ISO 22717:2015

NORME ISO
INTERNATIONALE 22717
Deuxième édition
2015-12-01
Cosmétiques — Microbiologie —
Détection de Pseudomonas aeruginosa
Cosmetics — Microbiology — Detection of Pseudomonas aeruginosa
Numéro de référence
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ISO 2015
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 2
5 Diluants et milieux de culture . 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (solution de tryptone et de chlorure de sodium) . 3
5.2.1 Généralités . 3
5.2.2 Composition . 3
5.2.3 Préparation . 3
5.3 Milieux de culture . 3
5.3.1 Généralités . 3
5.3.2 Milieu gélosé pour l’essai d’applicabilité (voir Article 11) (milieu gélosé à
l’hydrolysat de caséine et de soja ou gélose tryptone-soja) . 3
5.3.3 Bouillon d’enrichissement . 4
5.3.4 Milieu gélosé sélectif pour l’isolement de Pseudomonas aeruginosa . 5
5.3.5 Milieu gélosé sélectif pour confirmation de la présence de
Pseudomonas aeruginosa . 5
6 Appareillage et verrerie . 6
7 Souches de microorganismes . 6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire .6
9 Mode opératoire. 6
9.1 Recommandations générales. 6
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le bouillon d’enrichissement . 6
9.2.1 Généralités . 6
9.2.2 Produits miscibles à l’eau . 7
9.2.3 Produits non miscibles à l’eau . 7
9.2.4 Produits filtrables . 7
9.3 Incubation du bouillon d’enrichissement ensemencé . 7
9.4 Détection et identification de Pseudomonas aeruginosa . 7
9.4.1 Isolement . 7
9.4.2 Identification de Pseudomonas aeruginosa . 7
10 Expression des résultats (détection de Pseudomonas aeruginosa) .8
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit . 8
11.1 Généralités . 8
11.2 Préparation de l’inoculum . 8
11.3 Applicabilité de la méthode de détection. 8
11.3.1 Mode opératoire . 8
11.3.2 Interprétation des résultats de l’essai d’applicabilité. 9
12 Rapport d’essai . 9
Annexe A (informative) Autres bouillons d’enrichissement .11
Annexe B (informative) Neutralisants de l’activité antimicrobienne des conservateurs et
liquides de rinçage .13
Bibliographie .14
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer
un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à
l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes
de l’OMC concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos —
Informations supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 217, Cosmétiques.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 22717:2006), qui a fait l’objet d’une
révision mineure.
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Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques sont réalisés selon une analyse de risque
microbiologique appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L’analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que les suivants:
— l’altération potentielle des produits cosmétiques;
— le caractère pathogène des microorganismes;
— le site d’application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses);
— la catégorie d’utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans).
Pour les cosmétiques et les autres produits topiques, la détection d’agents pathogènes pour la peau, tels
que Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans peut être justifiée, parce qu’ils
peuvent causer des infections cutanées ou oculaires. La recherche d’autres sortes de microorganismes
peut aussi présenter un intérêt car ceux-ci (y compris des indicateurs de contamination fécale, par exemple
Escherichia coli) peuvent indiquer une défaillance de l’hygiène au cours du processus de fabrication.
NORME INTERNATIONALE ISO 22717:2015(F)
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de
Pseudomonas aeruginosa
1 Domaine d’application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la détection et
l’identification du microorganisme spécifié Pseudomonas aeruginosa dans les produits cosmétiques. Les
microorganismes considérés comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer
d’un pays à l’autre suivant les pratiques ou les réglementations nationales.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est préférable d’effectuer une
analyse appropriée du risque microbiologique afin de déterminer les types de produits cosmétiques
qui relèvent de la présente Norme internationale. Les produits considérés comme présentant un
faible risque microbiologique (voir ISO 29621) comprennent ceux ayant une faible activité de l’eau, les
produits hydroalcooliques, ceux ayant des valeurs de pH extrêmes, etc.
La méthode décrite dans la présente Norme internationale repose d’abord sur la détection de
Pseudomonas aeruginosa dans un milieu liquide non sélectif (bouillon d’enrichissement), suivie d’un
isolement sur un milieu gélosé sélectif. D’autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du
niveau de détection exigé.
NOTE Pour la détection de Pseudomonas aeruginosa, il est possible de réaliser des subcultures sur des milieux
de culture non sélectifs, puis de procéder aux étapes appropriées d’identification (par exemple en utilisant des
kits d’identification).
En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant de ce domaine d’application, il se peut
que cette méthode ne soit pas adaptée en tous points à certains produits (par exemple aux produits non
miscibles à l’eau). D’autres Normes internationales (ISO 18415) peuvent être appropriées. Il est possible
de remplacer les essais présentés ici par d’autres méthodes (par exemple des méthodes automatisées)
sous réserve que leur équivalence ait été démontrée ou que la méthode ait été validée par ailleurs.
