SIST EN ISO 12966-2:2017
(Main)Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of fatty acid methyl esters - Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids (ISO 12966-2:2017)
Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of fatty acid methyl esters - Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids (ISO 12966-2:2017)
ISO 12966-2:2017 specifies methods of preparing the methyl esters of fatty acids.
It includes methods for preparing fatty acid methyl esters from animal and vegetable fats and oils, fatty acids and soaps. To cover different requirements, four methylation methods are specified, namely:
a) a "rapid" transmethylation procedure under alkaline conditions;
b) a "general" transmethylation/methylation procedure under sequential alkaline and acid conditions;
c) a BF3 transmethylation procedure;
d) an alternative procedure using acid-catalysed transmethylation of glycerides.
Methyl esters so produced are used in various analytical procedures requiring such derivatives, e.g. gas-liquid chromatography (GLC), thin-layer chromatography (TLC) and infrared spectrometry (IR).
Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this document.
Tierische und pflanzliche Fette und Öle - Gaschromatographie von Fettsäuremethylestern - Teil 2: Herstellung von Fettsäuremethylestern (ISO 12966-2:2017)
Corps gras d'origines animale et végétale - Chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques d'acides gras - Partie 2: Préparation des esters méthyliques d'acides gras (ISO 12966-2:2017)
ISO 12966-2:2017 spécifie des méthodes de préparation des esters méthyliques d'acides gras.
Il comprend des méthodes de préparation des esters méthyliques d'acides gras à partir de corps gras d'origines animale et végétale, d'acides gras et de savons. Afin de répondre à différentes exigences, quatre méthodes de méthylation sont spécifiées, à savoir:
a) une méthode de transméthylation «rapide» en conditions alcalines;
b) une méthode de transméthylation/méthylation «générale» en conditions alcalines et acides séquentielles;
c) une méthode de transméthylation au BF3;
d) une méthode alternative reposant sur la transméthylation par catalyse acide de glycérides.
Les esters méthyliques ainsi obtenus sont utilisés dans diverses méthodes d'analyse exigeant des produits dérivés de ce type, par exemple la chromatographie gaz-liquide (CGL), la chromatographie sur couche mince (CCM) et la spectrométrie infrarouge (IR).
Le lait et les produits laitiers (ou les matières grasses provenant du lait et des produits laitiers) ne font pas partie du domaine d'application du présent document.
Rastlinske in živalske maščobe in olja - Plinska kromatografija metilnih estrov maščobnih kislin - 2. del: Priprava metilnih estrov maščobnih kislin (ISO 12966-2:2017)
Ta del standarda ISO 12966-4:2015 določa metodo za določanje metilnih estrov maščobnih kislin (FAME), pridobljenih s transesterifikacijo ali esterifikacijo iz maščob, olj in maščobnih kislin, s kapilarno plinsko kromatografijo (GLC). Metilne estre maščobnih kislin C8 do C24 je mogoče ločiti z uporabo metode iz tega dela standarda ISO 12966, vključno z metilnimi estri nasičenih maščobnih kislin, metilnimi estri cis- in trans-enkratno nenasičenih maščobnih kislin ter metilnimi estri cis- in trans-večkratno nenasičenih maščobnih kislin.
Ta metoda velja za surove, rafinirane in delno ali povsem hidrogenirane maščobe, olja in maščobne kisline, pridobljene iz živalskih in rastlinskih virov.
Ta metoda ni primerna za analizo mlečnih izdelkov, maščob in olj prežvekovalcev ali izdelkov z dodano konjugirano linolno kislino (CLA). Mleko in mlečni izdelki (ali maščoba iz mleka in mlečnih izdelkov) niso zajeti v tem delu standarda ISO 12966.
Standard 12966-4:2015 se ne uporablja za dimerne, trimerne, polimerne in oksidirane maščobne kisline ter maščobe in olja.
General Information
Relations
Standards Content (Sample)
SLOVENSKI STANDARD
01-julij-2017
1DGRPHãþD
SIST EN ISO 12966-2:2011
5DVWOLQVNHLQåLYDOVNHPDãþREHLQROMD3OLQVNDNURPDWRJUDILMDPHWLOQLKHVWURY
PDãþREQLKNLVOLQGHO 3ULSUDYDPHWLOQLKHVWURYPDãþREQLKNLVOLQ ,62
Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of fatty acid methyl esters -
Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids (ISO 12966-2:2017)
Tierische und pflanzliche Fette und Öle - Gaschromatographie von
Fettsäuremethylestern - Teil 2: Herstellung von Fettsäuremethylestern (ISO 12966-
2:2017)
Corps gras d'origines animale et végétale - Chromatographie en phase gazeuse des
esters méthyliques d'acides gras - Partie 2: Préparation des esters méthyliques d'acides
gras (ISO 12966-2:2017)
Ta slovenski standard je istoveten z: EN ISO 12966-2:2017
ICS:
67.200.10 5DVWOLQVNHLQåLYDOVNH Animal and vegetable fats
PDãþREHLQROMD and oils
71.040.50 Fizikalnokemijske analitske Physicochemical methods of
metode analysis
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
EN ISO 12966-2
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
April 2017
EUROPÄISCHE NORM
ICS 67.200.10 Supersedes EN ISO 12966-2:2011
English Version
Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography
of fatty acid methyl esters - Part 2: Preparation of methyl
esters of fatty acids (ISO 12966-2:2017)
Corps gras d'origines animale et végétale - Tierische und pflanzliche Fette und Öle -
Chromatographie en phase gazeuse des esters Gaschromatographie von Fettsäuremethylestern - Teil
méthyliques d'acides gras - Partie 2: Préparation des 2: Herstellung von Fettsäuremethylestern (ISO 12966-
esters méthyliques d'acides gras (ISO 12966-2:2017) 2:2017)
This European Standard was approved by CEN on 3 April 2017.
CEN members are bound to comply with the CEN/CENELEC Internal Regulations which stipulate the conditions for giving this
European Standard the status of a national standard without any alteration. Up-to-date lists and bibliographical references
concerning such national standards may be obtained on application to the CEN-CENELEC Management Centre or to any CEN
member.
This European Standard exists in three official versions (English, French, German). A version in any other language made by
translation under the responsibility of a CEN member into its own language and notified to the CEN-CENELEC Management
Centre has the same status as the official versions.
