ISO 14673-1:2004
(Main)Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents — Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents — Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
ISO 14673-1|IDF 189-1:2004 specifies a method for the determination of the nitrate and nitrite contents of milk and milk products by cadmium reduction and spectrometry. The method is applicable to: whole and partly skimmed and skimmed dried milk; hard, semi-hard and soft cheeses; processed cheese; whey cheese, caseins and caseinates and dried whey. The method may be performed using automatic equipment, in particular by segmented flow analysis (SFA) or flow injection analysis (FIA), thus reducing cadmium contamination in laboratory work places and waste water.
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites — Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
L'ISO 14673-1|FIL 189-1:2004 décrit une méthode de détermination des teneurs en nitrates et en nitrites dans les produits laitiers par réduction au cadmium et spectrométrie. La méthode s'applique: au lait entier, au lait demi-écrémé et au lait écrémé sec; aux fromages à pâte dure, semi-dure et aux fromages à pâte molle; aux fromages fondus; au lactosérum, aux caséines, aux caséinates et au lactosérum sec. Cette méthode peut être réalisée à l'aide d'un appareil automatisé, en particulier par analyse de fluide segmentée (SFA) ou par analyse par injection (FIA), ce qui permet de réduire la contamination par le cadmium des laboratoires et des eaux usées.
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Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 14673-1
IDF
189-1
Second edition
2004-02-01
Milk and milk products — Determination
of nitrate and nitrite contents —
Part 1:
Method using cadmium reduction and
spectrometry
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites —
Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
Reference numbers
ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
©
ISO and IDF 2004
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
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Published in Switzerland
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
Contents Page
Foreword. iv
1 Scope. 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 2
4 Principle . 2
5 Reagents . 2
6 Apparatus. 4
7 Sampling . 5
8 Preparation of test sample. 5
8.1 Dried milk and dried whey. 5
8.2 Caseins and caseinates. 5
8.3 Cheese. 6
8.4 Whey cheese . 6
9 Procedure. 6
9.1 Preparation of the copperized cadmium column . 6
9.2 Checking the reducing capacity of the column . 6
9.3 Regeneration of the column. 7
9.4 Preparation of test portion. 7
9.5 Extraction and deproteination . 8
9.6 Reduction of nitrate to nitrite. 8
9.7 Blank test . 9
9.8 Determination . 9
9.9 Preparation of calibration graph . 9
10 Calculation and expression of results . 9
10.1 Nitrite content. 9
10.2 Nitrate content. 10
11 Precision . 10
11.1 General. 10
11.2 Repeatability. 10
12 Test report. 11
Bibliography . 13
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through
ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has
been established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 14673-1IDF 189-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC
International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
This second edition cancels and replaces the first edition (ISO 14673-1IDF 189-1:2001), of which it
constitutes a minor revision.
ISO 14673IDF 189 consists of the following parts, under the general title Milk and milk products —
Determination of nitrate and nitrite contents:
— Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
— Part 2: Method using segmented flow analysis (Routine method)
— Part 3: Method using cadmium reduction and flow injection analysis with in-line dialysis (Routine method)
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
Foreword
IDF (the International Dairy Federation) is a worldwide federation of the dairy sector with a National
Committee in every member country. Every National Committee has the right to be represented on the IDF
Standing Committees carrying out the technical work. IDF collaborates with ISO and AOAC International in
the development of standard methods of analysis and sampling for milk and milk products.
Draft International Standards adopted by the Action Teams and Standing Committees are circulated to the
National Committees for voting. Publication as an International Standard requires approval by at least 50 % of
the National Committees casting a vote.
ISO 14673-1IDF 189-1 was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee
SC 5, Milk and milk products, and the International Dairy Federation (IDF), in collaboration with AOAC
International. It is being published jointly by ISO and IDF and separately by AOAC International.
All work was carried out by the Joint ISO/IDF/AOAC Action Team Minerals and minor compounds, of the
Standing Committee on Minor components characterization of physical properties, under the aegis of its
project leader, Mr G. Bråthen (NO).
This second edition, together with ISO 14673-2IDF 189-2 and ISO 14673-3IDF 189-3, cancels and replaces
IDF 84A:1984, IDF 95A:1982, IDF 96A:1987, IDF 97A:1985 and IDF 120:1984, which have been technically
revised.
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ISO 14673-1:2004(E)
INTERNATIONAL STANDARD
IDF 189-1:2004(E)
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite
contents —
Part 1:
Method using cadmium reduction and spectrometry
WARNING — The use of this International Standard may involve hazardous materials, operations and
equipment. This standard does not purport to address all the safety problems associated with its use.
