ISO 13629-2:2014

NORME ISO
INTERNATIONALE 13629-2
Première édition
2014-06-15
Textiles — Détermination de l’activité
antifongique des produits textiles —
Partie 2:
Méthode par dénombrement sur
plaque de gélose
Textiles — Determination of antifungal activity of textile products —
Part 2: Plate count method
Numéro de référence
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ISO 2014
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Mesures de sécurité . 2
6 Champignons de référence . 2
7 Appareillage . 2
8 Réactifs et milieux de culture . 4
8.1 Eau pure . 4
8.2 Tensio-actif anionique . 4
8.3 Milieu de culture . 4
9 Conservation et utilisation des champignons . 6
10 Suspension de spores . 7
10.1 Généralités . 7
10.2 Suspension de spores dans des milieux de culture . 7
10.3 Collecte et dispersion de la suspension de spores à partir d’un milieu de culture . 8
10.4 Filtration pour éliminer les hyphes et les filaments de spore . 8
10.5 Centrifugation et re-suspension pour éliminer le liquide surnageant . 8
10.6 Vérification de la concentration de la suspension de spores . 8
10.7 Ajustement de la suspension de spores pour les essais . 8
10.8 Dénombrement de l’inoculum . 9
11 Mode opératoire d’essai. 9
11.1 Inoculation et préparation des éprouvettes . 9
11.2 Méthode par dénombrement sur plaque de gélose .11
12 Résultats d’essai
.................................................................................................................................................................................................13
12.1 Évaluation de l’efficacité de l’essai .13
12.2 Calcul de la valeur de l’activité antifongique .14
13 Rapport d’essai .14
Annexe A (normative) Champignons utilisés dans la présente partie d’ISO 13629 .16
Annexe B (informative) Efficacité antifongique .17
Bibliographie .18
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 38, Textiles.
L’ISO 13629 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Textiles — Détermination de
l’activité antifongique des produits textiles:
— Partie 1: Méthode par luminescence
— Partie 2: Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
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Introduction
La présente partie de l’ISO 13629 adopte une méthode par dénombrement sur plaque de gélose comme
base pour la détermination quantitative de l’activité antifongique.
Les caractéristiques de la méthode par dénombrement sur plaque de gélose sont les suivantes:
— méthode conventionnelle facile à mettre en œuvre dans les laboratoires bactériologiques;
— aucun appareillage spécial, tel qu’un luminomètre, n’est nécessaire;
— existe depuis longtemps et représente un mode opératoire courant.
NORME INTERNATIONALE ISO 13629-2:2014(F)
Textiles — Détermination de l’activité antifongique des
produits textiles —
Partie 2:
Méthode par dénombrement sur plaque de gélose
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 13629 spécifie une méthode d’essai pour la détermination quantitative de
l’activité antifongique par dénombrement sur plaque de gélose.
La présente partie de l’ISO 13629 s’applique aux différents types de produits textiles, tels que les fibres,
les fils, les étoffes, les vêtements, les articles de literie, les tissus d’ameublement et divers autres types
d’articles.
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 105-F02, Textiles — Essais de solidité des teintures — Partie F02: Spécifications pour les tissus témoins
en coton et en viscose.
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations.
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
étoffe témoin
étoffe utilisée pour valider les conditions de croissance des champignons soumis à l’essai.
Note 1 à l’article: Les éprouvettes témoins sont prélevées sur l’étoffe témoin.
Note 2 à l’article: L’étoffe utilisée comme témoin peut être la même que celle soumise à essai mais sans traitement
antifongique. Si une telle étoffe n’est pas disponible, un tissu 100 % coton sans azurants optiques ou autre apprêt,
conforme aux exigences de l’ISO 105-F02, est utilisé comme étoffe témoin après lavage à une température de 60
°C avec une agitation mécanique et un rinçage.
3.2
agent antifongique
agent chimique servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
3.3
traitement antifongique
traitement servant à empêcher ou à atténuer la croissance de champignons ou à réduire leur nombre
3.4
suspension de spores
liquide contenant des spores fongiques uniformément réparties dans de l’eau stérilisée contenant un
tensio-actif anionique
3.5
méthode par dénombrement sur plaque de gélose
méthode dans laquelle le nombre de champignons présents après incubation est calculé par
dénombrement des colonies selon une méthode de dilution décimale
Note 1 à l’article: Les résultats sont exprimés en UFC (unités formant colonies).
3.6
neutralisant
agent chimique servant à inactiver, neutraliser ou stopper les propriétés antifongiques des agents
antifongiques
4 Principe
Une éprouvette d’essai et une éprouvette témoin sont inoculées avec une suspension de spores de
champignons de référence et incubées à 30 °C pendant 48 h.
