ISO 20838:2006
(Main)Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Requirements for amplification and detection for qualitative methods
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens — Requirements for amplification and detection for qualitative methods
ISO 20838:2006 provides the overall framework for qualitative methods for the detection of food-borne pathogens using the polymerase chain reaction (PCR). It covers the general requirements for the specific amplification of target nucleic acid sequences and the detection and confirmation of the identity of the amplified nucleic acid sequence. Guidelines, minimum requirements and performance characteristics described in ISO 20838:2006 are intended to ensure that comparable and reproducible results are obtained in different laboratories. ISO 20838:2006 has been established for food-borne pathogens in or isolated from food and feed matrices, but can also be applied to other matrices, for example environmental samples, or to the detection of other microorganisms under investigation.
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la détection des micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à l'amplification et à la détection pour les méthodes qualitatives
L'ISO 20838:2006 fournit le cadre de travail général des méthodes qualitatives pour la détection des micro-organismes pathogènes présents dans les aliments à l'aide de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). Elle concerne les exigences générales relatives à l'amplification spécifique des séquences d'acide nucléique cible et à la détection et la confirmation de la nature de la séquence d'acide nucléique amplifiée. Les lignes directrices, les exigences minimales et les caractéristiques de performances décrites dans l'ISO 20838:2006 visent à garantir l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans des laboratoires différents. L'ISO 20838:2006 a été conçue pour les micro-organismes pathogènes présents dans les aliments et les matrices alimentaires ou isolés de ces derniers, mais elle peut également s'appliquer à d'autres matrices, par exemple les échantillons environnementaux, ainsi que pour la détection d'autres micro-organismes.
General Information
Relations
Buy Standard
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 20838
First edition
2006-04-15
Microbiology of food and animal feeding
stuffs — Polymerase chain reaction
(PCR) for the detection of food-borne
pathogens — Requirements for
amplification and detection for qualitative
methods
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne
(PCR) pour la détection des micro-organismes pathogènes dans les
aliments — Exigences relatives à l'amplification et à la détection pour
les méthodes qualitatives
Reference number
©
ISO 2006
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.
© ISO 2006
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2006 – All rights reserved
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 1
5 Reagents. 2
6 Apparatus and equipment . 3
7 Procedure. 4
8 Interpretation. 6
9 Performance. 6
10 Test report. 6
Bibliography . 7
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
ISO 20838 was prepared by the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee
CEN/TC 275, Food analysis — Horizontal methods, in collaboration with Technical Committee ISO/TC 34,
Food products, Subcommittee SC 9, Microbiology, in accordance with the Agreement on technical
cooperation between ISO and CEN (Vienna Agreement).
iv © ISO 2006 – All rights reserved
Introduction
The amplification and detection of target nucleic acid sequences is performed to determine whether certain
nucleic acid sequences are present or not in the test portion. This determination is relative to appropriate
controls and within the detection limits of the analytical method used and test portion analysed.
This International Standard describes the procedure used to detect food-borne microorganisms, including
pathogens, by analysing nucleic acids extracted from foodstuffs, feed and environmental samples, or from
cultures or cell suspensions prepared from the foodstuff. Appropriate procedures for sample preparation,
culturing of microorganisms and extraction of nucleic acids are described in ISO 20837.
The main focus of this International Standard is on PCR-based amplification methods. However, because of
the rapid rate of technological change in this area, other amplification technologies and detection methods
may be considered.
This International Standard is related to a series of standards and a Technical Specification under the general
title Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of
food-borne pathogens
⎯ General requirements and definitions (ISO 22174)
⎯ Requirements for sample preparation for qualitative detection (ISO 20837)
⎯ Performance testing for thermal cyclers (ISO/TS 20836)
⎯ Requirements for amplification and detection for qualitative methods (ISO 20838)
The International Organization for Standardization (ISO) draws attention to the fact that it is claimed that
compliance with this document may involve the use of one or more patents concerning the PCR technology.