It is the responsibility of the user of this standard to establish safety and health practices and
determine the applicability of regulatory limitations prior to use.
1 Scope
This part of ISO 14673IDF 189 specifies a method for the determination of the nitrate and nitrite contents of
milk and milk products by cadmium reduction and spectrometry. The method is applicable to
whole and partly skimmed and skimmed dried milk;
hard, semi-hard and soft cheeses;
processed cheese;
whey cheese, caseins and caseinates, and dried whey.
The method may be performed using automatic equipment, in particular by segmented flow analysis (SFA) or
flow injection analysis (FIA), thus reducing cadmium contamination in laboratory work places and waste water.
NOTE These methods are described in ISO 14673-2IDF 189-2 and ISO 14673-3IDF 189-3, respectively.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 565, Test sieves — Metal wire cloth, perforated metal plate and electroformed sheet — Nominal sizes of
openings
ISO 648, Laboratory glassware — One-mark pipettes
ISO 835-1, Laboratory glassware — Graduated pipettes — Part 1: General requirements
ISO 1042, Laboratory glassware — One-mark volumetric flasks
© ISO and IDF 2004 – All rights reserved 1
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
nitrate content
mass fraction of nitrate determined by the procedure specified in this part of ISO 14673IDF 189
–
NOTE The nitrate content is expressed as the mass in milligrams of nitrate ions (NO ) per kilogram of product.
3
3.2
nitrite content
mass fraction of nitrite determined by the procedure specified in this part of ISO 14673IDF 189
–
NOTE The nitrite content is expressed as the mass in milligrams of nitrite ions (NO ) per kilogram of product.
2
4 Principle
A test portion is dispersed in warm water, with precipitation of the fat and proteins, then filtration. The nitrate
ions are reduced to nitrite ions in a portion of the filtrate by means of copperized cadmium.
A red colour is developed in portions of both unreduced filtrate and the reduced solution, by addition of
sulfanilamide and N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride. Spectrometric measurements are carried out
at a wavelength of 538 nm.
The nitrite content of the sample and the total nitrite content after reduction of nitrate ions are calculated by
comparing the measured absorbances with those of a set of sodium nitrite calibration solutions. The nitrate
content is calculated from the difference between these two contents.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade unless otherwise specified.
5.1 Water, distilled or deionized, or water of equivalent purity, free from nitrate and nitrite ions.
To avoid the possible inclusion of small gas bubbles in the copperized cadmium column (9.1.6), freshly boil
the distilled or deionized water and cool to room temperature. Use the thus-prepared water for the preparation
of the column (9.1), to check the reducing capacity of the column (9.2), and to regenerate the column (9.3).
5.2 Cadmium granules, of diameter 0,3 mm to 0,8 mm.
Prepare cadmium granules, if not available commercially, as follows.
Place a suitable number of zinc rods in a beaker. Cover the rods with cadmium sulfate solution (5.3). Scrape
the cadmium sponge from the rods from time to time over a period of 24 h. Remove the zinc rods and decant
the liquid until only sufficient remains to cover the cadmium sponge. Wash the sponge two or three times with
water. Transfer the cadmium sponge to a laboratory blender together with 400 ml of the hydrochloric acid
working solution (5.7) and blend for a few seconds to obtain granules of the required size. Return the contents
of the blender to the beaker and leave to stand for several hours, while stirring occasionally to remove bubbles.
Decant most of the liquid and immediately copperize the granules as described in 9.1.
WARNING — Because of its toxicity, the used cadmium should be delivered as chemical waste to the
relevant authorities.
2 © ISO and IDF 2004 – All rights reserved
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
5.3 Cadmium sulfate solution, c(CdSO ⋅8H O) = 40 g/l.
4 2
Dissolve 40 g of cadmium sulfate solution in water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with
water and mix.
5.4 Copper(II) sulfate solution, c(CuSO ⋅5H O) = 20 g/l.
4 2
Dissolve 20 g of copper(II) sulfate in water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water
and mix.
5.5 Hydrochloric acid (HCl), (ρ = 1,19 g/ml).
20
5.6 Dilute hydrochloric acid, c(HCl) ≈ 2 mol/l.
Carefully add 160 ml of hydrochloric acid (5.5) to about 700 ml of water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4)
while regularly swirling the contents. Cool the contents to room temperature. Dilute to the mark with water and
mix carefully.
