ISO 9233-1:2007

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9233-1
IDF
140-1
First edition
2007-12-15

Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin
content —
Part 1:
Molecular absorption spectrometric
method for cheese rind
Fromage, croûte de fromage et fromages fondus — Détermination de la
teneur en natamycine —
Partie 1: Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour
croûte de fromage




Reference numbers
ISO 9233-1:2007(E)
IDF 140-1:2007(E)
©
ISO and IDF 2007

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ISO 9233-1:2007(E)
IDF 140-1:2007(E)
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IDF 140-1:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
Foreword. v
1 Scope . 1
2 Terms and definitions. 1
3 Principle. 1
4 Reagents. 2
5 Apparatus . 2
6 Sampling. 3
7 Preparation of test sample. 3
7.1 Cheese rind . 3
7.2 Cheese interior. 3
8 Procedure . 4
8.1 Test portion . 4
8.2 Preparation of test solution . 4
8.3 Determination. 5
9 Calculation and expression of results. 6
9.1 Calculation of natamycin mass fraction. 6
9.2 Calculation of absorbance. 6
9.3 Calculation of surface-area-related natamycin mass . 7
9.4 Correction of results. 7
9.5 Expression of results . 7
10 Precision. 7
10.1 Interlaboratory tests . 7
10.2 Repeatability. 8
10.3 Reproducibility. 8
11 Test report . 8
Annex A (informative) Examples . 9
Annex B (informative) Results of interlaboratory trial. 13
Bibliography . 14

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ISO 9233-1:2007(E)
IDF 140-1:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.International
Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 9233-1|IDF 140-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5,
Milk and milk products and the International Dairy Federation (IDF) and is being published jointly by ISO and
IDF.
This first edition of ISO 9233-1|IDF 140-1, together with ISO 9233-2|IDF 140-2, cancel and replace the first
edition of ISO 9233:1991, which has been technically revised.
ISO 9233|IDF 140 consists of the following parts, under the general title Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin content:
⎯ Part 1: Molecular absorption spectrometric method for cheese rind
⎯ Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese
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IDF 140-1:2007(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO in the development of
standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.Draft International Standards adopted
by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the National Committees for voting.
Publication as an International Standard requires approval by at least 50% of IDF National Committees
casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. IDF shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 9233-1|IDF 140-1 was prepared by the International Dairy Federation (IDF) and Technical Committee
ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 5, Milk and milk products and is being published jointly by IDF
and ISO.
All work was carried out by the Joint ISO-IDF Action Team on Selected food additives and vitamins of the
Standing Committee on Analytical methods for additives and contaminants under the aegis of its project
leader, Mr. M. Carl (DE).
This first edition of ISO 9233-1|IDF 140-1, together with ISO 9233-2|IDF 140-2, cancel and replace the first
edition of IDF 140A:1992, which has been technically revised.
ISO 9233|IDF 140 consists of the following parts, under the general title Cheese, cheese rind and processed
cheese — Determination of natamycin content:
⎯ Part 1: Molecular absorption spectrometric method for cheese rind
⎯ Part 2: High-performance liquid chromatographic method for cheese, cheese rind and processed cheese


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ISO 9233-1:2007(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 140-1:2007(E)

Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination
of natamycin content —
Part 1:
Molecular absorption spectrometric method for cheese rind
1 Scope
This part of ISO 9233|IDF 140 specifies a method for the determination in cheese rind of natamycin mass
2
fraction of above 0,5 mg/kg and surface-area-related natamycin mass of above 0,03 mg/dm .
NOTE It is possible that the method may be suitable for detecting migration of natamycin into the cheese.
2 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
2.1
natamycin content
mass fraction of substances determined by the procedure specified in this part of ISO 9233|IDF 140
NOTE The natamycin content is expressed in milligrams per kilogram.
2.2
surface-area-related natamycin mass in cheese rind
surface-area-related mass of substances determined by the procedure specified in this part of
ISO 9233|IDF 140
NOTE The surface-area-related natamycin mass is expressed in milligrams of natamycin per square decimetre of
cheese rind.
2.3
cheese rind
outer layer of the cheese of thickness 5 mm, excluding the coating layer, if present.
3 Principle
A known quantity of sample is extracted with methanol. The extract is diluted with water followed by cooling to
between −15 °C and −20 °C to precipitate most of the fat, followed by filtration. The natamycin content or
surface-area-related natamycin mass is determined in the filtrate (after concentration, if necessary) by
molecular absorption spectrometry.
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IDF 140-1:2007(E)
4 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade, unless otherwise specified, and only distilled or
demineralized water or water of equivalent purity.
4.1 Methanol (CH OH).
3
4.2 Methanol, aqueous solution.
Mix 2 volumes of methanol (4.1) with 1 volume of water.
4.3 Natamycin standard solutions.
4.3.1 Natamycin standard stock solution, of concentration 500 mg/l.
Immediately before use, dissolve in methanol (4.1) a quantity of a natamycin preparation of known natamycin
content, corresponding to 50 mg of pure natamycin (C H NO ), in a 100 ml one-mark volumetric flask (5.1).
33 47 13
Make up to the mark with water and mix.
4.3.2 Natamycin standard working solution, of concentration 5 mg/l.
Pipette 5,0 ml of natamycin standard stock solution (4.3.1) into a 50 ml one-mark volumetric flask (5.1). Dilute
to the mark with aqueous methanol (4.2) and mix.
Pipette 5,0 ml of the thus diluted solution into another 50 ml one-mark volumetric flask (5.1). Dilute to the mark
with aqueous methanol (4.2) and mix. The concentration of this natamycin standard working solution is
5 µg/ml.
This concentration shall be close to that of the test solution measured in 8.3.3. Adjust the standard working
dilution by pipetting and diluting another quantity, if required.
5 Apparatus
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
5.1 One-mark volumetric flasks, of capacities 50 ml and 100 ml.
5.2 Slicer or similar apparatus, capable of cutting cheese portions of thickness 5 mm and of width about
30 mm (Figure A.1 shows an example).
5.3 Fine slicer, capable of cutting thin cheese slices of maximum thickness 1 mm (Figure A.2 shows an
example).
5.4 Grinder or blender.
5.5 Sharp knife, capable of cutting cheese slices into small pieces.
5.6 Magnetic stirrer or shaking machine.
5.7 Conical flasks, of capacities 100 ml and 200 ml, made of coloured glass and fitted with ground-glass
stoppers.
5.8 Syringes, disposable, of capacity 10 ml.
5.9 Membrane microfilters, of pore size 0,20 µm and 0,45 µm, resistant to attack by alcoholic solutions.
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IDF 140-1:2007(E)
1)
5.10 Folded paper filters, fast speed, of diameter 150 mm [e.g. S and S, No. 595 1/2 ].
5.11 Funnel, of diameter approximately 70 mm.
5.12 Freezer, capable of freezing at a temperature of between −15 °C and −20 °C.
1)
5.13 Extraction cartridges, to concentrate the filtered extract, if necessary [e.g. Sep-pack C18 or Waters
1)
No. 51910 ].
5.14 Spectrometer, suitable for recording an ultraviolet (UV) spectrum between 300 nm and 340 nm,
equipped with cells of optical pathlength 10 mm and a recorder.
5.15 Sample jar, of suitable capacity.
6 Sampling
A representative sample should have been sent to the laboratory. It should not have been damaged or
changed during transport or storage.
Sampling is not part of the method specified in this part of ISO 9233|IDF 140. A
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 9233-1
FIL
140-1
Première édition
2007-12-15


Fromage, croûte de fromage et fromages
fondus — Détermination de la teneur en
natamycine —
Partie 1:
Méthode par spectrométrie d'absorption
moléculaire pour croûte de fromage
Cheese, cheese rind and processed cheese — Determination of
natamycin content —
Part 1: Molecular absorption spectrometric method for cheese rind




