ISO/FDIS 18862

ISO/TC 34/SC 15
Secretariat: ICONTEC
Date: 2025-09-07
Coffee and coffee products — Determination of acrylamide —
Methods using high-performance liquid chromatography with mass
spectrometric detection (HPLC-MS/MS) and gas chromatography
with mass spectrometric detection (GC-MS) after derivatization
Café et de ses dérivés — Dosage de l’acrylamide — Méthodes utilisant CLHP-MS/MS et CG-MS après
dérivation
FDIS stage
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may be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying,
or posting on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO
at the address below or ISO’s member body in the country of the requester.
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CH-1214 Vernier, Geneva
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E-mail: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Published in Switzerland
Contents
Foreword . iv
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 2
6 Apparatus . 3
7 Sampling . 4
8 Procedure . 4
8.1 General . 4
8.2 Preparation of the sample extract . 4
8.3 Clean-up of the extracts . 5
8.4 HPLC-MS/MS measurement . 5
8.5 Measurement with GC-MS . 6
9 Calibration . 7
9.1 General advice . 7
9.2 Determination of linearity and definition of the working range . 8
9.3 Calibration with internal standard solution . 8
9.4 Determination of the laboratory specific recovery . 8
10 Evaluation . 8
10.1 Criteria for identification . 8
10.2 Calculation and final results . 8
11 Precision data . 9
11.1 General . 9
11.2 Repeatability . 9
11.3 Reproducibility . 9
11.4 Recovery . 9
12 Measurement uncertainty . 9
13 Test report . 9
Annex A (informative) Performance characteristics . 11
Annex B (informative) Examples of absorber materials . 12
Annex C (informative) Examples of columns and analysis conditions . 13
Annex D (informative) Examples for sample preparation and chromatographic conditions using
LC-MS/MS . 18
Bibliography . 25

iii
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are described
in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the different types of
ISO document should be noted. This document was drafted in accordance with the editorial rules of the
ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
ISO draws attention to the possibility that the implementation of this document may involve the use of (a)
patent(s). ISO takes no position concerning the evidence, validity or applicability of any claimed patent rights
in respect thereof. As of the date of publication of this document, ISO had not received notice of (a) patent(s)
which may be required to implement this document. However, implementers are cautioned that this may not
represent the latest information, which may be obtained from the patent database available at
www.iso.org/patents. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and expressions
related to conformity assessment, as well as information about ISO’s adherence to the World Trade
Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www.iso.org/iso/foreword.html.
The committee responsible for this document is ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 15, Coffee, in
collaboration with the European Committee for Standardization (CEN) Technical Committee CEN/TC 275,
Food analysis - Horizontal methods, in accordance with the Agreement on technical cooperation between ISO
and CEN (Vienna Agreement).
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 18862:2016), which has been technically
revised.
The main changes are as follows:
— added informative Annex D with examples for sample preparation and chromatographic conditions using
LC-MS/MS; has been added.
— — document editorially revised.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www.iso.org/members.html.
iv
Coffee and coffee products — Determination of acrylamide —
Methods using high-performance liquid chromatography with mass
spectrometric detection (HPLC-MS/MS) and gas chromatography
with mass spectrometric detection (GC-MS) after derivatization
WARNING — The use of this document can involve hazardous materials, operations and equipment.
This document does not purport to address all the safety problems associated with its use. It is the
responsibility of the user of this document to take appropriate measures for ensuring the safety and
health of the personnel prior to application of this document and to fulfil statutory requirements for
this purpose.
1 Scope
This document specifies methods for the determination of acrylamide in coffee and coffee products by
extraction with water, clean-up by solid-phase extraction and determination by high-performance liquid
chromatography with mass spectrometric detection (HPLC-MS/MS) and gas chromatography with mass
spectrometric detection (GC-MS). It was validated in a method validation study on roasted coffee, soluble
coffee, coffee substitutes and coffee products with ranges from 53 μg/kg to 612,1 μg/kg.
2 Normative references
The following documents are referred to in the text in such a way that some or all of their content constitutes
requirements of this document. For dated references, only the edition cited applies. For undated references,
the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminology databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https://www.iso.org/obp
— IEC Electropedia: available at https://www.electropedia.org/
4 Principle
The coffee sample is extracted with water or, in the case of soluble products, dissolved in water. A clean-up by
solid phase extraction (SPE) is employed to remove interfering matrix compounds. Two alternative methods
can be used for the determination: HPLC-MS/MS or, after a bromination of the acrylamide, GC-MS. In both
cases, isotopic labelled internal standard solutions are used.