5.7 Hydrochloric acid working solution, c(HCl) ≈ 0,1 mol/l.
Add 50 ml of dilute hydrochloric acid (5.6) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water
and mix.
5.8 Zinc sulfate solution, c(ZnSO ⋅7H O) = 535 g/l.
4 2
Dissolve 53,5 g of zinc sulfate in water in a 100 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
5.9 Potassium hexacyanoferrate(II) solution, c(K [Fe(CN) ]⋅3H O) = 172 g/l.
4 6 2
Dissolve 17,2 g of potassium hexacyanoferrate(II) trihydrate in water in a 100 ml volumetric flask (6.4). Dilute
to the mark with water and mix.
5.10 Disodium ethylenediaminetetraacetate dihydrate (EDTA) solution (Na C H N O ⋅2H O).
2 10 14 2 8 2
Dissolve 33,5 g of EDTA in about 900 ml water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with
water and mix.
5.11 Solution I.
Carefully add 450 ml of hydrochloric acid (5.5) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with
water and mix.
5.12 Solution II.
Dissolve by heating on a water bath (6.15) 0,5 g of sulfanilamide (NH C H SO NH ) in a mixture of 75 ml of
2 6 4 2 2
water and 5 ml of hydrochloric acid (5.5) in a 100 ml volumetric flask (6.4). Cool to room temperature. Dilute to
the mark with water and mix. Filter the obtained solution, if necessary.
5.13 Solution III.
Dissolve 0,1 g of N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride (C H NHCH CH NH ·2HCl) in water in a
10 7 2 2 2
100 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix. Filter the obtained solution, if necessary.
The solution may be stored for up to 1 week in a well-stoppered brown bottle in a refrigerator.
5.14 Sodium nitrite stock solution (NaNO ).
2
Dry a few grams of sodium nitrite in an oven (6.16) at 110 °C to 120 °C to constant mass (i.e. until the
difference between two successive weighings does not exceed 1 mg). Dissolve 0,150 g of the sodium nitrite in
water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
© ISO and IDF 2004 – All rights reserved 3
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ISO 14673-1:2004(E)
IDF 189-1:2004(E)
5.15 Sodium nitrite working solution.
Prepare the sodium nitrite working solution on the day of use. Transfer with a pipette (6.5), 10 ml of the stock
solution (5.14) and 20 ml of the buffer solution (5.19) to a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark
with water and mix. The nitrite content of the sodium nitrite working solution is 1 µg/ml.
5.16 Potassium nitrate stock solution (KNO ).
3
Dry a few grams of potassium nitrate in an oven (6.16) at 110 °C to 120 °C to constant mass (i.e. until the
difference between two successive weighings does not exceed 1 mg). Dissolve 1,468 g of the potassium
nitrate in water in a 1 000 ml volumetric flask (6.4). Dilute to the mark with water and mix.
5.17 Potassium nitrate working solution.
Prepare the potassium nitrate working solution on the day of use. Transfer with a pipette (6.5), 5 ml of the
potassium nitrate stock solution (5.16) and 20 ml of the buffer solution (5.19) to a 1 000 ml volumetric flask
(6.4). Dilute to the mark with water and mix. The nitrate content of the potassium nitrate working solution is
4,50 µg/ml.
5.18 Ammonia solution (NH ), (ρ = 0,91 g/ml).
3 20
If an ammonia solution of above-mentioned concentration is not available, an equivalent amount of a more
concentrated ammonia solution may be used in 5.19 [e.g. 103 ml of a 35 % (mass fraction) ammonia solution
(ρ = 1,19 g/ml)].
20
5.19 Buffer solution, pH 9,6 to 9,7.
Dilute 50 ml of hydrochloric acid (5.5) with 600 ml of water in a conical flask (6.3) and mix. Add 135 ml of the
ammonia solution (5.18) and dilute to 1 000 ml with 215 ml of water and mix. Adjust the pH, if necessary, to
between 9,6 and 9,7.
6 Apparatus
Clean all glassware thoroughly and rinse with distilled water to ensure that it is free from nitrate and nitrite ions.
Usual laboratory equipment and, in particular, the following.
6.1 Analytical balance, capable of weighing to the nearest 1 mg, with a readability of 0,1 mg.
6.2 Sample container, provided with an airtight lid.
6.3 Conical flasks, of capacity 250 ml, 500 ml and 1 000 ml.
6.4 Volumetric flasks, of nominal capacity 100 ml, 500 ml and 1 000 ml, complying with the requirements
of ISO 1042, class B.
