ISO 4099:1984
(Main)Cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry
Cheese — Determination of nitrate and nitrite contents — Method by cadmium reduction and photometry
Describes a method suitable for hard, semi-hard and soft cheeses of various ages and for processed cheese. The principle is based on extraction of the cheese with warm water, precipitation of the fat and proteins, filtration and reduction of the nitrate in a portion of the filtrate to nitrite by means of copperized cadmium. The detection limits of the method are 5 mg of nitrate per kilogram and 0,5 mg of nitrite per kilogram.
Fromages — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Méthode par réduction au cadmium et photométrie
General Information
Relations
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International Standard
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATlON.MEXAYHAPOAHAR OPrAHM3AUMR l-lo CTAHAAPTM3ALWl.ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents -
Method by cadmium reduction and photometry
Fromages - Dgtermination des teneurs en nitrates et en nitrites - A&thode par reduction au cadmium et photom&rie
Second edition - 1984-09-15
Ref. No. IS0 4099-1984 (E)
UDC 637.3 : 543.846 : 546.173/.175
Descriptors : agricultural products, dairy products, cheeses, chemical analysis, determination of content, nitrates, nitrites, molecular absorption
spectrometry.
Price based on 6 pages
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Foreword
IS0 (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of
national standards bodies (IS0 member bodies). The work of preparing International
Standards is normally carried out through IS0 technical committees. Every member
body interested in a subject for which a technical committee has been established has
the right to be represented on that committee. International organizations, govern-
mental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
Draft International Standards adopted by the technical committees are circulated to
the member bodies for approval before their acceptance as International Standards by
the IS0 Council. They are approved in accordance with IS0 procedures requiring at
least 75 % approval by the member bodies voting.
International Standard IS0 4099 was prepared by Technical Committee lSO/TC 34,
Agricultural food products.
IS0 4099 was first published in 1978. This second edition cancels and replaces the first
edition, of which it constitutes a minor revision.
NOTE - The method specified in this International Standard has been developed jointly with the
IDF (International Dairy Federation) and the AOAC (Association of Official Analytical Chemists,
USA). The text as approved by the above organizations will also be published by FAO/WHO
(Code of Principles concerning Milk and Milk Products and Associated Standards), by the IDF
and by the AOAC (Official Methods of Analysis).
0 International Organization for Standardization, 1984
Printed in Switzerland
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IS0 4099-1984 (E)
INTERNATIONAL STANDARD
- Determination of nitrate and nitrite contents -
Cheese
Method by cadmium reduction and photometry
5 Reagents
1 Scope and field of application
All reagents shall be of recognized analytical grade. The water
This International Standard specifies a method by cadmium
used shall be distilled or deionized water, free from nitrate and
reduction and photometry for the determination of the nitrate
nitrite.
and nitrite contents of cheese.
NOTE - In order to avoid possible inclusion of small gas bubbles in the
The method is suitable for hard, semi-hard and soft cheeses of
copperized cadmium column (6.101, the distilled or deionized water
various ages and for processed cheese.
used for the preparation of the column (8.1), for checking the reducing
capacity of the column (8.21, and for regeneration of the column (8.3)
The detection limits of the method are 5 mg of nitrate per
should preferably be freshly boiled and afterwards cooled to room
kilogram and 0,5 mg of nitrite per kilogram.
temperature.
5.1 Cadmium, granules, diameter 0,3 to 0,8 mm.
2 Reference
If cadmium granules are not available commercially, they may
IS0 707, Milk and milk products - Methods of sampling.
be prepared as follows.
Place a suitable number of zinc rods in a beaker and cover
3 Definition
with a 40 g/l solution of cadmium sulfate octahydrate
KdSO,- 8H,O). From time to time, scrape the cadmium
nitrate and nitrite contents of cheese : The contents of
sponge from the rods over a period of 24 h. Remove the zinc
substances determined by the procedure specified in this
rods and decant the liquid until only sufficient remains to cover
International Standard and expressed respectively as milligrams
the cadmium. Wash the sponge two or three times with water.
of nitrate ion (NOi) and of nitrite ion (NO,) per kilogram.
Transfer the cadmium to a laboratory blender together with
400 ml of 0,l mol/l hydrochloric acid, and blend for a few
seconds to obtain granules of the required size. Return the con-
4 Principle
tents of the blender to the beaker and leave to stand for several
hours, occasionally stirring to remove bubbles. Decant most of
Extraction of the cheese with warm water, precipitation of the
the liquid and immediately copperize as described in 8.1.1
fat and proteins, and filtration.
to 8.1.5.
