ISO 21150:2006

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 21150
First edition
2006-04-15


Cosmetics — Microbiology — Detection
of Escherichia coli
Cosmétiques — Microbiologie — Détection d'Escherichia coli




Reference number
ISO 21150:2006(E)
©
ISO 2006

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ISO 21150:2006(E)
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Published in Switzerland

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ISO 21150:2006(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope. 1
2 Normative references. 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 2
5 Diluents and culture media. 2
5.1 General. 2
5.2 Diluent for the bacterial suspension (tryptone sodium chloride solution). 3
5.3 Culture media . 3
6 Apparatus and glassware. 6
7 Strains of microorganisms . 6
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples . 6
9 Procedure. 6
9.1 General recommendations. 6
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth . 6
9.3 Incubation of the inoculated enrichment broth . 7
9.4 Detection and identification of Escherichia coli. 7
10 Expression of the results (detection of Escherichia coli) . 8
11 Neutralization of the antimicrobial properties of the product. 8
11.1 General. 8
11.2 Preparation of inoculum. 9
11.3 Validation of the detection method. 9
12 Test report. 10
Annex A (informative) Other enrichment broths. 11
Annex B (informative) Neutralizers of antimicrobial activity of preservatives and rinsing liquids . 14
Bibliography . 15

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ISO 21150:2006(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 21150 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
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ISO 21150:2006(E)
Introduction
Microbiological examinations of cosmetic products are to be carried out according to an appropriate
microbiological risk analysis in order to ensure their quality and safety for consumers.
Microbiological risk analysis depends on several parameters such as:
⎯ potential alteration of cosmetic products;
⎯ pathogenicity of microorganisms;
⎯ site of application of the cosmetic product (hair, skin, eyes, mucous membranes, etc.);
⎯ type of users (adults, children under 3 years, etc.).
For cosmetics and other topical products, the detection of skin pathogens such as Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans may be relevant. The detection of other kinds of
microorganisms might be of interest since these microorganisms (including indicators of faecal contamination,
e.g. Escherichia coli) suggest hygienic failure during manufacturing process.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 21150:2006(E)

Cosmetics — Microbiology — Detection of Escherichia coli
1 Scope
This International Standard gives general guidelines for the detection and identification of the specified
microorganism Escherichia coli in cosmetic products. Microorganisms considered as specified in this
International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations.
In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate
microbiological risk analysis, so as to determine the types of cosmetic products to which this International
Standard is applicable. Products considered to present a low microbiological risk include those with low water
activity, hydro-alcoholic products, extreme pH values, etc.
This International Standard specifies a method that is based on the detection of Escherichia coli in a
non-selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other
methods may be appropriate depending on the level of detection required.
NOTE For the detection of Escherichia coli, subcultures can be performed on non-selective culture media followed by
suitable identification steps (e.g. using identification kits).
Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not be
suited to some products in every detail (e.g. certain water-immiscible products). Other International Standards
may be appropriate. Other methods (e.g. automated) can be substituted for the test presented here provided
that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise validated.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
1)
ISO 21148:— , Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
product
portion of an identified cosmetic product received in the laboratory for testing
3.2
sample
portion of the product (at least 1 g or 1 ml) which is used in the test to prepare the initial suspension

