ISO 19250:2010

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 19250
First edition
2010-07-15
Water quality — Detection of Salmonella
spp.
Qualité de l'eau — Recherche de Salmonella spp.

Reference number
©
ISO 2010
PDF disclaimer
This PDF file may contain embedded typefaces. In accordance with Adobe's licensing policy, this file may be printed or viewed but
shall not be edited unless the typefaces which are embedded are licensed to and installed on the computer performing the editing. In
downloading this file, parties accept therein the responsibility of not infringing Adobe's licensing policy. The ISO Central Secretariat
accepts no liability in this area.
Adobe is a trademark of Adobe Systems Incorporated.
Details of the software products used to create this PDF file can be found in the General Info relative to the file; the PDF-creation
parameters were optimized for printing. Every care has been taken to ensure that the file is suitable for use by ISO member bodies. In
the unlikely event that a problem relating to it is found, please inform the Central Secretariat at the address given below.

©  ISO 2010
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized in any form or by any means,
electronic or mechanical, including photocopying and microfilm, without permission in writing from either ISO at the address below or
ISO's member body in the country of the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2010 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction.v
1 Scope.1
2 Normative references.1
3 Terms and definitions .2
4 Principle.2
4.1 General .2
4.2 Pre-enrichment in non-selective liquid medium .2
4.3 Enrichment in selective liquid media .2
4.4 Plating out and recognition.3
4.5 Confirmation .3
5 Apparatus.3
6 Sampling.4
7 Culture media and reagents .4
8 Procedure.5
8.1 Preparation of the sample .5
8.2 Non-selective pre-enrichment.5
8.3 Selective enrichment.5
8.4 Plating out .6
8.5 Confirmation .6
9 Expression of results.9
10 Test report.9
Annex A (normative) Diagram of procedure .10
Annex B (normative) Composition and preparation of culture media and reagents.11
Annex C (informative) Results of the interlaboratory trial.18
Bibliography.23

Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 19250 was prepared by Technical Committee ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 4,
Microbiological methods.
This edition cancels and replaces ISO 6340:1995, which has been technically revised.

iv © ISO 2010 – All rights reserved

Introduction
Salmonella species are bacteria which are widely distributed all over the world. They are usually classified as
pathogens, although their virulence and pathogenesis vary widely. The natural hosts of Salmonella include
humans, agricultural and domestic livestock, and wild animals including birds. Humans and animals can
excrete these bacteria while carrying them asymptomatically as well as during disease. It is therefore
impossible to eliminate them from the environment. Following the infection of humans, the transmission of
Salmonella can cause severe disease.
Since water is a recognized vehicle of infection, the presence or absence of Salmonella is monitored in water
where there is perceived to be a risk of infection. Salmonella can be present in all types of domestic and
agricultural waste water, freshwaters, including ground and drinking waters, as well as sea water.
The detection of Salmonella in water usually requires a concentration step. Since Salmonella cells can be
present in low numbers and injured in the aqueous environment, their detection in water usually requires a
pre-enrichment step.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 19250:2010(E)