Reduction of the nitrate in a portion of the filtrate to nitrite, by
5.2 CopperW) sulfate, solution.
means of copperized cadmium.
Dissolve 20 g of copper sulfate pentahydrate (CuS04. 5H,O)
Development of a red colour, in portions of both unreduced
in water and dilute to 1 000 ml.
filtrate and of the reduced solution, by addition of sulfanilamide
and
and N-l -naphthyl-ethylenediamine dihydrochloride,
spectrometric measurement at a wavelength of 538 nm.
5.3 Buffer solution, pH 9,6 to 9,7.
Calculation of the nitrite content of the sample and of the total Dilute 50 ml of concentrated hydrochloric acid [eZO 1 ,I9 g/ml;
nitrite content after reduction of nitrate, by comparing the
about 38% (m/m) hydrogen chloride solution] with 600 ml of
measured absorbances with those of a series of standard water. After mixing, add 135 ml of ammonium hydroxide
sodium nitrite solutions; calculation of the nitrate content from LQ~O 0,91 g/ml; about 25 % (m/m) ammonia solution]. Dilute to
the difference between these two contents.
1 000 ml with water and mix.
1
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IS0 4099-1984 (E)
Dilute 10 ml of this solution with 20 ml of the buffer solution
NOTE - If ammonium hydroxide of this concentration is not available,
an equivalent amount of a more concentrated solution may be used,
(5.3) and dilute further to 1 000 ml with water in a one-mark
for example 100 ml of 35 % (m/m) solution (QzO 0,88 g/ml).
volumetric flask. Mix.
Adjust the pH to 9,6 to 9,7 if necessary.
1 ml of this standard solution contains I,00 pg of NO;.
5.4 Hydrochloric acid, about 2 mol/l.
5.10 Potassium nitrate, standard solution corresponding to
0,004 5 g of nitrate per litre.
Dilu te 160 ml of concentrated hydrochloric acid (Qua I,19 g/ml)
to 1 000 ml with water.
Dissolve in water 1,468 g of potassium nitrate (KNO,), dried to
constant mass at 110 to 120 OC, dilute to 1 000 ml with water in
5.5 Hydrochloric acid, about 0,l mol/l.
a one-mark volumetric flask and mix.
Dilute 50 ml of the hydrochloric acid (5.4) to 1 000 ml with
On the day of use, dilute 5 ml of this solution with 20 ml of the
water.
buffer solution (5.3) and dilute further to 1 000 ml with water in
a one-mark volumetric flask. Mix.
5.6 Solutions for precipitation of proteins and fat.
1 ml of this standard solution contains 4,50 pg of NO;.
5.6.1 Zinc sulfate, solution.
Apparatus
6
Dissolve 53,5 g of zinc sulfate heptahydrate (ZnS04a7H20) in
water and dilute to 100 ml.
All g Iassware shall be thoroug hly cleaned and r nsed with dis-
tilled water to ensure and nitrite.
that it is free from nitrate
5.6.2 Potassium hexacyanoferrate(II), solution.
Usual laboratory apparatus, and in particular
Dissolve 17,2 g of potassium hexacyanoferrate(ll) trihydrate
in water and dilute to 100 ml.
[KJFe(CN)G.3H,01
6.1 Analytical balance.
5.7 EDTA, solution.
6.2 Appropriate grinding device.
Dissolve 33,5 g of disodium ethylenediaminetetraacetate
dihydrate (Na,C,,H,,N,O,.2H,O) in water and dilute to
1 000 ml.
63 . Suitable laboratory mixer/h lnizer, with glass
con tainers of capacity 250 o
r 400 ml.
5.8 Solutions for colour development.
6.4 Conical flasks, of capacity 250 ml.
5.8.1 Solution I.
6.5 Volumetric flasks, of capacities 100; 500 and 1 000 ml,
Dissolve, by heating on a water-bath, 0,5 g of sulfanilamide
complying with the requirements of IS0 1042, class B.
(NH,CGH,S02NH2) in a mixture of 75 ml of water and 5 ml of
concentrated hydrochloric acid &, I,19 g/ml). Cool to room
temperature and dilute to 100 ml with water. Filter if necessary.
