ISO 23611-3:2007
(Main)Soil quality — Sampling of soil invertebrates — Part 3: Sampling and soil extraction of enchytraeids
Soil quality — Sampling of soil invertebrates — Part 3: Sampling and soil extraction of enchytraeids
ISO 23611-3:2007 specifies a method for sampling, handling and extracting enchytraeids from terrestrial field soils as a prerequisite for using these animals as bioindicators (e.g. to assess the quality of a soil as a habitat for organisms). It applies to all terrestrial biotopes in which enchytraeids occur. ISO 23611-3:2007 is not applicable for semi-terrestrial soils and might be difficult to use under extreme climatic or geographical conditions.
Qualité du sol — Prélèvement des invertébrés du sol — Partie 3: Prélèvement et extraction des enchytréides
L'ISO 23611-3:2007 spécifie une méthode pour le prélèvement, la manipulation et l'extraction des enchytraéides du sol prélevés sur le terrain comme pré-requis à l'utilisation de ces animaux en tant que bio-indicateurs (par exemple, pour évaluer la qualité d'un sol en tant qu'habitat pour ces organismes). La présente partie de l'ISO 23611 s'applique à tous les biotopes terrestres dans lesquels il est possible de trouver des enchytraéides. L'ISO 23611-3:2007 n'est pas applicable à des sols semi-terrestres et peut être d'utilisation difficile dans des conditions climatiques ou géographiques extrêmes.
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INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23611-3
First edition
2007-05-01
Soil quality — Sampling of soil
invertebrates —
Part 3:
Sampling and soil extraction of
enchytraeids
Qualité du sol — Prélèvement des invertébrés du sol —
Partie 3: Prélèvement et extraction des enchytréides
Reference number
ISO 23611-3:2007(E)
©
ISO 2007
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ISO 23611-3:2007(E)
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ISO 23611-3:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 2
5 Apparatus . 2
6 Procedure . 3
6.1 Soil sampling. 3
6.2 Extraction of the enchytraeids . 3
6.3 Microscopic identification . 4
6.4 Preservation of Enchytraeidae . 4
6.5 Validity of the extraction process . 4
6.6 Determination of biomass. 5
7 Data assessment. 5
8 Test report . 5
Annex A (informative) Species identification in enchytraeids. 7
Annex B (informative) Quick extraction of enchytraeids . 8
Bibliography . 10
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ISO 23611-3:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 23611-3 was prepared by Technical Committee ISO/TC 190, Soil quality, Subcommittee SC 4, Biological
methods.
ISO 23611 consists of the following parts, under the general title Soil quality — Sampling of soil invertebrates:
⎯ Part 1: Hand-sorting and formalin extraction of earthworms
⎯ Part 2: Sampling and extraction of micro-arthropods (Collembola and Acarina)
⎯ Part 3: Sampling and soil extraction of enchytraeids
⎯ Part 4: Sampling, extraction and identification of soil-inhabiting nematodes
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ISO 23611-3:2007(E)
Introduction
This part of ISO 23611 has been drawn up since there is a growing need for the standardization of terrestrial
zoological field methods. Such methods, mainly covering the sampling, extraction and handling of soil
invertebrates, are needed for the following purposes:
⎯ biological classification of soils including soil quality assessment (e.g. References [21], [25], [27]);
⎯ terrestrial bioindication and long-term monitoring (e.g. References [13], [26]);
⎯ evaluation of the effects of chemicals on soil animals (References [15], [22]).
Data for these purposes are gained by standardized methods since they can form the basis for far-reaching
decisions (e.g. whether a given site should be remediated or not). In fact, the lack of such standardized
methods is one of the most important reasons why biological classification concepts in terrestrial (i.e. soil)
habitats have so far been relatively rarely used in comparison to aquatic sites.