ISO takes no position concerning the evidence, validity and scope of these patent rights.
ISO has been informed that Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. and F. Hoffman-La Roche
Ltd. hold patent rights concerning the PCR technology. The companies have assured ISO that they are willing
to negotiate licences under reasonable and non-discriminatory terms and conditions with applicants
throughout the world. In this respect, the statements of the holders of these patent rights are registered with
ISO. Information may be obtained from:
Licensing Department
Applied Biosystems
850 Lincoln Centre Drive
Foster City, CA 94404
USA
and
Roche Molecular Systems, Inc.
Licensing Department
1145 Atlantic Avenue
Alameda, CA 94501
USA
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights other than those identified above. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent
rights.
vi © ISO 2006 – All rights reserved
INTERNATIONAL STANDARD ISO 20838:2006(E)
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase
chain reaction (PCR) for the detection of food-borne
pathogens — Requirements for amplification and detection for
qualitative methods
WARNING — The use of this standard may involve hazardous materials, operations and equipment.
This standard does not purport to address all of the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this standard to establish appropriate safety and health practices and
determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This International Standard provides the overall framework for qualitative methods for the detection of food-
borne pathogens using the polymerase chain reaction (PCR).
It covers the general requirements for the specific amplification of target nucleic acid sequences and the
detection and confirmation of the identity of the amplified nucleic acid sequence.
Guidelines, minimum requirements and performance characteristics described in this International Standard
are intended to ensure that comparable and reproducible results are obtained in different laboratories.
This International Standard has been established for food-borne pathogens in or isolated from food and feed
matrices, but can also be applied to other matrices, for example environmental samples, or to the detection of
other microorganisms under investigation.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 16140, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Protocol for the validation of alternative methods
ISO 22174:2005, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain reaction (PCR) for the
detection of food-borne pathogens — General requirements and definitions
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the terms and definitions given in ISO 22174 apply.
4 Principle
For the purposes of this International Standard, qualitative analysis consists of screening and/or specific
detection of target nucleic acid sequences in the test samples. Specificity can be at genus, species or a lower
taxonomic level.
A qualitative result shall clearly demonstrate the presence or absence of the target sequence under study,
relative to appropriate controls and within the detection limits of the analytical method used and test portion
analysed.
The analysis generally consists of
a) amplification by PCR of specific target sequences,
b) detection of the PCR product,
c) confirmation of the identity of the PCR product, and/or
d) confirmation by a standardized microbiological cultural method (e.g. an International Standard).
5 Reagents
In all cases, analytically pure reagents suitable for molecular biological applications shall be used. It is
generally advisable to take aliquots of the reaction solutions required for a PCR method and to store them
under appropriate conditions, for example at –20 °C.
5.1 DNA polymerase
A thermostable polymerase (possibly including reverse transcriptase activity) is used for PCR. This may be a
purified, native enzyme, or a purified, genetically engineered recombinant form of the enzyme.
It should be used according to the manufacturer’s instructions.
Each DNA polymerase may need different experimental conditions, e.g. buffer, temperature.
5.2 Reverse transcriptase
This enzyme is used for transcription of RNA in complementary single-stranded DNA (cDNA) able to be
amplified by a subsequent PCR.
It should be used according to the manufacturer’s instructions.
5.3 Reaction buffer
The appropriate buffer should be used according to the enzyme manufacturer’s instructions. Ready to use
reagents are commercially available. Materials used for preparation of a PCR buffer shall be stable with
respect to storage and cycling conditions.
It should be used according to the manufacturer's instructions.
5.4 Deoxyribonucleoside triphosphates (dNTP), for PCR
Solutions containing molecular biology grade dATP, dCTP, dGTP, dTTP and/or dUTP, as appropriate, shall
be used. They shall be stable during storage and under PCR conditions. They are commercially available.
