4.4.2 DMF-partitioning of fat and organochlorine compounds
Extract the fat from the 25 ml of hexane solution (4.4.1) with 10 ml of dimethylformamide (DMF) saturated with n-
hexane (4.2.5), by shaking in a separating funnel. After 2 min to 3 min, run the lower DMF layer into a second
3) Micro-Snyder is an example of suitable equipment available commercially. This information is given for the convenience of
users of this part of ISO 3890 and does not constitute an endorsement by ISO of this equipment.
100 ml separating funnel (retaining any interfacial emulsion in the first separating funnel). Repeat the extraction of
the n-hexane solution with two further 10 ml portions of DMF (4.2.5). Combine the DMF extracts and wash them
with 10 ml of n-hexane saturated with DMF (4.2.4).
Separate the 10 ml of n-hexane and wash with a further 10 ml of DMF (4.2.5). Reject the n-hexane and add the
washings to the original 30 ml of DMF extract in a 500 ml (or preferably 350 ml) separating funnel. Add 6 ml of
n-hexane (4.2.1) and shake vigorously for 2 min with 200 ml of sodium sulfate solution (4.2.9).
Allow to stand for 20 min to separate. Collect the n-hexane phase by gentle swirling. Drain the aqueous layer to
waste, dry the separating funnel with filter paper and drain the n-hexane into a graduated tube with a ground-glass
neck which will hold 15 ml of solvent. Rinse the separating funnel with small quantities of n-hexane and add these
to the tube.
Fit the tube with a micro-Snyder column (4.3.5) and concentrate the n-hexane extract to about 2 ml.
4.4.3 Clean-up on aluminium oxide with n-hexane
Pour a slurry of 5 g of prepared aluminium oxide (4.2.8) in n-hexane (4.2.1) into a chromatographic column (4.3.4)
containing a solvent-washed cotton wool plug (ISO 3890-1:2000, A.5.15). Allow the aluminium oxide to settle and
cover it with a 30 mm layer of anhydrous sodium sulfate (4.2.7). Drain the n-hexane until the meniscus reaches the
top of the sodium sulfate layer. Add the n-hexane extract (4.4.2) and wash into the column with 2 ml portions of
n-hexane.
Elute at a flow rate not exceeding 5 ml/min with 50 ml of n-hexane (4.2.1), collecting the eluate in the rotary
evaporator (4.3.2). Concentrate the eluate to approximately 5 ml. Detach the graduated tube, fit a micro-Snyder
column (4.3.5) and concentrate the eluate to 1 ml.
4.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1:2000, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1:2000, clauses 10 to 14.
5 Method C: Liquid-liquid partitioning with dimethylformamide (DMF) and clean-up on a
Florisil column (see reference [6])
5.1 Principle
The organochlorine compounds, together with the fat, are extracted from the sample by the procedure described in
5.4.1. The extract is concentrated almost to dryness, then dissolved in light petroleum. The organochlorine
compounds are partitioned into dimethylformamide. After addition of sodium sulfate solution, the organochlorine
compounds are further partitioned into light petroleum.
The organic phase is purified by chromatography on Florisil, using light petroleum/diethyl ether as the eluting
solvent. The eluate is concentrated then examined by GLC.
5.2 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
5.2.1 Light petroleum, boiling range 30�Cto40�C, redistilled.
5.2.2 Diethyl ether (C H OC H ), peroxide free.
2 5 2 5
5.2.3 Light petroleum, boiling range 60�Cto80�C, redistilled.
5.2.4 Eluting solvent, mixture of diethyl ether (5.2.2) and light petroleum (5.2.1) (6:94 by volume).
6 © ISO 2000 – All rights reserved
1)
5.2.5 Adsorbent: Florisil (Floridin Co ) 60 to100 mesh.
Heat the adsorbent at 650�C for 2 h in a muffle furnace. Cool to 130�C and keep for 5 h at this temperature in a
drying oven. Afterwards, allow to cool to room temperature in a desiccator then transfer to an airtight, stoppered jar.
Add 5 parts of distilled water to 95 parts of the adsorbent (by volume) and shake until free of lumps. Allow to stand
for 24 h and shake before use.
5.2.6 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500�C� 25 °C for 4 h. Cool and store in a stoppered bottle.
5.2.7 Dimethylformamide (DMF), saturated with light petroleum.
Distil DMF and collect the fraction with boiling range 152�Cto154�C. Saturate this with light petroleum (5.2.1).
5.2.8 Light petroleum (5.2.1), saturated with dimethylformamide.
5.2.9 Sodium sulfate solution, 2 % solution.
5.2.10 n-Hexane [CH (CH ) CH ]
3 2 4 3
5.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.3.1 High-speed blender
2)
5.3.2 Rotary evaporator (Kuderna-Danish or equivalent), with flask of capacity 500 ml, and with graduated
tube attached.
5.3.3 Chromatographic column, of internal diameter 20 mm and length 300 mm, with a sintered glass plate
and a PTFE stopcock.
5.4 Procedure
5.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
For general methods, see ISO 3890-1:2000, annex A.
5.4.2 DMF-partitioning of fat and pesticides
Dissolve the sample extract, containing 2 g to 5 g of fat, in 25 ml of light petroleum saturated with DMF (5.2.8).
Transfer to a 250 ml separating funnel. Extract with small portions of a measured quantity (e.g. 75 ml) of DMF
saturated with light petroleum (5.2.7) added to the separating funnel. Shake vigorously for 1 min to 2 min each time
and drain the DMF-phase into a 500 ml separating funnel. Mix the combined phases with 200 ml of sodium sulfate
solution (5.2.9) and shake for 1 min to 2 min each with one 40 ml and three 25 ml portions of light petroleum
(5.2.3). Collect the light petroleum phases and wash with about 10 ml of water. Dry over sodium sulfate (5.2.6) and
filter through a plug of cotton wool. After addition of about 5 ml of n-hexane (5.2.10) through the cotton wool plug,
reduce to a volume of about 5 ml in the rotary evaporator (5.3.2).
5.4.3 Clean-up on Florisil with light petroleum
Half-fill the chromatographic column (5.3.3) with light petroleum (5.2.3). Add 20 g of deactivated adsorbent (5.2.5)
in small portions through a funnel, keeping the PTFE stopcock partly open and gently tapping the column. Use only
columns free from visible inclusions of air. Cover with a 20 mm layer of anhydrous sodium sulfate (5.2.6) and allow
the light petroleum to drain to the surface of the column filling.
Transfer the sample extract onto the column with several millilitres of the eluting solvent (5.2.4). Allow it to enter
into the column, filling by opening the tap until the meniscus reaches the layer of sodium sulfate (5.2.6).