Water quality — Detection of Salmonella spp.
WARNING — In order to safeguard the health of laboratory personnel, it is essential that tests for
detecting Salmonella, and especially S. enterica subsp. enterica ser. Typhi (Salmonella ser. Typhi) and
S. enterica subsp. enterica ser. Paratyphi (Salmonella ser. Paratyphi), be undertaken only in properly
equipped laboratories, under the control of a skilled microbiologist, and that great care be taken in the
disposal of all incubated materials.
Persons using this International Standard should be familiar with normal laboratory practice. This
standard does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its use. It is
the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to ensure
compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted according to this International Standard
be carried out by suitably trained staff.
1 Scope
This International Standard specifies a method for the detection of Salmonella spp. (presumptive or
confirmed) in water samples. It is possible that, for epidemiological purposes or during outbreak investigations,
other media are also required.
WARNING — It is possible that the method does not recover all Salmonella ser. Typhi and ser.
Paratyphi.
NOTE For a semi-quantitative approach, most probable number (MPN) tests can be performed using appropriate
sample volumes. For these cases, the volume of the buffered peptone water is adjusted accordingly.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 6579, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Horizontal method for the detection of Salmonella
spp.
ISO 6887-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs — Preparation of test samples, initial suspension
and decimal dilutions for microbiological examination — Part 1: General rules for the preparation of the initial
suspension and decimal dilutions
ISO 7218, Microbiology of food and animal feeding stuffs — General requirements and guidance for
microbiological examinations
ISO 7704, Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
ISO 8199, Water quality — General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture
ISO 19458, Water quality — Sampling for microbiological analysis
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
presumptive Salmonella spp.
bacteria which grow in the selective enrichment medium specified, and form typical or atypical colonies on the
solid selective media
3.2
confirmed Salmonella spp.
bacteria which grow in the selective enrichment medium specified, and form typical and suspicious colonies
on the solid selective media, and which display specfic biochemical and serological characteristics
NOTE The specific biochemical and serological characteristics are determined by tests specified in this International
Standard.
3.3
Salmonella detection
determination of the presence or absence of Salmonella (3.4)
3.4
Salmonella spp.
Salmonella
microorganisms which form typical or atypical colonies on solid selective media and which display specific
biochemical and serological characteristics
4 Principle
4.1 General
The detection of Salmonella necessitates four successive stages (see also Annex A).
Pre-enrichment is often necessary to permit detection of low numbers of Salmonella or injured Salmonella.
Some Salmonella and those which are sublethally injured may require additional incubation time (4.3).
Furthermore, Salmonella can be present in small numbers and are often accompanied by considerably Iarger
numbers of other members of Enterobacteriaceae or of other families. Therefore, selective enrichment is
necessary.
4.2 Pre-enrichment in non-selective liquid medium
Buffered peptone water (B.1) is inoculated at ambient temperature with a known volume of the sample or its
dilutions, then incubated at (36 ± 2) °C for (18 ± 2) h. Larger volumes can be concentrated using membrane
filtration and the membrane filter is then added to buffered peptone water.
NOTE For waste water it has been shown that shorter incubation times or direct inoculation of the sample in selective
medium (4.3) produce better results.
For a semi-quantitative approach, MPN tests can be performed using appropriate sample volumes. In these
cases, adjust the volumes of the buffered peptone water accordingly.
4.3 Enrichment in selective liquid media
Rappaport-Vassiliadis medium with soya (RVS broth) and Muller-Kauffmann tetrathionate-novobiocin broth
(MKTTn) are inoculated with the culture obtained in 4.2.
The RVS broth is incubated at (41,5 ± 1) °C for (24 ± 3) h and the MKTTn broth at (37 ± 1) °C for (24 ± 3) h.
2 © ISO 2010 – All rights reserved

To detect slow-growing Salmonella spp., incubate the enrichment broth for a further (24 ± 3) h to a total of
(48 ± 4) h at (41,5 ± 1,0) °C.
NOTE Salmonella Typhi and Salmonella Paratyphi A are usually not important in routine water quality monitoring, but
can be relevant in epidemiological investigations. MKTTn broth is used for enrichment with incubation at (36 ± 2) °C for up
to (24 ± 3) h and recovers most strains of Salmonella, including some strains of Salmonella Paratyphi, but is not thought to
be able to recover strains of Salmonella Paratyphi C. MKTTn broth is not used if Salmonella Typhi is suspected after the
use of selenite cystine broth.
4.4 Plating out and recognition
From the cultures obtained in 4.3, two selective solid media are inoculated:
a) xylose lysine deoxycholate agar (XLD agar);
b) any other solid selective medium complementary to XLD agar and, if applicab
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 19250
Première édition
2010-07-15
Qualité de l'eau — Recherche
de Salmonella spp.
Water quality — Detection of Salmonella spp.