Originally, the methods described here were developed for taxonomical and ecological studies, investigating
the role of enchytraeids in various soil ecosystems. These animals without doubt belong to the most important
[5]
soil invertebrates in temperate regions (mainly in acidic soils ). Their influence on soil functions like litter
[14], [19]
decomposition and nutrient cycling is well-known . Due to their number which is often very high (and to
[4]
their population biomass), they are also important in many terrestrial food-webs . Some species have
unintentionally been distributed by man in many soils of the world.
Since it is neither possible nor useful to standardize methods for all soil organisms, the most important
ones have been selected. [Microbiological parameters are already covered by existing ISO guidelines
[29] [37] [38]
(e.g. ISO 10381-6 , ISO 14240-1 and ISO 14240-2 )].
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INTERNATIONAL STANDARD ISO 23611-3:2007(E)
Soil quality — Sampling of soil invertebrates —
Part 3:
Sampling and soil extraction of enchytraeids
1 Scope
This part of ISO 23611 specifies a method for sampling, handling and extracting enchytraeids from terrestrial
field soils as a prerequisite for using these animals as bioindicators (e.g. to assess the quality of a soil as a
habitat for organisms).
Basic information on the ecology of enchytraeids and their use as bioindicators in the terrestrial environment
are included in the Bibliography.
This part of ISO 23611 applies to all terrestrial biotopes in which enchytraeids occur. The sampling design of
field studies in general is specified in ISO 10381-1. These details can vary according to the climatic/regional
conditions of the site to be sampled and an overview on the determination of effects of pollutants on
enchytraeids in field situations is given in Reference [6].
Methods for some other soil organism groups such as earthworms or micro-arthropods are specified in
ISO 23611-1 and ISO 23611-2.
This part of ISO 23611 is not applicable for semi-terrestrial (i.e. living in or close to the pure water) soils and
might be difficult to use under extreme climatic or geographical conditions (e.g. in high mountains).
When sampling soil invertebrates, it is highly recommendable to characterize the site (e.g. concerning climate
and land use). However, such a characterization is not covered by this part of ISO 23611. ISO 10390,
ISO 10694, ISO 11272, ISO 11274, ISO 11277, ISO 11461 and ISO 11465 are more suitable for measuring
pH, particle size distribution, C/N ratio, organic carbon content and water holding capacity.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
enchytraeids
small soil-inhabiting worms (a few millimetres to several centimetres in length) belonging to the family
Enchytraeidae, order Oligochaeta (class Clitellata, phylum Annelida)
EXAMPLE Species of the genera Enchytraeus, Fridericia or Cognettia.
3 Principle
Enchytraeids at a certain site are sampled from the soil by using a split corer (diameter usually 3 cm to 6 cm).
After sampling, the soil samples containing the enchytraeids are transported to the laboratory. Then the
enchytraeids are extracted from soil by means of a wet extraction method. (This approach has been well-
[11], [17], [20]
known for a long time .) After extraction, the enchytraeids are identified alive and, if required,
preserved in such a way that they can be stored in a collection indefinitely (e.g. for taxonomical purposes).
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The determination of the biomass of enchytraeids is also described in this part of ISO 23611. The abundance
and biomass values can be recalculated to the area of the soil corer or, more rarely, volume parameters.
NOTE 1 The sampling of enchytraeids is often included in much broader monitoring programmes which try to cover the
whole soil fauna or parts of it (e.g. the mesofauna). The design of such programmes is not included in this part of
ISO 23611 (but see e.g. Reference [3]).
NOTE 2 Some hints for the taxonomy of enchytraeids are given in Annex A.
4 Reagents
4.1 Tap water (without toxic properties, e.g. due to copper contamination).
4.2 Ethanol, 70 % (volume fraction).
4.3 Bengalred, 4,5,6,7-Tetrachloro-2',4',5',7'-tetraiodofluorescein formulated as a staining agent.
4.4 Bouin’s fixative, buffered solution of formaldehyde, acetic acid and picric acid.
4.5 Paracarmin, staining agent, prepared as a mixture of carmine acid, aluminium chloride and calcium
chloride solved in ethanol.