CEN members are the national standards bodies of Austria, Belgium, Bulgaria, Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia,
Finland, Former Yugoslav Republic of Macedonia, France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania,
Luxembourg, Malta, Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Romania, Serbia, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland,
Turkey and United Kingdom.
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
CEN-CENELEC Management Centre: Avenue Marnix 17, B-1000 Brussels
© 2017 CEN All rights of exploitation in any form and by any means reserved Ref. No. EN ISO 12966-2:2017 E
worldwide for CEN national Members.
Contents Page
European foreword . 3
European foreword
This document (EN ISO 12966-2:2017) has been prepared by Technical Committee ISO/TC 34 “Food
products” in collaboration with Technical Committee CEN/TC 307 “Oilseeds, vegetable and animal fats
and oils and their by-products - Methods of sampling and analysis” the secretariat of which is held by
AFNOR.
This European Standard shall be given the status of a national standard, either by publication of an
identical text or by endorsement, at the latest by October 2017 and conflicting national standards shall
be withdrawn at the latest by October 2017.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. CEN [and/or CENELEC] shall not be held responsible for identifying any or all such patent
rights.
This document supersedes EN ISO 12966-2:2011.
According to the CEN-CENELEC Internal Regulations, the national standards organizations of the
following countries are bound to implement this European Standard: Austria, Belgium, Bulgaria,
Croatia, Cyprus, Czech Republic, Denmark, Estonia, Finland, Former Yugoslav Republic of Macedonia,
France, Germany, Greece, Hungary, Iceland, Ireland, Italy, Latvia, Lithuania, Luxembourg, Malta,
Netherlands, Norway, Poland, Portugal, Romania, Serbia, Slovakia, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland,
Turkey and the United Kingdom.
Endorsement notice
The text of ISO 12966-2:2017 has been approved by CEN as EN ISO 12966-2:2017 without any
modification.
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 12966-2
Second edition
2017-03
Animal and vegetable fats and oils —
Gas chromatography of fatty acid
methyl esters —
Part 2:
Preparation of methyl esters of fatty
acids
Corps gras d’origines animale et végétale — Chromatographie en
phase gazeuse des esters méthyliques d’acides gras —
Partie 2: Préparation des esters méthyliques d’acides gras
Reference number
ISO 12966-2:2017(E)
©
ISO 2017
ISO 12966-2:2017(E)
© ISO 2017, Published in Switzerland
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
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Tel. +41 22 749 01 11
Fax +41 22 749 09 47
copyright@iso.org
www.iso.org
ii © ISO 2017 – All rights reserved
ISO 12966-2:2017(E)
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Reactions . 1
5 Methodology . 2
5.1 Preparation of test sample . 2
5.2 Rapid method . 2
5.2.1 Applicability . 2
5.2.2 Principle . 2
5.2.3 Reagents . 3
5.2.4 Apparatus . 3
5.2.5 Procedure . 3
5.3 General method . 4
5.3.1 Applicability . 4
5.3.2 Principle . 4
5.3.3 Reagents . 4
5.3.4 Apparatus and materials . 5
5.3.5 Procedure . 5
5.4 Transmethylation using boron trifluoride (BF ) catalyst . 6
5.4.1 Principle . 6
5.4.2 Applicability . 6
5.4.3 Reagents . 6
5.4.4 Apparatus . 7
5.4.5 Procedure . 8
5.5 Acid-catalysed transmethylation of glycerides . 9
5.5.1 Principle . 9
5.5.2 Reagents . 9
5.5.3 Apparatus .10
5.5.4 Preparation of test sample .10
5.5.5 Procedure .10
Annex A (informative) Thin-layer chromatography method for testing the completeness
of derivatization .11
Bibliography .15
ISO 12966-2:2017(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT) see the following
URL: w w w . i s o .org/ iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 12966-2:2011), of which it constitutes a
minor revision.
The changes compared to the previous edition are as follows:
— milk and milk fat products have been excluded from the scope.
A list of all the parts in the ISO 12966 series can be found on the ISO website.
iv © ISO 2017 – All rights reserved
ISO 12966-2:2017(E)
Introduction
General
Oils and fats (i.e. liquid and solid lipids) are predominantly composed of fatty acid esters of glycerol
(triacylglycerols, TAGs), with smaller amounts of fatty acid esters of sterols and long chain of aliphatic
alcohols. Due to the high molecular mass of the TAGs and their consequent low volatility, they are
difficult to analyse directly by gas chromatography (GC), especially if a detailed analysis of unsaturated
fatty acids is required. Fatty acids themselves do not chromatograph well (except for short-chain-length
fatty acids, e.g. butanoic and pentanoic acids). It is therefore better practice to form fatty acid esters,
usually the fatty acid methyl esters (FAMEs), prior to GC.
The analysis of oils and fats has been extensively reviewed in Reference [9].
The formation of FAMEs is a critical stage in the analysis of fatty acids. Non-quantitative conversion
of fatty acids to FAMEs, modification of the structure of fatty acids (e.g. changes in positional and
geometric isomers present) and formation of non-FAME artefacts may all affect the quantitative
determination of fatty acid composition.
Transesterification is one mechanism which can be employed to form FAMEs from fatty acid esters in
fats (i.e. triacylglycerol). Alkali- or acid-catalysed transesterification procedures can be used to form
FAMEs in a methanolic medium; the procedure can be termed transmethylation. Transmethylation is
a reversible process and a large excess of methanol is required to maintain an equilibrium position
which favours formation of the FAMEs. Water can prevent the reaction going to completion, and its
presence should therefore be minimized. Alkali-catalysed procedures do not produce FAMEs from free
fatty acids, due to the formation of soaps.
Esterification is an acid-catalysed mechanism which can be employed to form FAMEs from fatty acids.
It is possible that the fatty acids are naturally present in the sample of fat under examination. Formation
of FAMEs by this mechanism is commonly termed methylation. Again, an excess of methanol and the
absence of water are preconditions for the quantitative formation of FAMEs.
This document provides guidelines for the preparation of fatty acid methyl esters. In support of these
guidelines, various procedures to prepare fatty acid methyl esters are specified. These include the
following:
a) “rapid” transmethylation under alkaline conditions;
b) “general” transmethylation/methylation under sequential alkaline and acid conditions;
c) boron trifluoride (BF ) transmethylation/methylation.