5 Reagents
WARNING — In view of health risks when working with acrylamide, appropriate preventive and
protection measures shall be taken, such as using a fume cupboard, aspirating acrylamide-containing
solutions only with a pipette, and avoiding skin and eye contact or inhalation of acrylamide-containing
vapour.
If available, reagents of “residue analysis grade” or “analytical reagent grade” shall be used. The level of
impurities in the reagents that contribute to the blank should be negligibly small. The blank shall be checked
regularly.
For HPLC-MS/MS, the solutions according to 5.4.1 to 5.5.2 can be prepared using the HPLC eluent as a solvent.
The stability of these solutions depends on the mobile phase used and shall be validated.
When using GC-MS, all standard solutions according to 5.4.2 and 5.5.2 shall be subjected to the derivatization
step according to 8.5.1.
Instead of D3-acrylamide, it is also possible to use C acrylamide for the preparation of the internal standard
solution. However, in Clauses 8clause 8 and 9 clause 9, the procedure and calculation are described for D3-
acrylamide only.
5.1 Water, of grade 1 according to ISO 3696
5.2 Operating gases of high purity, suitable for gas chromatography and mass spectrometry according to
the instructions of the manufacturer of the apparatus.
5.3 Solvents, such as methanol, ethyl acetate, acetonitrile and n-hexane. MS-grade.
5.4 Acrylamide, C H NO, purity > 98 %, reference substance.
3 5
5.4.1 Acrylamide stock solution, mass concentration ρ = 1 000 μg/ml.
Weigh (0,10 ± 0,001) g of acrylamide into a 100 ml one-mark volumetric flask and swirl it in 30 ml of water in
order to dissolve the acrylamide. Fill up to the mark with water and mix well. The stock solution is stable for
at least three months when stored protected from light at a maximum of 6 °C.
Alternatively, a commercially available solution with a mass concentration of ρ = 1 000 µg/ml may be used.
The information of the manufacturer regarding the stability of the solution shall be observed.
5.4.2 Acrylamide calibration solution, ρ = 10 μg/ml.
Using a pipette, transfer (1,0 ± 0,001) ml of the acrylamide stock solution (5.4.1) into a 100 ml one-mark
volumetric flask and fill up to the mark with water. This solution shall be stored protected from light at a
maximum of 6 °C and shall be freshly prepared every working day. Depending on the working range, more
dilution steps can be necessary.
5.5 D3-acrylamide (acrylamide-2,3,3-d3) internal
...

PROJET FINAL
Norme
internationale
ISO/TC 34/SC 15
Café et dérivés du café — Dosage
Secrétariat: ICONTEC
de l’acrylamide — Méthodes par
Début de vote:
chromatographie liquide à haute
2025-08-21
performance avec détection par
Vote clos le:
spectrométrie de masse (CLHP–
2025-10-16
SM/SM) et chromatographie en
phase gazeuse avec détection par
spectrométrie de masse (CG–SM)
après dérivation
Coffee and coffee products — Determination of acrylamide
— Methods using high-performance liquid chromatography
with mass spectrometric detection (HPLC-MS/MS) and gas
chromatography with mass spectrometric detection (GC-MS)
after derivatization
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-MERCIALES,
AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES
PROJETS DE NORMES
TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS
DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI BILITÉ DE DEVENIR DES
NORMES POUVANT
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION
NATIONALE.
Numéro de référence
PROJET FINAL
Norme
internationale
ISO/TC 34/SC 15
Café et dérivés du café — Dosage
Secrétariat: ICONTEC
de l’acrylamide — Méthodes par
Début de vote:
chromatographie liquide à haute
2025-08-21
performance avec détection par
Vote clos le:
spectrométrie de masse (CLHP–
2025-10-16
SM/SM) et chromatographie en
phase gazeuse avec détection par
spectrométrie de masse (CG–SM)
après dérivation
Coffee and coffee products — Determination of acrylamide
— Methods using high-performance liquid chromatography
with mass spectrometric detection (HPLC-MS/MS) and gas
chromatography with mass spectrometric detection (GC-MS)
after derivatization
LES DESTINATAIRES DU PRÉSENT PROJET SONT
INVITÉS À PRÉSENTER, AVEC LEURS OBSERVATIONS,
NOTIFICATION DES DROITS DE PROPRIÉTÉ DONT ILS
AURAIENT ÉVENTUELLEMENT CONNAISSANCE ET À
FOURNIR UNE DOCUMENTATION EXPLICATIVE.
