SIST ISO 11027:1997

ISO
INTERNATIONAL
STANDARD
First edition
1993-07-15
Pepper and pepper oleoresins -
Determination of piperine content -
Method using high-performance liquid
chromatography
Poivres, okorbines de poivres - Determination de Ia teneur en
pipbine - Methode par Chromatographie en Phase liquide 2 haute
Performance
Reference number
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 11027 was prepared by Technical Committee
lSO/TC 34, Agricultural food products, Sub-Committee SC 7, Spices and
condimen ts.
Annex A of this International Standard is for information only.
8 ISO 1993
All rights reserved. No patt of this publication may be reproduced or utilized in any form or
by any means, electronie or mechanical, including photocopying and microfilm, without per-
mission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
INTERNATIONAL STANDARD
Pepper and pepper oleoresins - Determination of
piperine content - Method using high-performance
liquid chromatography
3.2 Whole pepper
1 Scope
Preparation by grinding the Sample, then extraction
This International Standard specifies a method for the
of the powder obtained, followed by determination of
by high-performance liquid chro-
determination,
piperine by HPLC, in accordance with the procedure
matography, of the piperine content of peppers (Piper
described in this International Standard.
nigrum Linnaeus), whole or powdered, as weil as their
extracts (oleoresins).
3.3 Oleoresins of pepper
This method enables the Separation and, if necessary,
the determination of the other alkaloids of pepper
Dilution of the oleoresin in ethanol, then determi-
(isochavicine, isopiperine and piperittin).
nation of piperine by HPLC, in accordance with the
procedure described in this International Standard.
2 Normative references
The following Standards contain provisions which,
through reference in this text, constitute provisions 4 Reagents
of this International Standard. At the time of publi-
cation, the editions indicated were valid. All Standards Use only reagents of recognized analytical grade and
are subject to revision, and Parties to agreements distilled or demineralized water or water of equivalent
based on this International Standard are encouraged purity.
to investigate the possibility of applying the most re-
cent editions of the Standards indicated below.
4.1 Reference substance
Members of IEC and ISO maintain registers of cur-
rently valid International Standards.
Piperine of at least 98 % purity, determined by the
spectrometric method described in ISO 5564.
‘9
ISO 28253 981, Spices and condiments - Prepa-
ration of a ground Sample for analysis.
WARNING - This product should be handled with
care as it is strongly irritating.
ISO 5564:1982, Black pepper and white pepper,
whole or ground - Determination of piperine con ten t
- Spectrophotometric method.
4.2 Solvents
4.2.1 Ethanol , 96 % (VW).
3 Principle
4.2.2 Acetoni trile
3.1 Ground pepper
WARNING - This product should be handled with
Extraction with ethanol under reflux, then determi-
care as it is lachrymatory.
nation of piperine by high-performance liquid chro-
2 matography (HPLC), in accordance with the procedure
described in this International Standard. 4.2.3 Acetic acid, 1 % (VW) aqueous Solution.

4.3 Elution solvent
6 Calibration method
Mix 52 volumes of acetic acid Solution (4.2.3) and 48
WARNING - Throughout the Operation, it is
volumes of acetonitrile (4.2.2).
imperative that the solutions are not exposed to
light (for instance wrap the flasks in aluminium
feil) and are used as quickly as possible because
5 Apparatus
of the instability of the piperine solutions.
Usual laboratory equipment and, in particular, the fol-
lowing.
6.1 Reference solution
Prepare for immediate use a 1 g/l stock Solution of
5.1 Pipettes, of 2 ml, 5 ml and 10 ml capacity.
the piperine (4.1) in ethanol (4.2.1).
5.2 Volumetric flasks, of 25 ml, 50 ml and 100 ml
capacity (made of antiactinic glass or wrapped in alu-
6.2 Calibration curve
minium feil).
From the reference Solution (6.1), prepare at least
three Standard solutions of piperine with concen-
5.3 Filtration diaphragms, non-adsorbing.
trations ranging from 0,05 g/l to 0,2 g/l. Inject each
Solution into the chromatograph (5.4.1). Repeat the
determination at least once. Measure the peak areas
54 . Separation System
and repeat the tests if the results deviate by more
than 5 %.
5.4.1 Chromatograph, for high-performance liquid
chromatography.
Plot the calibration curve, i.e. the mass of piperine in-
jected versus the peak area.
5.4.2 Pumping System, which enables a flow rate
Define the mean slope of the curve.
which is constant or programmed at high pressure to
be obtained and maintained.
6.3 Calculation of the response factor, K
5.4.3 Degassing Systems, for sol
...

