ISO 17375:2006

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 17375
First edition
2006-06-01


Animal feeding stuffs — Determination
of aflatoxin B
1
Aliments des animaux — Dosage de l'aflatoxine B
1





Reference number
ISO 17375:2006(E)
©
ISO 2006

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ISO 17375:2006(E)
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ISO 17375:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 1
5 Apparatus. 4
6 Procedures. 6
6.1 Conditioning of IACs . 6
6.2 Extraction. 6
6.3 Immunoaffinity clean up . 6
6.4 Post-column derivatization. 7
6.5 Calibration curve. 7
6.6 Calculation. 7
6.7 Spiking procedures for recovery determination .8
7 Precision. 8
7.1 Interlaboratory test . 8
7.2 Repeatability. 8
7.3 Reproducibility. 9
8 Test report. 9
Annex A (informative) Results of an interlaboratory test. 10
Bibliography . 11

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ISO 17375:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 17375 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 10, Animal
feeding stuffs.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 17375:2006(E)

Animal feeding stuffs — Determination of aflatoxin B
1
1 Scope
This International Standard specifies a method for the determination of aflatoxin B in animal feeding stuffs
1
using high-performance liquid chromatography with post-column derivatization.
It is applicable to animal feeding stuffs with a fat content of up to 50 %.
The limit of quantification of this method has been demonstrated to be better than 0,5 µg/kg for aflatoxin B for
1
a signal-to-noise ratio of 6.
NOTE The method is based on that given in Reference [1].
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Principle
A test portion is extracted with a solvent solution (acetone/water). The sample extract is filtered, diluted with
water or phosphate-buffered saline to a specified solvent concentration. A test portion is applied on an
immunoaffinity column (IAC) containing antibodies specific to aflatoxin B . The aflatoxin B is removed from
1 1
the IAC with neat methanol, and then quantified by reverse-phase high-performance liquid chromatography
(RP-HPLC) with post-column derivatization (PCD) involving bromination. The PCD is achieved with either
electrochemically generated bromine or with pyridinium hydrobromide perbromide (PBPB) followed by
fluorescence detection.
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified.
WARNING — This method requires the use of toxic inflammable liquids such as acetone, methanol
and acetonitrile. Avoid contact and keep away from heat, sparks or open flames.
[2],[3]
NOTE Decontamination procedures for laboratory wastes have been developed and validated by the
International Agency for Research on Cancer (WHO).
4.1 Water, complying with grade 3 in accordance with ISO 3696:1987.
4.2 Phosphate buffer saline (PBS), pH 7,4.
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ISO 17375:2006(E)
PBS may be prepared from potassium chloride (0,20 g), potassium dihydrogen phosphate (0,20 g), anhydrous
disodium hydrogen phosphate (1,16 g) [or disodium hydrogen phosphate dodecahydrate (2,92 g)] and sodium
chloride (8,00 g) added to 900 ml purified water. Adjust the pH to pH 7,4 (with 0,1 mol/l HCl or 0,1 mol/l NaOH
as appropriate) and dilute the solution to 1,0 l.
Alternatively, commercially available phosphate-buffered saline tablets with equivalent properties may be used.
PBS is not microbiologically stable and should be prepared fresh at least once a week.
4.3 Pyridinium hydrobromide perbromide (PBPB, CAS: 39416-48-3).
This reagent is not required in the case of using electrochemically generated bromine.
4.4 Potassium bromide.
This reagent is not required in the case of using the PBPB reagent.
4.5 HPLC-grade acetonitrile.
4.6 HPLC-grade methanol.
4.7 Acetone, pure.
4.8 HPLC grade water, complying with grade 1 of ISO 3696:1987.
4.9 Extraction solvent, solution of acetone (4.7) and water (4.8) [85+15 (by volume)].
4.10 Nitric acid, c(HNO ) = 4 mol/l.
3
This reagent is not required in the case of using the PBPB reagent.
4.11 Immunoaffinity column (IAC)
The IAC should contain antibodies raised against aflatoxin B . The IAC should have a capacity of not less
1
than 40 ng of aflatoxin B and should give a recovery of not less than 80 % for aflatoxin B when applied as a
1
1
standard solution in acetone/water containing 0,25 ng of aflatoxin B .
1
4.12 HPLC mobile phase solvent A, for use with PBPB post column reagent only.
Use a solution of water (4.8)/acetonitrile (4.5)/methanol (4.6) [6+2+3 (by volume)]. The ratio of solvents may
be adjusted to give optimum separation parameters.
4.13 HPLC mobile phase solvent B, for use with electrochemically generated bromine only.
Use a solution of water (4.8)/acetonitrile (4.5)/methanol (4.6) [6+2+3 (by volume)] containing 120 mg
potassium bromide (4.4) and 350 µl nitric acid at 4 mol/l (4.10) per litre of mobile phase. The ratio of solvents
may be adjusted to give optimum separation parameters.
The mobile phase solvents (4.12 and 4.13) should be degassed.
4.14 Post-column reagent, for use with PBPB post column reagent only.
Dissolve 25 mg of PBPB (4.3) in 500 ml of water. This solution may be used for up to 4 days if stored in a dark
place at room temperature. This post-column reagent shall be used only in combination with HPLC mobile
phase solvent A (4.12) but not with HPLC mobile phase solvent B (4.13).
NOTE Post column reagent is only stable for 3 days.
4.15 Toluene/acetonitrile, 98 + 2 (by volume).
2 © ISO 2006 – All rights reserved