6.5 Pipettes, capable of delivering 2 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml, 20 ml and 25 ml, complying
with the requirements
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 14673-1
FIL
189-1
Deuxième édition
2004-02-01
Lait et produits laitiers — Détermination
des teneurs en nitrates et en nitrites —
Partie 1:
Méthode par réduction au cadmium et
spectrométrie
Milk and milk products — Determination of nitrate and nitrite contents —
Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry
Numéros de référence
ISO 14673-1:2004(F)
FIL 189-1:2004(F)
©
ISO et FIL 2004
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ISO 14673-1:2004(F)
FIL 189-1:2004(F)
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Publié en Suisse
ii © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés
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ISO 14673-1:2004(F)
FIL 189-1:2004(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives. 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Réactifs . 2
6 Appareillage. 4
7 Échantillonnage . 5
8 Préparation de l'échantillon pour essai. 5
8.1 Lait sec et lactosérum sec . 5
8.2 Caséines et caséinates. 5
8.3 Fromage . 6
8.4 Lactosérum. 6
9 Mode opératoire . 6
9.1 Préparation de la colonne de cadmium cuivré . 6
9.2 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne. 7
9.3 Régénération de la colonne . 7
9.4 Préparation de la prise d'essai . 7
9.5 Extraction et déprotéinisation . 8
9.6 Réduction des nitrates en nitrites . 9
9.7 Essai à blanc . 9
9.8 Détermination . 9
9.9 Préparation de la courbe de l'étalonnage. 9
10 Calcul et expression des résultats. 10
10.1 Teneur en nitrites . 10
10.2 Teneur en nitrates . 10
11 Fidélité. 11
11.1 Généralités. 11
11.2 Répétabilité. 11
12 Rapport d'essai . 12
Bibliographie . 14
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés iii
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ISO 14673-1:2004(F)
FIL 189-1:2004(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux
de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général
confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire
partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 14673-1FIL 189-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration
avec l'AOAC International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC
International.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition (ISO 14673-1FIL 189-1:2001), dont elle
constitue une révision technique.
L'ISO 14673FIL 189 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Lait et produits
laitiers — Détermination des teneurs en nitrates et en nitrites:
— Partie 1: Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
— Partie 2: Méthode d'analyse par flux continus segmentés (Méthode de routine)
— Partie 3: Méthode par réduction au cadmium et d'analyse par injection de flux avec dialyse en ligne
(Méthode de routine)
iv © ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés
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ISO 14673-1:2004(F)
FIL 189-1:2004(F)
Avant-propos
La FIL (Fédération internationale de laiterie) est une fédération mondiale du secteur laitier avec un Comité
National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comité National a le droit de faire partie des Comités
permanents de la FIL auxquels sont confiés les travaux techniques. La FIL collabore avec l'ISO et avec
l'AOAC International pour l'élaboration de méthodes normalisées d'analyse et d'échantillonnage pour le lait et
les produits laitiers.
Les projets de Normes internationales adoptés par les Équipes d'Action et les Comités permanents sont
soumis aux Comités Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert
l'approbation de 50 % au moins des Comités Nationaux votants.
L'ISO 14673-1FIL 189-1 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires,
sous-comité SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fédération internationale de laiterie (FIL), en collaboration
avec l'AOAC International. Elle est publiée conjointement par l'ISO et la FIL, et séparément par l'AOAC
International.
L'ensemble des travaux a été confié à l'Équipe d'Action mixte ISO/FIL/AOAC, Composants azotés dans le lait
et les produits laitiers, du Comité permanent chargé des Composants mineurs du lait et de la caractérisation
des propriétés physiques, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur G. Bråthen (NO).
Cette deuxième édition, ainsi que l'ISO 14673-2FIL 189-2 et l'ISO 14673-3FIL 189-3, annule et remplace la
FIL 84A:1984, la FIL 95A:1982, la FIL 96A:1987, la FIL 97A:1985 et la FIL 120:1984, dont elle constitue une
révision technique.
© ISO et FIL 2004 – Tous droits réservés v
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ISO 14673-1:2004(F)
NORME INTERNATIONALE
FIL 189-1:2004(F)
Lait et produits laitiers — Détermination des teneurs en nitrates
et en nitrites —
Partie 1:
Méthode par réduction au cadmium et spectrométrie
AVERTISSEMENT — L'utilisation de la présente Norme internationale peut impliquer l'intervention de
produits, d'opérations et d'équipements à caractère dangereux. La présente Norme internationale n'a
pas la prétention d'aborder tous les problèmes de sécurité concernés par son usage. Il est de la
responsabilité de l'utilisateur de la présente norme d'établir des règles de sécurité et d'hygiène et de
déterminer l'application des restrictions réglementaires avant utilisation.