ISO
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1993-07-I 5
Poivres, oléorésines de poivres -
Détermination de la teneur en pipérine -
Méthode par chromatographie en phase
liquide à haute performance
- Determination of piperine content -
Pepper and pepper oleoresins
Method using high-performance liquid chroma tograph y
Numéro de référence
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une federation
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique créé a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 11027 a eté élaboree par le comité technique
lSO/K 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 7, Épices.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnee uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1993
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite
ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genéve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
II
NORME INTERNATIONALE ISO 11027:1993(F)
Détermination de la
Poivres, oléorésines de poivres -
teneur en pipérine - Méthode par chromatographie
en phase liquide à haute performance
liquide à haute performance (CLHP), selon le mode
1 Domaine d’application
opératoire décrit dans la présente Norme internatio-
nale.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode permettant de déterminer, par chromatographie
en phase liquide a haute performance, la teneur en
3.2 Cas des poivres entiers
pipérine des poivres (Piper nigrum Linnaeus) entiers
ou en poudre, ainsi que de leurs extraits (oléorésines).
Préparation par broyage de l’échantillon, puis extrac-
tion de la poudre obtenue, suivie d’une determination
La méthode permet la séparation et, éventuellement,
de la pipérine par CLHP, selon le mode opératoire
la détermination des autres alcaloïdes du poivre
décrit dans la présente Norme internationale.
(isochavicine, isopipérine et pipérithine).
3.3 Cas des oléorésines de poivre
2 Références normatives
Dilution de I’oléorésine dans I’éthanol, puis détermi-
nation de la pipérine par CLHP selon le mode opé-
Les normes suivantes contiennent des dispositions
ratoire décrit dans la présente Norme internationale.
qui, par suite de la réference qui en est faite, consti-
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
4 Réactifs
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
norme est sujette a révision et les parties prenantes
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
des accords fondes sur la présente Norme internatio-
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de
nale sont invitees à rechercher la possibilité d’appli-
pureté équivalente.
quer les éditions les plus recentes des normes
indiquées ci-aprés. Les membres de la CEI et de I’ISO
possèdent le registre des Normes internationales en
4.1 Substance de référence
vigueur à un moment donne.
Pipérine de pureté au moins égale a 98 %, détermi-
ISO 28251981, Épices - Préparation d’un Achan tillon
née par la méthode spectrométrique décrite dans
moulu en vue de l’analyse.
I’ISO 5564.
ISO 5564:1982, Poivre noir et poivre blanc, entier ou AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
en poudre - Détermination de la teneur en pipérine avec précaution car il est très irritant.
- M&hode spectrophotométrique.
4.2 Solvants
3 Principe
4.2.1 Éthanol, à 96 % (K+/V).
3.1 Cas des poivres en poudre 4.2.2 Acétonitrile.
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
Extraction par I’éthanol sous reflux, puis determi-
avec précaution car il est lacrymogène.
nation de la pipérine par chromatographie en phase