Numéro de référence
©
ISO 2010
PDF – Exonération de responsabilité
Le présent fichier PDF peut contenir des polices de caractères intégrées. Conformément aux conditions de licence d'Adobe, ce fichier
peut être imprimé ou visualisé, mais ne doit pas être modifié à moins que l'ordinateur employé à cet effet ne bénéficie d'une licence
autorisant l'utilisation de ces polices et que celles-ci y soient installées. Lors du téléchargement de ce fichier, les parties concernées
acceptent de fait la responsabilité de ne pas enfreindre les conditions de licence d'Adobe. Le Secrétariat central de l'ISO décline toute
responsabilité en la matière.
Adobe est une marque déposée d'Adobe Systems Incorporated.
Les détails relatifs aux produits logiciels utilisés pour la création du présent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info
du fichier; les paramètres de création PDF ont été optimisés pour l'impression. Toutes les mesures ont été prises pour garantir
l'exploitation de ce fichier par les comités membres de l'ISO. Dans le cas peu probable où surviendrait un problème d'utilisation,
veuillez en informer le Secrétariat central à l'adresse donnée ci-dessous.

DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT

©  ISO 2010
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée sous
quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l'accord écrit
de l'ISO à l'adresse ci-après ou du comité membre de l'ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2010 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction.v
1 Domaine d'application .1
2 Références normatives.1
3 Termes et définitions .2
4 Principe.2
4.1 Généralités .2
4.2 Préenrichissement sur milieu non sélectif liquide .2
4.3 Enrichissement sur milieux sélectifs liquides .3
4.4 Isolement et identification .3
4.5 Confirmation .3
5 Appareillage .3
6 Échantillonnage.4
7 Milieux de culture et réactifs .4
8 Mode opératoire.5
8.1 Préparation de l'échantillon .5
8.2 Préenrichissement non sélectif .5
8.3 Enrichissement sélectif .6
8.4 Isolement.6
8.5 Confirmation .6
9 Expression des résultats.9
10 Rapport d'essai.9
Annexe A (normative) Logigramme du mode opératoire .11
Annexe B (normative) Composition et préparation des milieux de culture et réactifs .12
Annexe C (informative) Résultats de l'essai interlaboratoires.19
Bibliographie.24

Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 19250 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 147, Qualité de l'eau, sous-comité SC 4,
Méthodes microbiologiques.
Cette édition annule et remplace l'ISO 6340:1995, qui a fait l'objet d'une révision technique.
iv © ISO 2010 – Tous droits réservés

Introduction
Les Salmonella sont des bactéries qui sont largement répandues à travers le monde. Elles sont, en général,
considérées comme pathogènes bien que leur virulence et leur pouvoir pathogène varient énormément. Les
hôtes naturels des Salmonella sont la population humaine, le bétail, les animaux domestiques, ainsi que les
animaux sauvages, y compris les oiseaux. Êtres humains et animaux peuvent excréter des Salmonella tout en
étant des porteurs asymptomatiques, de même qu'en cas de maladie. Par conséquent, il est impossible de les
éliminer de l'environnement. Par infection des êtres humains, la transmission des Salmonella peut causer de
graves maladies.
Dans la mesure où l'eau est un vecteur d'infection reconnu, la présence ou l'absence de Salmonella est
contrôlée dans l'eau lorsque l'on considère qu'il existe un risque d'infection. Les Salmonella peuvent être
présentes dans les eaux usées agricoles et domestiques, les eaux douces, y compris les eaux destinées à la
consommation humaine et les eaux souterraines, ainsi que dans les eaux de mer.
La recherche de Salmonella dans l'eau requiert habituellement une étape de concentration. Dans la mesure
où les Salmonella peuvent être présentes en faible nombre et avoir subi une altération dans l'environnement
aqueux, leur recherche dans l'eau nécessite habituellement une étape de préenrichissement.