Numéros de référence
ISO 9233-1:2007(F)
FIL 140-1:2007(F)
©
ISO et FIL 2007

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FIL 140-1:2007(F)
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ISO 9233-1:2007(F)
FIL 140-1:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Avant-propos. v
1 Domaine d'application. 1
2 Termes et définitions. 1
3 Principe. 1
4 Réactifs . 2
5 Appareillage . 2
6 Échantillonnage . 3
7 Préparation de l'échantillon pour essai. 3
7.1 Croûte de fromage. 3
7.2 Intérieur du fromage. 3
8 Mode opératoire . 4
8.1 Prise d'essai . 4
8.2 Préparation de la solution d'essai. 4
8.3 Détermination. 5
9 Calcul et expression des résultats. 6
9.1 Calcul de la fraction massique de la natamycine. 6
9.2 Calcul de l'absorbance. 6
9.3 Calcul de la masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine . 7
9.4 Correction des résultats . 7
9.5 Expression des résultats . 8
10 Fidélité . 8
10.1 Essais interlaboratoires . 8
10.2 Répétabilité. 8
10.3 Reproductibilité. 8
11 Rapport d'essai . 8
Annexe A (informative) Exemples . 9
Annexe B (informative) Résultats des essais interlaboratoires . 13
Bibliographie . 14

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ISO 9233-1:2007(F)
FIL 140-1:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 9233-1|FIL 140-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité
SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL) et est publiée conjointement par
l'ISO et la FIL.
Cette première édition de l'ISO 9233-1|FIL 140-1, ainsi que l'ISO 9233-2|FIL 140-2, annulent et remplacent la
première édition de l'ISO 9233:1991, qui a fait l'objet d'une révision technique.
L'ISO 9233|FIL 140 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Fromage, croûte de
fromage et fromages fondus — Détermination de la teneur en natamycine:
⎯ Partie 1: Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour croûte de fromage
⎯ Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance pour fromage, croûte de fromage et
fromages fondus
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ISO 9233-1:2007(F)
FIL 140-1:2007(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO pour
l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 9233-2|FIL 140-1 a été élaborée par la Fédération internationale de laiterie (FIL) et le comité technique
ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et est publiée conjointement par
la FIL et l'ISO.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO/FIL, Additifs et vitamines sélectionnés, du
Comité permanent chargé des Méthodes analytiques pour additifs et contaminants, sous la conduite de son
chef de projet, Monsieur M. Carl (D).
Cette première édition de l'ISO 9233-1|FIL 140-1, ainsi que l'ISO 9233-2|FIL 140-2, annulent et remplacent la
première édition de la FIL 140A:1992, qui a fait l'objet d'une révision technique.
L'ISO 9233|FIL 140 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Fromage, croûte de
fromage et fromages fondus — Détermination de la teneur en natamycine:
⎯ Partie 1: Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour croûte de fromage
⎯ Partie 2: Méthode par chromatographie liquide à haute performance pour fromage, croûte de fromage et
fromages fondus


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ISO 9233-1:2007(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 140-1:2007(F)