“Rapid” transmethylation method under alkali-catalysed conditions
This method is applicable to the routine analysis of edible fats and oils containing fatty acids down to
butanoic acid (C4:0) and/or for the determination of butanoic acid or hexanoic acid (C6:0) by GC using
an internal standard.
Alkaline catalysts transesterify neutral lipids in the presence of anhydrous methanol (transmethylation)
more rapidly than acid catalysts. The disadvantages of such alkali-catalysed procedures are that free
fatty acids are not esterified, and the presence of water may prevent the transmethylation going to
completion (hydrolysis of the FAMEs to free fatty acids). The most commonly used reagents are
potassium and sodium hydroxide and sodium methoxide in the presence of anhydrous methanol.
“General” transmethylation/methylation under sequential alkaline and acid conditions
This method under sequential alkali- and acid-catalysed conditions is applicable to all oils and fats
including distillate and acid oils, but is not recommended for lauric oils. Short-chain fatty acid methyl
esters are easily lost during reflux. For lauric acid oils, the “rapid” transmethylation method is
recommended.
ISO 12966-2:2017(E)
During methylation, substances containing the following configurations can be totally or partially
decomposed:
a) keto, epoxy, hydroxyl, hydroperoxy groups;
b) cyclopropyl and cyclopropenyl groups;
c) acetylenic fatty acids.
Boron trifluoride (BF ) transmethylation/methylation
Owing to the toxicity of BF it is recommended that this method only be used in extremis.
The BF method is applicable for most oils, fats and derivatives (fatty acids, soaps) with the exception of
milk fats and fats containing fatty acids with specific groups.
During methylation, substances containing the following configurations can be totally or partially
decomposed:
a) keto, epoxy, hydroxyl, hydroperoxy groups;
b) cyclopropyl and cyclopropenyl groups;
c) acetylenic fatty acids.
If the fatty matter contains such substances in only very small amounts (e.g. cottonseed oil), the method
can be applied; otherwise, the “rapid” or “general” transmethylation/methylation methods should be
followed.
For GC, the optimum recovery of the methyl esters from the reaction mixture is obtained by using
isooctane (2,2,4-trimethylpentane). However, only about 75 % of the methyl caproate present is
recovered.
Boron trifluoride is a strong Lewis acid, and in the form of its coordination complex with methanol, under
reflux conditions, it can rapidly methylate fatty acids. Methanolic boron trifluoride does transmethylate
fatty acid esters (e.g. triglyceride), but the rate of reaction is slower than the methylation of fatty acids.
Methanolic boron trifluoride solution is commercially available, which enhances the attractiveness of
this acid catalyst, but there are potential disadvantages associated with the use of this reagent.
a) It has been reported that high concentrations of boron trifluoride (50 % mass fraction) produce
methoxy artefacts from unsaturated fatty acids.
b) The reagent has a limited shelf-life at ambient temperature and should be kept refrigerated.
c) Aged reagent can produce artefacts and therefore, it is recommended that each new batch
purchased be tested before use and periodically during its lifetime.
d) Methanolic boron trifluoride is an acidic reagent and therefore can produce derivatives of fatty
acids containing labile groups which can give rise to spurious peaks on FAME chromatograms.
Additional information
Much attention has been given to the preparation and analysis of esters of short-chain fatty acids by GC,
largely because of their occurrence in milk fats. Short-chain fatty acids, in the free state or esterified to
glycerol, can be converted completely to methyl esters by any of the reagents described in the preceding
paragraphs, but quantitative recovery from the reaction medium may not be achieved unless special
precautions are taken. Losses can occur at several stages in any procedure. Short-chain fatty acid esters
(methyl especially) are volatile and may be lost selectively on refluxing the esterification medium;
they are more soluble in water than longer-chain esters and can be lost in an aqueous extraction step
or they may be distilled off when the extracting solvent is evaporated. Selective losses can also occur
if non-saponifiable impurities have to be removed by sublimation or thin-layer chromatography (TLC)
purification. The best esterification procedures for short-chain fatty acids are those in which heating of
the reagents is avoided and in which stages involving aqueous extraction and solvent removal are absent.
vi © ISO 2017 – All rights reserved
ISO 12966-2:2017(E)
Injection of reaction media containing basic and acidic esterification catalysts directly on to GC
columns shortens their working lives. The top few centimetres of packed columns can be replenished
periodically, while lengths of deactivated tubing or “retention gaps” ahead of capillary columns protect
them. This can be a small price to pay for the speed, simplicity and accuracy of these procedures.
Additionally, this document gives a simple TLC procedure to check the effectiveness of the
transmethylation/methylation. This procedure may also be used to check the generic composition of an
oil or fat before transmethylation/methylation is undertaken.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 12966-2:2017(E)
Animal and vegetable fats and oils — Gas chromatography
of fatty acid methyl esters —
Part 2:
Preparation of methyl esters of fatty acids
1 Scope
This document specifies methods of preparing the methyl esters of fatty acids.
It includes methods for preparing fatty acid methyl esters from animal and vegetable fats and oils, fatty
acids and soaps. To cover different requirements, four methylation methods are specified, namely:
a) a “rapid” transmethylation procedure under alkaline conditions;
b) a “general” transmethylation/methylation procedure under sequential alkaline and acid conditions;
c) a BF transmethylation procedure;
d) an alternative procedure using acid-catalysed transmethylation of glycerides.
Methyl esters so produced are used in various analytical procedures requiring such derivatives, e.g.
gas-liquid chromatography (GLC), thin-layer chromatography (TLC) and infrared spectrometry (IR).
Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this
document.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content
constitutes requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For
undated references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
— ISO Online browsing platform: available at http:// www .iso .org/ obp
4 Reactions
The determination of the fatty acid composition of oils and fats is one of the fundamental analyses
within the fats and oils sector and has been extensively reviewed in Reference [9]. For this purpose, the
fatty acid components of lipids are usually converted to methyl esters followed by GC analysis.
The “rapid” method (5.2) does not derivatize free fatty acids (FFAs) present in oil to fatty acid methyl
esters (FAMEs). If FFAs are present, the assumption is usually made that the FFAs have the same fatty
ISO 12966-2:2017(E)
acid distribution as the triglycerides. This is usually true for crude oils, but less so for fractionated or
refined oils. Except for some cold-pressed oils, as a general rule, oils with <0,5 % mass fraction FFAs
have probably been refined; oils above can be assumed to be crude. The tolerable concentration of FFAs
in oil depends on the particular oil being analysed and also the intended use of the FAME data generated.