5.5 Primers
The primers should be selected based on a sequence specifically to detect the DNA of the target
microorganism.
5.6 Water
For the amplification reaction water that is DNase- and RNase-free should be used at all times. Suitable ultra
pure water is available commercially.
2 © ISO 2006 – All rights reserved
5.7 Magnesium chloride (MgCl )
This is supplied either as a component of the reaction buffer or as a separate solution.
5.8 Chemicals for detection of PCR products
The chemicals used for the detection system described in a PCR method should be of appropriate quality.
5.9 Optional additional reagents
5.9.1 Mineral oil
This is dispensed onto the reaction mix to minimize evaporation during thermal cycling.
5.9.2 Facilitators
These are substances, such as polyethylene glycol or bovine serum albumin, which can be added to the PCR
[1]
reaction to reduce inhibition by matrix-derived substances .
5.9.3 RNase inhibitors
These are added to an RT-PCR to prevent degradation of target RNA by RNase enzymes, which may have
contaminated the reagents or plastic ware used in the extraction procedure. RNase inhibitors are
commercially available.
5.9.4 Reagents to prevent carry over of PCR products
As a further guard against contamination, a decontamination system (based on psoralene, dUTP and UNG,
for example) may be included in the PCR system to minimize the risk of carryover contamination from PCR
products produced during previous PCR reactions.
6 Apparatus and equipment
This shall be in accordance with ISO 22174.
In addition to standard laboratory equipment, the following appa
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 20838
Première édition
2006-04-15
Microbiologie des aliments — Réaction
de polymérisation en chaîne (PCR) pour
la détection des micro-organismes
pathogènes dans les aliments —
Exigences relatives à l'amplification et à
la détection pour les méthodes
qualitatives
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain
reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens —
Requirements for amplification and detection for qualitative methods
Numéro de référence
©
ISO 2006
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.
© ISO 2006
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax. + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2006 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions. 2
4 Principe. 2
5 Réactifs. 2
6 Appareillage et matériel. 4
7 Mode opératoire. 4
8 Interprétation. 6
9 Performances. 7
10 Rapport d'essai . 7
Bibliographie . 8
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'ISO 20837 a été élaborée par le comité technique CEN/TC 275, Analyse des produits alimentaires —
Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN) en collaboration avec le comité
technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 9, Microbiologie, conformément à l'Accord de
coopération technique entre l'ISO et le CEN (Accord de Vienne).
iv © ISO 2006 – Tous droits réservés
Introduction
L'amplification et la détection de séquences d'acide nucléique cible sont réalisées afin de détecter la présence
éventuelle de certaines séquences d'acides nucléiques dans la prise d'essai. Cette détermination dépend du
caractère approprié des témoins et des limites de détection de la méthode analytique utilisée et de la prise
d'essai analysée.
La présente Norme internationale décrit le mode opératoire permettant de détecter les micro-organismes
pathogènes présents dans les aliments par une analyse des acides nucléiques extraits d'aliments, d'aliments
pour animaux et d'échantillons environnementaux, ou de cultures ou de suspensions cellulaires préparées à
partir de l'aliment. Les modes opératoires appropriés relatifs à la préparation des échantillons, la mise en
culture des micro-organismes et l'extraction des acides nucléiques font l'objet d'une description séparée dans
l'ISO 20837.
La présente Norme internationale s'intéresse essentiellement aux méthodes d'amplification par PCR.
Cependant, au vu des évolutions constantes de la technologie relative à ce domaine, d'autres techniques
d'amplification et méthodes de détection peuvent être envisagées.
La présente Norme internationale fait partie d'une série de normes et d'une Spécification technique réunies
sous le titre générique Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
détection de micro-organismes pathogènes dans les aliments
La présente Norme internationale fait partie d'une série de normes et d'une Spécification technique réunies
sous le titre générique Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
détection de micro-organismes pathogènes dans les aliments:
⎯ Exigences générales et définitions (ISO 22174);
⎯ Exigences relatives à la préparation des échantillons pour la détection qualitative (ISO 20837);
⎯ Critères de performances pour les thermocycleurs (ISO/TS 20836);
⎯ Exigences relatives à l'amplification et à la détection pour des méthodes qualitatives (ISO 20838).