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
OUTRE LE FAIT D’ÊTRE EXAMINÉS POUR
ÉTABLIR S’ILS SONT ACCEPTABLES À DES FINS
© ISO 2025 INDUSTRIELLES, TECHNOLOGIQUES ET COM-MERCIALES,
AINSI QUE DU POINT DE VUE DES UTILISATEURS, LES
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
PROJETS DE NORMES
TRAITEMENT PARALLÈLE ISO/CEN
INTERNATIONALES DOIVENT PARFOIS ÊTRE CONSIDÉRÉS
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
DU POINT DE VUE DE LEUR POSSI BILITÉ DE DEVENIR DES
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
NORMES POUVANT
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
SERVIR DE RÉFÉRENCE DANS LA RÉGLEMENTATION
NATIONALE.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse Numéro de référence
ii
Sommaire Page
Avant-propos .iv
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe. 1
5 Réactifs . 2
6 Appareillage . 3
7 Échantillonnage . 4
8 Mode opératoire . 5
8.1 Généralités .5
8.2 Préparation de l’extrait d’échantillon .5
8.3 Purification des extraits .5
8.3.1 Précipitation de Carrez.5
8.3.2 Extraction en phase solide .5
8.4 Analyse par CLHP-SM/SM .6
8.4.1 Chromatographie liquide à haute performance (CLHP) . .6
8.4.2 Identification et quantification par spectrométrie de masse (CLHP-SM/SM) .6
8.5 Analyse par CG-SM .6
8.5.1 Dérivation et préparation de l’échantillon pour la chromatographie en phase
gazeuse .6
8.5.2 Chromatographie en phase gazeuse .7
8.5.3 Identification et quantification par spectrométrie de masse .7
9 Étalonnage . 8
9.1 Conseil d’ordre général .8
9.2 Détermination de la linéarité et définition de la plage de travail .8
9.3 Étalonnage avec une solution d’étalon interne .8
9.4 Détermination du taux de récupération spécifique du laboratoire .8
10 Évaluation . 8
10.1 Critères d’identification . .8
10.2 Calcul et résultats finaux . . .8
11 Résultats de fidélité . 9
11.1 Généralités .9
11.2 Répétabilité .9
11.3 Reproductibilité . .10
11.4 Taux de récupération .10
12 Incertitude de mesure. 10
13 Rapport d’essai . 10
Annexe A (informative) Caractéristiques de performance .11
Annexe B (informative) Exemples de matériaux absorbants .12
Annexe C (informative) Exemples de colonnes et de conditions d’analyse .13
Annexe D (informative) Exemples de préparation des échantillons et de conditions
chromatographiques utilisant la CL-SM/SM . 19
Bibliographie .25

iii
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux. L’ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document
a été rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2
(voir www.iso.org/directives).
L’ISO attire l’attention sur le fait que la mise en application du présent document peut entraîner l’utilisation
d’un ou de plusieurs brevets. L’ISO ne prend pas position quant à la preuve, à la validité et à l’applicabilité
de tout droit de brevet revendiqué à cet égard. À la date de publication du présent document, l’ISO n’avait
pas reçu notification qu’un ou plusieurs brevets pouvaient être nécessaires à sa mise en application.
Toutefois, il y a lieu d’avertir les responsables de la mise en application du présent document que des
informations plus récentes sont susceptibles de figurer dans la base de données de brevets, disponible à
l’adresse www.iso.org/brevets. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne pas avoir identifié de tels
droits de brevet.
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de
l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles techniques au
commerce (OTC), voir www.iso.org/iso/fr/avant-propos.html.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est le Comité technique ISO/TC 34, Produits
alimentaires, sous-comité SC 15, Café, en collaboration avec le comité technique CEN/TC 275, Analyse des
produits alimentaires — Méthodes horizontales, du Comité européen de normalisation (CEN), conformément
à l’Accord de coopération technique entre l’ISO et le CEN (Accord de Vienne).
Cette deuxième édition annul
...