The presence of FFAs in oil might introduce additional peaks on the final gas chromatogram and make
the identification of FAMEs synthesized using the “rapid” transmethylation procedure problematic.
The “general” (5.3) procedure derivatizes both FFAs and glyceryl esters to FAMEs (see 5.3.1).
It is up to the analyst to decide whether the use of either the “rapid” or “general” procedure is
appropriate based on the nature of the oil being analysed. This notwithstanding, as a general rule,
use of the “rapid” method is suggested only if the FFA content is ≤0,5 % mass fraction. The “general”
method (5.3) is suggested for oils with an FFA content >0,5 % mass fraction. Alternatively, if a partially
hydrolysed fat is to be converted to FAMEs, the acid-catalysed transmethylation procedure specified in
5.5 may be used.
Owing to the toxicity of BF , it is recommended that the BF method (5.4) be used only in extremis.
3 3
5 Methodology
WARNING — The method specified involves the use of potentially hazardous reagents. Normal
precautions shall be taken for eye protection and for protection from the dangers of corrosive
chemical burns. Methanolic potassium hydroxide solution is poisonous.
5.1 Preparation of test sample
The test sample shall be liquid, dry and clear. Proceed in accordance with ISO 661, but heat the sample
to just above the melting point.
5.2 Rapid method
5.2.1 Applicability
This rapid transmethylation method, under alkali-catalysed conditions, is applicable to the routine
analysis of edible fats and oils containing fatty acids down to butanoic acid (C4:0) and/or for the
determination of butanoic acid or hexanoic acid (C6:0) by GC using an internal standard.
This procedure does not derivatize FFAs to FAMEs. The analyst should note that the presence of FFAs in
the fi
...
SLOVENSKI STANDARD
oSIST prEN ISO 12966-2:2017
01-februar-2017
5DVWOLQVNHLQåLYDOVNHPDãþREHLQROMD3OLQVNDNURPDWRJUDILMDPHWLOHVWURY
PDãþREQLKNLVOLQGHO 3ULSUDYDPHWLOHVWURYPDãþREQLKNLVOLQ ,62',6
Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of fatty acid methyl esters -
Part 2: Preparation of methyl esters of fatty acids
Tierische und pflanzliche Fette und Öle - Gaschromatographie von
Fettsäuremethylestern - Teil: 2: Herstellung von Fettsäuremethylestern (ISO/DIS 12966-
2:2016); Deutsche und Englische Fassung prEN ISO 12966-2:2016
Corps gras d'origines animale et végétale - Chromatographie en phase gazeuse des
esters méthyliques d'acides gras - Partie 2: Préparation des esters méthyliques d'acides
gras
Ta slovenski standard je istoveten z: prEN ISO 12966-2
ICS:
67.200.10 5DVWOLQVNHLQåLYDOVNH Animal and vegetable fats
PDãþREHLQROMD and oils
71.040.50 Fizikalnokemijske analitske Physicochemical methods of
metode analysis
oSIST prEN ISO 12966-2:2017 de
2003-01.Slovenski inštitut za standardizacijo. Razmnoževanje celote ali delov tega standarda ni dovoljeno.
oSIST prEN ISO 12966-2:2017
oSIST prEN ISO 12966-2:2017
EUROPÄISCHE NORM
ENTWURF
prEN ISO 12966-2
EUROPEAN STANDARD
NORME EUROPÉENNE
Dezember 2016
ICS 67.200.10 Vorgesehen als Ersatz für EN ISO 12966-2:2011
Deutsche Fassung
Tierische und pflanzliche Fette und Öle - Gaschromatographie
von Fettsäuremethylestern - Teil 2: Herstellung von
Fettsäuremethylestern (ISO/FDIS 12966-2:2016)
Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of Corps gras d'origines animale et végétale -
fatty acid methyl esters - Part 2: Preparation of methyl Chromatographie en phase gazeuse des esters
esters of fatty acids (ISO/FDIS 12966-2:2016) méthyliques d'acides gras - Partie 2: Préparation des esters
méthyliques d'acides gras (ISO/FDIS 12966-2:2016)
Dieser Europäische Norm-Entwurf wird den CEN-Mitgliedern zur parallelen Umfrage vorgelegt. Er wurde vom Technischen Komitee
CEN/TC 307 erstellt.
Wenn aus diesem Norm-Entwurf eine Europäische Norm wird, sind die CEN-Mitglieder gehalten, die CEN-Geschäftsordnung zu erfüllen, in
der die Bedingungen festgelegt sind, unter denen dieser Europäischen Norm ohne jede Änderung der Status einer nationalen Norm zu
geben ist.
Dieser Europäische Norm-Entwurf wurde vom CEN in drei offiziellen Fassungen (Deutsch, Englisch, Französisch) erstellt. Eine Fassung in
einer anderen Sprache, die von einem CEN-Mitglied in eigener Verantwortung durch Übersetzung in seine Landessprache gemacht und
dem Management-Zentrum des CEN-CENELEC mitgeteilt worden ist, hat den gleichen Status wie die offiziellen Fassungen.
CEN-Mitglieder sind die nationalen Normungsinstitute von Belgien, Bulgarien, Dänemark, Deutschland, der ehemaligen jugoslawischen
Republik Mazedonien, Estland, Finnland, Frankreich, Griechenland, Irland, Island, Italien, Kroatien, Lettland, Litauen, Luxemburg, Malta,
den Niederlanden, Norwegen, Österreich, Polen, Portugal, Rumänien, Schweden, der Schweiz, der Slowakei, Slowenien, Spanien, der
Tschechischen Republik, der Türkei, Ungarn, dem Vereinigten Königreich und Zypern.
Die Empfänger dieses Norm-Entwurfs werden gebeten, mit ihren Kommentaren jegliche relevante Patentrechte, die sie kennen, mitzuteilen
und unterstützende Dokumentationen zur Verfügung zu stellen.
Warnvermerk : Dieses Schriftstück hat noch nicht den Status einer Europäischen Norm. Es wird zur Prüfung und Stellungnahme
vorgelegt. Es kann sich noch ohne Ankündigung ändern und darf nicht als Europäischen Norm in Bezug genommen werden.