4.6 Canada-balm, natural yellowish viscous fluid containing 13 % to 14 % (volume fraction) Canadin acid
(C H O ), 48 % to 50 % (volume fraction) α- and β-Canadinol acid (C H O ) and 5 % (volume fraction)
20 38 2 19 30 2
Canadoesen (C H O).
21 40
5 Apparatus
5.1 Split soil corer (e.g. diameter 3 cm to 6 cm; extracted core length 10 cm to 30 cm); length in total
variable (depending whether or not a handle is used).
5.2 Plastic bags (e.g. 1-l freezer bags); general store.
5.3 Temperature recorder or a minimum/maximum-thermometer.
5.4 Plastic bowls, diameter approximately 20 cm, height approximately 10 cm; general store.
5.5 Plastic sieves, diameter approximately 15 cm, mesh width approximately 0,5 mm; general store.
5.6 60-W bulbs as a heating device; general store.
5.7 Glassware, e.g. petri dishes (square format) with a size of 8 cm × 8 cm or small glass vessels
(e.g. 50 ml).
5.8 Sharp, large knife.
5.9 Refrigerator.
5.10 Dissecting microscope with low magnification (10 to 40 times).
5.11 Microscope with high magnification (60 to 400 times).
5.12 Spring steel pincers (flat).
5.13 Eppendorf pipette, a soft steel forceps or a hooked needle.
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6 Procedure
6.1 Soil sampling
The soil samples to be used for the investigation of the enchytraeid community are taken destructively by
means of a soil corer (5.1). The corer is carefully pressed into the soil. The depth depends on the soil type, but
usually varies between 10 cm (e.g. forests) and up to 30 cm (e.g. crop sites), i.e. those layers in which the
bulk of the enchytraeids are living. In rare cases, e.g. if thick roots are present, a plastic or wooden hammer
can be used to take the samples. After removing the soil corer, its valve is opened and the soil core is
carefully taken out by hand. The core is divided into cylinders (e.g. 3 cm to 4 cm height) with a knife (5.8).
These soil cylinders may be stored in small plastic bags (5.2) in a refrigerator (5.9) at approximately 4 °C to
6 °C for a period of preferably not longer than one to two weeks (storage should not exceed one month in any
[7]
case ). The soil corer is cleaned with water afterwards.
6.2 Extraction of the enchytraeids
In principle, the extraction of the worms from the soil is caused by their active movement in the water-
saturated sample.
The extraction should commence as soon as possible after the sampling (see 6.1). The bowls (5.4) are
carefully filled up with tap water (4.1) until the empty sieves (5.5) are completely covered by the water. The
samples (i.e. soil cylinders) are put in the sieves, and are, if necessary (e.g. in cases of heavy loam soils),
carefully broken apart by hand (see Figure 1). The bottom of the sieves should not reach the bottom of the
bowls. To ensure an extraction efficiency of Enchytraeidae from the samples of more than 90 %, the
extraction of soil should last for 4 d to 7 d and of litter for 0,5 d to 2 d at (12 ± 2) °C (water temperature). The
duration depends mainly on the organic content of the sample. These times can be modified according to
organizational requirements and the number of individuals in a sample. However, the worms quickly die if an
oxygen deficiency occurs (in order to avoid this problem the water can be changed after 24 h or 48 h). An
acceleration of the extraction using a heat source [e.g. a 60-W bulb (5.6)] placed above the sample can be
helpful, but should be carefully used (i.e. slow increase over at least 3 h), since otherwise — species-
specifically — many animals, especially juveniles and fragmentation stages, remain in the soil (see Annex B).
NOTE 1 In order to reduce the amount of debris at the bottom of the extraction bowls, a fine wiping cloth (0,5 mm) can
[23]
be put in the mesh before the soil sample is put in .