Dans la présente partie de l’ISO 13629, la croissance fongique est déterminée de manière quantitative en
dénombrant visuellement les colonies sur la plaque de gélose, en UFC, et l’activité fongique est calculée
à l’aide des UFC.
Si l’éprouvette d’essai absorbe l’eau, la méthode d’absorption est recommandée. Au cas où elle n’absorbe
pas l’eau, la méthode de transfert est recommandée.
5 Mesures de sécurité
La méthode d’essai spécifiée ici nécessite l’utilisation de champignons.
Selon l’ISO 7218, cet essai doit être réalisé exclusivement par un personnel ayant reçu une formation et
ayant de l’expérience dans les techniques microbiologiques.
Concernant les mesures de sécurité à prendre, il convient de consulter et de suivre toutes les
réglementations, règles et recommandations dans le pays concerné.
6 Champignons de référence
Les champignons à utiliser doivent être choisis dans le Tableau A.1, Annexe A.
Des types de champignons équivalents obtenus auprès d’autres agences de la Fédération mondiale des
collections de cultures (World Federation for Culture Collections – WFCC) doivent être utilisés sous
réserve d’un accord entre les parties intéressées.
Le numéro de référence et la provenance de la souche des champignons utilisés doivent être mentionnés
dans le rapport d’essai.
7 Appareillage
Matériel de laboratoire courant et, en particulier, ce qui suit. Le cas échéant, les articles doivent être
stérilisés avant utilisation.
7.1 Gaze, stérilisée.
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7.2 Boîte de Petri, en verre ou en plastique, d’un diamètre d’environ 60 mm ou 90 mm.
7.3 Autoclave, pouvant maintenir la température à (121 ± 2) °C (équivalent à 103 kPa).
7.4 Anse d’ensemencement en platine, de 2 mm à 4 mm de diamètre (ou équivalent en plastique).
7.5 Fil d’ensemencement en platine en forme de L (ou équivalent en plastique).
7.6 Incubateur, pouvant maintenir la température dans une plage comprise entre 25 °C et 37 °C avec
une tolérance de ± 2 °C.
7.7 Flacon, à bouchon à vis d’une capacité de 30 ml en verre, avec un joint en polytétrafluoroéthylène
ou en silicone et un bouchon en polypropylène. Il doit être soigneusement lavé dans un détergent alcalin
ou neutre, rincé et séché.
7.8 Entonnoir en verre.
7.9 Pipettes, d’une capacité de 0,2 ml, 1 ml, 5 ml et 10 ml avec une tolérance de 0,5 % ou moins,
comportant un embout en verre ou en plastique.
7.10 Pipette Pasteur, pour les essais microbiologiques (ou équivalent en plastique).
7.11 Fiole conique, d’une capacité comprise entre 100 ml et 500 ml.
7.12 Pinces, constituées d’un matériau pouvant être stérilisé.
7.13 Centrifugeuse, ayant une accélération centrifuge d’environ 2 000 x g.
7.14 Tube à centrifuger, utilisé avec la centrifugeuse.
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7.15 Hématimètre, permettant de réaliser de mesurer entre 1 x 10 cellules/ml et 3 x 10 cellules/ml.
7.16 Microscope, permettant un grossissement de x 200 .
7.17 Nettoyeur à ultrasons, compact, pour les outils d’expérimentation, ayant une fréquence d’environ
30 kHz à 50 kHz.
7.18 pH-mètre, avec des électrodes en verre pour les essais biochimiques ou papier pH équivalent.
7.19 Erlenmeyer, d’une capacité de 100 ml.
7.20 Gabarit de découpe, en acier inoxydable, d’un diamètre de (3,8 ± 0,1) cm.
7.21 Cylindre en acier inoxydable, pesant (200 ± 10) g et ayant un diamètre de (3,5 ± 0,1) cm.
7.22 Agitateur, permettant de produire une action d’agitation de type vortex.
7.23 Malaxeur de type Stomacher, pouvant atteindre les 6 coups/s à 8 coups/s, avec les récipients
jetables correspondants.
7.24 Chambre d’humidité, enceinte tropicale ou autre conteneur pouvant maintenir des conditions
atmosphériques avec un taux d’humidité élevé.
7.25 Réfrigérateur, pouvant maintenir la température entre 2 °C et 8 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.26 Congélateurs, pouvant être réglés l’un à une température inférieure à –70 °C et l’autre à une
température inférieure à –20 °C avec une tolérance de ± 2 °C.