Fromage, croûte de fromage et fromages fondus —
Détermination de la teneur en natamycine —
Partie 1:
Méthode par spectrométrie d'absorption moléculaire pour
croûte de fromage
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 9233|FIL 140 spécifie une méthode de détermination de la teneur en natamycine
présente dans la croûte de fromage supérieure à 0,5 mg/kg et de la masse, exprimée par rapport à la surface,
2
de natamycine de la croûte de fromage supérieure à 0,03 mg/dm .
NOTE La méthode pourrait également convenir à la détection de la migration de la natamycine vers l'intérieur du
fromage.
2 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
2.1
teneur en natamycine
fraction massique de substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la présente partie de
l'ISO 9233|FIL 140
NOTE La teneur en natamycine est exprimée en milligrammes par kilogramme.
2.2
masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine de la croûte de fromage
masse, exprimée par rapport à la surface, de substances déterminée par le mode opératoire spécifié dans la
présente partie de l'ISO 9233|FIL 140
NOTE La masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine est exprimée en milligrammes de natamycine par
décimètre carré de croûte de fromage.
2.3
croûte de fromage
couche extérieure du fromage, d'une épaisseur de 5 mm, à l'exclusion de l'enrobage, si ce dernier est présent
3 Principe
Une quantité connue d'échantillon est extraite à l'aide de méthanol. L'extrait est dilué avec de l'eau suivie d'un
refroidissement entre –15 °C et –20 °C pour précipiter la majeure partie de la matière grasse, puis filtration.
La teneur en natamycine ou la masse, exprimée par rapport à la surface, de natamycine est déterminée dans
le filtrat (après concentration, si nécessaire) par spectrométrie d'absorption moléculaire.
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FIL 140-1:2007(F)
4 Réactifs
Sauf indications contraires, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue, et de l'eau distillée
ou déminéralisée ou de l'eau de pureté équivalente.
4.1 Méthanol (CH OH).
3
4.2 Méthanol, solution aqueuse.
Mélanger 2 volumes de méthanol (4.1) avec 1 volume d'eau.
4.3 Solutions étalons de natamycine.
4.3.1 Solution étalon mère de natamycine, ayant une concentration de 500 mg/l.
Immédiatement avant l'emploi, dissoudre dans une fiole jaugée à un trait de capacité 100 ml (5.1) une
quantité d'une préparation à teneur connue en natamycine, correspondant à 50 mg de natamycine pure
(C H NO ) dans du méthanol (4.1). Compléter au trait repère avec de l'eau et mélanger.
33 47 13
4.3.2 Solution étalon de travail de natamycine, ayant une concentration de 5 mg/l.
Introduire au moyen d'une pipette dans une fiole jaugée à un trait de capacité 50 ml (5.1) 5,0 ml de la solution
étalon mère de natamycine (4.3.1). Diluer au trait avec la solution aqueuse de méthanol (4.2), puis mélanger.
Introduire au moyen d'une pipette dans une autre fiole jaugée à un trait de capacité 50 ml (5.1) 5,0 ml de la
solution ainsi diluée. Diluer au trait avec la solution aqueuse de méthanol (4.2), puis mélanger. 1 ml de cette
solution étalon de travail contient 5 µg de natamycine.
Il est nécessaire que la concentration de la solution étalon de travail soit proche de celle de la solution d'essai
mesurée en 8.3.3. Ajuster la dilution étalon de travail en pipettant et diluant une autre quantité, si nécessaire.
5 Appareillage
Matériel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit.
5.1 Fioles jaugées à un trait, d'une capacité de 50 ml et 100 ml.
5.2 Appareil à trancher ou appareil similaire, capable de découper des portions de fromage de 5 mm
d'épaisseur et d'environ 30 mm de large (voir l'exemple donné à la Figure A.1).
5.3 Appareil à trancher fin, capable de découper de fines tranches de fromage d'une épaisseur maximale
de 1 mm (voir l'exemple donné à la Figure A.2).
5.4 Broyeur ou mélangeur.
5.5 Couteau aiguisé, capable de découper des tranches de fromage en petits morceaux.
5.6 Agitateur magnétique ou appareil à secouer.
5.7 Fioles coniques, d'une capacité de 100 ml et 200 ml, en verre teinté et munies de bouchons en verre
rodé.
5.8 Seringues, jetables, de capacité 10 ml.
5.9 Microfiltres à membrane, de 0,20 µm et 0,45 µm de grosseur de pore, résistants à l'attaque par des
solutions alcooliques.
2 © ISO et FIL 2007 – Tous droits réservés

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ISO 9233-1:2007(F)
FIL 140-1:2007(F)
1)
5.10 Papiers-filtres plissés, à filtration rapide, de 150 mm de diamètre [par exemple S et S, No. 595 1/2 ].
5.11 Entonnoir, d'environ 70 mm de diamètre.
5.12 Congélateur, capable de maintenir une température comprise entre −15 °C et −20 °C.
1)
5.13 Cartouches d'extraction, pour concentrer l'extrait filtré, si nécessaire [par exemple Sep-pack C18 ou
1)
Waters No. 51910 ].
5.14 Spectromètre, capable d'enregistrer un spectre UV compris entre 300 nm et 340 nm, équipé de cuves
d'un parcours optique de 1 cm et d'un enregistreur.
5.15 Récipient, d'une capacité appropriée.
6 Échantillonnage
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon réellement représentatif, non endommagé ou modifié
lors du transport et de l'entreposage.
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 9233|FIL 140.
Une méthode d'échantillonnage recommandée est indiquée dans l'ISO 707|FIL 50.
L'échantillon de laboratoire doit être constitué d'un fromage entier, ou d'une portion de fromage représentative
de l'ensemble.
7 Préparation de l'échantillon pour essai
7.1 Croûte de fromage
Si nécessaire, couper l'échantillon pour essai en sections ou en portions de plus faible dim
...