L'Organisation internationale de normalisation (ISO) attire l'attention sur le fait qu'il est déclaré que la
conformité avec les dispositions du présent document peut impliquer l'utilisation d'un ou plusieurs brevets
intéressant la technologie PCR.
L'ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à la portée de ces droits de propriété.
L'ISO a été informé que les sociétés Applied Biosystems, Roche Molecular Systems Inc., et F. Hoffmann-La
Roche Ltd., détiennent des droits de propriété concernant la technologie PCR. Les sociétés précitées ont
donné l'assurance à l'ISO qu'ils consentent à négocier des licences avec des demandeurs du monde entier, à
des termes et conditions raisonnables et non discriminatoires. À ce propos, la déclaration des détenteurs de
ces droits de propriété est enregistrée à l'ISO. Des informations peuvent être demandées à:
Licensing Department
Applied Biosystems
850 Lincoln Centre Drive
Foster City, CA 94404
États-Unis
et
Roche Molecular Systems, Inc.
Licensing Department
1145 Atlantic Avenue
Alameda, CA 94501
États-Unis
L'attention est d'autre part attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire
l'objet de droits de propriété autres que ceux qui ont été mentionnés ci-dessus. L'ISO ne saurait être tenue
pour responsable de l'identification de ces droits de propriété en tout ou partie.
vi © ISO 2006 – Tous droits réservés
NORME INTERNATIONALE ISO 20838:2006(F)
Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en
chaîne (PCR) pour la détection des micro-organismes
pathogènes dans les aliments — Exigences relatives à
l'amplification et à la détection pour les méthodes qualitatives
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'intervention de
produits, d'opérations et d'équipements à caractère dangereux. La présente norme n'a pas la
prétention d'aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. Il est de la
responsabilité de l'utilisateur de la présente norme d'établir des règles de sécurité et d'hygiène
appropriées et de déterminer l'application des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale fournit le cadre de travail général des méthodes qualitatives pour la
détection des micro-organismes pathogènes présents dans les aliments à l'aide de la réaction de
polymérisation en chaîne (PCR).
Elle concerne les exigences générales relatives à l'amplification spécifique des séquences d'acide nucléique
cible et à la détection et la confirmation de la nature de la séquence d'acide nucléique amplifiée.
Les lignes directrices, les exigences minimales et les caractéristiques de performances décrites dans la
présente Norme internationale visent à garantir l'obtention de résultats comparables et reproductibles dans
des laboratoires différents.
La présente Norme internationale a été conçue pour les micro-organismes pathogènes présents dans les
aliments et les matrices alimentaires ou isolés de ces derniers, mais elle peut également s'appliquer à
d'autres matrices, par exemple les échantillons environnementaux, ainsi que pour la détection d'autres micro-
organismes.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 16140, Microbiologie des aliments — Protocole pour la validation des méthodes alternatives
ISO 22174:2005, Microbiologie des aliments — Réaction de polymérisation en chaîne (PCR) pour la
recherche de micro-organismes pathogènes dans les aliments — Exigences générales et définitions
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions donnés dans l'ISO 22174 s'appliquent.
4 Principe
4.1 Généralités
Pour les besoins de la présente Norme internationale, l'analyse qualitative comprend le dépistage global et/ou
la détection spécifique des séquences d'acides nucléique cible dans les échantillons d'essai. La spécificité
peut être définie au niveau du genre, de l'espèce, ou à un niveau taxonomique inférieur.
Un résultat qualitatif doit indiquer clairement la présence ou l'absence de la séquence cible étudiée, en
fonction des témoins appropriés et dans les limites de détection de la méthode analytique utilisée et de la
prise d'essai analysée.
