ISO 9308-1:2014
(Main)Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora
ISO 9308-1:2014 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not suitable for these types of water. ISO 9308-1:2014 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected pool water, or finished water from drinking water treatment plants. Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this chromogenic agar.
Qualité de l'eau — Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes — Partie 1: Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible teneur en bactéries
L'ISO 9308 :2014 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli (E. coli) et des bactéries coliformes. La méthode consiste en une filtration sur membrane, suivie d'une mise en culture dans une gélose chromogène et d'un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l'échantillon. La gélose de différenciation étant peu sélective, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité du dénombrement des E. coli et des bactéries coliformes, par exemple, dans certaines eaux de surface ou certaines eaux de puits peu profonds. Cette méthode ne convient pas à ces types d'eau. L'ISO 9308 :2014 est particulièrement adaptée aux eaux à faible teneur en bactéries qui produiront moins de 100 colonies totales sur de la gélose chromogène pour le dénombrement des bactéries coliformes. Ces eaux peuvent être l'eau potable, l'eau de piscine désinfectée ou l'eau propre sortant de stations de production d'eau potable. Certaines souches d'E. coli négatives à la β-D-glucuronidase, telles qu'Escherichia coli O157, ne sont pas détectées en tant qu'E. coli. Comme elles sont positives à la β-D-galactosidase, elles sont considérées comme des bactéries coliformes sur la gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA).
General Information
- Status
- Published
- Publication Date
- 15-Sep-2014
- Technical Committee
- ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
- Drafting Committee
- ISO/TC 147/SC 4 - Microbiological methods
- Current Stage
- 9060 - Close of review
- Completion Date
- 04-Jun-2030
Relations
- Effective Date
- 12-Feb-2026
- Effective Date
- 06-Jun-2022
- Effective Date
- 25-Dec-2021
- Effective Date
- 26-Dec-2009
Overview
ISO 9308-1:2014 - Water quality - Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria - Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora - specifies a laboratory method to enumerate Escherichia coli (E. coli) and coliform bacteria in water using membrane filtration and chromogenic coliform agar (CCA). The method is intended for waters with low bacterial background (e.g., drinking water, disinfected pool water, finished water from treatment plants) where colony growth on CCA remains low. The standard emphasizes correct sampling, incubation, colony differentiation and quality assurance measures.
Key topics and technical requirements
- Principle: Filter a defined sample volume through a membrane (cellulose esters, nominal pore 0.45 µm), place the membrane on CCA, incubate and count target colonies.
- Incubation: (36 ± 2) °C for (21 ± 3) h (as specified in the document).
- Colony interpretation on CCA:
- ß‑glucuronidase + ß‑galactosidase (dark-blue to violet) = presumptive E. coli.
- ß‑galactosidase positive only (salmon to red) = presumptive coliforms (non‑E. coli); oxidase test required to exclude oxidase‑positive non‑coliforms (e.g., Aeromonas).
- Limitations:
- Not suitable for surface waters or shallow wells with high background flora (background growth can interfere).
- Some E. coli strains (e.g., ß‑D‑glucuronidase negative strains such as O157) may not appear as E. coli on CCA and will register as coliforms.
- The draft references thresholds of about 80–100 total colonies on CCA as the upper range for routine applicability.
- Apparatus & media: autoclave, incubator, membrane filtration equipment, forceps, pH meter, CCA and oxidase reagents. Media and reagents should meet ISO 11133 and CCA performance must be verified per ISO 11133/ISO 7704.
- Results & reporting: Calculate colony counts per 100 ml (or filtered volume) following ISO 8199; reports must include method reference, sample ID, results, and any deviations.
Practical applications and users
- Intended users: drinking‑water laboratories, water utilities, pool operators, public health agencies, regulatory bodies, and accredited microbiological testing labs.
- Typical applications: routine monitoring of drinking water quality, verification of treatment plant effluent, compliance testing for disinfected recreational waters and finished water quality assurance.