6.6 Pipettes, to deliver 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20 and 25 ml,
complying with the requirements of IS0 648, class A, or
5.8.2 Solution I I. IS0 835/l.
Dilute 450 ml of concentrated hydrochloric acid fez0 I,19 g/ml)
NOTE - Where appropriate, burettes may be used instead of pipettes.
to 1 000 ml with water.
6.7 Graduated cylinders, of capacities 5; 10; 25; 100; 250;
5.8.3 Solution Ill.
500 and 1 000 ml.
Dissolve 0,l g of A/-I-naphthyl-ethylenediamine dihydrochloride
68 . Glass funnels, of diameter about 7 cm, with short stem.
(C,,H,NHCH,CH,NH,.2HCI) in water. Dilute to 100 ml with
water. Filter if necessary.
6.9 Filter paper, medium grade, of diameter about 15 cm,
The solution may be stored for uptol week in a well-stoppered
free from nitrate and nitrite.
brown bottle in a refrigerator.
6. IO Reduction column (for example as shown in the
5.9 Sodium nitrite, standard solution corresponding to
figure).
0,001 g of nitrite per litre.
On the day of use, dissolve in water 0,150 g of sodium nitrite Spectrometer, suitable for measuring absorbance at a
6.11
(NaNO$, dried to constant mass at 110 to 120 OC, dilute to
wavelength of 538 nm, with cells of optical path length 1 to
1 000 ml with water in a one-mark volumetric flask and mix. 2 cm.
2
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IS0 4099-1984 (El
5 ml of the buffer solution (5.3) to the contents of the reservoir.
7 Sampling
Collect the eluate in a 100 ml volumetric flask. The flow rate
shall not exceed 6 ml/min.
7.1 See IS0 707.
8.2.2 When the reservoir has nearly run empty, wash the
such a that deterioration and
7.2 Store the sample in
way
walls of the reservoir with about 15 ml of water and, when this
change in composition are preven ted.
has run off, repeat the same treatment with another 15 ml por-
tion of water. After this second portion of water has run into
the column as well, completely fill the reservoir with water and
8 Procedure
allow it to pass through the column at maximum flow rate.
8.1 Pre paration of the copperized cadmium
8.2.3
After nearly 100 ml of eluate has been collected, remove ’
col umn
the volumetric flask, make up to the mark with water and mix
well.
Transfer the cadmium granules (5.1) ( approx imately 40
8.1.1
to 60 for each column)
...
Norme internationale @ 4099
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MEX/JYHAPOAHAfl OPrAHM3AUMR no CTAHAAPTM3At(MM*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et
photométrie
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents - Method by cadmium reduction and photometry
Deuxième édition - 1984-09-15
- U CDU 637.3 : 543.846 : 546.173/.175 Réf. no : IS0 4099-1984 (FI
-
8 Descripteurs : produit agricole, produit laitier, fromage, analyse chimique, dosage, nitrate, nitrite, spectrométrie d'absorption moleculaire.
O
v,
Prix basé sur 6 pages
---------------------- Page: 1 ----------------------
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d'organismes nationaux de normalisation (comités membres de I'ISO). L'élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I'ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I'ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
nationales par le Conseil de I'ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
mément aux procédures de I'ISO qui requièrent l'approbation de 75 % au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 4099 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L'ISO 4099 a été pour la première fois publiée en 1978. Cette deuxième édition annule
et remplace la première édition dont elle constitue une révision mineure.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie1 et I'AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels, USA). Le texte, approuvé par les organisations susmentionnées, sera égale-
ment publié par la FAO/OMS (Code de principes concernant le lait et les produits laitiers et les
normes connexes), par la FIL et par I'AOAC (Official Methods of Analysis).
O Organisation internationale de normalisation, 1984 O
Imprimé en Suisse
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NORM E I NTE R NAT1 ON ALE IS0 4099-1984 (FI
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et
photométrie
1 Objet et domaine d'application 5 Réactifs
La présente Norme internationale spécifie une méthode par Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
réduction au cadmium et photométrie, pour la détermination
L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou déionisée, exempte
des teneurs en nitrates et en nitrites des fromages. de nitrites et de nitrates.