EUROPÄISCHES KOMITEE FÜR NORMUNG
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION
COMITÉ EUROPÉEN DE NORMALISATION
CEN-CENELEC Management-Zentrum: Avenue Marnix 17, B-1000 Brüssel
© 2016 CEN Alle Rechte der Verwertung, gleich in welcher Form und in welchem Ref. Nr. prEN ISO 12966-2:2016 D
Verfahren, sind weltweit den nationalen Mitgliedern von CEN vorbehalten.
oSIST prEN ISO 12966-2:2017
FprEN ISO 12966-2:2016 (D)
Inhalt
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Europäisches Vorwort . 4
Vorwort . 5
Einleitung . 6
1 Anwendungsbereich . 9
2 Normative Verweisungen . 9
3 Begriffe . 9
4 Reaktionen . 9
5 Verfahrensweise . 10
5.1 Vorbereitung der Untersuchungsprobe . 10
5.2 Schnellverfahren . 10
5.2.1 Anwendbarkeit . 10
5.2.2 Kurzbeschreibung . 10
5.2.3 Reagenzien . 10
5.2.4 Geräte . 11
5.2.5 Verfahren . 11
5.3 Allgemeines Verfahren . 12
5.3.1 Anwendbarkeit . 12
5.3.2 Kurzbeschreibung . 12
5.3.3 Reagenzien . 12
5.3.4 Geräte und Materialien . 13
5.3.5 Verfahren . 13
5.4 Transmethylierung mit Bortriflourid (BF )-Katalysator . 14
5.4.1 Kurzbeschreibung . 14
5.4.2 Anwendbarkeit . 14
5.4.3 Reagenzien . 14
5.4.4 Geräte . 15
5.4.5 Verfahren . 16
5.5 Säurekatalysierte Transmethylierung der Glyceride . 18
5.5.1 Kurzbeschreibung . 18
5.5.2 Reagenzien . 18
5.5.3 Geräte . 18
5.5.4 Vorbereitung der Untersuchungsprobe . 18
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FprEN ISO 12966-2:2016 (D)
5.5.5 Verfahren . 19
Anhang A (informativ) Dünnschichtchromatographisches Verfahren für die Prüfung der
Vollständigkeit der Derivatisierung . 20
Literaturhinweise. 24
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Europäisches Vorwort
Dieses Dokument (FprEN ISO 12966-2:2016) wurde vom Technischen Komitee ISO/TC 34 „Food products“
in Zusammenarbeit mit dem Technischen Komitee CEN/TC 307 „Ölsamen, tierische und pflanzliche Fette
und Öle und deren Nebenprodukte — Probenahme- und Untersuchungsverfahren“ erarbeitet, dessen
Sekretariat vom AFNOR gehalten wird.
Dieses Dokument ist derzeit zur parallelen formellen Abstimmung vorgelegt.
Dieses Dokument wird EN ISO 12966-2:2011 ersetzen.
Anerkennungsnotiz
Der Text von ISO/FDIS 12966-2:2016 wurde vom CEN als FprEN ISO 12966-2:2016 ohne irgendeine
Abänderung genehmigt.
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Vorwort
ISO (die Internationale Organisation für Normung) ist eine weltweite Vereinigung von Nationalen
Normungsorganisationen (ISO-Mitgliedsorganisationen). Die Erstellung von Internationalen Normen wird
normalerweise von ISO Technischen Komitees durchgeführt. Jede Mitgliedsorganisation, die Interesse an
einem Thema hat, für welches ein Technisches Komitee gegründet wurde, hat das Recht, in diesem Komitee
vertreten zu sein. Internationale Organisationen, staatlich und nicht-staatlich, in Liaison mit ISO, nehmen
ebenfalls an der Arbeit teil. ISO arbeitet eng mit der Internationalen Elektrotechnischen Kommission (IEC)
bei allen elektrotechnischen Themen zusammen.
Die Verfahren, die bei der Entwicklung dieses Dokuments angewendet wurden und die für die weitere Pflege
vorgesehen sind, werden in den ISO/IEC-Direktiven, Teil 1 beschrieben. Im Besonderen sollten die für die
verschiedenen ISO-Dokumentenarten notwendigen Annahmekriterien beachtet werden. Dieses Dokument
wurde in Übereinstimmung mit den Gestaltungsregeln der ISO/IEC-Direktiven, Teil 2 erarbeitet
(siehe www.iso.org/directives).
Es wird auf die Möglichkeit hingewiesen, dass einige Elemente dieses Dokuments Patentrechte berühren
können. ISO ist nicht dafür verantwortlich, einige oder alle diesbezüglichen Patentrechte zu identifizieren.
Details zu allen während der Entwicklung des Dokuments identifizierten Patentrechten finden sich in der
Einleitung und/oder in der ISO-Liste der empfangenen Patenterklärungen (siehe www.iso.org/patents).
Jeder in diesem Dokument verwendete Handelsname wird als Information zum Nutzen der Anwender
angegeben und stellt keine Anerkennung dar.
Eine Erläuterung der Bedeutung ISO-spezifischer Benennungen und Ausdrücke, die sich auf
Konformitätsbewertung beziehen, sowie Informationen über die Beachtung der Grundsätze der
Welthandelsorganisation (WTO) zu technischen Handelshemmnissen (TBT, en: Technical Barriers to Trade)
durch ISO enthält der folgende Link: www.iso.org/iso/foreword.html.
Das für dieses Dokument verantwortliche Komitee ist ISO/TC 34, Food products, Unterkomitee SC 11, Animal
and vegetable fats and oils.
Diese zweite Ausgabe ersetzt die erste Ausgabe (ISO 12966-2:2011), die eine geringfügige Änderung
darstellt.
Die Änderungen im Vergleich zur vorhergehenden Ausgabe sind die folgenden:
— Milch und Milcherzeugnisse (und Fette daraus) sind vom Anwendungsbereich der Norm ausgeschlossen
worden.
Eine Liste aller Teile der Normenreihe ISO 12966 kann auf der ISO-Website gefunden werden.
