ISO 20637:2015

NORME ISO
INTERNATIONALE 20637
Première édition
2015-11-01
Formules infantiles et produits
nutritionnels pour adultes —
Détermination de la teneur en myo-
inositol par chromatographie liquide
et ampérométrie pulsée
Infant formula and adult nutritionals — Determination of myo-
inositol by liquid chromatography and pulsed amperometry
Numéro de référence
©
ISO 2015
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Termes et définitions . 1
3 Principe . 1
4 Réactifs et matériaux . 1
5 Appareillage . 3
6 Mode opératoire. 4
6.1 Myo-inositol libre . 4
6.1.1 Préparation de l’échantillon . 4
6.1.2 Extraction . 5
6.2 Myo-inositol lié sous forme de phosphatidylinositol . 5
6.2.1 Préparation de l’échantillon . 5
6.2.2 Extraction . 6
6.2.3 Purification . 6
6.2.4 Hydrolyse . 6
6.3 Analyse par CLHP . 6
6.3.1 Conditions de fonctionnement de l’instrument . 6
6.3.2 Réglages du détecteur d’ampérométrie pulsée avec électrode en or . 8
6.3.3 Démarrage de l’instrument . 8
6.3.4 Analyse de l’étalon et de l’échantillon . 9
6.3.5 Arrêt du système . 9
7 Calculs . 9
7.1 Généralités . 9
7.2 Concentration des étalons . 9
7.3 Préparation de la courbe d’étalonnage .10
7.4 Calcul du myo-inositol libre ou libre plus lié dans les échantillons .10
7.4.1 Calcul du myo-inositol libre .10
7.4.2 Calcul du myo-inositol lié .10
7.4.3 Calcul du myo-inositol libre plus lié .10
Annexe A (informative) Exemples de chromatogrammes .11
Annexe B (informative) Données de fidélité .12
Bibliographie .15
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, en
collaboration avec l’AOAC INTERNATIONAL. Le document est publié par l’ISO et séparément par l’AOAC
INTERNATIONAL. La méthode décrite dans la présente Norme internationale est équivalente à la
Méthode officielle de l’AOAC 2011.18: Myo-inositol (libre et lié sous forme de phosphatidylinositol) dans les
formules infantiles et pédiatriques et les produits nutritionnels pour adultes.
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NORME INTERNATIONALE ISO 20637:2015(F)
Formules infantiles et produits nutritionnels pour
adultes — Détermination de la teneur en myo-inositol par
chromatographie liquide et ampérométrie pulsée
AVERTISSEMENT — L’utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer des
matériaux, des opérations et des équipements dangereux. La présente Norme internationale
n’a pas pour but d’aborder tous les problèmes de sécurité liés à son utilisation. Avant d’utiliser
la présente Norme internationale, il incombe à l’utilisateur d’établir des pratiques appropriées
de sécurité et de protection de la santé et de déterminer l’applicabilité des restrictions
réglementaires.
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale spécifie une méthode de détermination de la teneur en myo-
inositol (libre ou libre plus lié sous forme de phosphatidylinositol) dans les formules infantiles et
les produits nutritionnels pour adultes par chromatographie liquide et ampérométrie pulsée avec
commutation de colonne.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
2.1
produit nutritionnel pour adultes
aliment complet sur le plan nutritionnel, spécialement formulé, consommé sous forme liquide, pouvant
constituer la seule source d’alimentation, constitué de n’importe quelle combinaison de lait, soja, riz,
lactosérum, protéine hydrolysée, amidon et acides aminés, avec et sans protéine intacte
2.2
formule infantile
substitut du lait maternel spécialement fabriqué pour satisfaire, par lui-même, les besoins nutritionnels
des nourrissons pendant les premiers mois de la vie jusqu’à l’introduction d’une alimentation
complémentaire appropriée
[SOURCE: Norme Codex 72-1981]
3 Principe
Le myo-inositol libre et le myo-inositol lié sous forme de phosphatidylinositol sont extraits au moyen
de deux modes opératoires de préparation d’échantillon différents. Le myo-inositol libre est extrait
des échantillons avec de l’acide chlorhydrique dilué et de l’eau. Le phosphatidylinositol est extrait des
échantillons avec du chloroforme et séparé des autres matières grasses sur cartouches d’extraction
en phase solide en silice. Le myo-inositol est alors libéré de la chaîne glycérol avec de l’acide acétique
et de l’acide chlorhydrique concentrés à 120 °C. La méthode de chromatographie ionique utilise une
combinaison de deux colonnes d’échange d’ions différentes avec commutation de colonne et détection
par ampérométrie pulsée (PAD). La concentration du myo-inositol est calculée par comparaison avec
des étalons de concentration connue.