L'analyse est généralement constituée des opérations suivantes:
a) l'amplification par PCR des séquences cibles spécifiques;
b) la détection du produit PCR;
c) la confirmation de l'identité du produit PCR; et/ou
d) la confirmation au moyen d'une méthode de culture microbiologique normalisée (par exemple une Norme
internationale).
5 Réactifs
Dans tous les cas, les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique et adaptés à des applications de
biologie moléculaire. Il est généralement recommandé de préparer des aliquotes des solutions de réaction
nécessaires à une méthode PCR et de les conserver dans des conditions appropriées, par exemple à −20 °C.
5.1 ADN polymérase
Une polymérase thermostable (comprenant éventuellement une activité de transcriptase inverse) est utilisée
pour la PCR. Il peut s'agir d'une enzyme naturelle purifiée ou d'une forme transgénique de l'enzyme,
recombinée et purifiée.
Il convient de l'utiliser conformément aux instructions du fabricant.
Chaque ADN polymérase peut nécessiter des conditions expérimentales différentes, par exemple tampon,
température.
5.2 Transcriptase inverse
Cette enzyme est utilisée pour la transcription de l'ARN en ADN complémentaire (ADNc) simple brin pouvant
être ultérieurement amplifié par PCR.
Il convient de l'utiliser conformément aux instructions du fabricant.
2 © ISO 2006 – Tous droits réservés
5.3 Solution tampon de réaction
Il convient d'utiliser la solution tampon appropriée conformément aux instructions du fabricant de l'enzyme.
Des réactifs prêts à l'emploi sont disponibles dans le commerce. Les matériaux utilisés pour la préparation
d'une solution tampon de réaction de PCR doivent être stables dans les conditions de stockage et de
thermocyclage.
Il convient de l'utiliser conformément aux instructions du fabricant.
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 20838
Первое издание
2006-04-15
Микробиология пищевых продуктов и
кормов для животных. Полимеразная
цепная реакция для обнаружения
патогенных пищевых
микроорганизмов. Требования к
амплификации и обнаружению для
качественного анализа
Microbiology of food and animal feeding stuffs — Polymerase chain
reaction (PCR) for the detection of food-borne pathogens —
Requirements for amplification and detection for qualitative methods
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2006
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на интегрированные шрифты и они не будут установлены на компьютере, на котором ведется редактирование. В
случае загрузки настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение
лицензионных условий фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все
меры предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами
ISO. В редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный
секретариат по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по
адресу, приведенному ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright @ iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2006 – Все права сохраняются
Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .1
4 Общие принципы.2
5 Реактивы .2
6 Аппаратура и оборудование .3
7 Методика .4
8 Интерпретация .6
9 Функционирование .6
10 Отчет об испытаниях.6
Библиография.7
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов
обычно осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в
деятельности, для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом
комитете. Международные организации, правительственные и неправительственные, имеющие связи
с ISO, также принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, то
ISO работает в тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Проекты международных стандартов разрабатываются в соответствии с правилами Директив ISO/IEC,
Часть 2.
Основной задачей технических комитетов является разработка международных стандартов. Проекты
международных стандартов, принятые техническими комитетами, рассылаются комитетам-членам на
голосование. Для опубликования их в качестве международного стандарта требуется одобрение не
менее 75 % комитетов-членов, принимающих участие в голосовании.
Стандарт ISO 20838 был подготовлен Европейским комитетом по стандартизации (CEN), Техническим
комитетом CEN/TC 275, Анализ пищевых продуктов Горизонтальные методы, совместно с
Техническим комитетом ISO/TC 34, Пищевые продукты, Подкомитетом SC 9, Микробиология, в
соответствии с Соглашением о техническом сотрудничестве между ISO и CEN (Венское соглашение).
iv © ISO 2006 – Все права сохраняются
Введение
Амплификация и обнаружение последовательностей нуклеиновых кислот выполняется в целях
определения присутствуют или нет определенные последовательности нуклеиновых кислот в
испытательной порции. Это определение относится к применяемым методам контроля в пределах
определения применяемого аналитического метода и подвергающейся анализу испытательной порции.