Wash the original container with several millilitres of eluting solvent (5.2.4) and proceed as above. Elute the column
with 200 ml of the eluting solvent into a 500 ml round-bottomed flask at a flow rate not exceeding 5 ml/min.
Concentrate the eluate in a rotary evaporator (5.3.2) to 5 ml. Transfer the concentrated extract to a graduated tube
with diethyl ether (5.2.2) and dilute to a definite volume (10 ml to 20 ml) with diethyl ether.
5.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1:2000, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1:2000, clauses 10 to 14.
6 Method D: Column chromatography on aluminium oxide of precisely defined activity
(see reference [7])
6.1 Principle
The organochlorine compounds are extracted from the sample using acetone/n-hexane. The acetone is partitioned
into aqueous sodium sulfate. The n-hexane is dried and concentrated. The specified amount of fat extract is
purified by chromatography on neutral aluminium oxide of precisely defined activity using n-hexane as the eluting
solvent.
The eluate is concentrated then examined by GLC.
6.2 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise specified and distilled or demineralized water or
water of equivalent purity.
6.2.1 Acetone (CH COCH )
3 3
6.2.2 n-Hexane (CH (CH ) CH )
3 2 4 3
6.2.3 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500�C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
6.2.4 Sodium sulfate solution, 2 % solution.
4)
6.2.5 Aluminium oxide (Al O ), neutral (Woelm W 200 , Activity Grade Super 1 or equivalent).
2 3
Preheat the material as supplied at 500�C� 25 °C for 3 h to 4 h to remove any moisture and any interfering
organic material and cool over phosphorus pentoxide. Deactivate a portion by adding approximately 10 ml of water
to 90 g of aluminium oxide, in portions of 2 ml to 3 ml while swirling the flask or bottle. Stopper firmly and shake or
place on rollers to mix thoroughly. Leave to equilibrate for 24 h in closed vessels at ambient temperature before
use. Standardize the material as follows. Weigh 22,0 g of the aluminium oxide. Prepare a slurry in a small volume
of n-hexane (6.2.2) and transfer it to a chromatography column (6.3.2). Add a 10 mm layer of anhydrous sodium
sulfate (6.2.3) and wash the column with 15 ml to 20 ml of n-hexane. Adjust the level of the n-hexane layer to just
below the top of the sodium sulfate layer.
4) Woelm W 200 is an example of a suitable product available commercially. This information is given for the convenience of
users of this part of ISO 3890 and does not constitute an endorsement by ISO of this product.
8 © ISO 2000 – All rights reserved
Place a suitable receiver (of at least 250 ml capacity) under the column. Pipette a small volume of n-hexane
solution containing 1 g of oil or animal fat onto the top of the column, taking care that the pipette is well drained and
that the oil is not allowed to run down the side of the column. Allow the level of the oil in n-hexane solution to run
down to the top of the sodium sulfate layer. Add 2 ml of n-hexane and again allow the level to run down.
Elute the column with 150 ml of n-hexane. Evaporate the eluate to a small volume in the evaporator (6.3.3) and
transfer it quantitatively into a weighing bottle that has previously been heated to 110�C, cooled and then weighed.
Remove the remaining solvent by heating under a gentle stream of nitrogen. Dry in an oven at 110�Cfor 5min.
Cool in a desiccator and weigh to the nearest 0,01 g. Ensure that the fat has reached constant mass. Let the mass
of the fat be A.
Pipette a further equal volume of the initial n-hexane solution into another preweighed bottle, evaporate, dry and
weigh as before. Let the mass of the fat be B.
The fat capacity of the column is equal to (B – A) g expressed to the nearest 0,01 g. Adjust the activity of the
aluminium oxide, if necessary in several stages, so that the fat capacity of a column is 0,62 g� 0,02 g of animal fat
or refined vegetable oil or 0,52 g� 0,02 g of butterfat.
Deactivate enough aluminium oxide for a series of analyses (e.g. the remaining contents of a 500 g bottle) to the
defined fat capacity.
6.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.3.1 High-speed blender
6.3.2 Chromatography column, of internal diameter 20 mm and length 300 mm, with a PTFE stopcock.
2)
6.3.3 Rotary evaporator (Kuderna-Danish or equivalent), with flask of capacity 500 ml, and with graduated
tube attached.
6.3.4 Glass wool, washed with light petroleum.
6.4 Procedure
6.4.1 General methods
For general methods, see ISO 3890-1:2000, annex A.
6.4.2 Test portion
Weigh, to the nearest 0,01 g, sufficient sample to provide approximately 0,7 g of fat and, in the case of solid
products, chop finely.
6.4.3 Extraction of fat and organochlorine compounds
Blend the test portion with 50 ml of acetone (6.2.1) in a high-speed blender (6.3.1) for 2 min. Add 200 ml of
n-hexane (6.2.2) and continue blending until complete breakdown of the sample is achieved. Allow the phases to
separate. Decant the maximum volume of the extract into a 1 l separating funnel through a filter of anhydrous
sodium sulfate (6.2.3) on glass wool (6.3.4). Wash the extract twice with 500 ml of sodium sulfate solution (6.2.4),
discarding the lower aqueous layers together with a little of the n-hexane layer.
Transfer 10 ml of n-hexane extract to a preweighed weighing bottle and determine the extracted fat according to
6.4.4. Based upon the calculation in 6.4.4, transfer a volume of n-hexane extract containing 0,40 g of milk, cheese
or butterfat to the rotary evaporator (6.3.3). Concentrate the transferred amount to 5 ml to 8 ml, disconnect and
continue the evaporation to 1 ml to 2 ml on a water bath at between 60 �Cto70�C under a stream of nitrogen.
6.4.4 Determination of extracted fat
Transfer 10 ml of the hexane extract into a preweighed weighing bottle. Evaporate to dryness at 60�C under a
stream of nitrogen. Dry the residue in an oven at 105�C for 15 min, cool and weigh the bottle and its contents.
Repeat the drying process to constant mass of the bottle and its contents. Calculate the amount of fat in grams per
10 ml of hexane extract by taking the difference between the final mass (in grams) after drying and the mass (in
grams) of the preweighed weighing bottle. Do not use this fat determination for the calculation of organochlorine
residue contents.