La méthode est applicable aux fromages à pâte ferme, demi-
NOTE ~ Dans le but d'éviter l'inclusion de petites bulles de gaz dans la
ferme et à pâte molle, de divers âges, ainsi qu'aux fromages colonne de cadmium cuivré (6.10). l'eau distillée ou déionisée. utilisée
fondus. pour la préparation de la colonne (8.1), pour la vérification du pouvoir
réducteur de la colonne (8.2) et pour la régénération de la colonne
(8.3). doit être de préférence récemment bouillie puis refroidieà la tem-
Les limites de détection de la méthode sont de 5 mg de nitrates
pérature ambiante.
par kilogramme et de 0,5 mg de nitrites par kilogramme.
5.1 Cadmium, sous forme de granulés, diamètre des parti-
2 Référence
cules 0,3 à 0,8 mm.
IS0 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d'échantillon-
S'il n'est pas possible de se procurer dans le commerce des gra-
nage.
la manière
nulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de
suivante :
3 Définition
Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes de
zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de cadmium
nitrates et nitrites des fromages : Teneurs en substances
octahydraté (CdSO4.8HZO) à 40 g/l. Gratter de temps en
déterminées selon la méthode spécifiée dans la présente Norme
temps le cadmium spongieux déposé sur les baguettes et cela
internationale et exprimées respectivement en milligrammes
durant une période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et
d'ion nitrate (NO$ et d'ion nitrite (NO;) par kilogramme.
décanter le liquide jusqu'à ce qu'il en reste seulement une quan-
tité suffisante pour recouvrir le cadmium. Laver deux ou trois
fois le cadmium spongieux avec de l'eau. Transférer le cad-
4 Principe
mium dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution
d'acide chlorhydrique à 0,l mol/l et broyer durant quelques
Extraction du fromage avec de l'eau chaude, précipitation de la
secondes afin d'obtenir des granulés de la dimension requise.
matière grasse et des protéines, et filtration.
Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l'y maintenir
durant plusieurs heures en agitant de temps en temps pour
à I'état de nitrites, des
Sur une portion du filtrat, réduction,
chasser les bulles. Décanter la majeure partie du liquide et pro-
nitrates extraits, au moyen de cadmium cuivré.
céder immédiatement au cuivrage comme décrit de 8.1.1
à 8.1.5.
Développement d'une coloration rouge à partir de portions de
filtrat non réduit età partir de portions de filtrat réduit, par addi-
5.2 Sulfate de cuivre(l1). solution.
tion de sulfanilamide et de dichlorhydrate de Mnaphtyl-1)
éthylène diamine, puis mesurage photométrique 8 une lon-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre(l1) pentahydraté
gueur d'onde de 538 nm.
(CuSO4.5H2O) dans de l'eau et compléter à 1 O00 ml.
Calcul de la teneur en nitrites de I'échantillon et de la teneur
totale en nitrites après réduction des nitrates, par comparaison
5.3 Solution tampon, de pH 9,6 à 9,7.
des absorbances mesurées avec celles d'une série de solutions
étalons de nitrite de sodium; calcul de la teneur en nitrates à
Diluer 50 ml d'acide chlorhydrique concentré leZo 1.19 g/ml;
partir de la différence entre ces deux teneurs.
solution à environ 38% (rnlrn)] avec 600 ml d'eau. Après
1
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IS0 4099-1984 (FI
5.9 Nitrite de sodium, solution étalon, correspondant à
rnPlaiiqP ajouter 135 ml de solution d'hydroxyde d'ammonium
0,001 g d'ion nitrite par litre.
l~~20 O 91 q in1 contenant environ 25 % (m//~) NH31 Compléter
a 1 O00 rnl avec de l'eau et homogénéiser
Le jour de l'utilisation, dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium
NOTE SI l'hydroxyde d'ammonium n'est pas disponible a cette con-
(NaN02), préalablement séché de 110 à 120 OC jusqu'à masse
rt:iitratioii, iine quantité équivalente d'une solution plus concentrée
constante, dans de l'eau; compléter à 1 O00 ml avec de l'eau
ppiit etre iitilis&, par exemple 100 ml de solution à 35 % Oi!//?r)
dans une fiole jaugée et homogénéiser.
0.88 g tnli
Diluer 10 ml de cette solution avec 20 ml de la solution tampon
Ajuster le pH de 9.6 à 9,7 si nécessaire
(5.3), compléter ensuite à 1 O00 ml avec de l'eau dans une fiole
jaugée et homogénéiser.
5.4 Acide chlorhydrique, environ 2 mol/l.
1 ml de cette solution étalon contient 1.00 pg de NO*.