1 Domaine d'application
La présente partie de l'ISO 14673FIL 189 décrit une méthode de détermination des teneurs en nitrates et en
nitrites dans les produits laitiers par réduction au cadmium et spectrométrie. La méthode s'applique au
lait entier, au lait demi-écrémé et au lait écrémé sec;
aux fromages à pâte dure, semi-dure et aux fromages à pâte molle;
aux fromages fondus;
au lactosérum, aux caséines, aux caséinates et au lactosérum sec.
Cette méthode peut être réalisée à l'aide d'un appareil automatisé, en particulier par analyse de fluide
segmentée (SFA) ou par analyse par injection (FIA), ce qui permet de réduire la contamination par le
cadmium des laboratoires et des eaux usées.
NOTE Ces deux méthodes sont décrites respectivement dans l'ISO 14673-2FIL 189-2 et l'ISO 14673-3FIL 189-3.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 565, Tamis de contrôle — Tissus métalliques, tôles métalliques perforées et feuilles électroformées —
Dimensions nominales des ouvertures
ISO 648, Verrerie de laboratoire — Pipettes à un trait
ISO 835-1, Verrerie de laboratoire — Pipettes graduées — Partie 1: Spécifications générales
ISO 1042, Verrerie de laboratoire — Fioles jaugées à un trait
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3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
teneur en nitrates
fraction massique de nitrate, déterminée par le mode opératoire décrit dans la présente partie de
l'ISO 14673FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrates est exprimée sous forme de masse, en milligrammes d'ion nitrate (NO ) par
3
kilogramme de produit.
3.2
teneur en nitrites
fraction massique de nitrite, déterminée par le mode opératoire décrit dans la présente partie de
l'ISO 14673FIL 189
–
NOTE La teneur en nitrites est exprimée sous forme de masse, en milligrammes d'ion nitrite (NO ) par kilogramme
2
de produit.
4 Principe
Une prise d'essai est dispersée dans de l'eau chaude, avec précipitation de la matière grasse et des protéines,
et ensuite filtration. Sur une portion du filtrat, les ions nitrate sont réduits en ions nitrite à l'aide de cadmium
cuivré.
Une coloration rouge se développe dans des portions de filtrat non réduit et de solution réduite, par addition
de sulfanilamide et de dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine. Les mesurages spectrométriques se
font à une longueur d'onde de 538 nm.
La teneur en nitrites de l'échantillon et la teneur totale en nitrites après réduction des ions nitrate sont
calculées par comparaison des absorbances mesurées avec celles d'une série de solutions étalons de nitrite
de sodium. La teneur en nitrates est calculée à partir de la différence entre ces deux teneurs.
5 Réactifs
Sauf spécification contraire, utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
5.1 Eau, distillée ou déionisée, ou eau de pureté équivalente, exempte d'ions nitrate et nitrite.
Dans le but d'éviter l'inclusion de petites bulles de gaz dans la colonne de cadmium cuivré (9.1.6), faire bouillir
de l'eau distillée ou déionisée et la refroidir à température ambiante. Utiliser l'eau ainsi obtenue pour la
préparation de la colonne (9.1), pour le contrôle du pouvoir réducteur de la colonne (9.2) et pour la
régénération de la colonne (9.3).
5.2 Cadmium sous forme de granulés, diamètre de 0,3 mm à 0,8 mm.
S'il n'est pas possible de se procurer dans le commerce des granulés de cadmium, ceux-ci peuvent être
préparés de la manière suivante.
Placer dans un bécher un nombre convenable de baguettes de zinc. Recouvrir ces baguettes avec une
solution de sulfate de cadmium (5.3). Au cours des 24 h suivantes, gratter de temps en temps le cadmium
spongieux déposé sur les baguettes. Retirer les baguettes de zinc et décanter le liquide jusqu'à ce qu'il en
reste une quantité minimale suffisante pour recouvrir le cadmium spongieux. Laver deux ou trois fois le
cadmium spongieux avec de l'eau. Transférer le cadmium spongieux dans un broyeur de laboratoire avec
400 ml de solution d'acide chlorhydrique, solution de travail (5.7) et broyer pendant quelques secondes afin
d'obtenir des granulés de la dimension requise. Replacer le contenu du broyeur dans le bécher et l'y maintenir
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pendant plusieurs heures en agitant de temps en temps pour chasser les bulles. Décanter la majeure partie
du liquide et procéder immédiatement au cuivrage des granulés comme décrit en 9.1.