6.4.5 Clean-up
Prepare a slurry of 22 g of deactivated aluminium oxide (6.2.5), having a suitable fat capacity, in a small volume of
n-hexane and transfer to a chromatography column (6.3.2). Add a 10 mm layer of anhydrous sodium sulfate (6.2.3)
to thetop of thecolumnand wash thecolumnwith 15mlto20mlof n-hexane. Adjust the level of n-hexane to just
below the top of the sodium sulfate layer. Transfer an aliquot of concentrated n-hexane solution containing 0,50 g
of fat (0,40 g from butter, milk or cheese), prepared as described in 6.4.3, to the top of the column. Elute the
column with 150 ml of n-hexane, and concentrate the eluate to approximately 8 ml in the rotary evaporator (6.3.3).
Transfer, if necessary, to a graduated tube and continue the evaporation in a water bath at 50�C under a stream of
nitrogen to a volume of 2 ml to 3 ml. Remove the tube with the eluate from the water bath and continue the
evaporation at ambient temperature to a final volume of 1,0 ml, then stopper the tube.
6.5 Gas chromatography
See ISO 3890-1:2000, 6.2. For preliminary tests, etc., see ISO 3890-1:2000, clauses 10 to 14.
7 Method E: Column chromatography on alumina column (see reference [8])
7.1 Principle
The organochlorine compounds are extracted from the sample using light petroleum. The specified amount of fat
extract is purified by chromatography on basic aluminium oxide of precisely defined activity, using light petroleum
as eluting solvent. The eluate is concentrated then examined by GLC.
7.2 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and distilled or demineralized water
or water of equivalent purity.
7.2.1 Light petroleum, boiling range 40�Cto60�C, distilled.
7.2.2 Acetone (CH COCH )
3 3
7.2.3 Sodium sulfate (Na SO ), granular, anhydrous.
2 4
Heat at 500�C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
7.2.4 Sand, acid washed.
Heat at 500�C� 25 °C for 4 h, then cool and store in a stoppered bottle.
4)
7.2.5 Aluminium oxide (Al O ), basic (Woelm W 200 , Activity Grade Super I, or equivalent).
2 3
Weigh an unopened bottle. Add quickly to the contents (usually 515 g) 27 g of water. Close the bottle immediately.
Shake vigorously and allow to stand for 24 h. Transfer the contents to a well-stoppered bottle.
10 © ISO 2000 – All rights reserved
Weigh the empty original bottle and calculate the water content of the deactivated aluminium oxide. The ratio of the
obtained proportions shall be 9,5:0,5 (by volume). Adjust if necessary. Check the activity of the aluminium oxide by
chromatographing a standard solution of �-HCH with blank fat according to the procedure described below. The
recovery of �-HCH, as well as the fat retention, shall be more than 95 %. If the recovery of �-HCH is too low,
increase the water content of the aluminium oxide gradually by mixing 0,2 parts of distilled water to 99,8 parts of
aluminium oxide (by mass).
7.3 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
7.3.1 Soxhlet apparatus
2)
7.3.2 Rotary evaporator (Kuderna-Danish or equivalent), with flask of capacity 500 ml, and with graduated
tube attached.
7.3.3 High-speed blender
–1
7.3.4 Centrifuge, capable of rotating at frequency of 2 500 min .
7.3.5 Quartz wool
7.3.6 Chromatographic column, of internal diameter 6 mm and length 175 mm, having an outlet of internal
diameter 1 mm and length 40 mm, and a solvent reservoir of internal diameter 70 mm and length 125 mm.
7.3.7 Graduated tubes, of capacity 25 ml.
7.4 Procedure
7.4.1 Extraction of fat and organochlorine compounds
7.4.1.1 General methods
See ISO 3890-1:2000, annex A.
7.4.1
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 3890-2
Première édition
2000-08-01
Lait et produits laitiers — Détermination
des résidus de composés organochlorés
(pesticides) —
Partie 2:
Méthodes d’essai pour la purification des
extraits bruts et tests de confirmation
Milk and milk products — Determination of residues of organochlorine
compounds (pesticides) —
Part 2: Test methods for crude extract purification and confirmation
Numéro de référence
©
ISO 2000
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Sommaire Page
Avant-propos.v
1 Domaine d'application.1
2Référence normative .1
3Méthode A: Séparation liquide-liquide à l'aide d'acétonitrile et purification sur colonne de
Florisil (voir référence [3]).1
3.1 Principe.1
3.2 Réactifs .2
3.3 Appareillage .3
3.4 Mode opératoire.3
3.5 Chromatographie en phase gazeuse.4
4Méthode B: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et purification sur
colonne d'alumine (voir références [4� et [5�) .4
4.1 Principe.4
4.2 Réactifs .4
4.3 Appareillage .5
4.4 Mode opératoire.5
4.5 Chromatographie en phase gazeuse.6
5Méthode C: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et purification sur
colonne de Florisil (voir référence [6]) .7
5.1 Principe.7
5.2 Réactifs .7
5.3 Appareillage .7
5.4 Mode opératoire.8
5.5 Chromatographie en phase gazeuse.8
6Méthode D: Chromatographie sur colonne d'oxyde d'aluminium d'activité définie avec
précision (voir référence [7]) .8
6.1 Principe.8
6.2 Réactifs .9
6.3 Appareillage .10
6.4 Mode opératoire.10
6.5 Chromatographie en phase gazeuse.11
7Méthode E: Chromatographie sur colonne d'oxyde d'aluminium (voir référence [8]) .11
7.1 Principe.11
7.2 Réactifs .11
7.3 Appareillage .12
7.4 Mode opératoire.12
7.5 Chromatographie en phase gazeuse.13
8Méthode F: Chromatographie sur colonne de Florisil partiellement désactivé
(voir références [9], [10], [11]).13
8.1 Principe.13
8.2 Réactifs .13
8.3 Appareillage .13
8.4 Mode opératoire.14
8.5 Chromatographie en phase gazeuse.15
9Méthode G: Chromatographie sur colonne de gel de silice partiellement désactivé
(voir référence [12]).15
9.1 Principe.15
9.2 Réactifs .15
9.3 Appareillage.16
9.4 Mode opératoire .16
9.5 Chromatographie en phase gazeuse .17
10 Méthode H: Chromatographie par perméation de gel.17
10.1 Principe.17
10.2 Réactifs .17
10.3 Appareillage.18
10.4 Mode opératoire .18
10.5 Chromatographie en phase gazeuse .18
11 Tests de confirmation et procédé supplémentaire de purification.19
11.1 Test de confirmation A: Dosage des composés organochlorés par chromatographie en phase
gazeuse sur colonne capillaire (voir références [14], [15], [16]) .19
11.2 Test de confirmation B: Chromatographie en couche mince des composés organochlorés
(voir référence [9]).20
11.3 Test de confirmation C: Modifications chimiques (voir références [17], [18], [19], [20], [21]).23
11.4 Test de confirmation D: Modifications photochimiques (voir référence �22�) .27
12 Procédé supplémentaire de purification .27
12.1 Principe.27
12.2 Réactifs .27
12.3 Appareillage.28
12.4 Mode opératoire .28
Bibliographie .29
iv © ISO 2000 – Tous droits réservés
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiéeaux
comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude aledroit de faire partie ducomité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en
liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec la Commission
électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 3.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour
vote. Leur publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités
membres votants.