2 Références normatives
Les documents ci-après, en totalité ou en partie, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 21148:2005, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
EN 12353, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Conservation des microorganismes d’essai utilisés
pour la détermination de l’activité bactéricide (Legionella incluses), mycobactéricide, sporicide, fongicide et
virucide (bactériophages inclus)
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
3.1
produit
portion d’un produit cosmétique identifié reçue au laboratoire pour essais
3.2
échantillon
portion du produit (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée lors de l’essai pour préparer la suspension initiale
(solution mère)
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution) de l’échantillon dans un volume défini d’un bouillon d’enrichissement approprié
3.4
dilution de l’échantillon
dilution de la suspension initiale
3.5
microorganisme spécifié
bactérie aérobie mésophile ou levure qui est indésirable dans un produit cosmétique et qui est reconnue
comme étant une espèce pathogène pour la peau, susceptible d’être néfaste pour la santé humaine ou
considérée comme une indication de défaillance de l’hygiène dans le processus de fabrication
3.6
Pseudomonas aeruginosa
bacille Gram négatif mobile, formant des colonies lisses pigmentées de couleur marron ou verdâtre
Note 1 à l’article: Les principales caractéristiques pour l’identification sont les suivantes: croissance sur milieu
sélectif gélose cétrimide, oxydase positive, production de pigments fluorescents diffusibles et production de
pigment phénazine soluble (pyocyanine) dans les milieux appropriés.
Note 2 à l’article: Pseudomonas aeruginosa peut être isolé à partir d’une grande variété de sources
environnementales, notamment l’eau; il est capable de contaminer un grand nombre de substrats différents.
Il peut être à l’origine d’infections cutanées ou oculaires chez l’homme. Sa présence est donc indésirable dans
les produits cosmétiques en raison de son caractère potentiellement pathogène et de sa capacité à modifier les
propriétés physicochimiques de la formulation du cosmétique.
3.7
bouillon d’enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou des agents dispersants appropriés, dont il
a été démontré qu’il convient pour le produit soumis à essai
4 Principe
La première étape du mode opératoire est une phase d’enrichissement utilisant un bouillon non sélectif
afin d’augmenter le nombre de microorganismes sans risque d’inhibition par les ingrédients sélectifs
qui sont présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
La seconde étape (isolement) de l’essai est réalisée sur un milieu sélectif et elle est suivie d’essais
d’identification
L’inhibition potentielle de la croissance microbienne par l’échantillon doit être neutralisée pour
[1]
permettre la détection des microorganismes viables. Dans tous les cas et quelle que soit la méthode
employée, la neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et démontrée
(voir Article 11).
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Des instructions générales sont données dans l’ISO 21148. Lorsque la présente Norme internationale
mentionne l’emploi d’eau, il faut utiliser de l’eau distillée ou de l’eau purifiée comme spécifié dans
l’ISO 21148.
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Le bouillon d’enrichissement est utilisé pour disperser l’échantillon et pour augmenter la population
microbienne initiale. Il peut contenir des neutralisants si l’échantillon à soumettre à essai possède
des propriétés antimicrobiennes. L’efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11).
L’Annexe B fournit des informations relatives aux neutralisants appropriés.
Le bouillon d’enrichissement (5.3.3.1), ou l’un de ceux donnés dans l’Annexe A, peut être utilisé pour
vérifier la présence de Pseudomonas aeruginosa conformément à la présente Norme internationale à
condition qu’il ait été démontré qu’il est approprié conformément à l’Article 11.
D’autres diluants et milieux de culture sont utilisables s’il a été démontré que leur emploi convient.
5.2 Diluant pour la suspension bactérienne (solution de tryptone et de chlorure de
sodium)
5.2.1 Généralités
Le diluant est utilisé pour préparer la suspension bactérienne utilisée pour le mode opératoire de l’essai
d’applicabilité (voir Article 11).
5.2.2 Composition
— tryptone, hydrolysat pancréatique de caséine 1,0 g
— chlorure de sodium 8,5 g
— eau 1 000 ml
5.2.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l’eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à
température ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés suivant les modes opératoires ci-dessous ou à partir de
milieux de culture déshydratés conformément aux instructions du fabricant. Il convient de se conformer
aux instructions données par le fournisseur des milieux.
NOTE Il est possible d’utiliser des milieux prêts à l’emploi quand leur composition et/ou leurs performances
de croissance sont comparables à celles des formules indiquées ci-après.
5.3.2 Milieu gélosé pour l’essai d’applicabilité (voir Article 11) (milieu gélosé à l’hydrolysat de
caséine et de soja ou gélose tryptone-soja)
5.3.2.1 Composition
— hydrolysat pancréatique de caséine 15,0 g
— hydrolysat papaïque de soja 5,0 g
— chlorure de sodium 5,0 g
— agar 15,0 g
— eau 1 000 ml
5.3.2.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l’eau en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l’autoclave à 121 °C pendant 15
...