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ISO 17375:2006(E)
4.16 Aflatoxin B standard material, in form of crystals or a dry film for analytical purposes.
1
WARNING 1 — This method requires the use of solutions of aflatoxin B . Aflatoxins are carcinogenic
1
to humans. Attention is drawn to the statement made by the International Agency for Research on

[2]
Cancer (WHO) .
WARNING 2 — Aflatoxins are subject to light degradation. Protect analytical work adequately from the
daylight, and keep aflatoxin standard solutions protected from light by using amber vials or
aluminium foil.
4.17 Calibration stock solutions for HPLC
4.17.1 General stock solution
Prepare an aflatoxin B (4.16) stock solution containing 10,0 µg/ml in toluene/acetonitrile (4.15).
1
NOTE The toluene/acetonitrile stock solution is stable for at least one year provided it is stored in acid-washed
glassware and kept for storage at –18 °C in the dark. If stock solutions are used up in a much shorter period (maximum of
3 months), methanol (4.6) might be used as an alternative. Note that methanolic solutions are more sensitive to an
alkaline ambient of the glass surface and to day light than toluene/acetonitrile solutions.
Wrap the flasks tightly in aluminium foil and store them at less than 4 °C. To determine the exact
concentration of aflatoxins in this stock solution, record the absorption curve between a wavelength of 330 nm
and 370 nm in 1 cm quartz glass cells (5.21) in a spectrometer (5.20), with the stock solution solvent in the
reference cell. Calculate the mass concentration of each aflatoxin, c , in micrograms per millilitre, using
a
Equation (1):
M ×100
a
cA=× (1)
amax
ε × d
a
where
A is the absorbance determined at the maximum of the absorption curve;
max
M is the molar mass of aflatoxin B , in grams per mole (312 g/mol);
a 1
2
ε is the molar absorptivity of aflatoxin B , in square metres per mole (1930 m /mol for
a 1
2
toluene/acetonitrile and 2150 m /mol for methanol solutions);
d is the optical path length of the cell, in centimetres.
4.17.2 Calibration stock solution
Prepare an aflatoxin B (4.16) calibration solution containing 50,0 ng/ml in either toluene/acetonitrile (4.15) or
1
methanol (4.6) from the stock solution (4.17.1).
4.17.3 Option A (see 6.3)
Pipette from the calibration stock solution (4.17.2) the volumes as listed in Table 1 (Option A) into a set of
20 ml calibrated volumetric flasks. Evaporate the toluene/acetonitrile solution just to dryness under a stream of
nitrogen at room temperature. If methanol is used in the preparation of the stock solution, evaporation is not
required. To each flask, add 7 ml of methanol. Allow the aflatoxins to dissolve, then dilute to the mark with
water, and shake well.
NOTE Remember that methanol and water are subject to volume contraction when mixed.
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ISO 17375:2006(E)
4.17.4 Option B (see 6.3)
Pipette from the calibration stock solution (4.17.2) the volumes as listed in Table 1 (Option B) into a set of at