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments delaprésente partie de l’ISO 3890 peuvent faire
l’objet de droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de
ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
La Norme internationale ISO 3890-2 a étéélaboréepar le comité technique ISO/TC 34, Produits agricoles
alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, en collaboration avec la Fédération internationale de
laiterie (FIL) et l'AOAC International (Association des chimistes analytiques officiels); elle sera également publiée
par ces deux organisations.
L'ISO 3890 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits laitiers —
Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides):
— Partie 1: Considérations générales et méthodes d'extraction
— Partie 2: Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de confirmation
NORME INTERNATIONALE ISO 3890-2:2000(F)
Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés
organochlorés (pesticides) —
Partie 2:
Méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts et tests de
confirmation
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente partie de l’ISO 3890 peut impliquer l’emploi de produits,
d’opérations et d’équipements à caractère dangereux. La présente partie de l’ISO 3890 ne prétend pas
aborder tous les problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à
l’utilisateur d’établir des pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité,et des’assurer du
respect delaréglementation nationale en vigueur.
1 Domaine d'application
La présente partiedel'ISO3890spécifie des méthodes d'essai pour la purification des extraits bruts obtenus avec
les méthodes générales données dans l'ISO 3890-1. Elle donne également des méthodes recommandées pour la
détermination des résidus de composés organochlorés dans le lait et les produits laitiers ainsi que des tests de
confirmation et des techniques de purification.
2Référence normative
Le document normatif suivant contient des dispositions qui, par suite de la référence qui y est faite, constituent des
dispositions valables pour la présente partie de l'ISO 3890. Pour les références datées, les amendements
ultérieurs ou les révisions de ces publications ne s’appliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords
fondés sur la présente partie de l'ISO 3890 sont invitées à rechercher la possibilité d'appliquer l’édition la plus
récente du document normatif indiqué ci-après. Pour les références non datées, la dernière édition du document
normatif en référence s’applique. Les membres de l'ISO et de la CEI possèdent le registre des Normes
internationales en vigueur.
ISO 3890-1:2000, Lait et produits laitiers — Détermination des résidus de composés organochlorés (pesticides) —
Partie 1: Considérations générales et méthodes d'extraction.
3Méthode A: Séparation liquide-liquide à l'aide d'acétonitrile et purification sur
colonne de Florisil (voir référence [3])
3.1 Principe
Extraction des composés organochlorésainsi quedela matière grasse d'un échantillon par l'une des méthodes
décrites dans l'ISO 3890-1. Concentration de l'extrait presque jusqu'à sec, puis dissolution dans l'éther de pétrole
et séparation des composés organochlorés dans l'acétonitrile. Aprèsmélange de l'acétonitrile avec un excèsd'eau,
séparation des composés organochlorés dans l'éther de pétrole. Purification de la phase organique par
chromatographie sur une colonne de Florisil en utilisant comme éluant un mélange d'éther de pétrole et d'oxyde
d’éthyle. Concentration des éluats pour examen par chromatographie en phase gazeuse.
Une méthode particulière est décrite pour les échantillons de fromage.
3.2 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distilléeou
déminéralisée, ou de l'eau de puretééquivalente.
3.2.1 Éther de pétrole, ayant un point d'ébullition compris entre 40 °Cet60 °C.
Distiller sur pastilles d'hydroxyde de potassium ou de sodium.
3.2.2 Acétonitrile (CH CN), saturé d'éther de pétrole.
Pour la purification, mélanger 4 l d'acétonitrile avec 1 ml d'acide orthophosphorique et 30 g de pentoxyde de
phosphore dans un ballon en verre à fond rond. Ajouter des billes en verre et distiller à une température comprise
entre 81 °Cet82 °C. La température ne doit pas dépasser 82 °C.
Mélanger l'acétonitrile avec suffisamment d'éther de pétrole pour qu'une séparation des phases se produise.
3.2.3 Oxyde d’éthyle (C H OC H ), exempt de peroxydes.
2 5 2 5
Distiller et stabiliser avec 2,0 % de son volume d'éthanol absolu (C H OH).
2 5
3.2.4 Solvant d'élution A: mélange d’oxyde d’éthyle (3.2.3) et d’éther de pétrole (3.2.1) (6:94 en volume).
Sécher sur 10 g à 25 g de sulfate de sodium anhydre (3.2.6).
3.2.5 Solvant d'élution B: mélange d’oxyde d’éthyle (3.2.3) et d’éther de pétrole (3.2.1) (15:85 en volume).
Sécher sur 10 g à 25 g de sulfate de sodium anhydre (3.2.6).
3.2.6 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer à 500 °C � 25 °C pendant 4 h. Laisser refroidir et conserver dans un flacon bouché.
1)
3.2.7 Adsorbant: Florisil (Floridin Co ), 60 mesh à 100 mesh.
Activer l'adsorbant par chauffage à 650 °C� 25 °C pendant 4 h, le verser immédiatement dans des flacons bien
bouchés et le conserver dans l'obscurité. Avant usage, chauffer à 130 °C pendant au moins 5 h.
Il convient de conserver l'adsorbant soit à 130 °C � 2 °C, soit à la température ambiante dans un dessiccateur.
Dans ce dernier cas, cependant, il est recommandé de le chauffer à 130 °C � 2 °C tous les 2 jours.
Il convient que chaque lot d'adsorbant soit contrôlé de temps en temps de la façon suivante.
Faire passer 1 ml d'une solution hexanique étalon contenant 0,1 mg/l de lindane, d’heptachlore époxyde, d'aldrine
et de dieldrine et 0,3 mg/l d'endrine à travers la colonne d'absorption (voir l’ISO 3890-1:2000, 9.3). Éluer et
concentrer comme décrit en 3.4.3. Déterminer la récupération par chromatographie en phase gazeuse.
L'adsorbant est satisfaisant si le lindane, l'heptachlore, l'aldrine et l'heptachlore époxyde sont trouvés
quantitativement dans le solvant d'élution A (3.2.4) et la dieldrine et l'endrine dans le solvant d'élution B (3.2.5).
3.2.8 Chlorure de sodium (NaCl), solution aqueuse à 2%.
Chauffer le chlorure de sodium à 500 °C � 25 °C pendant 4 h avant de préparer la solution.