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Einleitung
Allgemeines
Öle und Fette (d. h. flüssige und feste Lipide) bestehen überwiegend aus Fettsäureglycerinestern
(Triacylglycerin, TAG) mit kleineren Mengen an Fettsäuresterylestern und langkettigen aliphatischen
Alkoholen. Wegen der hohen Molekularmasse der TAG und der daraus folgenden Schwerflüchtigkeit sind sie
schwer direkt durch Gaschromatographie (GC) zu analysieren, besonders wenn eine ausführliche Analyse
von ungesättigten Fettsäuren notwendig ist. Fettsäuren selbst lassen sich nicht gut chromatographieren (mit
Ausnahme der kurzkettigen Fettsäuren, z. B. Buttersäure und Pentansäure). Es ist deshalb eine bessere
Praxis, vor der GC Fettsäureester zu bilden, üblicherweise Fettsäuremethylester (FAME).
Die Analyse der Öle und Fette wird im Literaturhinweis [9] umfassend beschrieben.
Bei der Analyse von Fettsäuren ist die Bildung der FAME ein kritischer Arbeitsgang. Die nicht quantitative
Umwandlung der Fettsäuren zu FAME, die Modifikation der Struktur der Fettsäuren (z. B. Änderungen in
den vorhandenen Stellungsisomeren und geometrischen Isomeren) und die Bildung von
Nicht-FAME-Artefakten können die quantitative Bestimmung der Fettsäurezusammensetzung beeinflussen.
Die Umesterung ist ein Vorgang, der zum Einsatz kommt, um FAME aus Fettsäureestern in Fette (z. B.
Triacylglycerin) zu bilden. Alkali- oder säurekatalysierte Umesterungsverfahren können zur Bildung der
FAME in einem methanolischen Medium angewendet werden; das Verfahren kann als „Transmethylierung“
bezeichnet werden. Die Transmethylierung ist ein umkehrbares Verfahren und es ist ein großer Überschuss
an Methanol erforderlich, um eine Gleichgewichtslage aufrechtzuerhalten, die die Bildung der FAME
begünstigt. Wasser kann verhindern, dass die Reaktion zum Abschluss kommt, und sein Vorliegen sollte
deshalb minimiert werden. Wegen der Bildung von Seifen bilden alkalikatalysierte Verfahren keine FAME.
Die Veresterung ist ein säurekatalysierter Vorgang, der zur Bildung von FAME aus Fettsäuren zum Einsatz
kommen kann. Es ist möglich, dass die Fettsäuren natürlich in der Probe des zu untersuchenden Fettes
vorhanden sind. Die Bildung der FAME durch diesen Vorgang wird üblicherweise als „Methylierung“
bezeichnet. Wieder sind ein Überschuss an Methanol und die Abwesenheit von Wasser Voraussetzungen für
die quantitative Bildung der FAME.
Dieses Dokument enthält Leitlinien für die Herstellung von Fettsäuremethylestern. In Anlehnung an diese
Leitlinien sind verschiedene Verfahren zur Herstellung von Fettsäuremethylestern festgelegt. Diese
beinhalten:
a) „Schnelle“ Transmethylierung unter alkalischen Bedingungen;
b) „Allgemeine“ Transmethylierung/Methylierung unter aufeinanderfolgenden alkalischen und sauren
Bedingungen; und
c) Bortriflourid (BF )-Transmethylierung/Methylierung.
„Schnelles“ Transmethylierungsverfahren unter alkalikatalysierten Bedingungen
Dieses Verfahren ist für die Routineanalyse von essbaren Fetten und Ölen mit der einen internen Standard
anwendenden GC geeignet, die Fettsäuren bis hin zur Buttersäure (C4:0) enthalten und/oder für die
Bestimmung von Butter- oder Hexansäure (C6:0).
Alkalische Katalysatoren estern neutrale Lipide in Anwesenheit von wasserfreiem Methanol (Trans-
methylierung) schneller als Säurekatalysatoren um. Die Nachteile dieser alkalikatalysierten Verfahren sind,
dass freie Fettsäuren nicht verestert werden, und das Vorliegen von Wasser kann verhindern, dass die
Transmethylierung zum Abschluss kommt (Hydrolyse der FAME zu freien Fettsäuren). Die am häufigsten
verwendeten Reagenzien sind Kalium, Natriumhydroxid und Natriummethylat in Anwesenheit von wasser-
freiem Methanol.
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„Allgemeine“ Transmethylierung/Methylierung unter aufeinanderfolgenden alkalischen und sauren
Bedingungen
Dieses Verfahren unter aufeinanderfolgenden alkalischen und sauren Bedingungen ist für alle Öle und Fette
einschließlich Destillat und saure Öle geeignet, aber es ist nicht für laurische Öle zu empfehlen. Kurzkettige
Fettsäuremethylester gehen während der Rückflussdestillation leicht verloren. Bei laurischen Ölen wird das
„Schnellverfahren“ der Transmethylierung empfohlen.
Während der Methylierung können Substanzen, die die folgenden Bindungen enthalten, ganz oder teilweise
gespalten werden:
a) Keto-, Epoxid-, Hydroxyl-, Hydroperoxy-Gruppen;
b) Cyclopropyl- und Cyclopropenyl-Gruppen;
c) Acetylenfettsäuren.
Bortriflourid-(BF -)Transmethylierung/Methylierung
Wegen der Toxizität von BF wird empfohlen, dass dieses Verfahren nur im äußersten Fall angewendet wird.
Das BF -Verfahren ist für die meisten Öle, Fette und Derivate (Fettsäuren, Seifen) geeignet, mit Ausnahme
von Milchfetten und Fetten, die Fettsäuren mit spezifischen Gruppen enthalten.
Während der Methylierung können Substanzen, die die folgenden Bindungen enthalten, ganz oder teilweise
gespalten werden:
a) Keto-, Epoxid-, Hydroxyl-, Hydroperoxy-Gruppen;
b) Cyclopropyl- und Cyclopropenyl-Gruppen;
c) Acetylenfettsäuren.
Falls die Fettmasse diese Substanzen in nur sehr geringen Mengen (z. B. Baumwollsaatöl) enthält, kann das
Verfahren angewendet werden; ansonsten sollte den „Schnell-“ oder „allgemeinen“
Transmethylierungs-/Methylierungsverfahren gefolgt werden.