- Useful where low bacterial background enables reliable chromogenic discrimination and accurate enumeration.
Related standards
- ISO 9308 (other parts): Part 2 (Most Probable Number), Part 3 (miniaturized MPN)
- ISO 11133 (culture media), ISO 7704 (membrane filter validation), ISO 8199 (enumeration guidance), ISO 19458 / ISO 5667 (sampling), ISO 3696 (water for laboratory use)
Keywords: ISO 9308-1:2014, water quality, E. coli, coliforms, membrane filtration, chromogenic coliform agar, enumeration, drinking water microbiology, water testing standard.
Buy Documents
ISO 9308-1:2014 - Water quality -- Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria
ISO 9308-1:2014 - Qualité de l'eau -- Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes
Frequently Asked Questions
ISO 9308-1:2014 is a standard published by the International Organization for Standardization (ISO). Its full title is "Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria — Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora". This standard covers: ISO 9308-1:2014 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not suitable for these types of water. ISO 9308-1:2014 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected pool water, or finished water from drinking water treatment plants. Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this chromogenic agar.
ISO 9308-1:2014 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not suitable for these types of water. ISO 9308-1:2014 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected pool water, or finished water from drinking water treatment plants. Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this chromogenic agar.
ISO 9308-1:2014 is classified under the following ICS (International Classification for Standards) categories: 07.100.20 - Microbiology of water. The ICS classification helps identify the subject area and facilitates finding related standards.
ISO 9308-1:2014 has the following relationships with other standards: It is inter standard links to EN ISO 9308-1:2014, ISO 3408-3:2006, ISO 9308-1:2014/Amd 1:2016, ISO 9308-1:2000. Understanding these relationships helps ensure you are using the most current and applicable version of the standard.
ISO 9308-1:2014 is available in PDF format for immediate download after purchase. The document can be added to your cart and obtained through the secure checkout process. Digital delivery ensures instant access to the complete standard document.
Standards Content (Sample)
INTERNATIONAL ISO
STANDARD 9308-1
Third edition
2014-09-15
Water quality — Enumeration
of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for
waters with low bacterial background
flora
Qualité de l’eau — Dénombrement des Escherichia coli et des
bactéries coliformes —
Partie 1: Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible
teneur en bactéries
Reference number
©
ISO 2014
© ISO 2014
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced or utilized otherwise in any form
or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting on the internet or an intranet, without prior
written permission. Permission can be requested from either ISO at the address below or ISO’s member body in the country of
the requester.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Published in Switzerland
ii © ISO 2014 – All rights reserved
Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 2
5 Apparatus and glassware . 2
6 Culture media and reagents . 2
7 Sampling . 3
8 Procedure. 3
8.1 Preparation of the sample . 3
8.2 Filtration . 3
8.3 Incubation and differentiation . 3
9 Expression of results . 4
10 Test report . 4
11 Quality assurance . 4
11.1 General . 4
11.2 Performance testing of Chromogenic Coliform Agar (CCA) . 4
11.3 Performance testing of oxidase test . 5
Annex A (informative) Further microbiological information on coliform bacteria .6
Annex B (normative) Composition and preparation of culture media and reagents .7
Annex C (informative) Performance characteristics . 9
Bibliography .10
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www.iso.org/directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www.iso.org/patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation on the meaning of ISO specific terms and expressions related to conformity
assessment, as well as information about ISO’s adherence to the WTO principles in the Technical Barriers
to Trade (TBT) see the following URL: Foreword - Supplementary information
The committee responsible for this document is ISO/TC 147, Water quality, Subcommittee SC 4,
Microbiological methods.
This third edition cancels and replaces the second edition (ISO 9308-1:2000), which has been technically
revised.
It also incorporates the Corrigendum ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.