NORME INTERNATIONALE ISO 19250:2010(F)

Qualité de l'eau — Recherche de Salmonella spp.
AVERTISSEMENT — Afin de préserver la santé du personnel de laboratoire, il est essentiel d'effectuer
les essais de recherche de Salmonella, et plus particulièrement de S. enterica subsp. enterica ser.
Typhi (Salmonella ser. Typhi) et S. enterica subsp. enterica ser. Paratyphi (Salmonella ser. Paratyphi),
uniquement dans des laboratoires correctement équipés, sous la direction d'un microbiologiste
compétent, et de faire très attention à l'élimination de toutes les substances incubées.
Il convient que l'utilisateur de la présente Norme internationale connaisse bien les pratiques
courantes de laboratoire. La présente Norme internationale n'a pas pour but de traiter tous les
problèmes de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l'utilisateur d'établir
des pratiques appropriées en matière d'hygiène et de sécurité, et de s'assurer de la conformité à la
réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est absolument essentiel que les essais réalisés conformément à la présente Norme
internationale soient exécutés par un personnel ayant reçu une formation adéquate.
1 Domaine d'application
La présente Norme Internationale spécifie une méthode pour la recherche de Salmonella spp. (présomptives
ou confirmées) dans des échantillons d'eau. À des fins épidémiologiques ou au cours d'enquêtes sur des
épidémies, il peut être nécessaire d'utiliser d'autres milieux.
AVERTISSEMENT — Il est possible que cette méthode ne retrouve pas toutes les Salmonella ser.
Typhi et ser. Paratyphi.
NOTE Pour une approche semi-quantitative, la technique du nombre le plus probable (NPP) peut être mise en
œuvre en utilisant des volumes appropriés de l'échantillon. Dans ces cas, le volume d'eau peptonée tamponnée est ajusté
en conséquence.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont utiles pour l'application du présent document. Pour les références
datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du document de
référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 6579:2002, Microbiologie des aliments — Méthode horizontale pour la recherche des Salmonella spp.
ISO 6887-1, Microbiologie des aliments — Préparation des échantillons, de la suspension mère et des
dilutions décimales en vue de l'examen microbiologique — Partie 1: Règles générales pour la préparation de
la suspension mère et des dilutions décimales
ISO 7218, Microbiologie des aliments — Exigences générales et recommandations
ISO 7704, Qualité de l'eau — Évaluation des membranes filtrantes utilisées pour des analyses
microbiologiques
ISO 8199, Qualité de l'eau — Lignes directrices générales pour le dénombrement des micro-organismes sur
milieu de culture
ISO 19458, Qualité de l'eau — Échantillonnage pour analyse microbiologique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
Salmonella spp. présomptives
bactéries se développant dans le milieu d'enrichissement sélectif spécifié et formant des colonies typiques ou
atypiques sur les milieux sélectifs solides
3.2
Salmonella spp. confirmées
bactéries se développant dans le milieu d'enrichissement sélectif spécifié et formant des colonies typiques et
suspectes sur les milieux sélectifs solides et qui présentent des caractéristiques biochimiques et sérologiques
spécifiques
NOTE Les caractéristiques biochimiques et sérologiques sont déterminées par des essais spécifiés dans la présente
Norme Internationale.
3.3
recherche de Salmonella
mise en évidence de la présence ou de l'absence de Salmonella (3.4)
3.4
Salmonella spp.
Salmonella
micro-organismes formant des colonies typiques ou atypiques sur des milieux sélectifs solides et présentant
des caractéristiques biochimiques et sérologiques spécifiques
4 Principe
4.1 Généralités
La recherche de Salmonella nécessite quatre phases successives (voir également l'Annexe A).
Un préenrichissement est souvent nécessaire pour permettre la recherche de Salmonella en nombre
relativement faible ou de Salmonella ayant subi une altération. Certaines Salmonella et celles ayant subi un
dommage sublétal peuvent nécessiter une période d'incubation supplémentaire (4.3). Par ailleurs, des
Salmonella peuvent être présentes en petit nombre et sont souvent accompagnées d'autres membres de la
famille des Enterobacteriaceae ou d'autres familles, en nombre largement plus important. Un enrichissement
sélectif est donc nécessaire.
4.2 Préenrichissement sur milieu non sélectif liquide
L'eau peptonée tamponnée (B.1) est ensemencée à température ambiante avec un volume connu de
l'échantillon ou de ses dilutions, puis incubée à (36 ± 2) °C pendant (18 ± 2) h. Des volumes plus importants
peuvent être concentrés par filtration sur membrane, après quoi la membrane filtrante est transférée dans
l'eau peptonée tamponnée.
NOTE Pour les eaux usées, il a été démontré que des périodes d'incubation plus courtes ou des ensemencements
directs de l'échantillon dans le milieu sélectif (4.3) donnent de meilleurs résultats.
Pour une approche semi-quantitative, la technique du NPP peut être mise en œuvre en utilisant des volumes
appropriés de l'échantillon. Dans ces cas, ajuster les volumes d'eau peptonée tamponnée en conséquence.
2 © ISO 2010 – Tous droits réservés