Diluer 160 rnl d'acide chlorhydrique concentré (ezo 1,19 g1ml) a
1 O00 rnl avec de l'eau.
5.10 Nitrate de potassium, solution étalon, correspondant à
0,004 5 g d'ion nitrate par litre.
Acide chlorhydrique, environ 0,l mol/l.
5.5
Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium (KNO,), préalable-
Diluer 50 ml d'acide chlorhydrique (5.4) à 1 O00 ml avec de
ment séché de 110 à 120 OC jusqu'à masse constante, dans de
l'eau.
l'eau; compléter à 1 O00 ml avec de l'eau dans une fiole jaugée
et homogénéiser.
Solutions pour la précipitation des protéines et de la
5.6
matière grasse.
Le jour de l'utilisation, diluer 5 ml de cette solution avec 20 ml
de la solution tampon (5.3), compléter ensuite à 1 O00 ml avec
5.6.1 Sulfate de zinc, solution.
de l'eau dans une fiole jaugée et homogénéiser.
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc heptahydraté
1 ml de cette solution étalon contient 4,50 pg de NO,.
(ZnS04.7H20) dans de l'eau et compléter à 100 ml.
5.6.2 Hexacyanoferratelll) de potassium, solution
6 Appareillage
Dissoudre 17,2 g d'hexacyanoferrate(l1) de potassium tri-
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec
hydraté I K4Fe(CN)6.3H20] dans de l'eau et compléter à 100 ml.
de l'eau distillée pour être certain qu'elle est exempte de nitra-
tes et de nitrites.
5.7 EDTA, solution
Matériel courant de laboratoire, et notamment:
Dissoudre 33.5 g d'éthylène diamine tétraacétate disodique
dihydraté (Na,Cl,Hl,N20,~2H20) dans de l'eau et compléter à
1 O00 ml.
6.1 Balance analytique.
5.8 Solutions pour le développement de la coloration.
6.2 Dispositif de broyage approprié.
5.8.1 Solution I.
6.3 Mixeur-homogénéiseur de laboratoire, avec réci-
Dissoudre, en chauffant au bain d'eau, 0,5 g de sulfanilamide
pients en verre de 250 ou 400 ml de capacité.
(NH2C6H4SOzNHz) dans un mélange constitué par 75 ml d'eau
et 5 ml d'acide chlorhydrique concentré (ezo 1,19 g/ml). Refroi-
Fioles coniques, de 250 ml de capacité.
dir à la température ambiante et compléter à 100 ml avec de 6.4
l'eau. Filtrer si nécessaire.
6.5 Fioles jaugées à un trait, de 100; 500 et 1 O00 ml de
5.8.2 Solution II.
capacité, conformes aux spécifications de I'ISO 1042, classe B.
Diluer 450 ml d'acide chlorhydrique concentré 1 ,I9 g/ml) à
1 O00 ml avec de l'eau.
6.6 Pipettes, permettant de délivrer 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20;
et 25 ml, conformes aux spécifications de I'ISO 648, classe A,
5.8.3 Solution III. ou de I'ISO 83511.
Dissoudre 0.1 g de dichlorhydrate de N-(naphtyl-1) éthylène
NOTE - Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées à la place
diamine (CloH,NHCH,CHzNHz~ 2HCI) dans de l'eau. Compléter
des pipettes.
à 100 ml avec de l'eau. Filtrer si nécessaire.
La solution peut être conservée jusqu'à 1 semaine au réfrigéra-
6.7 Éprouvettes graduées, de 5; 10; 25; 100; 250; 500 et
teur, dans un récipient en verre brun bien bouché.
1 O00 ml de capacité.
2
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IS0 4099-1984 (FI
Entonnoirs en verre, d‘environ 7 cm de diamètre, à tige 8.1.8 Conditionner la colonne qui vient d’être préparée en y
6.8
faisant circuler un mélange constitué par 750 ml d‘eau, 225 ml
courte.
de la solution étalon de nitrate de potassium (5.101, 20 ml de la
solution tampon (5.3) et 20 ml de la solution d‘EDTA (5.7), à un
Papier filtre, pour filtration moyenne, d’environ 15 cm
6.9
débit ne dépassant pas 6 ml/min. Laver ensuite la colonne avec
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
50 ml d’eau.
Appareil pour la réduction des nitrates (par exem-
6.10
8.2 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne
ple, celui qui est représenté à la figure).