1) Floridine Co est un exemple de produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des
utilisateurs de la présente partie de l'ISO 3890 et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du
produit ainsi désigné.
2 © ISO 2000 – Tous droits réservés
3.2.9 Éthanol (C H OH), absolu.
2 5
3.2.10 Oxalate de sodium (Na C O )ou oxalate de potassium (K C O ).
2 2 4 2 2 4
3.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
3.3.1 Colonnes de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 20 mm et une longueur de 300 mm,
munies de robinets en PTFE et de disques en verre fritté ou de tampons de laine de verre.
2)
3.3.2 Évaporateur rotatif (appareil de Kuderna-Danish ou équivalent), avec fiole d’évaporation de 500 ml de
capacité,etreliéà un tube gradué.
3.3.3 Mélangeur à grande vitesse.
3.3.4 Ampoules à décanter, ayant une capacité de 125 ml et 1 000 ml.
3.4 Mode opératoire
3.4.1 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
3.4.1.1 Méthodes générales
Voir l'ISO 3890-1:2000, annexe A.
3.4.1.2 Méthode particulière pour le fromage
Placer dans un mélangeur à grande vitesse (3.3.3) une quantité suffisante d'échantillon coupé en morceau (pour
obtenir 3 g de matière grasse), 2 g environ d'oxalate de sodium ou d'oxalate de potassium (3.2.10) et 100 ml
d'éthanol (3.2.9) et mélanger pendant 2 min à 3min.(Si,par expérience, on sait qu'avec tel ou tel type de produit
les émulsions ne sont pas cassées par la centrifugation, ajouter 1 ml d'eau pour 2 g d'échantillon avant de
mélanger.) Verser la suspension homogénéisée dans un flacon à centrifuger de 500 ml, ajouter 50 ml d'oxyde
d’éthyle (3.2.3) et secouer vigoureusement pendant 1 min. Ajouter 50 ml d'éther de pétrole (3.2.1) et secouer
vigoureusement pendant 1 min à 2min (ou répartir le mélange dans deux flacons de 250 ml et extraire chacun par
agitation vigoureuse pendant 1 min à 2 min avec 25 ml d'éther de pétrole). Procéder comme décrit dans
l'ISO 3890-1:2000, A.6.3.3.
3.4.2 Séparation liquide-liquide
Peser, à 0,01 g près, 1 g à 3g de la matière grasse extraite dans une ampoule à décanter de 125 ml (3.3.4) et
dissoudre dans 15 ml d'éther de pétrole (3.2.1). Ajouter 30 ml d'acétonitrile saturé d'éther de pétrole (3.2.2) et
agiter vigoureusement pendant 1 min à 2min. Aprèsséparation des phases, faire couler la couche inférieure
d'acétonitrile dans une ampoule à décanter de 1 000 ml (3.3.4) contenant 700 ml d'une solution de chlorure de
sodium (3.2.8) et 100 ml d'éther de pétrole (3.2.1). Secouer vigoureusement la couche d'éther de pétrole restée
dans l'ampoule à décanter de 125 ml par trois fois avec des portions de 30 ml d'acétonitrile saturé d'éther de
pétrole (3.2.2).
Rassembler les extraits acétonitrile dans l'ampoule à décanter de 1 000 ml, puis secouer avec précaution. Soutirer
la phase aqueuse inférieure dans une seconde ampoule à décanter de 1 000 ml et la secouer pendant 12 s avec
100 ml d'éther de pétrole. Rassembler les phases éther de pétrole provenant des deux ampoules à décanter de
1 000 ml. Laver deux fois avec des portions de 100 ml d'eau ou de solution de chlorure de sodium (3.2.8). Sécher
2) L’évaporateur rotatif de Kuderna-Danish est un exemple d’appareil approprié disponible sur le marché. Cette information
est donnée à l'intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 3890 et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou
recommande l'emploi exclusif du produit ainsi désigné.
sur sulfate de sodium (3.2.6) et filtrer dans la fiole d’évaporation de 500 ml de l’évaporateur rotatif (3.3.2), muni
d'un tube gradué. Rincer la colonne de sulfate de sodium trois fois avec des portions de 10 ml d'éther de pétrole
(3.2.1). Ensuite, concentrer la solution d'éther de pétrole jusqu'à 10 ml à l'aide de l'évaporateur rotatif (3.3.2).
3.4.3 Purification sur colonne de Florisil
Placer dans une colonne chromatographique (3.3.1) une couche d'adsorbant (3.2.7) de 100 mm. Couvrir d'une
couche de 10 mm de sulfate de sodium (3.2.6) et rincer le tout avec 40 ml à 50 ml d'éther de pétrole (3.2.1).
Introduire sur la colonne (3.3.1), à la pipette, les 10 ml de l'extrait concentré dans l'éther de pétroleobtenuen3.4.2
et rincer le récipient deux fois avec des portions d'environ 5 ml d'éther de pétrole. Éluer ensuite dans une fiole
d’évaporation (3.3.2) munie d'un tube gradué en utilisant 200 ml du solvant d'élution A (3.2.4). Il convient que la
vitesse d'élution ne dépasse pas 5 ml/min. Changer les fioles de réception et éluer de la même façon en utilisant
200 ml du solvant d'élution B (3.2.5).
Concentrer les deux éluats séparément jusqu'au petit volume désiré en utilisant l'évaporateur rotatif (3.3.2).
Examiner chaque éluat par chromatographie en phase gazeuse. Si une purification supplémentaire se révèle
nécessaire, celle-ci peut être conduite sur une seconde colonne d'adsorbant récemment préparé ou comme
indiqué dans l'ISO 3890-1:2000, annexe A.
Le premier éluat contient un peu d'HCB, les isomères HCH, l'heptachlore, l'heptachlore époxyde, l'aldrine, le DDE,
le TDE et le DDT. Le second éluat contient la dieldrine et l'endrine.
3.5 Chromatographie en phase gazeuse
Voir l'ISO 3890-1:2000, 6.2. Pour les essais préliminaires, etc., voir l'ISO 3890-1:2000, articles 10 à 14.
4Méthode B: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et
purification sur colonne d'alumine (voir références [4� et [5�)
4.1 Principe
Extraction des composés organochlorésainsi quedela matière grasse d’un échantillon par la méthode décrite
dans l'ISO 3890-1:2000, article A.6, puis séparation des résidus dans la diméthylformamide. Après addition d'une
solution de sulfate de sodium, séparation des composés organochlorés dans le n-hexane. Chromatographie de la
phase organique sur oxyde d'aluminium neutre en utilisant comme éluant le n-hexane. Concentration de l'éluat
pour examen par chromatographie en phase gazeuse.