At the end of the extraction procedure, the sieves are removed, the soil is discarded and disposed according
to local waste regulations. The water is slowly and carefully decanted from the bowl. The finest fraction of soil
at the bottom of the bowls should not be disturbed (see Figure 2). A small amount of water (up to a height of
5 mm to 10 mm) shall remain in the bowls. Subsequently, the finest fraction of soil is suspended in the
overlying water, placed in a petri dish (5.7) and briefly stored until soil particles have settled and the water
becomes clear. Since the whitish worms are heavier than water, but are rarely able to hide themselves in the
narrow soil layer, they can easily be collected out of the petri dish under a dissecting microscope (5.10). For
this transfer, a soft steel forceps, an Eppendorf pipette or a hooked needle (5.13) can be used, but in any case
damaging of the worms shall be avoided. The most convenient way of counting the total number is to divide
the surface of the petri dish in parallel rows which are checked one after another. Due to their white colour, the
worms are clearly visible against the usually brownish soil particles. The animals are transferred to small
plastic or glass vessels (e.g. 20 ml).
The number of samples which can be extracted simultaneously is theoretically unlimited. However, due to the
size of the water bowls, space limitations can occur. Since they (i.e. at least the water) shall be cooled, usually
only up to 40 to 50 samples can be processed at on
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 23611-3
Première édition
2007-05-01
Qualité du sol — Prélèvement des
invertébrés du sol —
Partie 3:
Prélèvement et extraction des
enchytréides
Soil quality — Sampling of soil invertebrates —
Part 3: Sampling and soil extraction of enchytraeids
Numéro de référence
ISO 23611-3:2007(F)
©
ISO 2007
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ISO 23611-3:2007(F)
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Publié en Suisse
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ISO 23611-3:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 2
4 Réactifs . 2
5 Appareillage . 2
6 Mode opératoire . 3
6.1 Échantillonnage du sol. 3
6.2 Extraction des enchytréides. 3
6.3 Identification au microscope . 4
6.4 Conservation des Enchytraeidae . 5
6.5 Validité du procédé d'extraction . 5
6.6 Détermination de la biomasse. 5
7 Évaluation des données. 5
8 Rapport d'essai . 6
Annexe A (informative) Identification des espèces chez les enchytréides. 7
Annexe B (informative) Extraction rapide des enchytréides . 8
Bibliographie . 10
© ISO 2007 – Tous droits réservés iii
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ISO 23611-3:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 23611-3 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 190, Qualité du sol, sous-comité SC 4,
Méthodes biologiques.
L'ISO 23611 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité du sol — Prélèvement
des invertébrés du sol:
⎯ Partie 1: Tri manuel et extraction au formol des vers de terre
⎯ Partie 2: Prélèvement et extraction des micro-arthropodes (Collembola et Acarina)
⎯ Partie 3: Prélèvement et extraction des enchytréides
⎯ Partie 4: Collection, extraction et identification des nématodes du sol
iv © ISO 2007 – Tous droits réservés
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ISO 23611-3:2007(F)
Introduction
La présente partie de l'ISO 23611 a été rédigée pour répondre à un besoin grandissant en matière de
normalisation des méthodes d'analyse sur le terrain de la zoologie. De telles méthodes, traitant
principalement du prélèvement, de l'extraction et de la manipulation des invertébrés du sol, sont nécessaires
pour les différentes applications suivantes:
⎯ la classification biologique des sols, y compris l'évaluation de la qualité des sols (par exemple
Références [21], [25], [27]);
⎯ la bio-indication terrestre et la surveillance à long terme (par exemple Références [13], [26]);
⎯ l'évaluation des effets des substances chimiques vis-à-vis des animaux du sol (Références [15], [22]).
Étant donné qu'elles peuvent être à la base de décisions importantes (par exemple, entreprendre ou non la
dépollution d'un site particulier), les données pour ces applications devront être obtenues à l'aide de
méthodes normalisées. En fait, l'absence de telles méthodes normalisées est l'une des principales raisons
pour lesquelles les concepts de classification biologique ont été relativement rarement utilisés, jusqu'à présent,
dans des habitats terrestres (comme le sol) par rapport aux sites aquatiques.