Procéder à ce contrôle au moins deux fois par jour, au début et
6.11 Spectromètre, permettant de mesurer I’absorbance à
à la fin d’une série de déterminations.
une longueur d‘onde de 538 nm, avec cuves de 1 à 2 cm de par-
cours optique.
8.2.1 Prélever, à la pipette, 20 ml de la solution étalon de
nitrate de potassium (5.10) et les introduire dans le réservoir
situé à la partie supérieure de la colonne. Ajouter immédiate-
7 Échantillonnage
ment 5 ml de la solution tampon (5.3) au contenu du réservoir.
Recueillir I’éluat dans une fiole jaugée de 100 ml. Le débit ne
7.1 Voir IS0 707.
6 ml/min.
doit pas dépasser
7.2 Conserver I‘échantillon de maniè
...
Norme internationale @ 4099
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION*MEXAYHAPOAHAR OPTAHMBAUMR no CTAHAAPTM3AUML4*ORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et
photométrie
Cheese - Determination of nitrate and nitrite contents - Method by cadmium reduction and photometry
Deuxième édition - 1984-09-15
- ‘L CDU 637.3 : 543.846 : 546.173/.175 Réf. no : IS0 4099-1984 (FI
Descripteurs : produit agricole, produit laitier, fromage, analyse chimique, dosage, nitrate, nitrite, spectrométrie d’absorption moléculaire.
O
E
Prix basé sur 6 pages
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Avant-propos
L‘ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est confiée aux comités techniques de I’ISO. Chaque
comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité technique
créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne-
mentales, en liaison avec I’ISO, participent également aux travaux.
Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
nationales par le Conseil de
mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 YO au moins des
comités membres votants.
La Norme internationale IS0 4099 a été élaborée par le comité technique ISOiTC 34,
Produits agricoles alimentaires.
L’ISO 4099 a été pour la première fois publiée en 1978. Cette deuxième édition annule
et remplace la première édition dont elle constitue une révision mineure.
NOTE - La méthode spécifiée dans la présente Norme internationale a été élaborée conjointe-
ment avec la FIL (Fédération internationale de laiterie) et I’AOAC (Association des chimistes
analytiques officiels, USA). Le texte, approuvé par les organisations susmentionnées, sera égale-
ment publié par la FAO/OMS (Code de principes concernant le lait et les produits laitiers et les
normes connexes), par la FIL et par I’AOAC (Official Methods of Analysis).
@ Organisation internationale de normalisation, 1984 0
ImDrirné en Suisse
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IS0 4099-1984 (FI
NORM E I NTE R NAT1 O NA LE
Fromages - Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites - Méthode par réduction au cadmium et
photométrie
1 Objet et domaine d’application 5 Réactifs
La présente Norme internationale spécifie une méthode par Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.
réduction au cadmium et photométrie, pour la détermination L‘eau utilisée doit être de l‘eau distillée ou déionisée, exempte
des teneurs en nitrates et en nitrites des fromages. de nitrites et de nitrates.
à pâte ferme, demi-
La méthode est applicable aux fromages
NOTE - Dans le but d’éviter l’inclusion de petites bulles de gaz dans la
ferme et à pâte molle, de divers âges, ainsi qu’aux fromages colonne de cadmium cuivré (6. IO), l’eau distillée ou déionisée, utilisée
pour la préparation de la colonne (8,l), pour la verification du pouvoir
fondus.
réducteur de la colonne (8.2) et pour la regeneration de la colonne
(8.31, doit être de préférence récemment bouillie puis refroidieà la tem-
Les limites de détection de la méthode sont de 5 mg de nitrates
pérature ambiante.
par kilogramme et de 0,5 mg de nitrites par kilogramme.
5.1 Cadmium, sous forme de granulés, diamètre des parti-
2 Référence
cules 0,3 à 0,8 mm.