least 5 different 20 ml volumetric flasks. Evaporate the toluene/acetonitrile solution just to dryness under a
stream of nitrogen at room temperature. If methanol is used in preparation of the stock solution, evaporation is
not required. To each flask, add approximately 10 ml of methanol. Allow the aflatoxins to dissolve, then dilute
further with neat methanol (not with methanol/water) to the mark and shake well. Then transfer exactly 1 ml of
this calibration working solution to an acid-washed glass vial (see Warning in 5.7), evaporated to dryness
according to Option B (6.3.3) and than redissolved in exactly the same volume that will be used to redissolve
the samples prior to injection (6.3). Calculate the concentration of aflatoxin B in the evaporated and
1
redissolved solution in nanograms per millilitre. Use these concentration values for the calculation according
to 6.6. In this case the calibration range will remain unchanged.
Table 1 — Preparation of calibration working solutions
Option A Option B
Working Calibration stock Concentration Calibration stock Concentration
standard solution of aflatoxin B solution of aflatoxin B
1 1
µl ng/ml µl ng/ml
1
20 0,050 100 0,250
2
70 0,175 350 0,875
3 120 0,300 600 1,500
4 170 0,425 850 2,125
5 220 0,550 1100 2,750
5 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
5.1 Vertical or horizontal shaker, adjustable.
5.2 Filter paper, of diameter 24 cm, prefolded (e.g. cellulose for fine precipitates).
5.3 Erlenmeyer flask, with screw top or glass stopper.
5.4 Glass microfibre filter paper, of diameter 5 cm (e.g. 1,6 µm retention).
5.5 Reservoir, 75 ml with Luer tip connector for IAC.
5.6 Hand pump, 20 ml syringe with Luer lock or rubber stopper for IAC.
5.7 Volumetric flasks, of 5 ml, 10 ml and 20 ml capacity, with an accuracy of at least 0,5 %.
WARNING — The use of non acid-washed glasswar
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 17375
Première édition
2006-06-01


Aliments des animaux — Dosage
de l'aflatoxine B
1
Animal feeding stuffs — Determination of aflatoxin B
1



Numéro de référence
ISO 17375:2006(F)
©
ISO 2006

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ISO 17375:2006(F)
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ISO 17375:2006(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs. 1
5 Appareillage. 4
6 Modes opératoires. 5
6.1 Conditionnement des colonnes d'immunoaffinité . 5
6.2 Extraction. 6
6.3 Purification sur colonne d'immunoaffinité. 6
6.3.1 Généralités. 6
6.3.2 Option A (recommandée). 6
6.3.3 Option B (le cas échéant uniquement) . 6
6.4 Dérivation postcolonne. 7
6.5 Courbe d'étalonnage . 7
6.6 Calculs. 7
6.7 Modes opératoires de dopage afin de déterminer le taux de récupération. 8
7 Fidélité. 8
7.1 Essai interlaboratoires. 8
7.2 Répétabilité. 8
7.3 Reproductibilité. 9
8 Rapport d'essai . 9
Annexe A (informative) Résultats d'un essai interlaboratoires. 10
Bibliographie . 11

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ISO 17375:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 17375 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 10,
Aliments des animaux.