À l'origine, les méthodes décrites ici ont été développées pour des études taxonomiques ou écologiques,
visant à élucider le rôle des enchytréides dans différents écosystèmes terrestres. Ces animaux font
indubitablement partie des invertébrés du sol les plus importants dans les régions tempérées (principalement
[5]
dans les sols acides ). Leur influence sur les fonctions du sol, comme la décomposition de la litière et le
[14], [19]
cycle des éléments nutritifs, est bien connue . En raison de leur nombre qui est souvent très élevé (et
de la biomasse de leur population) ils jouent également un rôle majeur dans un grand nombre de réseaux
[4]
trophiques terrestres . Certaines espèces ont été involontairement disséminées par l'homme dans les sols
du monde entier.
Étant donné qu'il n'est ni possible, ni utile de normaliser des méthodes pour tous les organismes du sol, seuls
les plus importants ont été sélectionnés [Les paramètres microbiologiques ont déjà été traités dans des
[29] [37] [38]
guides ISO existants (par exemple, l'ISO 10381-6 , l'ISO 14240-1 et l'ISO 14240-2 )].
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NORME INTERNATIONALE ISO 23611-3:2007(F)
Qualité du sol — Prélèvement des invertébrés du sol —
Partie 3:
Prélèvement et extraction des enchytréides
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 23611 spécifie une méthode pour le prélèvement, la manipulation et l'extraction
des enchytréides du sol prélevés sur le terrain comme pré-requis à l'utilisation de ces animaux en tant que
bio-indicateurs (par exemple, pour évaluer la qualité d'un sol en tant qu'habitat pour ces organismes).
Il est possible de trouver des informations de base sur l'écologie des enchytréides et leur utilisation en tant
que bio-indicateurs dans l'environnement terrestre dans la bibliographie.
La présente partie de l'ISO 23611 s'applique à tous les biotopes terrestres dans lesquels il est possible de
trouver des enchytréides. La stratégie d'échantillonnage générique pour les études de terrain est spécifiée
dans l'ISO 10381-1. Ces détails peuvent varier en fonction des conditions climatiques/régionales du site sur
lequel l'échantillon doit être prélevé et un aperçu de la détermination des effets des polluants sur les
enchytréides in situ est fourni à la Référence [6].
Les méthodes pour quelques autres groupes d'organismes du sol comme les vers de terre ou les
microarthropodes sont spécifiées dans l'ISO 23611-1 et l'ISO 23611-2.
La présente partie de l'ISO 23611 n'est pas applicable à des sols semi-terrestres (habitat aquatique ou à
proximité) et peut être d'utilisation difficile dans des conditions climatiques ou géographiques extrêmes (en
haute montagne, par exemple).
Il est vivement recommandable de caractériser le site en cas d'échantillonnage des invertébrés du sol (par
exemple du point de vue du climat et de l'usage du sol). Cependant, cette caractérisation n'est pas traitée
dans la présente partie de l'ISO 23611. L'ISO 10390, l'ISO 10694, l'ISO 11272, l'ISO 11274, l'ISO 11277,
l'ISO 11461 et l'ISO 11465 sont plus appropriés pour le mesurage du pH, de la distribution granulométrique,
du rapport C/N, de la teneur en carbone organique et de la capacité de rétention d'eau.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
enchytréides
petits vers vivant dans le sol (de quelques millimètres à plusieurs centimètres de longueur) appartenant à la
famille des Enchytraeidae, ordre des Oligochaeta (classe Clitellata, phylum Annelida)
EXEMPLE Les espèces des genres Enchytraeus, Fridericia ou Cognettia.
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ISO 23611-3:2007(F)
3 Principe
Sur un site donné, les enchytréides sont prélevés dans le sol au moyen d'un carottier stratifié (de diamètre
généralement compris entre 3 cm et 6 cm). Après le prélèvement, les échantillons de sol contenant les
enchytréides sont transportés au laboratoire. Ensuite, les enchytréides sont extraits du sol par une méthode
[11], [17], [20]
d'extraction humide. Ce protocole est connu de longue date . Après l'extraction les enchytréides
sont identifiés vivants et, si nécessaire, conservés de manière a pouvoir être stockés indéfiniment dans une
collection (par exemple, à des fins taxonomiques).