----------------------
...

МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 19250
Первое издание
2010-07-15
Качество воды. Выявление бактерий
рода Salmonella spp.
Water quality — Detection of Salmonella spp.

Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава
Ссылочный номер
©
ISO 2010
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена
лицензия на установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки
настоящего файла заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий
фирмы Adobe. Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все меры
предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами – членами ISO. В
редких случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просим информировать Центральный секретариат
по адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ

©  ISO 2010
Все права сохраняются. Если не задано иначе, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в
какой-либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без
предварительного письменного согласия офиса ISO по адресу, указанному ниже, или членов ISO в стране регистрации
пребывания.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2010 – Все права сохраняются

Содержание Страница
Предисловие .iv
Введение .v
1 Область применения .1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Аппаратура.4
6 Отбор проб.4
7 Питательные среды и реактивы .4
8 Проведение анализа .5
9 Представление результатов .10
10 Протокол испытания.10
11 Обеспечение качества.11
Приложение A (нормативное) Диаграмма анализа.12
Приложение B (нормативное) Состав (рецептура) и приготовление культуральных сред и
реактивов .13
Приложение С (информативное) Результаты межлабораторного эксперимента.20
Библиография.25

Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) представляет собой всемирную федерацию,
состоящую из национальных органов по стандартизации (комитеты-члены ISO). Работа по разработке
международных стандартов обычно ведется Техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член,
заинтересованный в теме, для решения которой образован данный технический комитет, имеет право
быть представленным в этом комитете. Международные организации, правительственные и
неправительственные, поддерживающие связь с ISO, также принимают участие в работе. ISO тесно
сотрудничает с Международной электротехнической комиссией (IEC) по всем вопросам
стандартизации в области электротехники.
Международные стандарты разрабатываются в соответствии с правилами, установленными в Части 2
Директив ISO/IEC.
Основное назначение технических комитетов заключается в разработке международных стандартов.
Проекты международных стандартов, принятые Техническими комитетами, направляются комитетам-
членам на голосование. Для их опубликования в качестве международных стандартов требуется
одобрение не менее 75 % комитетов-членов, участвовавших в голосовании.
Внимание обращается на тот факт, что отдельные элементы данного документы могут составлять
предмет патентных прав. ISO не несет ответственность за идентификацию каких–либо или всех
подобных патентных прав.
ISO 19250 был подготовлен Техническим комитетом ISO/TC 147, Качество воды, Подкомитетом SC 4,
Микробиологические методы.
Настоящее издание отменяет и заменяет ISO 6340:1995 после технического пересмотра.