Bei der GC wird die optimale Wiederfindung der Methylester aus dem Reaktionsgemisch durch die
Anwendung von Isooctan (2,2,4-Trimethylpentan) erhalten. Jedoch werden nur etwa 75 % des vorhandenen
Methylcapronats wiedergefunden.
Bortriflourid ist eine starke Lewis-Säure, und kann in der Form seines Koordinationskomplexes mit
Methanol unter Rückflussbedingungen schnell Fettsäuren methylieren. Methanolisches Bortriflourid
transmethylisiert Fettsäureester (z. B. Triglycerid), aber die Reaktionsgeschwindigkeit ist geringer als die
Methylierung der Fettsäuren. Methanolische Bortriflouridlösung ist handelsüblich verfügbar, das steigert die
Attraktivität dieses sauren Katalysators, aber es gibt viele mit der Anwendung dieses Reagens verbundene
Nachteile.
a) Es wurde berichtet, dass hohe Konzentrationen von Bortriflourid (50 % Massenanteil)
Methoxy-Artefakte aus ungesättigten Fettsäuren erzeugen.
b) Das Reagens hat eine begrenzte Haltbarkeitsdauer bei Umgebungstemperatur und sollte gekühlt
aufbewahrt werden.
c) Das gealterte Reagens kann Artefakte erzeugen und deshalb wird empfohlen, dass jede neu gelieferte
Charge vor der Verwendung und periodisch während seiner Lebensdauer überprüft wird.
d) Methanolisches Bortriflourid ist ein saures Reagens und deshalb kann es Derivate der Fettsäuren
erzeugen, die instabile Gruppen enthalten, die zu störenden (falschen) Peaks auf den FAME-Chromato-
grammen führen können.
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Zusätzliche Information
Der Herstellung und Analyse von Estern der kurzkettigen Fettsäuren mit der GC ist viel Aufmerksamkeit
gewidmet worden, im Wesentlichen infolge ihres Vorkommens in Milchfetten. Kurzkettige Fettsäuren, im
ungebundenen Stadium oder verestert zu Glycerin, können mit allen in den vorausgehenden Absätzen
beschriebenen Reagenzien vollständig zu Methylestern umgewandelt werden, aber die quantitative
Wiederfindung vom Reaktionsmedium kann nicht erreicht werden, außer besondere Vorkehrungen werden
getroffen. Verluste können bei verschiedenen Phasen in jedem Verfahren auftreten. Kurzkettige
Fettsäureester (hauptsächlich Methyl) sind unbeständig und können wahlweise beim Rückfluss des
Veresterungsmediums verloren gehen; sie sind in Wasser löslicher als langkettige Ester und können in
einem wässrigen Extraktionsschritt verloren gehen, oder sie können abdestilliert werden, wenn das
Extraktionslösemittel verdampft. Selektive Verluste können ebenfalls auftreten, wenn nicht verseifbare
Verunreinigungen durch Sublimation oder Reinigung durch Dünnschichtchromatographie (DC) entfernt
werden müssen. Die besten Veresterungsverfahren für kurzkettige Fettsäuren sind die, bei denen ein
Erwärmen der Reagenzien vermieden wird und bei denen Phasen eine wässrige Extraktion zur Folge haben
und ein Entfernen des Lösemittels fehlt.
Die Injektion des Reaktionsmediums, das basische und saure Veresterungskatalysatoren enthält, direkt auf
die GC-Säulen verkürzt deren Nutzungsdauer. Die oberen wenigen Zentimeter der gepackten Säulen können
periodisch aufgefüllt werden, solange Längen des desaktivierten Rohrs oder „Retentionsgaps“ (leere
Vorsäulen) vor den Kapillarsäulen diese schützen. Das kann ein kleiner Preis sein, der für die
Geschwindigkeit, Einfachheit und Genauigkeit dieser Verfahren zu zahlen ist.
Zur Überprüfung der Effektivität der Transmethylierung/Methylierung gibt dieses Dokument zusätzlich ein
einfaches DC-Verfahren an. Dieses Verfahren darf auch angewendet werden, um die allgemeine
Zusammensetzung eines Öles oder Fettes zu überprüfen, bevor die Transmethylierung/Methylierung
durchgeführt wird.
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1 Anwendungsbereich
Dieses Dokument legt Verfahren zur Herstellung der Methylester von Fettsäuren fest.
Er bezieht Verfahren für die Herstellung von Fettsäuremethylestern aus tierischen und pflanzlichen Fetten
und Ölen, Fettsäuren und Seifen mit ein. Um den verschiedenen Anforderungen gerecht zu werden, sind vier
Methylierungsverfahren festgelegt, insbesondere:
a) ein „Schnellverfahren“ der Transmethylierung unter alkalischen Bedingungen;
b) ein „allgemeines“ Transmethylierungs-/Methylierungsverfahren unter aufeinanderfolgenden alkalischen
und sauren Bedingungen;
c) ein BF -Transmethylierungsverfahren;
d) ein alternatives Verfahren mit säurekatalysierter Transmethylierung der Glyceride.
Die so gewonnenen Methylester werden für verschiedene analytische Verfahren verwendet, bei denen diese
Derivate erforderlich sind, z. B. Gas-flüssig-Chromatographie (GC), Dünnschichtchromatographie (DC) und
Infrarotspektrometrie (IR).
Milch und Milcherzeugnisse (oder Fett aus Milch und Milcherzeugnissen) sind vom Anwendungsbereich
dieses Dokumentes ausgenommen.
2 Normative Verweisungen
Die folgenden Dokumente werden im Text derart zitiert, dass einige Teile davon oder ihr gesamter Inhalt
Anforderungen des vorliegenden Dokuments darstellen. Bei datierten Verweisungen gilt nur die in Bezug
genommene Ausgabe. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Ausgabe des in Bezug genommenen
Dokuments (einschließlich aller Änderungen).
ISO 661, Animal and vegetable fats and oils — Preparation of test sample
3 Begriffe
Es werden keine Begriffe in diesem Dokument angegeben.
ISO und IEC unterhalten terminologische Datenbanken für die Verwendung in der Normung
unter den folgenden Adressen:
— IEC Electropedia: unter http://www.electropedia.org/
— ISO Online browsing platform: unter http://www.iso.org/obp
4 Reaktionen
Die Bestimmung der Zusammensetzung der Fettsäure von Ölen und Fetten ist eine der wichtigsten Analysen
innerhalb des Fett- und Ölbereichs und wurde im Literaturhinweis [9] umfassend dargestellt. Für diesen
Zweck werden die Fettsäurebestandteile der Lipide üblicherweise in Methylester umgewandelt, gefolgt von
der GC-Analyse.