Des méthodes particulières sont décrites pour les échantillons de lait et de beurre.
4.2 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distilléeou
déminéralisée, ou de l'eau de puretééquivalente.
4.2.1 n-Hexane [CH (CH ) CH ], ayant un point d'ébullition compris entre 68 °Cet70 °C.
3 2 4 3
Vérifier la pureté par chromatographie en phase gazeuse dans les conditions de travail de la colonne. Si
nécessaire, distiller sur hydroxyde de potassium.
4.2.2 Acétone (CH COCH ), d'utilisation courante.
3 3
4.2.3 Diméthylformamide (DMF).
Examiner un extrait au n-hexane d'une solution aqueuse diluée pour déceler les pics susceptibles d'interférer lors
de l'analyse par chromatographie en phase gazeuse. Redistiller le solvant, si nécessaire, et recueillir la fraction
dont le point d'ébullition est compris entre 152 °C et 154 °C.
4 © ISO 2000 – Tous droits réservés
4.2.4 n-Hexane, saturé de diméthylformamide.
4.2.5 Diméthylformamide, saturéede n-hexane.
4.2.6 Sable,lavé aux acides.
Chauffer pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
4.2.7 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
4.2.8 Oxyde d'aluminium (Al O ), neutre, activé.
2 3
Chauffer l'oxyde d'aluminium pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir. Ajouter avec précaution 7 parties d'eau à
93 parties d'oxyde d'aluminium (fraction massique) et mélanger soigneusement dans un récipient fermé pendant
au moins 90 min. Maintenir le récipient bien bouché et utiliser l'oxyde d'aluminium dans les 10 jours qui suivent.
4.2.9 Sulfate de sodium, solution aqueuse à 2%.
4.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
4.3.1 Appareil d'extraction Soxhlet.
2)
4.3.2 Évaporateur rotatif (appareil de Kuderna-Danish ou équivalent), avec fiole d’évaporation de 500 ml de
capacité,etreliéà un tube gradué.
4.3.3 Mélangeur à grande vitesse.
4.3.4 Colonnes de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 12 mm et une longueur de 300 mm,
munies de robinets en PTFE.
3)
4.3.5 Microcolonnes Snyder .
4.4 Mode opératoire
4.4.1 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
4.4.1.1 Méthodes générales
Voir l'ISO 3890-1:2000, annexe A.
4.4.1.2 Méthodes particulières
a) Lait
Introduire, dans l'ordre, 40 ml de lait bien mélangé,80mld'acétone (4.2.2) et 80 ml de n-hexane (4.2.1), dans
un bécher vortex de 250 ml. Homogénéiser ce mélange pendant 3 min. Le transférer immédiatement dans un
tube à centrifuger de 250 ml en lavant les lames du mixer avec 10 ml de n-hexane, puis avec 5 ml d'eau, et
ajouter les lavages dans le tube.
3) La microcolonne Snyder est un exemple d’appareil approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à
l'intention des utilisateurs de la présente partie de l'ISO 3890 et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande
l'emploi exclusif du produit ainsi désigné.
–1
Placer le tube dans une centrifugeuse à une fréquence de rotation de 2 500 min pendant 5 min. Recueillir la
couche de solvant n-hexane et la faire passer à travers une courte colonne de sulfate de sodium anhydre
(4.2.7). Laver le contenu du tube avec deux fractions successives de 25 ml de n-hexane et faire passer les
lavages à travers la colonne. Réduire les extraits rassemblés jusqu'à 15 ml environ dans l’évaporateur rotatif
(4.3.2). Transférer la solution dans une ampoule à décanter de 100 ml, graduée à 25 ml, et ajuster le volume à
25 ml. [Voir également la méthode E, 7.4.1.2 b) pour le lait.]
b) Beurre
Dissoudre 5 g de matière grasse butyrique clarifiée (fondue et décantéesur filtre) dans 10ml de n-hexane.
Transférer la solution dans une ampoule à décanter de 100 ml à l’aide de trois portions successives de 5 ml
de n-hexane.
4.4.2 Séparation de la matière grasse et des composés organochlorés à l'aide de DMF
Extraire les 25 ml de la solution hexanique de matière grasse (4.4.1) avec 10 ml de diméthylformamide (DMF)
saturéede n-hexane (4.2.5) en l'agitant dans une ampoule de décantation. Après2min à 3 min, recueillir la
couche inférieure de DMF dans une seconde ampoule à décanter de 100 ml (en retenant toute émulsion
interfaciale dans la première ampoule à décanter). Répéter l'extractiondela solutionde n-hexane avec deux
portions supplémentaires de 10 ml de DMF (4.2.5). Combiner les extraits DMF et les Iaver avec 10 ml de n-hexane
saturé de DMF (4.2.4).
Séparer lafractionde10ml de n-hexane et la laver avec une nouvelle portion de 10 ml de DMF (4.2.5). Rejeter le
n-hexane et ajouter les lavages à l'extrait initial de 30 ml de DMF dans une ampoule à décanter de 500 ml (ou de
préférence de 350 ml). Ajouter 6 ml de n-hexane (4.2.1) et secouer vigoureusement pendant 2 min avec 200 ml de
solution de sulfate de sodium (4.2.9).
Laisser reposer pendant 20 min pour laisser à l'hexane le temps de se séparer. Rassembler la phase hexanique
par agitation douce en tournant. Éliminer la phase aqueuse, sécher l'ampoule à décanter avec un papier filtre et
recueillir le n-hexane dans un tube gradué, à col rodé, pouvant contenir 15 ml de solvant. Rincer l'ampoule à
décanter avec de petites quantitésde n-hexane et les ajouter au tube.
Relier le tube à une microcolonne Snyder (4.3.5) et concentrer l'extrait hexanique à environ 2 ml.
4.4.3 Purification sur colonne d'oxyde d'aluminium à l'aide de n-hexane
Préparer une suspension de 5 g d'oxyde d'aluminium (4.2.8) dans le n-hexane (4.2.1) et la verser dans une
colonne de chromatographie (4.3.4) contenant un petit tampon de laine de coton lavé au solvant (voir
l’ISO 3890-1:2000, A.5.15). Laisser l'oxyde d'aluminium se déposer et le recouvrir d'une couche de sulfate de
sodium anhydre de 30 mm (4.2.7). Laisser s'écouler le n-hexane jusqu'à ce queleménisque du solvant atteigne le
haut de la couche de sulfate de sodium. Ajouter l'extrait (4.4.2) au n-hexane et laver la colonne avec des portions
de 2 ml de n-hexane (4.2.1).