iv © ISO 2010 – Все права сохраняются

Введение
Виды бактерий рода Salmonella являются бактериями, которые очень широко распространены во всем
мире. Обычно их относят к патогенным, хотя их вирулентность и патогенность колеблется в широком
диапазоне. Носителями бактерий рода Salmonella являются люди, сельскохозяйственный и домашний
скот, дикие животные, включая птиц. Люди и животные могут выделять эти бактерии, будучи
носителями без выраженных симптомов, а также во время заболевания. Поэтому невозможно
устранить их из окружающей среды. После инфицирования животных передача бактерий рода
Salmonella может вызвать серьезные заболевания.
Поскольку вода признана средством переноса инфекции, наличие или отсутствие бактерий рода
Salmonella отслеживают в воде, там где подозревают риск заражения. Salmonella может
присутствовать во всех типах бытовых и сельскохозяйственных сточных вод, пресной воды, включая
грунтовые и питьевую воду, а также морскую воду.
Обнаружение бактерий рода Salmonella в воде обычно требует этапа концентрирования. Поскольку
клетки Salmonella могут присутствовать в очень незначительном количестве и наносить вред
окружающей водной среде, обнаружение ее в воде обычно требует этапа предварительного
обогащения.
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 19250:2010(R)

Качество воды. Выявление бактерий рода Salmonella spp.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Чтобы сохранить здоровье персонала лаборатории, большое значение
имеет то, чтобы выявление бактерий рода Salmonella, и особенно видов S. enterica subsp.
enterica ser. Typhi (Salmonella ser. Typhi) и S. enterica subsp. enterica ser. Paratyphi (Salmonella ser.
Paratyphi), предпринималось только в надлежащим образом оснащенной лаборатории, под
руководством опытного микробиолога, и чтобы особо тщательный контроль осуществлялся в
отношении ликвидации всего инкубированного материала.
Пользователи данного международного стандарта должны быть знакомы с обычной
лабораторной практикой. Настоящий стандарт не преследует цели рассмотреть все вопросы,
связанные с безопасностью, если они возникают при его использовании. Пользователь сам
несет ответственность за разработку соответствующих правил техники безопасности и охраны
здоровья , а также за обеспечение соответствия условиям национальных регламентов.
ВНИМАНИЕ! Самое главное, чтобы анализ в соответствии с настоящим международным
стандартом выполнялся обученным персоналом.
1 Область применения
Настоящий международный стандарт устанавливает метод выявления бактерий рода Salmonella spp.
(презумптивных или подтвержденных) в пробах воды. Для эпидемиологических целей или при
расширенных исследованиях могут потребоваться другие среды.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Данный метод может выявить не все бактерии Salmonella ser. Typhi и ser.
Paratyphi.
ПРИМЕЧАНИЕ Для полуколичественного анализа, можно выполнить определение наиболее вероятного числа
(MPN=НВЧ), используя соответствующие объемы пробы. Для этих случаев объем пептонной забуференной воды
берется соответствующий.
2 Нормативные ссылки
Следующие ссылочные документы обязательны для применения данного документа. Для
датированных ссылок применяется только указанное издание. Для недатированных ссылок
применяется самое последнее издание указанного документа (включая все изменения).
ISO 6579, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод
обнаружения сальмонеллы Salmonella spp.
ISO 6887-1, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Приготовление проб для
испытаний, исходных суспензий и десятичных разведений для микробиологических исследований.
Часть 1. Общие правила приготовления исходной суспензии и десятичных разведений
ISO 7218, Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и
рекомендации по микробиологическим исследованиям
ISO 7704, Качество воды. Оценка мембранных фильтров, используемых для микробиологических анализов
ISO 8199, Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом
посева на питательной среде
ISO 19458, Качество воды. Отбор проб для микробиологического анализа
3 Термины и определения
Применительно к данному документу используются следующие термины и определения.
3.1
презумптивные бактерии рода Salmonella spp.
presumptive Salmonella spp.
бактерии, которые выращивают на установленной селективной обогатительной среде и образуют
типичные или атипичные колонии на твердых селективных средах on the solid selective media
3.2
подтвержденные бактерии рода Salmonella spp.
confirmed Salmonella spp.
бактерии, которые выращивают на установленной селективной обогатительной среде и образуют
типичные и сомнительные колонии на твердых селективных средах, и которые обладают
специфичными биохимическими и серологическими признаками
ПРИМЕЧАНИЕ Специфические биохимические и серологические признаки определяются по испытаниям/,
описанным в настоящем международном стандарте.
3.3
обнаружение бактерий Salmonella
Salmonella detection
определение присутствия или отсутствия микроорганизмов Salmonella (3.4)
3.4
сальмонелла
Salmonella spp.
Salmonella
микроорганизмы, которые образуют типичные или атипичные колонии на твердых селективных средах
и обладают специфическими биохимическими и серологическими признаками
4 Сущность метода
4.1 Общие положения
Обнаружение бактерий рода Salmonella требует четырех последовательных этапов (см. также
Приложение A).
Часто требуется предварительное обогащение, чтобы позволить выявление незначительного числа
микроорганизмов Salmonella или поврежденных микроорганизмов Salmonella. Некоторые
микроорганизмы Salmonella и микроорганизмы, сублетально поврежденные, могут потребовать
дополнительного времени инкубирования (4.3). Кроме того, бактерии рода Salmonella могут
присутствовать в небольших количествах и часто сопровождаются значительно большими
количествами других бактерий семейства энтеробактерий (Enterobacteriaceae) или других семейств.
Следовательно, потребуется селективное обогащение.
4.2 Предварительное обогащение в неселективной жидкой среде
Пептонную забуференную воду (B.1) засевают при температуре окружающей среды известным
2 © ISO 2010 – Все права сохраняются