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NORME INTERNATIONALE ISO 17375:2006(F)

Aliments des animaux — Dosage de l'aflatoxine B
1
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de dosage de l'aflatoxine B dans les aliments des
1
animaux en utilisant la chromatographie liquide haute performance avec dérivation postcolonne.
Elle est applicable aux aliments pour animaux dont la teneur en graisse est inférieure ou égale à 50 %.
Il a été démontré que la limite de quantification de l'aflatoxine B par cette méthode est inférieure à 0,5 µg/kg
1
avec un rapport signal/bruit de 6.
NOTE La méthode est basée sur celle donnée dans la Référence [1].
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d'essai
3 Principe
Un échantillon d'essai est extrait avec un mélange de solvants (acétone/eau). L'extrait est filtré, puis dilué
avec de l'eau ou un tampon phosphate salin (PBS) jusqu'à obtention d'une concentration en solvant spécifiée.
Une aliquote est ensuite déposée sur une colonne d'immunoaffinité contenant des anticorps spécifiques à
l'aflatoxine B . L'aflatoxine B est extraite de la colonne d'immunoaffinité par du méthanol pur, puis quantifiée
1 1
par chromatographie liquide haute performance en phase inverse (CLHP-PI) avec dérivation postcolonne
impliquant une bromuration. La dérivation postcolonne est obtenue avec du brome généré
électrochimiquement ou avec du bromure de pyridinium perbromure, suivie d'une détection fluorimétrique.
4 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
AVERTISSEMENT — Cette méthode requiert l'utilisation de substances liquides toxiques
inflammables comme l'acétone, le méthanol et l'acétonitrile. Éviter tout contact avec ces substances
et les maintenir éloignées de toutes les sources de chaleur, d'étincelles ou de flammes.
NOTE Les méthodes de décontamination des déchets de laboratoire [2], [3] ont été élaborées et validées par le
Centre international de recherche sur le cancer (OMS).
4.1 Eau, de qualité 3, conformément à l'ISO 3696:1987.
4.2 Tampon phosphate salin (PBS), pH 7,4.
Le PBS peut être préparé à partir de chlorure de potassium (0,20 g), de dihydrogénophosphate de potassium
(0,20 g), d'hydrogénophosphate disodique anhydre (1,16 g) [ou d'hydrogénophosphate disodique
dodécahydraté (2,92 g)] et de chlorure de sodium (8,00 g) ajoutés à 900 ml d'eau purifiée. Après dissolution,
le pH doit être ajusté à 7,4 (avec du HCl à 0,1 mol/l ou du NaOH à 0,1 mol/l, selon le cas) et la solution
complétée à 1,0 l.
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ISO 17375:2006(F)
Il est également possible d'utiliser des comprimés de tampon phosphate, disponibles dans le commerce,
présentant des propriétés équivalentes.
Le PBS n'étant pas microbiologiquement stable, il convient de le préparer extemporanément au moins une
fois par semaine.
4.3 Bromure de pyridinium perbromure (PBPB, CAS: 39416-48-3).
Si du brome généré électrochimiquement est utilisé, ce réactif n'est pas nécessaire.
4.4 Bromure de potassium.
Si du PBPB est utilisé, ce réactif n'est pas nécessaire.
4.5 Acétonitrile de qualité CLHP.
4.6 Méthanol de qualité CLHP.
4.7 Acétone, pure.
4.8 Eau de qualité CLHP, conforme à la qualité 1 de l'ISO 3696:1987.
4.9 Solvant d'extraction, solution d'acétone (4.7) et d'eau [85+15 (par volume)].
4.10 Acide nitrique, c(HNO ) = 4 mol/l.
3
Si du PBPB est utilisé, ce réactif n'est pas nécessaire.
4.11 Colonne d'immunoaffinité.