Настоящий международный стандарт описывает методику, применяемую для обнаружения
микроорганизмов в пищевых продуктах, кормах для животных и образцах окружающей среды, или в
культурах или клеточных суспензиях, приготовленных из пищевых продуктов. Приемлемые методики
подготовки образцов, выращивания микроорганизмов в питательной среде и экстракции нуклеиновых
кислот описаны в ISO 20837.
Основное внимание в данном международном стандарте уделяется методам амплификации на основе
цепных реакций в присутствии полимеразы (PCR). Однако ввиду большой скорости технологических
перемен в данной области могут рассматриваться и другие технологии амплификации и методы
обнаружения.
Настоящий международный стандарт связан с серией стандартов и Технических условий под общим
названием Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Цепная реакция в
присутствии полимеразы для обнаружения болезнетворных микроорганизмов, образующихся в
пищевых продуктах:
Общие требования и определения (ISO 22174)
Требования к приготовлению проб для качественного обнаружения (ISO 20837)
Функциональные испытания тепловых циклеров (ISO/TS 20836)
Требования к амплификации и обнаружению качественными методами (ISO 20838).
Международная Организация по стандартизации (ISO) обращает внимание на тот факт, что заявление
о соответствии настоящему документу может включать использование одного или более патентов,
касающихся технологии PCR.
ISO не занимает какую-либо позицию по отношению к наличию, действительности и объему таких
патентных прав.
ISO проинформирована, что компании Applied Biosystems, Roche Molecular Systems, Inc. и F. Hoffman-
La Roche Ltd. имеют патентные права в области технологии PCR. Эти компании заверили ISO, что они
желают провести переговоры о лицензиях на разумных и недискриминационных условиях с
партнерами во всем мире. С учетом этой точки зрения заявления собственников вышеупомянутых
патентных прав зарегистрированы в ISO. Информация может быть получена по следующим адресам:
Отдел лицензирования
Applied Biosystems
850 Lincoln Centre Drive
Foster City, CA 94404
USA
и
Roche Molecular Systems, Inc.
Отдел лицензирования
1145 Atlantic Avenue
Alameda, CA 94501
USA
Следует обратить внимание на возможность того, что некоторые элементы настоящего документа
могут быть объектом и других, чем указанные выше, патентных прав. ISO не несет ответственность за
идентификацию каких-либо или всех таких патентных прав.
vi © ISO 2006 – Все права сохраняются
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 20838:2006(R)
Микробиология пищевых продуктов и кормов для
животных. Полимеразная цепная реакция для обнаружения
патогенных пищевых микроорганизмов. Требования к
амплификации и обнаружению для качественного анализа
ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ — Использование настоящего стандарта может включать применение
опасных материалов, операций и оборудования. Данный стандарт не предназначен для
рассмотрения всех проблем безопасности, связанных с его использованием. Пользователь
настоящего стандарта несет ответственность за применение безопасных и не угрожающих
здоровью методов и определение необходимости нормативных ограничений перед
использованием стандарта.
1 Область применения
Настоящий стандарт содержит описание полной схемы качественных методов обнаружения
появляющихся в пищевых продуктах микроорганизмов с помощью цепной реакции в присутствии
полимеразы (PCR).
В стандарте рассматриваются общие требования по специальной амплификации заданных
последовательностей нуклеиновых кислот и обнаружению и подтверждению идентичности
амплифицированной последовательности нуклеиновых кислот.
Руководящие указания, минимальные требования и рабочие характеристики, описанные в данном
международном стандарте, предназначены для обеспечения гарантии получения в различных
лабораториях сравнимых и воспроизводимых результатов.