AVERTISSEMENT — Du fait de sa toxicité, le cadmium usagé doit être déclaré auprès des autorités
compétentes comme déchet chimique.
5.3 Sulfate de cadmium, solution, c(CdSO ,8H O) = 40 g/l.
4 2
Dissoudre 40 g de sulfate de cadmium dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.4 Sulfate de cuivre(II), solution, c(CuSO ,5H O) = 20 g/l.
4 2
Dissoudre 20 g de sulfate de cuivre (II) dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.5 Acide chlorhydrique (HCl), (ρ = 1,19 g/ml).
20
5.6 Acide chlorhydrique dilué, c(HCl) ≈ 2 mol/l.
Ajouter avec précaution 160 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans environ 700 ml d'eau dans une fiole jaugée
de 1 000 ml (6.4) tout en agitant régulièrement le contenu. Refroidir à température ambiante. Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger avec soin.
5.7 Acide chlorhydrique, solution de travail, c(HCl) ≈ 0,1 mol/l.
Ajouter 50 ml de solution d'acide chlorhydrique (5.6) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.8 Sulfate de zinc, solution, c(ZnSO ,7H O) = 535 g/l.
4 2
Dissoudre 53,5 g de sulfate de zinc dans de l'eau dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4). Compléter à 100 ml
avec de l'eau et mélanger.
5.9 Hexacyanoferrate(II) de potassium, solution, c(K [Fe(CN) ],3H O) = 172 g/l.
4 6 2
Dissoudre 17,2 g d'hexacyanoferrate(II) de potassium trihydraté dans de l'eau dans une fiole jaugée de
100 ml (6.4). Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger.
5.10 Éthylènedinitrilotétraacétate disodique dihydraté (EDTA), solution, (Na C H N O ,2H O).
2 10 14 2 8 2
Dissoudre 33,5 g d'EDTA dans environ 900 ml d'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.11 Solution I.
Ajouter avec précaution 450 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter
à 1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.12 Solution II.
Dissoudre en chauffant au bain d'eau (6.15) 0,5 g de sulfanilamide (NH C H SO NH ) dans un mélange
2 6 4 2 2
constitué par 75 ml d'eau et 5 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4). Refroidir à
température ambiante. Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger. Filtrer la solution ainsi obtenue, si
nécessaire.
5.13 Solution III.
Dissoudre 0,1 g de dihydrochlorure de N-(naphtyl-1)-éthylènediamine (C H NHCH CH NH ,2HCl) dans de
10 7 2 2 2
l'eau dans une fiole jaugée de 100 ml (6.4). Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger. Filtrer la solution
ainsi obtenue, si nécessaire.
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La solution peut être conservée au maximum pendant 1 semaine au réfrigérateur, dans un récipient en verre
brun bien bouché.
5.14 Nitrite de sodium (NaNO ), solution mère.
2
Sécher jusqu'à masse constante (c'est-à-dire jusqu'à ce que la différence entre deux pesages consécutifs soit
inférieure à 1 mg) quelques grammes de nitrite de sodium dans un four (6.16) entre 110 °C et 120 °C.
Dissoudre 0,150 g de nitrite de sodium dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.15 Nitrite de sodium, solution de travail.
Préparer la solution de travail de nitrite de sodium le jour de l'utilisation. Transférer, à l'aide d'une pipette (6.5),
10 ml de solution mère (5.14) et 20 ml de solution tampon (5.19) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau et mélanger. La teneur en nitrites de la solution de travail de nitrite de
sodium est de 1 µg/ml.
5.16 Nitrate de potassium (KNO ), solution mère.
3
Sécher jusqu'à masse constante (c'est-à-dire jusqu'à ce que la différence entre deux pesages consécutifs soit
inférieure à 1 mg) quelques grammes de nitrate de potassium dans un four (6.16) entre 110 °C et 120 °C.
Dissoudre 1,468 g de nitrate de potassium dans de l'eau dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4). Compléter à
1 000 ml avec de l'eau et mélanger.
5.17 Nitrate de potassium, solution de travail.
Préparer la solution de travail de nitrate de potassium le jour de l'utilisation. Transférer, à l'aide d'une pipette
(6.5), 5 ml de solution mère (5.16) et 20 ml de solution tampon (5.19) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.4).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau et mélanger. La teneur en nitrates de la solution de travail de nitrate de
potassium est de 4,50 µg/ml.