1)
To be published.
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ISO 21150:2006(E)
3.3
initial suspension
suspension (or solution) of the sample in a defined volume of an appropriate enrichment broth
3.4
sample dilution
dilution of the initial suspension
3.5
specified microorganism
aerobic mesophilic bacteria or yeast which is undesirable in a cosmetic product because it can cause skin or
eye infection, or it can be recognized as an indicator of hygienic failure in the manufacturing process
3.6
Escherichia coli
Gram-negative rod, motile, smooth colonies
NOTE 1 The main characteristics for identification are catalase positive, oxidase negative, fermentation of lactose,
production of indole, growth on selective medium containing bile salts with characteristic colonies.
NOTE 2 Escherichia coli can be isolated from the moist environmental sources (air, water, soil) and is a faecal
contamination indicator.
3.7
enrichment broth
non-selective liquid medium containing suitable neutralizers and/or dispersing agents and validated for the
product under test
4 Principle
The first step of the procedure is to perform an enrichment by using a non-selective broth medium to increase
the number of microorganisms without the risk of inhibition by the selective ingredients that are present in
selective/differential growth media.
The second step (isolation) of the test is performed on a selective medium followed by identification tests.
The possible inhibition of microbial growth by the sample shall be neutralized to allow the detection of viable
[5]
microorganisms . In all cases and whatever the methodology, the neutralization of the antimicrobial
[6] [7] [8]
properties of the product shall be checked and validated .
5 Diluents and culture media
5.1 General
Use the general instructions given in ISO 21148. When water is mentioned in this document, use distilled
water or purified water as specified in ISO 21148.
The enrichment broth is used to disperse the sample and to increase the initial microbial population. It may
contain neutralizers if the specimen to be tested has antimicrobial properties. The efficacy of the neutralization
shall be demonstrated (see Clause 11). Information relative to suitable neutralizers is given in Annex B.
The following enrichment broth is suitable for checking the presence of Escherichia coli according to this
International Standard provided that it is validated according to Clause 11.
Other diluents and culture media may be used if they have been demonstrated to be suitable for use.
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ISO 21150:2006(E)
5.2 Diluent for the bacterial suspension (tryptone sodium chloride solution)
The diluent is used for the preparation of bacterial suspension used for the validation procedure (see
Clause 11).
5.2.1 Composition
Tryptone, pancreatic digest of casein 1,0 g
Sodium chloride 8,5 g
Water 1 000 ml
5.2.2 Preparation
Dissolve the components in water by mixing while heating. Dispense into suitable containers. Sterilize in the
autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3 Culture media
5.3.1 General
Culture media may be prepared using the descriptions provided below or from dehydrated culture media,
according to the instructions from the manufacturer. The instructions provided by the supplier of the media
should be followed.
NOTE Ready-to-use media may be used when their composition and/or growth yields are comparable to those of the
formulas given herein.
5.3.2 Agar medium for validation [soybean-casein digest agar medium (SCDA) or tryptic soy agar
(TSA)]
5.3.2.1 Composition
Pancreatic digest of casein 15,0 g
Papaic digest of soybean meal 5,0 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 15,0 g
Water 1 000 ml
5.3.2.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating. Dispense
the medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,3 ± 0,2 when measured at room
temperature.
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ISO 21150:2006(E)
5.3.3 Enrichment broth
5.3.3.1 Eugon LT 100 broth
5.3.3.1.1 General
This medium contains ingredients
⎯ which neutralize inhibitory substances present in the sample:  lecithin and polysorbate 80,
⎯ dispersing agent:  octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
Pancreatic digest of casein 15,0 g
Papaic digest of soybean meal 5,0 g
L-cystine 0,7 g
Sodium chloride 4,0 g
Sodium sulfite 0,2 g
Glucose 5,5 g
Egg lecithin 1,0 g
Polysorbate 80 5,0 g
Octoxynol 9 1,0 g
Water 1 000 ml
5.3.3.1.3 Preparation
Dissolve the components, polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin, successively into boiling water until
their complete dissolution. Dissolve the other components by mixing while heating.
Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization
and cooling down, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.3.3.2 Other enrichment broths
Other enrichment broths may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.4 Selective agar medium for isolation of Escherichia coli
5.3.4.1 MacConkey agar medium
5.3.4.1.1 Composition
Pancreatic digest of gelatin 17,0 g
Pancreatic digest of casein 1,5 g
Peptic digest of animal tissue 1,5 g
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ISO 21150:2006(E)
Lactose 10,0 g
Bile salts mixture 1,5 g
Sodium chloride 5,0 g
Agar 13,5 g
Neutral red 30,0 mg
Crystal violet 1,0 mg
Water 1 000 ml
5.3.4.1.2 Preparation
Dissolve all solid components in the water and boil for 1 min to effect solution.
Dispense in suitable containers and sterilize at 121 °C for 15 min.
The pH, after sterilization and cooling down, shall be equivalent to 7,1 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.5 Selective agar medium for confirmation of Escherichia coli
5.3.5.1 Levine eosin-methylene blue agar medium
5.3.5.1.1 Composition
Pancreatic digest of gelatin 10,0 g
Potassium dihydrogen phosphate (KH PO) 2,0 g
2 4
Agar 15,0 g
Lactose 10,0 g
Eosine Y 400 mg
Methylene blue 65 mg
Water 1 000 ml
5.3.5.1.2 Preparation
Dissolve the pancreatic digest of gelatin, the dibasic potassium phosphate, and the agar in the water, with
warming, and allow to cool. Just prior to use, liquefy the gelled agar solution, add the remaining ingredients,
as solutions, in the following amounts, and mix; for each 100 ml of the liquefied agar solution
⎯ 5 ml of 20 % lactose solution,
⎯ 2 ml of 2 % eosin Y solution, and
⎯ 2 ml of 0,033 % methylene blue solution.
The finished medium may not be clear.
Dispense in suitable containers and sterilize at 121 °C for 15 min.
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ISO 21150:2006(E)
The pH, after sterilization and cooling down, shall be equivalent to 7,1 ± 0,2 when measured at room
temperature.
6 Apparatus and glassware
Use the laboratory equipment, apparatus and glassware described in ISO 21148.
7 Strains
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 21150
Première édition
2006-04-15