объемом пробы или его разведений, затем термостатируют при температуре (36 ± 2) °C в течение
(18 ± 2) ч. Большие объемы можно концентрировать с помощью мембранной фильтрации и помещения
после фильтрации мембранного фильтра в пептонную забуференную воду.
ПРИМЕЧАНИЕ Для сточных вод показано, что менее продолжительная инкубация или непосредственный
посев пробы на селективную среду (4.3) дает лучшие результаты.
Для полуколичественного анализа, можно выполнить определение наиболее вероятного числа
(MPN=НВЧ), используя соответствующие объемы проб. Для этих случаев объем пептонной
забуференной воды берется соответствующий
4.3 Обогащение в селективных жидких средах
Питательную среду Раппапорта-Василиадиса (Rappaport-Vassiliadis) (соевый бульон RVS) и
тетратионат-новобиоцинный бульон Мюллера-Кауфмана (Muller-Kauffmann) (MKTTn) засевают
культурой, полученной в 4.2.
Бульон RVS термостатируют при температуре (41,5 ± 1) °C в течение (24 ± 3) Ч, а бульон MKTTn - при
температуре (37 ± 1) °C в течение (24 ± 3) ч.
Для выявления медленно растущих бактерий рода Salmonella spp., инкубируют обогатительный бульон
в течение дополнительных (24 ± 3) ч до общей продолжительности (48 ± 4) ч при температуре
(41,5 ± 1,0) °C.
ПРИМЕЧАНИЕ Виды Salmonella Typhi и Salmonella Paratyphi A обычно не представляют интереса в рутинном
мониторинге качества воды, но могут иметь значение в эпидемиологических исследованиях. Бульон MKTTn
используют для обогащения при инкубировании при температуре (36 ± 2) °C в течение до (24 ± 3) ч для
большинства штаммов Salmonella, включая некоторые штаммы Salmonella Paratyphi, однако, он вряд ли подойдет
для штаммов Salmonella Paratyphi C. Бульон MKTTn не используют, если подозревается наличие бактерий вида
Salmonella Typhi после использования селенит-цистинового бульона.
4.4 Посев на чашки Петри и идентификация
Культурами, полученными в 4.3, засевают две чашки с п
...