Das „Schnellverfahren“ (5.2) derivatisiert nicht die in Öl vorhandenen freien Fettsäuren (FFA) zu
Fettsäuremethylestern (FAME). Falls FFA vorhanden sind, wird davon ausgegangen, dass die FFA die gleiche
Fettsäureverteilung aufweisen, wie die Triglyceride. Das trifft normalerweise auf Rohöle zu, jedoch weniger
auf fraktionierte oder raffinierte Öle. Mit Ausnahme einiger kaltgepresster Öle, sind in der Regel Öle
mit < 0,5 % Massenanteil FFA vermutlich raffiniert worden; bei Ölen, die darüber liegen, kann angenommen
werden, dass sie unverarbeitet (roh) sind. Die zulässige Konzentration der FFA in Öl hängt von dem
einzelnen zu analysierenden Öl und auch von der vorgesehenen Anwendung der erzeugten FAME-Daten ab.
Die Anwesenheit von FFA in Öl kann zu zusätzlichen Peaks auf dem endgültigen Gaschromatogramm führen
und gestaltet die Identifizierung der synthetischen FAME mit dem „Schnellverfahren“ der
Transmethylierung problematisch.
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Das „allgemeine“ Verfahren (5.3) derivatisiert sowohl FFA als auch Glycerin-Ester zu FAME (siehe 5.3.1).
Es hängt vom Analytiker ab, zu entscheiden, ob, basierend auf der Art des zu analysierenden Öles, entweder
das „Schnellverfahren“ oder das „allgemeine“ Verfahren geeigneter ist. Ungeachtet dessen, wird in der Regel
die Anwendung des „Schnellverfahrens“ nur empfohlen, wenn der FFA-Gehalt ≤ 0,5 % Massenanteil ist. Das
„allgemeine“ Verfahren (5.3) wird für Öle mit einem FFA-Gehalt von > 0,5 % Massenanteil empfohlen. Falls
ein teilweise hydrolysiertes Fett in FAME umgewandelt wird, darf alternativ das in 5.5 festgelegte
säurekatalysierte Transmethylierungsverfahren angewendet werden.
Wegen der Toxizität von BF wird empfohlen, das BF -Verfahren (5.4) nur im äußersten Fall anzuwenden.
3 3
5 Verfahrensweise
WARNUNG — Das festgelegte Verfahren verlangt die Verwendung von gefährlichen Reagenzien.
Es müssen die üblichen Vorkehrungen zum Schutz der Augen und vor der Gefahr von Verätzungen
getroffen werden. Die methanolische Kaliumhydroxidlösung ist giftig.
5.1 Vorbereitung der Untersuchungsprobe
Die Untersuchungsprobe muss flüssig, wasserfrei und klar sein. Es ist nach ISO 661 vorzugehen, jedoch wird
die Probe nur gerade über den Schmelzpunkt erwärmt.
5.2 Schnellverfahren
5.2.1 Anwendbarkeit
Das Schnellverfahren der Transmethylierung unter alkalikatalysierten Bedingungen ist für die Routine-
analyse von essbaren Fetten und Ölen mit der einen internen Standard anwendenden GC geeignet, die Fett-
säuren bis hin zur Buttersäure (C4:0) enthalten und/oder für die Bestimmung von Butter- oder Hexansäure
(C6:0).
Dieses Verfahren derivatisiert keine FFA zu FAME. Der Analytiker sollte beachten, dass das Vorliegen von
FFA in der fertigen Lösung die Qualität der anschließenden Gaschromatographie beeinflussen kann.
ANMERKUNG Entsprechend COI/T.20/Doc. No. 24:2001 [8] kann ein ähnliches Verfahren direkt auf Proben der
folgenden Ölkategorien angewendet werden:
a) natives Olivenöl mit einem Säuregehalt geringer als 3,3 %;
b) raffiniertes Olivenöl;
c) Olivenöl (Gemisch aus nativem und raffiniertem Olivenöl);
d) raffiniertes Oliventresteröl;
e) Oliventresteröl (Gemisch aus nativem Olivenöl und raffiniertem Oliventresteröl).
5.2.2 Kurzbeschreibung
Methylester werden durch Transmethylierung mit methanolischer Kaliumhydroxidlösung gebildet.
Mit diesem Verfahren werden freie Fettsäuren nicht verestert.
5.2.3 Reagenzien
Sofern nicht anderweitig festgelegt, sind nur analysenreine Reagenzien zu verwenden.
Die Reagenzien dürfen keine Peaks erzeugen, die die der Fettsäuremethylester während der GC störend
beeinflussen. Jede neue Charge des Reagens oder Lösemittels sollte durch deren Anwendung zur Herstellung
des Methylesters von reiner Ölsäure überprüft werden. Bei jedem zusätzlichen, unerwarteten Auftreten von
Peaks während der GC-Endanalyse sollte das Reagens verworfen werden.
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5.2.3.1 Methanol, das nicht mehr als 0,5 % Massenanteil Wasser enthält.
5.2.3.2 Wasser, entsprechend ISO 3696 [3], Qualität 3.
5.2.3.3 Natriumhydrogensulfat, wasserfrei.
5.2.3.4 Isooctan (2,2,4-Trimethylpentan), chromatographische Qualität.
WARNUNG — Isooctan ist leicht entzündbar und feuergefährlich. Die Grenzen der explosiven
Volumenanteile in Luft betragen 1,1 % bis 6,0 %. Es ist toxisch bei Aufnahme und beim Einatmen.
Es ist mit einem korrekt funktionierenden Abzug zu arbeiten, wenn mit diesem Lösemittel
umgegangen wird.
5.2.3.5 Kaliumhydroxid, methanolische Lösung, Menge der Stoffkonzentration c ungefähr 2 mol/l.
Unter leichtem Erwärmen sind 13,1 g Kaliumhydroxid (Massenanteil w = 85 g/100 g) in 100 ml absolutem
Methanol aufzulösen.
5.2.3.6 Stammlösung des internen Standards, nur für die Bestimmung der Butter- und/oder
Hexansäure.
250 mg Valer
...
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