Cosmétiques — Microbiologie —
Détection d'Escherichia coli
Cosmetics — Microbiology — Detection of Escherichia coli




Numéro de référence
ISO 21150:2006(F)
©
ISO 2006

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ISO 21150:2006(F)
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Publié en Suisse

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ISO 21150:2006(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application.1
2 Références normatives .1
3 Termes et définitions.1
4 Principe.2
5 Diluants et milieux de culture.2
5.1 Généralités .2
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (Solution tryptone-sel).3
5.3 Milieux de culture.3
6 Appareillage et verrerie.6
7 Souches de micro-organismes .6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire .6
9 Mode opératoire.6
9.1 Recommandations générales.6
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement.7
9.3 Incubation du milieu liquide d'enrichissement ensemencé.7
9.4 Recherche et identification d'Escherichia coli .7
10 Expression des résultats (recherche d'Escherichia coli).8
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit .8
11.1 Généralités .8
11.2 Préparation de l'inoculum.9
11.3 Validation de la méthode de recherche.9
12 Rapport d'essai .10
Annexe A (informative) Autres milieux liquides d'enrichissement .11
Annexe B (informative) Neutralisants de l'activité antimicrobienne des conservateurs et liquides
de rinçage .14
Bibliographie .15


© ISO 2006 – Tous droits réservés iii

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ISO 21150:2006(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 21150 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.
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ISO 21150:2006(F)
Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques doivent être réalisés conformément à une analyse
de risque appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L'analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que les suivants:
⎯ l'altération potentielle des produits cosmétiques;
⎯ le caractère pathogène des micro-organismes;
⎯ le site d'application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses, etc.);
⎯ la catégorie d'utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans, etc.).
Pour les cosmétiques et d'autres produits topiques, la recherche d'agents pathogènes pour la peau, tels que
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans peut être justifiée. La recherche
d'autres sortes de micro-organismes peut aussi présenter de l'intérêt, car ceux-ci (y compris des indicateurs
de contamination fécale, par exemple Escherichia coli) laissent penser à une défaillance de l'hygiène au cours
du processus de fabrication.

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NORME INTERNATIONALE ISO 21150:2006(F)