Данный международный стандарт установлен для случая патогенных микроорганизмов, содержащихся
в пищевых продуктах или отделенных от пищевых продуктов или кормов для животных матрицах, но
может также применяться и для других матриц, например образцов окружающей среды, или для
обнаружения других исследуемых микроорганизмов.
2 Нормативные ссылки
Следующие ниже ссылочные документы обязательны при применении данного документа. При
жестких ссылках используются только цитированные издания. При плавающих ссылках применяется
последнее издание ссылочного документа (включая все изменения).
ISO 16140, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки
достоверности альтернативных методов
ISO 22174:2005, Микробиология пищевых продуктoв и кормов для животных. Цепная реакция
полимеразы для обнаружения пищевых патогенов. Общие требования и определения
3 Термины и определения
Для целей настоящего документа применяются термины и определения стандарта ISO 22174.
4 Общие принципы
Качественный анализ для целей настоящего стандарта состоит из отсеивания и/или специального
обнаружения целевых последовательностей нуклеиновых кислот в испытательных пробах.
Специфичность может определяться на уровнях рода, вида или на более низком таксономическом
уровне.
Качественный результат должен ясно показывать присутствие или отсутствие изучаемой целевой
последовательности, с учетом применяемых методов контроля в пределах определения применяемого
аналитического метода и подвергающейся анализу испытательной порции.
Анализ обычно включает следующее
a) амплификацию специальных целевых последовательностей методом PCR,
b) обнаружение продукта PCR,
c) подтверждение идентичности продукта PCR, и/или
d) подтверждение с помощью стандартного микробиологического культурального метода (например
международного стандарта).
5 Реактивы
Во всех случаях должны применяться аналитически чистые реактивы, пригодные для
использования в молекулярной биологии. Обычно рекомендуется брать аликвоты реакционных
растворов, требующиеся для метода PCR, и хранить их при подходящих условиях, например при
температуре –20 °C.
5.1 Полимераза дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК)
В методе PCR используется термостабильная полимераза (возможно включающая активность
обратной транскриптазы). Это может быть очищенный природный энзим, или очищенная полученная
генно-инженерным методом рекомбинантная форма энзима.
Ее следует использовать согласно инструкциям изготовителя.
Для каждой полимеразы ДНК могут требоваться свои отдельные экспериментальные условия,
например буфер, температура.
5.2 Обратная транскриптаза
Этот энзим используется для транскрипции рибонуклеиновой кислоты (РНК) в комплементарную
однонитевую дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК), которая может быть амплифицирована затем с
помощью реакции PCR.
Данный энзим следует использовать согласно инструкциям изготовителя.
5.3 Буфер реакции
Необходимо использовать подходящий буфер согласно инструкциям изготовителя энзима. Готовые к
использованию реактивы имеются в продаже. Материалы для приготовления буфера PCR должны
быть стабильны при хранении и циклических условиях.
Эти материалы следует использовать согласно инструкциям изготовителя.
5.4 Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (dNTP), для реакции PCR
По мере необходимости следует использовать растворы, содержащие пригодные для применения в
молекулярной биологии марки dATP, dCTP, dGTP, dTTP и/или dUTP. Они должны быть стабильны при
хранении и в условиях реакции PCR. Эти препараты имеются в продаже.
2 © ISO 2006 – Все права сохраняются
5.5 Праймеры
Праймеры необходимо выбирать исходя из последовательности, специфической для обнаружения
ДНК целевых микроорганизмов.
5.6 Вода
При реакции амплификации всегда должна использоваться вода, не содержащая дезоксирибонуклеазу
(ДНКазу) и рибонуклеазу (РНКазу). Пригодная для этих целей вода сверхвысокой очистки имеется в
продаже.
5.7 Хлорид магния (MgCl )
Он поставляется либо в виде компоненты реакционного буфера, либо
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.