La détermination de la biomasse des enchytréides est également décrite dans la présente partie de
l'ISO 23611. Les valeurs d'abondance et de biomasse sont recalculées et rapportées à la surface du carottier
ou, plus rarement, à des paramètres liés au volume.
NOTE 1 Le prélèvement d'enchytréides est souvent inclus dans des programmes de surveillance plus vastes visant à
couvrir la totalité ou une partie de la faune du sol (par exemple, la mésofaune). La conception de tels programmes n'est
pas comprise dans la présente partie de l'ISO 23611 (mais voir, par exemple, la Référence [3]).
NOTE 2 Quelques indications sur la taxinomie des enchytréides sont fournies dans l'Annexe A.
4 Réactifs
4.1 Eau du robinet (dépourvue de propriétés toxiques, par exemple, en raison d'une contamination par le
cuivre).
4.2 Éthanol, à 70 % (fraction volumique).
4.3 Rose de Bengale, 4,5,6,7-tétrachloro-2',4',5',7'-tétraiodofluorescéine formulée comme un colorant.
4.4 Fixateur de Bouin, solution tamponnée de formaldéhyde, d'acide acétique et d'acide picrique.
4.5 Paracarmin, colorant préparé sous forme de mélange d'acide carminique, de chlorure d'aluminium et
de chlorure de calcium dissous dans l'éthanol.
4.6 Baume du Canada, fluide naturel visqueux et jaunâtre contenant de 13 % à 14 % (fraction volumique)
de Canadine acide (C H O ), de 48 % à 50 % (fraction volumique) de α- et β-Canadinol acide (C H O )
20 38 2 19 30 2
et 5 % (fraction volumique) de Canadœsen (C H O).
21 40
5 Appareillage
5.1 Carottier stratifié pour prélèvement de sol (ayant un diamètre compris entre 3 cm et 6 cm, par
exemple; longueur de carotte extraite: de 10 cm à 30 cm); de longueur totale variable (selon qu'il est muni
d'une poignée ou non).
5.2 Sachets en plastique (par exemple, sachets pour congélation de 1 l); du commerce.
5.3 Enregistreur de température ou thermomètre minimum/maximum.
5.4 Bols en plastique, diamètre: 20 cm environ, hauteur: 10 cm environ; du commerce.
5.5 Tamis en plastique, diamètre: 15 cm environ, ouverture de mailles: 0,5 mm approximativement; du
commerce.
5.6 Ampoules de 60 W, en tant qu'élément chauffant; du commerce.
5.7 Verrerie, boîtes de Petri, par exemple (de format carré) de 8 cm × 8 cm ou petits récipients en verre
(de 50 ml, par exemple).
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5.8 Couteau, affûté et de grande taille.
5.9 Réfrigérateur.
5.10 Microscope à dissection, à faible grossissement (de 10 à 40 fois).
5.11 Microscope, à grossissement élevé (de 60 à 400 fois).
5.12 Pinces à ressort en acier (plates).
5.13 Pipette Eppendorf, pince en acier doux ou aiguille à crochet.
6 Mode opératoire
6.1 Échantillonnage du sol
Les échantillons de sol à utiliser pour étudier la communauté des enchytréides sont prélevés de manière
destructive au moyen d'un carottier pour sol (5.1). On presse le carottier avec soin contre le sol pour l'y faire
pénétrer. La profondeur de pénétration est fonction du type de sol mais, en règle générale, elle est comprise
entre 10 cm (par exemple, en forêt) et 30 cm (dans les zones cultivées, par exemple), ce qui correspond aux
couches dans lesquelles vit la majorité des enchytréides. Dans de rares cas, par exemple si le sol comporte
de grosses racines, il est possible d'utiliser un marteau en plastique ou en bois pour prélever les échantillons.