Il convient que la colonne d'immunoaffinité contienne des anticorps spécifiques à l'aflatoxine B . Il convient
1
que la colonne d'immunoaffinité présente une capacité d'au moins 40 ng d'aflatoxine B et donne un taux de
1
récupération d'au moins 80 % d'aflatoxine B , lorsque l'on dépose une solution étalon contenant 0,25 ng
1
d'aflatoxine B dans une solution de solvants acétone/eau.
1
4.12 Phase mobile CLHP, solvant A, à utiliser uniquement avec le PBPB.
Utiliser un mélange de solvants eau (4.8)/acétonitrile (4.5)/méthanol (4.6) [6+2+3 (par volume)]. Pour garantir
une meilleure séparation, il est possible d'ajuster le rapport des solvants.
4.13 Phase mobile CLHP, solvant B, à utiliser uniquement avec du brome généré électrochimiquement.
Utiliser un mélange de solvants eau (4.8)/acétonitrile (4.5)/méthanol (4.6) [6+2+3 (par volume)] contenant
120 mg de bromure de potassium (4.4) et 350 µl d'acide nitrique à 4 mol/l (4.10) par litre de phase mobile.
Pour garantir une meilleure séparation, il est possible d'ajuster le rapport des solvants.
Il convient de dégazer les phases mobiles (4.12/4.13).
4.14 Réactif postcolonne, à utiliser uniquement avec le PBPB.
Dissoudre 25 mg de PBPB (4.3) dans 500 ml d'eau. La solution peut être conservée quatre jours dans une
pièce à l'abri de la lumière, à température ambiante. Ce réactif postcolonne doit être utilisé uniquement avec
la phase mobile A (4.12) et non avec la phase mobile B (4.13).
NOTE Le réactif postcolonne n'est stable que pendant 3 jours.
4.15 Toluène/acétonitrile, [98+2 (par volume)].
4.16 Étalon d'aflatoxine B , sous forme de cristaux ou de film en ampoule pour des besoins d'analyse.
1
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ISO 17375:2006(F)
AVERTISSEMENT 1 — Cette méthode requiert l'utilisation de solutions d'aflatoxine B . Les aflatoxines
1
sont cancérogènes pour l'homme. Une attention particulière doit être portée aux recommandations du
[2]
Centre internationale de recherche sur le cancer (OMS) .
AVERTISSEMENT 2 — Les aflatoxines sont sujettes à une dégradation par la lumière. Protéger de la
lumière du jour le laboratoire où sont réalisées les analyses et conserver les solutions étalons
d'aflatoxine à l'abri de la lumière en utilisant des flacons ambrés ou du papier aluminium.
4.17 Solutions d'étalonnage pour CLHP.
4.17.1 Solution mère.
Préparer une solution mère d'aflatoxine B (4.16) à 10,0 µg/ml dans un mélange de toluène/acétonitrile (4.15).
1
NOTE Cette solution est stable pendant au moins un an, à condition qu'elle soit conservée dans de la verrerie
préalablement lavée à l'acide et à l'abri de la lumière, à une température de −18 °C. La solution mère peut aussi être
préparée dans le méthanol (4.6) si elle est conservée pendant une période plus brève (durée maximale de 3 mois). En
effet, les solutions préparées dans le méthanol sont plus sensibles à la lumière du jour et au pH alcalin de la surface du
verre.
Bien envelopper les fioles dans du papier aluminium et les conserver à une température inférieure à 4 °C.
Pour déterminer la concentration exacte des aflatoxines de la solution mère, enregistrer le spectre
d'absorption entre 330 nm et 370 nm dans des cuves en quartz de 1 cm (5.21) à l'aide d'un
spectrophotomètre (5.20), avec le mélange toluène-acétonitrile dans la cuve de référence. Calculer la
concentration massique des aflatoxines, c , en microgrammes par millilitre, à l'aide de l'Équation (1):
a
M ×100
a
cA=× (1)
amax
ε ×d
a
où
A est l'absorbance maximale déterminée sur le spectre d'absorption;