IS0 707, Lait et produits laitiers - Méthodes d’échantillon-
S’il n‘est pas possible de se procurer dans le commerce des gra-
nage.
nulés de cadmium, ceux-ci peuvent être préparés de la manière
suivante :
3 Définition
Placer, dans un bécher, un nombre convenable de baguettes de
zinc et les recouvrir avec une solution de sulfate de cadmium
nitrates et nitrites des fromages : Teneurs en substances
octahydraté (CdS04.8H20) à 40 gil. Gratter de temps en
déterminées selon la méthode spécifiée dans la présente Norme
temps le cadmium spongieux déposé sur les baguettes et cela
internationale et exprimées respectivement en milligrammes
durant une période de 24 h. Retirer les baguettes de zinc et
d’ion nitrate (NOj) et d‘ion nitrite (N0.J par kilogramme.
décanter le liquide jusqu’à ce qu’il en reste seulement une quan-
tité suffisante pour recouvrir le cadmium. Laver deux ou trois
fois le cadmium spongieux avec de l’eau. Transférer le cad-
4 Principe
mium dans un broyeur de laboratoire avec 400 ml de solution
d’acide chlorhydrique à 0,l mol/l et broyer durant quelques
Extraction du fromage avec de l’eau chaude, précipitation de la
secondes afin d’obtenir des granulés de la dimension requise.
matière grasse et des protéines, et filtration.
Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l’y maintenir
durant plusieurs heures en agitant de temps en temps pour
Sur une portion du filtrat, réduction, à I’état de nitrites, des
chasser les bulles. Décanter la majeure partie du liquide et pro-
nitrates extraits, au moyen de cadmium cuivré.
céder immédiatement au cuivrage comme décrit de 8.1.1
à 8.1.5.
Développement d’une coloration rouge à partir de portions de
filtrat non réduit et à partir de portions de filtrat réduit, par addi-
5.2 Sulfate de cuivre(ll1, solution.
tion de sulfanilamide et de dichlorhydrate de N-(naphtyl-1)
éthylène diamine, puis mesurage photométrique à une lon-
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre(l1) pentahydraté
gueur d’onde de 538 nm.
(CuSO4.5H2O) dans de l’eau et compléter a 1 O00 ml.
Calcul de la teneur en nitrites de I’échantillon et de la teneur
totale en nitrites après réduction des nitrates, par comparaison 5.3 Solution tampon, de pH 9,6 à 9,7
des absorbances mesurées avec celles d’une série de solutions
étalons de nitrite de sodium; calcul de la teneur en nitrates à Diluer 50 ml d‘acide chlorhydrique concentré [ez0 1,19 g/ml;
partir de la différence entre ces deux teneurs.
solution à environ 38% (mirn)i avec 600 ml d‘eau. Après
1
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5.9 Nitrite de sodium, solution étalon, correspondant à
melange, ajouter 135 ml de solution d‘hydroxyde d‘ammonium
1~)~~ 0.91 g rnl contenant environ 25% (v?//H) NH31. Compléter 0,001 g d‘ion nitrite par litre.
à 1 O00 nil avec de l’eau et homogénéiser.
Le jour de l’utilisation, dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium
NOTE SI l’hydroxyde d’ammonium n’est pas disponible a cette con-
(NaNo,), préalablement séché de 110 à 120 OC jusqu’à masse
c-tmtration, iine quantite equivalente d’une solution plus concentrée
constante, dans de l’eau; compléter à 1 O00 ml avec de l’eau
par exemple 100 ml de solution à 35 Yo (1li//t7)
[>piit 6tre titilisBe,
dans une fiole jaugée et homogénéiser.
lo2) 0.88g inIl
Diluer 10 ml de cette solution avec 20 ml de la solution tampon
Ajuster le pH de 9,6 à 9.7 si nécessaire.
(5.31, compléter ensuite à 1 O00 ml avec de l’eau dans une fiole
jaugée et homogénéiser.
Acide chlorhydrique, environ 2 molil.
5.4
1 ml de cette solution étalon contient 1,00 lg de NO*.
Diluer 160 ml d’acide chlorhydrique concentré (ezo 1,19 g/ml) a
1 O00 rnl avec de l’eau.
Nitrate de potassium, solution étalon, correspondant à
5.10
0,004 5 g d’ion nitrate par litre.
Acide chlorhydrique, environ 0,l molil.
5.5
Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium (KNO,), préalable-
Diluer 50 rnl d’acide chlorhydrique (5.4) à 1 O00 ml avec de
ment séché de 110 à 120 OC jusqu‘à masse constante, dans de
l’eau
l’eau; compléter à 1 O00 ml avec de l’eau dans une fiole jaugée
et homogénéiser.
5.6 Solutions pour la précipitation des protéines et de la
matière grasse.