Cosmétiques — Microbiologie — Détection d'Escherichia coli
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la recherche et l'identification
du micro-organisme spécifié Escherichia coli dans les produits cosmétiques. Les micro-organismes
considérés comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer d'un pays à un autre,
suivant les pratiques ou les réglementations nationales.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est conseillé d'effectuer une analyse
appropriée du risque microbiologique afin de déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent de la
présente Norme internationale. Les produits dont on considère qu'ils présentent un faible risque
microbiologique comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydro-alcooliques, ceux
ayant des valeurs de pH extrêmes, etc.
La présente Norme internationale spécifie une méthode basée sur la recherche d'Escherichia coli dans un
milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), suivie de l'isolement du micro-organisme sur un
milieu gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du niveau de recherche requis.
NOTE Pour la recherche d'Escherichia coli, il est possible de réaliser des subcultures sur des milieux de culture non
sélectifs avant de procéder aux étapes appropriées d'identification (en utilisant, par exemple, des kits d'identification).
En raison de la grande variété de produits cosmétiques entrant dans ce domaine d'application, la présente
méthode pourrait ne pas être, en tout point, adaptée à certains produits (par exemple à certains produits non
miscibles dans l'eau). D'autres Normes internationales peuvent être plus adaptées. D'autres méthodes (par
exemple automatisées) peuvent se substituer aux essais présentés ici, sous réserve que leur équivalence ait
été démontrée ou que la méthode ait été validée par ailleurs.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence (y compris les éventuels amendements) s'applique.
1)
ISO 21148:— , Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
produit
portion d'un produit cosmétique identifié, reçue au laboratoire pour essais

1) À publier.
© ISO 2006 – Tous droits réservés 1

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ISO 21150:2006(F)
3.2
échantillon
portion du produit (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée dans l'essai pour préparer la suspension initiale
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution) de l'échantillon dans un volume défini d'un milieu liquide d'enrichissement approprié
3.4
dilution(s) de l'échantillon
dilution(s) de la suspension initiale
3.5
micro-organisme spécifié
bactérie aérobie mésophile ou levure dont la présence dans un produit cosmétique est indésirable parce
qu'elle peut causer des infections de la peau ou des yeux ou peut être reconnue comme un indicateur de
défaillance de l'hygiène dans le processus de fabrication
3.6
Escherichia coli
bacille Gram négatif, mobile, en colonies lisses
NOTE 1 Les principales caractéristiques pour l'identification sont les suivantes: catalase positive, oxydase négative,
fermentation du lactose, production d'indole, croissance sur milieu sélectif contenant des sels biliaires avec des colonies
caractéristiques.
NOTE 2 Escherichia coli peut être isolé à partir de sources environnementales humides (air, eau, sol) et c'est un
indicateur de contamination fécale.
3.7
milieu liquide d'enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou des agents dispersants appropriés, validé pour le
produit en essai
4 Principe
La première étape du mode opératoire est de procéder à l'enrichissement en utilisant un milieu liquide non
sélectif pour augmenter le nombre de micro-organismes sans risque d'inhibition par les ingrédients sélectifs
qui sont présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
La seconde étape de l'essai (isolement) est réalisée sur un milieu sélectif, avant les essais d'identification.
L'inhibition potentielle de la croissance microbienne par l'échantillon doit être neutralisée pour permettre la
[5]
recherche des micro-organismes viables . Dans tous les cas et quelle que soit la méthode employée, la
[6] [7] [8]
neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et validée .
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Utiliser les instructions générales données dans l'ISO 21148. Lorsque le présent document mentionne
l'utilisation d'eau, utiliser de l'eau distillée ou de l'eau purifiée telle que spécifiée dans l'ISO 21148.
Le milieu liquide d'enrichissement est utilisé pour disperser l'échantillon et pour augmenter la population
microbienne initiale. Il peut contenir des neutralisants si l'échantillon à soumettre à essai possède des
propriétés antimicrobiennes. L'efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11). L'Annexe B
fournit des informations relatives aux neutralisants appropriés.
2 © ISO 2006 – Tous droits réservés