ISO 9308 consists of the following parts, under the general title Water quality — Enumeration of
Escherichia coli and coliform bacteria:
— Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora
— Part 2: Most probable number method
— Part 3: Miniaturized method (Most Probable Number) for the detection and enumeration of E. coli in
surface and waste water
iv © ISO 2014 – All rights reserved
Introduction
The presence and extent of faecal pollution is an important factor in assessing the quality of water and
the risk to human health from infection. Examination of water samples for the presence of Escherichia
coli (E. coli), which normally inhabits the bowel of man and other warm-blooded animals, provides an
indication of such pollution. Examination for coliform bacteria can be more difficult to interpret because
some coliform bacteria live in soil and surface fresh water and are not always intestinal. Therefore,
the presence of coliform bacteria, although not a proof of faecal contamination, may indicate failure in
treatment, storage, or distribution.
INTERNATIONAL STANDARD ISO 9308-1:2014(E)
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and
coliform bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for waters with low bacterial
background flora
WARNING — Persons using this document should be familiar with normal laboratory practice.
This document does not purport to address all of the safety problems, if any, associated with its
use. It is the responsibility of the user to establish appropriate safety and health practices and to
ensure compliance with any national regulatory conditions.
IMPORTANT — It is absolutely essential that tests conducted in accordance with this document
be carried out by suitably qualified staff.
1 Scope
This part of ISO 9308 specifies a method for the enumeration of Escherichia coli (E. coli) and coliform
bacteria. The method is based on membrane filtration, subsequent culture on a chromogenic coliform
agar medium, and calculation of the number of target organisms in the sample. Due to the low selectivity
of the differential agar medium, background growth can interfere with the reliable enumeration of
E. coli and coliform bacteria, for example, in surface waters or shallow well waters. This method is not
suitable for these types of water.
This part of ISO 9308 is especially suitable for waters with low bacterial numbers that will cause less
than 100 total colonies on chromogenic coliform agar (CCA). These may be drinking water, disinfected
pool water, or finished water from drinking water treatment plants.
Some strains of E. coli which are β-D-glucuronidase negative, such as Escherichia coli O157, will not be
detected as E. coli. As they are β-D-galactosidase positive, they will appear as coliform bacteria on this
chromogenic agar.
2 Normative references
The following documents, in whole or in part, are normatively referenced in this document and are
indispensable for its application. For dated references, only the edition cited applies. For undated
references, the latest edition of the referenced document (including any amendments) applies.
ISO 3696, Water for analytical laboratory use — Specification and test methods
ISO 7704, Water quality — Evaluation of membrane filters used for microbiological analyses
ISO 8199, Water quality — General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture
ISO 11133, Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance
testing of culture media
ISO 19458, Water quality — Sampling for microbiological analysis
3 Terms and definitions
For the purpose of this document, the definitions given in ISO/IEC Guide 2 and the following apply.
3.1
coliform bacteria
members of the Enterobacteriaceae that express β-D-galactosidase
3.2
Escherichia coli
E. coli
member of the Enterobacteriaceae that expresses β-D-galactosidase and β-D-glucuronidase
4 Principle
Filtration of a test portion of the sample through a membrane filter, which retains the organisms, and
placement of the membrane filter on a chromogenic coliform agar plate.
Incubation of the membrane filter at (36 ± 2) °C for (21 ± 3) h.
Counting of β-D-galactosidase positive colonies (pink to red) as presumptive coliform bacteria that are
not E. coli. To avoid false-positive results, caused by oxidase positive bacteria, for example, Aeromonas
spp, the presumptive colonies shall be confirmed by a negative oxidase reaction.
Counting of β-D-galactosidase and β-D-glucuronidase positive colonies (dark-blue to violet) as E. coli.
Total coliform bacteria are the sum of oxidase negative colonies with pink to red colour and all dark-blue
to violet colonies.
5 Apparatus and glassware
The following are the usual microbiological laboratory equipment.
5.1 Apparatus, suitable for sterilization by steam (autoclave), according to the instructions given in
ISO 8199.
5.2 Incubator, thermostatically controlled at (36 ± 2) °C.
5.3 pH meter, with an accuracy of ±0,1 at 20 °C to 25 °C.