Éluer à un débit d'élution n'excédant pas 5 ml/min avec 50 ml de n-hexane (4.2.1); recueillir l'éluat dans
l’évaporateur rotatif (4.3.2). Concentrer l'éluat à approximativement 5 ml. Détacher le tube gradué, l'adapter sur
une microcolonne Snyder (4.3.5) et poursuivre la réduction de l’éluat jusqu’à un volume de 1 ml.
4.5 Chromatographie en phase gazeuse
Voir l’ISO 3890-1:2000, 6.2. Pour les essais préliminaires, etc., voir l’ISO 3890-1:2000, articles 10 à 14.
6 © ISO 2000 – Tous droits réservés
5Méthode C: Séparation liquide-liquide à l'aide de diméthylformamide (DMF) et
purification sur colonne de Florisil (voir référence [6])
5.1 Principe
Extraction des composés organochlorésainsi quedela matière grasse d’un échantillon par la méthode décrite en
5.4.1. Concentration de l'extrait presque jusqu'à sec, puis dissolution dans l'éther de pétrole et séparation des
composés organochlorés dans la diméthylformamide. Après addition d'une solution de sulfate de sodium,
séparation supplémentaire des résidus de composés organochlorés dans l'éther de pétrole.
Chromatographie de la phase organique sur Florisil en utilisant comme éluant un mélange d'éther de pétrole et
d'éther diéthylique. Concentration de l'éluat pour examen par chromatographie en phase gazeuse.
5.2 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distilléeou
déminéralisée, ou de l'eau de puretééquivalente.
5.2.1 Éther de pétrole, redistillé et ayant un point d'ébullition compris entre 30 °Cet40 °C.
5.2.2 Oxyde d’éthyle (C H OC H ), exempt de peroxydes.
2 5 2 5
5.2.3 Éther de pétrole, redistillé et ayant un point d'ébullition compris entre 60 °Cet80 °C.
5.2.4 Solvant d'élution,mélange d’oxyde d’éthyle (5.2.2) et d’éther de pétrole (5.2.1) (6:94 en volume).
1)
5.2.5 Adsorbant: Florisil (Floridin Co ), 60 mesh à 100 mesh.
Chauffer l'adsorbant pendant 2 h à 650 °C dans un four à moufle. Refroidir à 130 °C et laisser pendant 5 h à cette
température dans une étuve. Laisser ensuite refroidir à la température ambiante dans un dessiccateur, puis
transvaser dans un récipient étanche à l'air et bouché. Ajouter 5 parties d'eau distillée à 95 parties d'adsorbant (en
volume) et secouer jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de grumeaux. Laisser reposer pendant 24 h et secouer à nouveau
avant utilisation.
5.2.6 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer à 500 °C � 25 °C pendant 4 h, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
5.2.7 Diméthylformamide (DMF), saturéeavec deI'éther de pétrole.
Distiller le DMF et en recueillir la fraction dont le point d'ébullition est compris entre 152 °Cet 154 °C, puis saturer
avec de I'éther de pétrole (5.2.1).
5.2.8 Éther de pétrole (5.2.1), saturé avec la diméthylformamide.
5.2.9 Sulfate de sodium, solution à 2%.
5.2.10 n-Hexane [CH (CH ) CH ].
3 2 4 3
5.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.3.1 Mélangeur à grande vitesse.
2)
5.3.2 Évaporateur rotatif (appareil de Kuderna-Danish ou équivalent), avec fiole d’évaporation de 500 ml de
capacité,etreliéà un tube gradué.
5.3.3 Colonne de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 20 mm et une longueur de 300 mm, munie
d’un disque en verre fritté et d’un robinet en PTFE.
5.4 Mode opératoire
5.4.1 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
Pour les méthodes générales, voir l'ISO 3890-1:2000, annexe A.
5.4.2 Séparation de la matière grasse et des pesticides à l'aide de DMF
Dissoudre l'extrait de l'échantillon, contenant 2 g à 5g de matière grasse, dans 25 ml d'éther de pétrole saturé
avec le DMF (5.2.8). Transférer dans une ampoule à décanter de 250 ml. Extraire avec de petites portions d'une
quantité mesurée (par exemple 75 ml) de DMF saturéed'éther de pétrole (5.2.7) ajoutées dans l'ampoule à
décanter. Secouer vigoureusement pendant 1 min à 2min à chaque fois et recueillir la phase DMF dans une
ampoule à décanter de 500 ml. Mélanger les phases rassemblées avec 200 ml d'une solution de sulfate de sodium
(5.2.9) et secouer chacune pendant 1 min à 2 min avec une portion de 40 ml puis trois portions de 25 ml d'éther de
pétrole (5.2.3). Recueillir les phases éther de pétrole et laver avec environ 10 ml d'eau. Sécher sur sulfate de
sodium (5.2.6) et filtrer à travers un tampon de laine de coton. Après addition d'environ 5 ml de n-hexane (5.2.10) à
travers le tampon de laine de coton, réduire à un volume d'environ 5 ml dans l'évaporateur rotatif (5.3.2).
5.4.3 Purification sur colonne de Florisil à l'aide d'éther de pétrole
Remplir à moitié la colonne chromatographique (5.3.3) avec de l'éther de pétrole (5.2.3). Ajouter 20 g d'adsorbant
désactivé (5.2.5) en petites portions à l'aide d'un entonnoir, en maintenant le robinet en PTFE partiellement ouvert
et en tapotant doucement la colonne. N'utiliser que des colonnes débarrassées de toute bulle d'air visible.
Recouvrir d'une couche de sulfate de sodium anhydre (5.2.6) de 20 mm d'épaisseur et laisser l'éther de pétrole
s'écouler vers la surface de remplissage de la colonne.
Introduire l’extrait de l'échantillon sur la colonne à l'aide de quelques millilitres de solvant d'élution (5.2.4). Laisser
l'extrait pénétrer dans la colonne en ouvrant le robinet jusqu'à queleménisque atteigne la couche de sulfate de
sodium (5.2.6).
Rincer le récipient initial à l'aide de quelques millilitres de solvant d'élution (5.2.4) et procéder comme ci-dessus.
Éluer la colonne à l'aide de 200 ml de solvant d'élution, recueillis dans un ballon à fond rond de 500 ml à une
vitesse d'élution ne dépassant pas 5 ml/min. Concentrer l'éluat jusqu'à 5ml dans un évaporateur rotatif (5.3.2).
Transférer le concentré dans un tube graduéà l'aide d'oxyde d’éthyle (5.2.2) et ajuster à un volume défini (10 ml à
20 ml) à l'aide d'oxyde d’éthyle (5.2.2).