solution aqueuse a
4.2.3 Acide acétique,
6 Méthode par calibration
1 % (vlv).
AVERTISSEMENT - Tout au long du mode opé-
ratoire, les solutions doivent être conservées à
4.3 Solvant d’élution
l’abri de la lumière (par exemple, sous feuille
Mélanger 52 volumes de solution d’acide acétique d’aluminium) et utilisées le plus rapidement pos-
(4.2.3) et 48 volumes d’acétonitrile (4.2.2). sible en raison de l’instabilité des solutions de
pipérine.
5 Appareillag6
6.1 Solution de référence
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
qui suit:
Préparer extemporanément une solution mère à 1 g/l
de pipérine (4.1) dans I’éthanol (4.2.1).
5.1 Pipettes, de 2 ml, 5 ml et 10 ml de capacité.
5.2 Fioles jaugées, de 25 ml, 50 ml et 100 ml de
6.2 Droite d’étalonnage
capacité (en verre antiactinique ou entourées de pa-
pier d’aluminium).
À partir de la solution de référence (6.1) préparer au
moins trois solutions étalons de pipérine de concen-
5.3 Membranes de filtration, non adsorbantes.
tration allant de 0,05 g/l à 0,2 g/l. Injecter chaque so-
lution dans le chromatographe (5.4.1). Répéter la
5.4 Système de séparation.
détermination au moins une fois. Mesurer les aires
de pics et répéter les essais si les résultats s’écartent
5.4.1 Chromatographe, pour chromatographie en
de plus de 5 %.
phase liquide à haute performance.
Tracer la droite d’étalonnage, c’est-à-dire la masse de
pipérine injectée par rapport a l’aire du pic.
5.4.2 Système de pompage, permettant l’obtention
et le maintien d’un débit constant ou programme a
Définir la pente moyenne de la droite.
haute pression.
5.4.3 Système de dégazage des solvants.
6.3 Calcul du coefficient de réponse, K
5.4.4 Système de détection approprié, pouvant
être réglé à une longueur d’onde de
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ISO
NORME
INTERNATIONALE
Première édition
1993-07-I 5
Poivres, oléorésines de poivres -
Détermination de la teneur en pipérine -
Méthode par chromatographie en phase
liquide à haute performance
- Determination of piperine content -
Pepper and pepper oleoresins
Method using high-performance liquid chroma tograph y
Numéro de référence
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une federation
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général confiée aux
comités techniques de I’ISO. Chaque comité membre intéressé par une
étude a le droit de faire partie du comite technique créé a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mités membres votants.
La Norme internationale ISO 11027 a eté élaboree par le comité technique
lSO/K 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 7, Épices.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnee uniquement
à titre d’information.
0 ISO 1993
Droits de reproduction réservés. Aucune partie de cette publication ne peut être reproduite
ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Genéve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
II
NORME INTERNATIONALE ISO 11027:1993(F)
Détermination de la
Poivres, oléorésines de poivres -
teneur en pipérine - Méthode par chromatographie
en phase liquide à haute performance
liquide à haute performance (CLHP), selon le mode
1 Domaine d’application
opératoire décrit dans la présente Norme internatio-
nale.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
thode permettant de déterminer, par chromatographie
en phase liquide a haute performance, la teneur en
3.2 Cas des poivres entiers
pipérine des poivres (Piper nigrum Linnaeus) entiers
ou en poudre, ainsi que de leurs extraits (oléorésines).
Préparation par broyage de l’échantillon, puis extrac-
tion de la poudre obtenue, suivie d’une determination
La méthode permet la séparation et, éventuellement,
de la pipérine par CLHP, selon le mode opératoire
la détermination des autres alcaloïdes du poivre
décrit dans la présente Norme internationale.
(isochavicine, isopipérine et pipérithine).
3.3 Cas des oléorésines de poivre
2 Références normatives
Dilution de I’oléorésine dans I’éthanol, puis détermi-
nation de la pipérine par CLHP selon le mode opé-
Les normes suivantes contiennent des dispositions
ratoire décrit dans la présente Norme internationale.
qui, par suite de la réference qui en est faite, consti-
tuent des dispositions valables pour la présente
Norme internationale. Au moment de la publication,
4 Réactifs
les éditions indiquées étaient en vigueur. Toute
norme est sujette a révision et les parties prenantes
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique
des accords fondes sur la présente Norme internatio-
reconnue et de l’eau distillée ou déminéralisée ou de
nale sont invitees à rechercher la possibilité d’appli-
pureté équivalente.
quer les éditions les plus recentes des normes
indiquées ci-aprés. Les membres de la CEI et de I’ISO
possèdent le registre des Normes internationales en
4.1 Substance de référence
vigueur à un moment donne.
Pipérine de pureté au moins égale a 98 %, détermi-
ISO 28251981, Épices - Préparation d’un Achan tillon
née par la méthode spectrométrique décrite dans
moulu en vue de l’analyse.
I’ISO 5564.
ISO 5564:1982, Poivre noir et poivre blanc, entier ou AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
en poudre - Détermination de la teneur en pipérine avec précaution car il est très irritant.
- M&hode spectrophotométrique.
4.2 Solvants
3 Principe
4.2.1 Éthanol, à 96 % (K+/V).
3.1 Cas des poivres en poudre 4.2.2 Acétonitrile.
AVERTISSEMENT - Ce produit doit être manipulé
Extraction par I’éthanol sous reflux, puis determi-
avec précaution car il est lacrymogène.
nation de la pipérine par chromatographie en phase

solution aqueuse a
4.2.3 Acide acétique,
6 Méthode par calibration
1 % (vlv).
AVERTISSEMENT - Tout au long du mode opé-
ratoire, les solutions doivent être conservées à
4.3 Solvant d’élution
l’abri de la lumière (par exemple, sous feuille
Mélanger 52 volumes de solution d’acide acétique d’aluminium) et utilisées le plus rapidement pos-
(4.2.3) et 48 volumes d’acétonitrile (4.2.2). sible en raison de l’instabilité des solutions de
pipérine.
5 Appareillag6
6.1 Solution de référence
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce
qui suit:
Préparer extemporanément une solution mère à 1 g/l
de pipérine (4.1) dans I’éthanol (4.2.1).
5.1 Pipettes, de 2 ml, 5 ml et 10 ml de capacité.
5.2 Fioles jaugées, de 25 ml, 50 ml et 100 ml de
6.2 Droite d’étalonnage
capacité (en verre antiactinique ou entourées de pa-
pier d’aluminium).
À partir de la solution de référence (6.1) préparer au
moins trois solutions étalons de pipérine de concen-
5.3 Membranes de filtration, non adsorbantes.
tration allant de 0,05 g/l à 0,2 g/l. Injecter chaque so-
lution dans le chromatographe (5.4.1). Répéter la
5.4 Système de séparation.
détermination au moins une fois. Mesurer les aires
de pics et répéter les essais si les résultats s’écartent
5.4.1 Chromatographe, pour chromatographie en
de plus de 5 %.
phase liquide à haute performance.
Tracer la droite d’étalonnage, c’est-à-dire la masse de
pipérine injectée par rapport a l’aire du pic.
5.4.2 Système de pompage, permettant l’obtention
et le maintien d’un débit constant ou programme a
Définir la pente moyenne de la droite.
haute pression.
5.4.3 Système de dégazage des solvants.
6.3 Calcul du coefficient de réponse, K
5.4.4 Système de détection approprié, pouvant
être réglé à une longueur d’onde de
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