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ISO 21150:2006(F)
Le milieu liquide d'enrichissement suivant est adapté pour vérifier la présence d'Escherichia coli
conformément à la présente Norme internationale, à condition d'avoir été validé conformément à l'Article 11.
D'autres diluants et milieux de culture sont utilisables si leur aptitude à l'emploi a été démontrée.
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (Solution tryptone-sel)
Le diluant est utilisé pour préparer la suspension bactérienne utilisée pour la validation (voir Article 11).
5.2.1 Composition
Tryptone, digestion pancréatique de caséine 1,0 g
Chlorure de sodium 8,5 g
Eau 1 000 ml
5.2.2 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température
ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés comme indiqué ci-dessous, ou à partir de milieux de culture
déshydratés conformément aux instructions du fabricant. Il convient de suivre les instructions données par le
fournisseur de ces milieux.
NOTE Il est possible d'utiliser des milieux prêts à l'emploi quand leur composition et/ou leurs performances de
croissance sont comparables à celles des formules indiquées ici.
5.3.2 Milieu gélosé pour validation [milieu gélosé aux peptones de caséine et de soja (SCDA)
ou gélose trypto-caséine soja (TSA)]
5.3.2.1 Composition
Peptone pancréatique de caséine 15,0 g
Peptone papaïque de soja 5,0 g
Chlorure de sodium 5,0 g
Gélose 15,0 g
Eau 1 000 ml
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en mélangeant tout en chauffant.
Répartir dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
© ISO 2006 – Tous droits réservés 3

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ISO 21150:2006(F)
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,3 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température
ambiante.
5.3.3 Milieu liquide d'enrichissement
5.3.3.1 Bouillon Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Généralités
Ce milieu contient
⎯ des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans l'échantillon: lécithine et
polysorbate 80, et
⎯ un agent dispersant: octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
Peptone pancréatique de caséine 15,0 g
Peptone papaïque de soja 5,0 g
L-cystine 0,7 g
Chlorure de sodium 4,0 g
Sulfite de sodium 0,2 g
Glucose 5,5 g
Lécithine d'œuf 1,0 g
Polysorbate 80 5,0 g
Octoxynol 9 1,0 g
Eau 1 000 ml
5.3.3.1.3 Préparation
Dissoudre successivement dans l'eau bouillante le polysorbate 80, l'octoxynol 9 et la lécithine d'œuf jusqu'à
dissolution complète. Dissoudre les autres composants en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après
stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,1 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température
ambiante.
5.3.3.2 Autres milieux liquides d'enrichissement
D'autres milieux liquides d'enrichissement peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
5.3.4 Milieu gélosé sélectif pour isolement d'Escherichia coli
5.3.4.1 Gélose MacConkey
5.3.4.1.1 Composition
Digestion pancréatique de gélatine 17,0 g
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ISO 21150:2006(F)
Digestion pancréatique de caséine 1,5 g
Digestion pepsique de tissu animal 1,5 g
Lactose 10,0 g
Mélange de sels biliaires 1,5 g
Chlorure de sodium 5,0 g
Gélose 13,5 g
Rouge neutre 30,0 g
Cristal violet 1,0 ml
Eau 1 000 ml
5.3.4.1.2 Préparation
Dissoudre tous les composants solides dans l'eau et faire bouillir pendant 1 min pour dissoudre.
Répartir dans des récipients appropriés et stériliser à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,1 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température
ambiante.
5.3.5 Milieu gélosé sélectif pour confirmation de la présence d'Escherichia coli
5.3.5.1 Gélose de Levine à l'éosine et au bleu de méthylène
5.3.5.1.1 Composition
Digestion pancréatique de gélatine 10,0 g
Dihydrogénophosphate de potassium (KH PO) 2,0 g
2 4
Gélose 15,0 g
Lactose 10,0 g
Éosine Y 400 mg
Bleu de méthylène 65 mg
Eau 1 000 ml
5.3.5.1.2 Préparation
Dissoudre la digestion pancréatique de gélatine, le phosphate de potassium dibasique et la gélose dans l'eau
tout en chauffant, puis laisser refroidir. Juste avant utilisation, faire fondre le gel de gélose, ajouter les
ingrédients restants sous forme de solutions, dans les quantités suivantes, et mélanger: pour chaque 100 ml
de gélose fondue
⎯ 5 ml d'une solution de lactose à 20 %,
⎯ 2 ml d'une solution d'éosine Y à 2 %, et
⎯ 2 ml d'une solution de bleu de méthylène à 0,033 %.
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ISO 21150:2006(F)
Il se peut que le milieu fini ne soit pas limpide.
Répartir dans des récipients appropriés et stériliser à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,1 ± 0,2, le mesurage étant effectué à la température
ambiante.
6 Appareillag
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