5.18 Solution d'ammoniaque (NH ), (ρ = 0,91 g/ml).
3 20
Si une solution d'ammoniaque à la concentration mentionnée ci-dessus n'est pas disponible, une quantité
équivalente d'une solution plus concentrée peut être utilisée en 5.19 [par exemple, 103 ml d'une solution à
35 % en fraction massique (ρ = 1,19 g/ml)].
20
5.19 Solution tampon, pH entre 9,6 et 9,7.
Diluer 50 ml d'acide chlorhydrique (5.5) dans 600 ml d'eau dans une fiole conique (6.3) et mélanger. Ajouter
135 ml de solution d'ammoniaque (5.18) et compléter à 1 000 ml avec 215 ml d'eau et mélanger. Ajuster le pH
entre 9,6 et 9,7, si nécessaire.
6 Appareillage
Toute la verrerie doit être soigneusement lavée et rincée avec de l'eau distillée pour la rendre exempte d'ions
nitrate et nitrite.
Matériel courant de laboratoire et, en particulier:
6.1 Balance analytique, d'une précision de 1 mg, permettant de lire jusqu'à 0,1 mg.
6.2 Récipient pour échantillon, muni d'un couvercle étanche à l'air.
6.3 Fioles coniques, de 250 ml, de 500 ml et de 1 000 ml de capacité.
6.4 Fioles jaugées, de 100 ml, de 500 ml et de 1 000 ml de capacité, conformes aux exigences de
l'ISO 1042, classe B.
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6.5 Pipettes, permettant de délivrer 2 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml, 20 ml et 25 ml, conformes
aux exigences de l'ISO 648, classe A, ou de l'ISO 835-1. Le cas échéant, des burettes peuvent être utilisées à
la place des pipettes.
6.6 Éprouvettes graduées, de 5 ml, 10 ml, 25 ml, 100 ml, 250 ml, 500 ml et 1 000 ml de capacité.
6.7 Entonnoirs en verre, d'environ 7 cm de diamètre, à tige courte.
6.8 Papier-filtre, pour filtration moyenne, d'environ 15 cm de diamètre, exempt d'ions nitrate et nitrite.
6.9 Colonne de réduction, en verre, par exemple celle représentée sur la Figure 1.
6.10 Spectromètre, permettant d'effectuer des mesurages de l'absorbance à une longueur d'onde de
538 nm, muni de cellules de 1 cm à 2 cm de parcours optique.
6.11 Broyeur, permettant de broyer l'échantillon de laboratoire, si nécessaire. Afin d'éviter toute perte
d'humidité, il convient que l'appareil ne dégage pas trop de chaleur. Ne pas utiliser de broyeur à marteau.
6.12 Agitateur de laboratoire ou homogénéisateur, avec des récipients en verre, de 250 ml ou de 400 ml
de capacité, permettant de préparer des suspensions de prises d'essai de fromage et de petit-lait.
6.13 Tamis d'essai, en toile de câble tissé, de 200 mm de diamètre, de dimension nominale d'ouverture de
500 µm et muni d'un réceptacle conforme aux exigences de l'ISO 565.
6.14 Agitateur magnétique.
6.15 Bain d'eau, permettant de faire bouillir l'eau.
6.16 Four, permettant de maintenir la température entre 110 °C et 120 °C.
7 Échantillonnage
L'échantillonnage ne fait pas partie de la méthode spécifiée dans la présente partie de l'ISO 14673FIL 189.
Une méthode d'échantillonnage recommandée est donnée dans l'ISO 707.
Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon véritablement représentatif qui n'a pas été
endommagé pendant le transport ou l'entreposage.
Conserver l'échantillon pour essai de manière à éviter sa détérioration ou toute modification de sa composition.
8 Préparation de l'échantillon pour essai
8.1 Lait sec et lactosérum sec
Transférer l'échantillon pour essai dans un récipient pour échantillon (6.2) dont la capacité est égale à environ
le double du volume de l'échantillon pour essai. Fermer immédiatement le récipient. Bien mélanger
l'échantillon pour essai par agitations et retournements successifs jusqu'à l'obtention d'un échantillon
homogène.
8.2 Caséines et caséinates
8.2.1 Bien mélanger l'échantillon pour essai, si nécessaire après l'avoir transvasé en totalité dans un
récipient pour essai (6.2) de capacité appropriée, par agitations et retournements successifs.