4 Réactifs et matériaux
Au cours de l’analyse, sauf indication contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de l’eau de pureté équivalente.
4.1 Produits chimiques et solvants
4.1.1 Acide acétique, glacial, ACS.
4.1.2 Chloroforme, haute pureté, qualité CLHP.
4.1.3 Éther diéthylique, anhydre, qualité CLHP.
4.1.4 Driérite (dessiccatif), sulfate de calcium anhydre, 8 mesh.
4.1.5 Hélium, qualité zéro ou l’équivalent.
4.1.6 Hexane, qualité CLHP.
4.1.7 Acide chlorhydrique, concentré (36 % à 38 %), ACS.
4.1.8 Acide métaphosphorique, ACS.
4.1.9 Méthanol, qualité CLHP.
4.1.10 Myo-inositol, étalon de référence primaire, lot officiel, conserver avec un dessiccatif. Consulter
l’étiquette de l’étalon pour connaître la pureté.
4.1.11 Chlorure de sodium, ACS.
4.1.12 Hydroxyde de sodium, 50 % (m/m), forme à faible teneur en carbonates.
4.2 Préparation des réactifs et des solutions étalons
4.2.1 Généralités. Le volume de toutes les solutions peut être augmenté ou diminué selon les besoins,
à condition de respecter les bonnes pratiques de laboratoire. Les solutions peuvent être conservées au
réfrigérateur ou à température ambiante dans des récipients inertes étanches, sauf indication contraire.
4.2.2 Solution étalon mère de myo-inositol (environ 2 000 mg/l). Peser avec précision environ
0,100 g de myo-inositol et transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 50 ml. Compléter au
volume avec de l’eau. Bien mélanger. Conserver au réfrigérateur. Délai d’expiration: 3 mois.
4.2.3 Solution étalon intermédiaire de myo-inositol (environ 200 mg/l). Diluer 10,0 ml de solution
étalon mère (4.2.2) à 100 ml avec de l’eau et bien mélanger. Jeter après usage.
4.2.4 Préparation des solutions d’étalonnage
4.2.4.1 Solutions étalons de myo-inositol limite haute (environ 4 mg/l, 2 mg/l, 1 mg/l, 0,5 mg/l)
Dans des fioles jaugées séparées, diluer 2,0 ml, 1,0 ml et 0,5 ml d’étalon intermédiaire de myo-inositol
(4.2.3) à 100 ml avec de l’eau. Diluer 0,5 ml d’étalon intermédiaire de myo-inositol (4.2.3) à 200 ml avec
de l’eau. Délai d’expiration: 2 semaines.
4.2.4.2 Solutions étalons de myo-inositol limite basse (environ 0,2 mg/l et 0,05 mg/l)
Dans des fioles jaugées séparées, diluer 4 ml et 1 ml de l’étalon de myo-inositol à 0,5 mg/l avec 10 ml
d’eau. Délai d’expiration: 2 semaines.
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4.2.5 Acide chlorhydrique, 0,5 %. Ajouter 1,25 ml d’acide chlorhydrique concentré à environ 200 ml
d’eau dans une fiole jaugée de 250 ml. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai
d’expiration: 6 mois.
4.2.6 Chlorure de sodium, 1 mol/l. Dissoudre 5,8 g de chlorure de sodium et diluer à 100 ml avec de
l’eau. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.7 Hydroxyde de sodium, 0,12 % ou 30 mmol (Pompe 1). Peser rapidement (4,8 ± 0,1) g
d’hydroxyde de sodium à 50 % dans une fiole jaugée de 2 000 ml contenant environ 1 900 ml d’eau. Il est
important que l’hydroxyde de sodium n’absorbe pas le dioxyde de carbone de l’air. Bien mélanger d’un
mouvement rotatif. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.8 Hydroxyde de sodium, 4,0 % ou 1 mol/l (Pompe 2). Peser rapidement (160 ± 3) g d’hydroxyde
de sodium à 50 % dans une fiole jaugée de 2 000 ml contenant environ 1 900 ml d’eau. Il est important
que l’hydroxyde de sodium n’absorbe pas le dioxyde de carbone de l’air. Bien mélanger d’un mouvement
rotatif. Compléter au volume avec de l’eau et bien mélanger. Délai d’expiration: 1 mois.