Le jour de l‘utilisation, diluer 5 ml de cette solution avec 20 ml
de la solution tampon (5.3), compléter ensuite à 1 O00 ml avec
5.6.1 Sulfate de zinc, solution de l’eau dans une fiole jaugée et homogénéiser.
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc heptahydraté
1 ml de cette solution étalon contient 4,50 pg de NO,.
(ZnS04~7H20) dans de l’eau et compléter à 100 ml.
5.6.2 Hexacyanoferrate(l1) de potassium, solution.
6 Appareillage
Dissoudre 17,2 g d’hexacyanoferrate(l1) de potassium tri-
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec
hydraté [ K,Fe(CN)6.3H201 dans de l’eau et compléter à 100 rnl.
de l‘eau distillée pour être certain qu’elle est exempte de nitra-
tes et de nitrites.
5.7 EDTA, solution.
Matériel courant de laboratoire, et notamment
Dissoudre 33,5 g d’éthylène diamine tetraacetate disodique
a
dihydraté (Na,C,oH,4N208~2H20) dans de l’eau et compléter
1 O00 ml.
6.1 Balance analytique.
5.8 Solutions pour le développement de la coloration.
6.2 Dispositif de broyage approprié
5.8.1 Solution I.
6.3 Mixeur-homogénéiseur de laboratoire, avec réci-
Dissoudre, en chauffant au bain d‘eau, 0,5 g de sulfanilamide
pients en verre de 250 ou 400 ml de capacité.
75 rnl d’eau
(NH,C6H4S0,NH,) dans un mélange constitué par
et 5 ml d’acide chlorhydrique concentré (ezo 1 ,I9 g/rnl). Refroi-
Fioles coniques, de 250 ml de capacité.
dir à la température ambiante et compléter à 100 ml avec de 6.4
l’eau. Filtrer si nécessaire.
6.5 Fioles jaugées à un trait, de 100; 500 et 1 O00 ml de
5.8.2 Solution II.
capacité, conformes aux spécifications de I’ISO 1042, classe B.
Diluer 450 rnl d’acide chlorhydrique concentré 1,19 g/ml) a
1 O00 ml avec de l’eau.
6.6 Pipettes, permettant de délivrer 2; 4; 5; 6; 8; 10; 12; 20;
et 25 ml, conformes aux spécifications de I’ISO 648, classe A,
5.8.3 Solution III. ou de I’ISO 835/1.
Dissoudre 0,l g de dichlorhydrate de N-(naphtyl-I éthylène
NOTE - Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées a la place
diamine (C,0H,NHCH,CH,NH2~2HCI) dans de l’eau. Compléter
des pipettes.
à 100 ml avec de l’eau. Filtrer si nécessaire.
La solution peut être conservée jusqu’à 1 semaine au réfrigéra-
6.7 Éprouvettes graduées, de 5; 10; 25; 100; 250; 500 et
teur, dans un récipient en verre brun bien bouché.
1 O00 ml de capacité.
2
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Entonnoirs en verre, d’environ 7 cm de diamètre, à tige 8.1.8 Conditionner la colonne qui vient d’être préparée en y
6.8
courte. faisant circuler un mélange constitué par 750 ml d’eau, 22.5 ml
de la solution étalon de nitrate de potassium (5.10), 20 ml de la
solution tampon (5.3) et 20 ml de la solution d’EDTA 15.7), à un
6.9 Papier filtre, pour filtration moyenne, d’environ 15 cm
débit ne dépassant pas 6 ml/min. Laver ensuite la colonne avec
de diamètre, exempt de nitrates et de nitrites.
50 ml d‘eau.
Appareil pour la réduction des nitrates (par exem-
6.10
Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne
8.2
ple, celui qui est représenté à la figure).
Procéder à ce contrôle au moins deux fois par jour, au début et
6.11 Spectromètre, permettant de mesurer I’absorbance à
à la fin d’une série de déterminations.
une longueur d’onde de 538 nm, avec cuves de 1 à 2 cm de par-
cours optique.
8.2.1 Prélever, à la pipette, 20 ml de la solution étalon de
nitrate de potassium (5.10) et les introduire dans le réservoir
à la partie supérieure de la colonne. Ajouter immédiate-
situé
7 Échantillonnage
ment 5 ml de la solution tampon (5.3) au contenu du réservoir.
Recueillir I’éluat dans une fiole jaugée de 100 ml. Le débit ne
7.1 Voir IS0 707
doit pas dépasser 6 ml/min.
Conserve
...
Questions, Comments and Discussion
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