7.27 Balance, d’une précision de 0,01 g.
7.28 Sacs jetables en plastique, pouvant contenir des produits alimentaires, destinés à être utilisés
pour l’agitation de l’échantillon.
7.29 Poste de sécurité microbiologique (PSM de type II), conçu pour les essais microbiologiques ou
autre système offrant des performances équivalentes.
7.30 Bains d’eau, un bain d’eau permettant de maintenir une température constante de (46 ± 2) °C et un
autre permettant de maintenir une température de 70 °C à 90 °C.
8 Réactifs et milieux de culture
Les réactifs utilisés lors des essais doivent être de qualité analytique et/ou adaptés pour les essais
microbiologiques.
Il est recommandé d’utiliser des produits déshydratés disponibles dans le commerce pour la préparation
des milieux de culture, en respectant scrupuleusement les instructions du fabricant.
8.1 Eau pure
Eau de qualité analytique pour la préparation des milieux microbiologiques, fraîchement distillée et/ou
passée sur résine échangeuse d’ions et/ou ultra-filtrée et/ou filtrée par osmose inverse (OI).
Elle doit être exempte de substances toxiques ou inhibitrices pour les champignons.
8.2 Tensio-actif anionique
Dioctyl sulfosuccinate de sodium pour préparer la suspension de spores. La concentration du tensio-
actif anionique dans l’eau pure (8.1) est de 50 mg/l. Stériliser cette solution à l’autoclave (7.3) à 121 °C
pendant 20 min.
8.3 Milieu de culture
Utiliser un milieu de culture préparé comme décrit ci-dessous. Des produits préparés du commerce
peuvent être utilisés après une validation appropriée.
Les milieux de culture qui ne sont pas utilisés immédiatement après leur préparation doivent être
conservés à une température comprise entre 5 °C et 10 °C et jetés au bout d’un mois.
8.3.1 Bouillon de Sabouraud au dextrose (SDB)
Peptone 10 g
Dextrose 20 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
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8.3.2 Gélose à la pomme de terre et au dextrose (PDA)
Infusion de pomme de terre 200 g
Dextrose 20 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
Ce milieu favorise la sporulation des moisissures.
8.3.3 Gélose de Sabouraud au dextrose (SDA)
Peptone pepsique de viande 10 g
Dextrose 40 g
Agar-agar 15 g
Eau pure 1 000 ml (volume final)
Suivre les indications du fournisseur.
pH après stérilisation 5,6 ± 0,2
NOTE Ce milieu est utilisé pour la méthode de transfert.
8.3.4 Culture inclinée
8.3.4.1 Verser environ 10 ml de PDA préchauffée et entièrement dissoute (voir 8.3.2) dans un tube à
essai stérilisé.
8.3.4.2 Boucher avec un bouchon en coton et stériliser à la vapeur.
8.3.4.3 Après la stérilisation, incliner le tube à essai d’environ 15° contre une surface plane sur une
table de laboratoire propre et laisser le contenu se solidifier.
8.3.4.4 Lorsqu’il ne reste plus d’eau en excédent sur la gélose solidifiée, dissoudre et solidifier à nouveau
avant utilisation.
8.3.5 Solution neutralisante, milieu SCDLP
Polysorbate 80 30 g
Lécithine de jaune d’œuf 3 g
Chlorhydrate d’histidine 1 g
Peptone de viande ou de caséine 1 g
Chlorure de sodium (NaCl) 4,3 g
Phosphate monopotassique 3,6 g
Phosphate disodique déshydraté 7,2 g
Eau 1 000 ml (volume final)
pH après stérilisation 7,2 ± 0,2
Lorsqu’il est impossible d’obtenir un pouvoir neutralisant suffisant, la teneur en polysorbate 80 ou en
lécithine peut être ajustée ou un autre agent neutralisant peut être ajouté. Il est possible d’utiliser des
solutions neutralisantes du commerce si leur efficacité a été prouvée (voir Annexe B). L’utilisation de
tout neutralisant non spécifié doit être enregistrée, avec son nom et sa concentration.
9 Conservation et utilisation des champignons
9.1 Repiquer les champignons et les spores de référence et les traiter dans un poste de sécurité
microbiologique (7.29) ou autre système équivalent.
9.2 Réaliser une stérilisation à la flamme ou une stérilisation chimique sur les bouchons de coton et les
cols des tubes à essai avant et après le repiquage.
9.3 Racler une petite quantité de champignons sur les champignons d’origine, étaler les spores sur
l’eau en excédent qui se trouve au fond de la culture inclinée (8.3.4) et répartir en partant du somm
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