5.5 Chromatographie en phase gazeuse
Voir l’ISO 3890-1:2000, 6.2. Pour les essais préliminaires, etc., voir l’ISO 3890-1:2000, articles 10 à 14.
6Méthode D: Chromatographie sur colonne d'oxyde d'aluminium d'activité définie avec
précision (voir référence [7])
6.1 Principe
Extraction des composés organochlorésd’un échantillon à l'aide d'un mélange d'acétone et de n-hexane.
Séparation de l'acétone dans du sulfate de sodium aqueux. Séchage et concentration du n-hexane.
Chromatographie de la quantité spécifiéed'extraitde matière grasse sur oxyde d'aluminium neutre d'activité définie
avec précision, en utilisant du n-hexane comme solvant d'élution.
Concentration de l'éluat, puis examen par chromatographie en phase gazeuse.
8 © ISO 2000 – Tous droits réservés
6.2 Réactifs
Sauf indication différente, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue et de l'eau distilléeou
déminéralisée, ou de l'eau de puretééquivalente.
6.2.1 Acétone (CH COCH ).
3 3
6.2.2 n-Hexane [CH (CH ) CH ].
3 2 4 3
6.2.3 Sulfate de sodium (Na SO ), en granulés, anhydre.
2 4
Chauffer pendant 4 h à 500 °C, puis refroidir et conserver dans un flacon bouché.
6.2.4 Sulfate de sodium,solution à 2%.
4)
6.2.5 Oxyde d'aluminium (Al O ), neutre (Woelm W 200 , Activity Grade Super 1 ou équivalent).
2 3
Préchauffer le produit tel quel à 500 °C� 25 °C pendant 3 h à 4 h afin d'éliminer toute humidité et tout produit
organique pouvant interférer, puis refroidir sur pentoxyde de phosphore. En désactiver une certaine quantité en
ajoutant environ 10 ml d'eau à 90 g d'oxyde d'aluminium, par portions de 2 ml à 3 ml, tout en agitant la fiole ou le
flacon par retournement. Bien boucher et secouer ou placer sur des rouleaux pour mélanger soigneusement.
Laisser s'équilibrer pendant 24 h avant emploi, en récipients fermés à température ambiante. Standardiser le
produit comme suit: peser 22,0 g d'oxyde d'aluminium; préparer une suspension dans un petit volume de n-hexane
(6.2.2) et la verser dans une colonne de chromatographie (6.3.2); ajouter une couche de 10 mm de sulfate de
sodium anhydre (6.2.3) et rincer la colonne avec 15 ml à 20 ml de n-hexane; ajuster le niveau de la couche de
n-hexane juste au-dessous du sommet de la couche de sulfate de sodium.
Placer une fiole de réception adéquate (de capacité d'au moins 250 ml) sous la colonne. Prélever à la pipette un
petit volume d'une solution de n-hexane contenant 1 g d'huile ou de graisse animale et le verser sur le sommet de
la colonne en ayant soin de bien laisser s'écouler le contenu de la pipette, qui ne doit pas descendre le long de la
paroi de la colonne. Laisser le niveau de l'huile dans la solution de n-hexane descendre jusqu'au sommet de la
couche de sulfate de sodium. Ajouter 2 ml de n-hexane et laisser à nouveau descendre le niveau.
Éluer la colonne avec 150 ml de n-hexane. Évaporer l'éluat dans l'évaporateur rotatif (6.3.3) jusqu'à obtention d'un
petit volume et le transférer quantitativement dans un vase à peser préalabIement chaufféà 110 °C, refroidi et taré.
Éliminer le solvant restant par chauffage sous un léger courant d'azote. Sécher dans une étuve à 110 °C pendant
5 min. Refroidir dans un dessiccateur et peser à 0,01 g près. S'assurer que l'on obtient une masse constante.
Soit A la masse de matière grasse.
Prélever à la pipette un nouveau volume égal de la solution initiale de n-hexane et le verser dans un autre vase à
peser taré. Évaporer, sécher et peser comme précédemment. Soit B la masse de matière grasse obtenue.
La capacité en matière grasse de la colonne est égale à (B – A)g, exprimée à 0,01 g près. Ajuster, si nécessaire
en plusieurs fois, l'activité de l'oxyde d'aluminium, de façon que la capacité en matière grasse d'une colonne soit de
0,62 g � 0,02 g de graisse animale ou d'huile végétale raffinée, ou de 0,52 g� 0,02 g de matière grasse butyrique.
Pour une série d'analyses, désactiver une quantité suffisante d'oxyde d'aluminium (soit les quantités restantes d'un
flacon de 500 g) pour la capacité définieenmatière grasse.
4) Woelm W 200 est un produit approprié disponible sur le marché. Cette information est donnée à l'intention des utilisateurs
de la présente partie de l'ISO 3890 et ne signifie nullement que l'ISO approuve ou recommande l'emploi exclusif du produit ainsi
désigné.
6.3 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
6.3.1 Mélangeur à grande vitesse.
6.3.2 Colonne de chromatographie, ayant un diamètre intérieur de 20 mm et une longueur de 300 mm, munie
d’un robinet en PTFE.
2)
6.3.3 Évaporateur rotatif (appareil de Kuderna-Danish ou équivalent), avec fiole d’évaporation de 500 ml de
capacité,etreliéà un tube gradué.
6.3.4 Laine de verre,lavée à l'éther de pétrole.
6.4 Mode opératoire
6.4.1 Méthodes générales
Pour les méthodes générales, voir l'ISO 3890-1:2000, annexe A.
6.4.2 Prise d'essai
Peser, à 0,01 g près, une quantité suffisante d'échantillon pour obtenir environ 0,7 g de matière grasse; dans le cas
de produits solides, émincer finement.
6.4.3 Extraction de la matière grasse et des composés organochlorés
Dans un mélangeur à grande vitesse (6.3.1), mélanger pendant 2 min la prise d'essai avec 50 ml d'acétone (6.2.1).
Ajouter 200 ml de n-hexane (6.2.2) et poursuivre le mélange jusqu'à désagrégation complète de l'échantillon.
Laisser les phases se séparer. Décanter le volume maximal de l'extrait dans une ampoule à décanter de 1 l, à
travers un filtre de sulfate de sodium anhydre (6.2.3) placé sur laine de verre (6.3.4). Laver l'extrait 2 fois avec à
chaque fois 500 ml de solution de sulfate de sodium (6.2.4), en éliminant les phases aqueuses inférieures avec un
peu de la phase hexanique.
Transférer 10 ml d'extrait hexanique dans un vase à peser taré e
...
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