8.2.2 Transvaser 50 g de l'échantillon pour essai dans le tamis d'essai (6.13). Si les 50 g passent
complètement ou presque complètement à travers le tamis, passer au tamis tout l'échantillon pour essai
mélangé (8.2.1).
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8.2.3 Si l'échantillon pour essai ne passe pas complètement à travers le tamis, utiliser le broyeur (6.11)
jusqu'à obtention du résultat souhaité. Transférer immédiatement tout l'échantillon pour essai tamisé dans le
récipient pour échantillon (6.2) et bien mélanger après avoir bouché le récipient. Pendant l'exécution de ces
opérations, veiller à ne pas provoquer de modification de la teneur en eau du produit.
8.2.4 Une fois l'échantillon pour essai préparé, procéder à la préparation de la prise d'essai (9.4) le plus
rapidement possible.
8.3 Fromage
8.3.1 Avant l'analyse, enlever la croûte ou la surface moisie du fromage, de manière que l'échantillon pour
essai préparé soit représentatif du fromage tel qu'il est généralement consommé.
8.3.2 Broyer l'échantillon pour essai à l'aide d'un dispositif approprié (6.11). Mélanger rapidement la masse
broyée et, si possible, broyer une seconde fois et mélanger de nouveau. Nettoyer l'appareil après chaque
broyage d'échantillon. Si l'échantillon pour essai ne peut pas être broyé, le mixer en le mélangeant et en le
malaxant avec force.
8.3.3 Aussitôt que possible après le broyage, transvaser l'échantillon pour essai dans un récipient étanche à
l'air (6.2) avant l'analyse. Il convient que l'analyse soit effectuée le plus rapidement possible après le broyage. Si
l'analyse doit être repoussée, prendre toutes les précautions nécessaires pour garantir la bonne conservation de
l'échantillon pour essai et empêcher la condensation de l'humidité sur la surface intérieure du récipient.
8.3.4 Ne pas analyser le fromage broyé présentant une formation de moisissure non souhaitée ou
commençant à se détériorer.
8.4 Lactosérum
Préparer l'échantillon pour essai conformément aux instructions en 8.3.2.
9 Mode opératoire
9.1 Préparation de la colonne de cadmium cuivré
9.1.1 Introduire les granulés de cadmium (5.2) (de 40 g à 60 g par colonne) dans une fiole conique de
250 ml (6.3). Ajouter une quantité suffisante de solution de travail d'acide chlorhydrique (5.7) pour couvrir le
cadmium. Agiter pendant quelques minutes.
9.1.2 Décanter la solution (9.1.1), puis laver le cadmium dans la fiole conique avec de l'eau jusqu'à ce qu'il
soit exempt d'ions chlorure (c'est-à-dire jusqu'à ce que la réaction avec le nitrate d'argent soit négative).
9.1.3 Cuivrer les granulés de cadmium par addition de la solution de sulfate de cuivre (II) (5.4) (environ
2,5 ml par gramme de cadmium sont nécessaires). Agiter pendant 1 min.
9.1.4 Aussitôt après, décanter la solution (9.1.3), puis laver immédiatement le cadmium cuivré avec de l'eau,
en prenant soin que le cadmium soit continuellement couvert d'eau. Arrêter le lavage lorsque l'eau de lavage
est exempte de cuivre précipité.
9.1.5 Placer un tampon de laine de verre à la base de la colonne en verre (6.9) destinée à contenir le
cadmium cuivré (voir la Figure 1). Remplir la colonne en verre avec de l'eau.
9.1.6 Transférer le cadmium cuivré dans la colonne en verre en réduisant au minimum l'exposition à l'air. La
hauteur de cadmium cuivré doit être de 15 cm à 20 cm. Éviter d'enfermer des bulles d'air entre les granulés de
cadmium cuivré. Le niveau de liquide ne doit pas descendre au-dessous du niveau de cadmium cuivré.
9.1.7 Conditionner la colonne qui vient d'être préparée en y faisant circuler un mélange constitué de 750 ml
d'eau, de 225 ml de la solution de travail de nitrate de potassium (5.17), de 20 ml de la solution tampon (5.19)
et de 20 ml de la solution d'EDTA (5.10), à un débit ne dépassant pas 6 ml/min. Laver ensuite la colonne avec
50 ml d'eau.
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9.2 Contrôle du pouvoir réducteur de la colonne
9.2.1 Procéder à ce contrô
...
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