Après le retrait du carottier hors du sol, celui-ci est ouvert et l'on recueille à la main la carotte de sol avec
précaution. Ensuite, à l'aide d'un couteau (5.8), on divise la carotte en deux cylindres (par exemple, de 3 cm
à 4 cm de hauteur). Ces deux cylindres de sol peuvent être conservés au réfrigérateur (5.9) dans de petits
sachets en plastique (5.2), à une température comprise entre 4 °C et 6 °C approximativement, pendant une
période ne dépassant pas une à deux semaines, de préférence (dans tous les cas, il convient que la durée de
[7]
stockage n'excède pas un mois ). Pour finir, le carottier est lavé à l'eau.
6.2 Extraction des enchytréides
En principe, l'extraction des vers hors du sol est engendrée par les mouvements actifs de ceux-ci dans
l'échantillon saturé en eau.
Il convient de commencer l'extraction dès que possible après l'échantillonnage (voir 6.1). Les bols (5.4) sont
remplis d'eau du robinet (4.1) avec précaution jusqu'à ce que les tamis vides (5.5) soient complètement
recouverts d'eau. Les échantillons (c'est-à-dire les cylindres de sol) sont déposés dans les tamis et sont, si
nécessaire (par exemple, dans le cas de sols argileux) cassés à la main avec soin (voir Figure 1). Il convient
que le fond des tamis n'atteigne pas le fond des bols. Pour garantir une efficacité d'extraction des
Enchytraeidae hors des échantillons de plus de 90 %, il convient que l'extraction du sol se prolonge pendant
une durée de 4 d à 7 d et que l'extraction de la litière dure pendant 0,5 d à 2 d, à (12 ± 2) °C (température de
l'eau). La durée dépend principalement de la teneur de l'échantillon en matière organique. Ces durées
peuvent être modifiées en fonction d'exigences liées à l'organisation et du nombre d'individus contenus dans
un échantillon. Toutefois, les vers meurent vite en cas de manque d'oxygène (pour éviter cela, il est possible
de changer l'eau au bout de 24 h ou de 48 h). Une accélération de l'extraction au moyen d'une source de
chaleur [une ampoule de 60 W (5.6), par exemple] placée au-dessus de l'échantillon peut se révéler utile mais
il convient d'en faire usage avec précaution (prévoir une augmentation lente sur au moins 3 h), sinon — selon
l'espèce — de nombreux animaux, surtout les jeunes et les stades de fragmentation, restent dans le sol (voir
Annexe B).
NOTE 1 Pour réduire la quantité de débris au fond des bols d'extraction, il est possible de recouvrir les mailles du
[23]
tamis avec un tissu fin (0,5 mm) avant d'y déposer l'échantillon de sol .
À la fin de l'extraction, les tamis sont enlevés, le sol est jeté et mis au rebut en suivant la réglementation
locale relative aux déchets. Avec soin, on verse l'eau lentement hors du bol en veillant à ne pas perturber la
fraction la plus fine du sol au fond du bol (voir Figure 2). Une petite quantité d'eau (jusqu'à une hauteur
de 5 mm à 10 mm) doit rester dans les bols. Ensuite, la fraction la plus fine du sol est mise en suspension
dans l'eau et l'ensemble est déposé dans une boîte de Petri (5.7), puis stocké pendant une courte durée
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jusqu'à ce que les particules de sol se décantent et que l'eau devienne limpide. Étant donné que les vers
blanchâtres sont plus lourds que l'eau mais qu'ils sont rarement capables de se dissimuler dans la mince
couche de sol, il est facile de les prélever hors de la boîte de Petri sous un microscope à dissection (5.10).
Pour effectuer ce transfert, il est possible d'utiliser une pince en acier doux, une pipette Eppendorf ou une
aiguille à crochet (5.13), mais il faut, dans tous les cas, éviter d'endommager les vers. Pour compter le
nombre total de vers, le plus simple consiste à diviser la surface de la boîte de Petri en rangées parallèles et
de l
...
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