max
M est la masse molaire d'aflatoxine B , en grammes par mole (312 g/mol);
a 1
2
ε est le coefficient d'absorption de l'aflatoxine B , en mètres carrés par mole (1 930 m /mol pour le
a 1
2
mélange toluène/acétonitrile et 2 150 m /mol pour les solutions à base de méthanol);
d est le trajet optique de la cuve, en centimètres.
4.17.2 Solution étalon.
À partir de la solution mère (4.17.1), préparer une solution étalon d'aflatoxine B (4.16) contenant 50,0 ng/ml
1
dans un mélange toluène/acétonitrile (4.15) ou dans du méthanol (4.5).
4.17.3 Option A (voir 6.3).
À l'aide d'une pipette, prélever dans la solution étalon (4.17.2) les volumes indiqués dans le Tableau 1
(Option A) et les placer dans différentes fioles jaugées de 20 ml. Évaporer à sec la solution de
toluène/acétonitrile sous un courant d'azote, à température ambiante. Si du méthanol a été utilisé lors de la
préparation de la solution mère, l'évaporation n'est pas nécessaire. Ajouter dans chaque fiole 7 ml de
méthanol, laisser les aflatoxines se dissoudre, puis compléter au trait de jauge avec de l'eau et bien mélanger.
NOTE Le mélange du méthanol et de l'eau aboutit à une contraction de volume.
4.17.4 Option B (voir 6.3).
À l'aide d'une pipette, prélever dans la solution étalon (4.17.2) les volumes indiqués dans le Tableau 1
(Option B) et les placer dans au moins cinq fioles jaugées de 20 ml. Évaporer à sec la solution de
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ISO 17375:2006(F)
toluène/acétonitrile sous un courant d'azote, à température ambiante. Si du méthanol a été utilisé lors de la
préparation de la solution mère, l'évaporation n'est pas nécessaire. Ajouter dans chaque fiole environ 10 ml
de méthanol, laisser les aflatoxines se dissoudre, puis compléter au trait de jauge avec du méthanol pur (pas
avec un mélange eau/méthanol) et bien mélanger. Transférer ensuite exactement 1 ml de cette solution
étalon de travail dans un flacon en verre préalablement lavé à l'acide (voir Avertissement en 5.7), évaporé à
sec conformément à l'Option B (6.3.3), puis redissous dans un volume identique au volume initial ayant servi
à redissoudre les échantillons (6.3). Calculer la concentration d'aflatoxine B dans les solutions évaporées et
1
redissoutes en nanogrammes par millilitre. Utiliser ces valeurs de concentration pour effectuer les calculs
conformément à 6.6. Dans ce cas, le domaine d'étalonnage restera inchangé.
Tableau 1 — Préparation des solutions étalons de travail
Option A Option B
Étalon de
Aliquote de solution Concentration Aliquote de solution Concentration
travail
étalon d'aflatoxine B étalon d'aflatoxine B
1 1
µl ng/ml µl ng/ml
1 20 0,050 100 0,250
2 70 0,175 350 0,875
3 120 0,300 600 1,500
4 170 0,425 850 2,125
5 220 0,550 1 100 2,750

5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Agitateur mécanique à oscillations verticales ou horizontales, réglable.
5.2 Papier-filtre, d'un diamètre de 24 cm, préalablement plié (par exemple cellulose pour les précipités
fins).
5.3 Erlenmeyer, avec col rodé ou à vis.
5.4 Papier-filtre en microfibres de verre, d'un diamètre de 5 cm (par exemple rétention de
particules > 1,6 µm).
5.5 Réservoir, de 75 ml avec adaptateur Luer pour fixation sur colonnes d'immunoaffinités.
5.6 Seringue, de 20 ml avec embout à verrouillage ou bouchon en caoutchouc pour fixation sur colonnes
d'immunoaffinité.
5.7 Fioles jaugées, d'une capacité de 5 ml, de 10 ml et de 20 ml avec une exactitude d'au moi
...