5.4 Equipment, for membrane filtration.
5.5 Membrane filters, composed of cellulose esters or other suitable material, usually about 47 mm or
50 mm in diameter, with filtration characteristics equivalent to a rated nominal pore diameter of 0,45 µm
and, preferentially, with grid lines.
The membrane filters shall be free from growth-inhibiting or growth-promoting properties and the
printing ink used for the grid shall not affect the growth of bacteria. If not obtained sterile, they shall
be sterilized according to the manufacturer’s instructions. Every batch of membrane filters shall be
tested for its suitability for the test according to ISO 7704 especially since the use of different brands of
membrane filters may result in different recovery and colour development.
5.6 Disinfected forceps, for handling of membrane filters.
6 Culture media and reagents
For the preparation of culture media and reagents, see ISO 8199 and ISO 11133. Use ingredients of
uniform quality and chemicals of analytical grade (see note); fo
...
NORME ISO
INTERNATIONALE 9308-1
Troisième édition
2014-09-15
Qualité de l’eau — Dénombrement
des Escherichia coli et des bactéries
coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane
pour les eaux à faible teneur en
bactéries
Water quality — Enumeration of Escherichia coli and coliform
bacteria —
Part 1: Membrane filtration method for waters with low bacterial
background flora
Numéro de référence
©
ISO 2014
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2014
Droits de reproduction réservés. Sauf indication contraire, aucune partie de cette publication ne peut être reproduite ni utilisée
sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie, l’affichage sur
l’internet ou sur un Intranet, sans autorisation écrite préalable. Les demandes d’autorisation peuvent être adressées à l’ISO à
l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2014 – Tous droits réservés
Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 2
4 Principe . 2
5 Appareillage et verrerie . 2
6 Milieux de culture et réactifs . 3
7 Échantillonnage . 3
8 Mode opératoire. 3
8.1 Préparation de l’échantillon . 3
8.2 Filtration . 3
8.3 Incubation et différenciation . 3
9 Expression des résultats. 4
10 Rapport d’essai . 4
11 Assurance qualité . 4
11.1 Généralités . 4
11.2 Essais de performance de la gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA) . 4
11.3 Essais de performance de l’essai de recherche de l’oxydase . 5
Annexe A (informative) Informations microbiologiques complémentaires sur les
bactéries coliformes . 6
Annexe B (normative) Composition et préparation des milieux de culture et réactifs .7
Annexe C (informative) Caractéristiques de performance . 9
Bibliographie .10
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de
la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC concernant
les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos — Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration du présent document est l’ISO/TC 147, Qualité de l’eau, sous-comité
SC 4, Méthodes microbiologiques.
Cette troisième édition annule et remplace la deuxième édition (ISO 9308-1:2000), qui a fait l’objet d’une
révision technique.
Elle comprend également le rectificatif ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007.
L’ISO 9308 comprend les parties suivantes, présentées sous le titre général Qualité de l’eau —
Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes:
— Partie 1: Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à faible teneur en bactéries
— Partie 2: Méthode du nombre le plus probable
— Partie 3: Méthode miniaturisée (nombre le plus probable) pour la recherche et le dénombrement des
E. coli dans les eaux de surface et les eaux résiduaires
iv © ISO 2014 – Tous droits réservés
Introduction
La présence et l’étendue de la pollution fécale est un facteur important dans l’évaluation de la qualité
de l’eau ainsi que du risque infectieux représenté pour la santé humaine. L’examen d’échantillons d’eau
pour y rechercher des Escherichia coli (E. coli), normalement présents dans les intestins de l’homme et
des animaux homéothermes, fournit une indication sur ce type de pollution. Les résultats de l’examen
des bactéries coliformes peuvent s’avérer plus difficiles à interpréter en raison du fait que certains
coliformes vivent également dans le sol et dans les eaux douces de surface, et ne sont donc pas toujours
d’origine intestinale. La présence de bactéries coliformes peut donc, bien que ce ne soit pas la preuve
d’une contamination d’origine fécale, indiquer une défaillance du traitement, du stockage ou de la
distribution de l’eau.