4.2.9 Acide métaphosphorique, 6 %. Peser 6,0 g d’acide métaphosphorique dans une fiole jaugée
de 100 ml. Dissoudre et diluer au volume avec de l’eau. Bien mélanger. Conserver au réfrigérateur. Délai
d’expiration: 1 semaine.
4.2.10 Solutions d’extraction du phosphatidylinositol. Préparer une solution fraîche le jour de
l’utilisation.
4.2.10.1 Chloroforme:méthanol (2:1). Mélanger 60 ml de chloroforme et 30 ml de méthanol.
4.2.10.2 Hexane:éther diéthylique (80:20). Mélanger 80 ml d’hexane et 20 ml d’éther diéthylique.
4.2.10.3 Hexane:éther diéthylique (50:50). Mélanger 50 ml d’hexane et 50 ml d’éther diéthylique.
4.2.10.4 Méthanol:chloroforme:eau (75:15:10). Mélanger 75 ml de méthanol, 15 ml de chloroforme
et 10 ml d’eau.
5 Appareillage
Verrerie et équipement de laboratoire habituels et, en particulier, les éléments suivants.
5.1 Balance analytique, capacité de pesée minimum d’au moins 0,000 1 g.
5.2 Centrifugeuse.
5.3 Dessiccateur.
5.4 Évaporateur sous flux d’azote, avec bain-marie ou l’équivalent.
5.5 Four, capable de maintenir 120 °C.
5.6 pH-mètre, avec tampons à pH 4 et 7.
5.7 Agitateur magnétique, multiposition avec barreaux aimantés.
5.8 Extracteur sous vide.
5.9 Agitateur vortex.
5.10 Système de CLHP, avec composants résistant à la corrosion incluant un échantillonneur
automatique, deux pompes isocratiques, une vanne de commutation à six voies, un détecteur
d’ampérométrie pulsée avec électrode en or et tubulure en PEEK ou polytétrafluoroéthylène (PTFE)
de 0,18 mm à 0,25 mm (0,007 pouce à 0,01 pouce) de diamètre interne. Échantillonneur automatique
pouvant injecter 20 μl.
1)
5.11 Colonnes, Dionex CarboPac MA1 (4 mm × 250 mm) P/N 44066, MA1 (4 mm × 50 mm) P/N 44067
et PA1 (4 × 50 mm) P/N 43096, ou l’équivalent.
5.12 Béchers, tailles assorties.
5.13 Tubes de centrifugation, 50 ml avec bouchons revêtus de polytétrafluoroéthylène (PTFE).
5.14 Filtres seringue, polyamide, 0,45 μm et 0,2 μm.
1)
5.15 Papier filtre, Whatman 2V ou l’équivalent.
5.16 Fioles coniques, 50 ml ou 125 ml ou l’équivalent.
5.17 Fioles jaugées, tailles assorties.
5.18 Entonnoirs, adaptés à une utilisation avec papier filtre.
5.19 Pipettes, volumétriques, tailles assorties.
2)
5.20 Cartouche d’extraction en phase solide (SPE), silice, 1 g .
5.21 Seringues, 1 ml jetables et 25 ml étanches au gaz en verre avec aiguilles de 100 mm (4 pouces) en
acier inoxydable.
6 Mode opératoire
6.1 Myo-inositol libre
6.1.1 Préparation de l’échantillon
6.1.1.1 Généralités
Les échantillons préparés qui sont conservés de manière constante à une température comprise entre
1 °C et 8 °C dans des récipients fermés sont stables pendant 5 jours. Après 5 jours, les échantillons
doivent de nouveau être préparés. Bien mélanger les échantillons liquides pour assurer l’homogénéité.
1) Ceci est un exemple de produit approprié disponible dans le commerce. Cette information est donnée par souci
de commodité à l’intention des utilisateurs du présent document et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à
l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes
résultats.
2) J.T. Baker référence 7086-07 (www.avantormaterials.com) est un exemple de produit approprié disponible
dans le commerce. Cette information est donnée par souci de commodité à l’intention des utilisateurs du présent
document et ne saurait constituer un engagement de l’ISO à l’égard de ce produit. Des produits équivalents peuvent
être utilisés s’il est démontré qu’ils conduisent aux mêmes résultats.
4 © ISO 2015 – Tous droits réservés

Si l’homogénéité de l’é
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