NORME INTERNATIONALE ISO 9308-1:2014(F)
Qualité de l’eau — Dénombrement des Escherichia coli et
des bactéries coliformes —
Partie 1:
Méthode par filtration sur membrane pour les eaux à
faible teneur en bactéries
AVERTISSEMENT — Il convient que l’utilisateur du présent document connaisse bien les pratiques
courantes de laboratoire. Le présent document n’a pas pour but de traiter de tous les problèmes
de sécurité qui sont, le cas échéant, liés à son utilisation. Il incombe à l’utilisateur d’établir des
pratiques appropriées en matière d’hygiène et de sécurité et de s’assurer de la conformité à la
réglementation nationale en vigueur.
IMPORTANT — Il est indispensable que les essais menés selon le présent document soient
effectués par un personnel adéquatement qualifié.
1 Domaine d’application
La présente partie de l’ISO 9308 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli (E. coli) et des
bactéries coliformes. La méthode consiste en une filtration sur membrane, suivie d’une mise en culture
dans une gélose chromogène et d’un calcul du nombre des organismes cibles présents dans l’échantillon.
La gélose de différenciation étant peu sélective, la flore bactérienne générale peut perturber la fiabilité
du dénombrement des E. coli et des bactéries coliformes, par exemple, dans certaines eaux de surface ou
certaines eaux de puits peu profonds. Cette méthode ne convient pas à ces types d’eau.
La présente partie de l’ISO 9308 est particulièrement adaptée aux eaux à faible teneur en bactéries
qui produiront moins de 100 colonies totales sur de la gélose chromogène pour le dénombrement des
bactéries coliformes. Ces eaux peuvent être l’eau potable, l’eau de piscine désinfectée ou l’eau propre
sortant de stations de production d’eau potable.
Certaines souches d’E. coli négatives à la β-D-glucuronidase, telles qu’Escherichia coli O157, ne sont pas
détectées en tant qu’E. coli. Comme elles sont positives à la β-D-galactosidase, elles sont considérées
comme des bactéries coliformes sur la gélose chromogène pour bactéries coliformes (CCA).
2 Références normatives
Les documents ci-après, dans leur intégralité ou non, sont des références normatives indispensables à
l’application du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique. Pour les
références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les éventuels
amendements).
ISO 3696, Eau pour laboratoire à usage analytique — Spécification et méthodes d’essai
ISO 7704, Qualité de l’eau — Évaluation des membranes filtrantes utilisées pour des analyses microbiologiques
ISO 8199, Qualité de l’eau — Lignes directrices générales pour le dénombrement des micro-organismes sur
milieu de culture
ISO 11133, Microbiologie des aliments et de l’eau — Préparation, production, stockage et essais de
performance des milieux de culture
ISO 19458, Qualité de l’eau — Échantillonnage pour analyse microbiologique
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les définitions suivantes et celles données dans l’ISO/IEC Guide 2
s’appliquent.
3.1
bactéries coliformes
membres de la famille des Entérobactéries qui expriment la β-D-galactosidase
3.2
Escherichia coli
E. coli
membre de la famille des Entérobactéries qui exprime la β-D-galactosidase et la β-D-glucuronidase
4 Principe
Filtration d’une prise d’essai de l’échantillon sur une membrane filtrante, qui retient les organismes, et
placement de la membrane filtrante dans une boîte de gélose chromogène coliforme.
Incubation de la membrane filtrante à (36 ± 2) °C pendant (21 ± 3) h.
Comptage des colonies positives pour la β-D-galactosidase (couleur rose à rouge) en tant que bactéries
coliformes présomptives qui ne sont pas des E. coli. Pour éviter les résultats faux-positifs, provoqués par
les bactéries positives à l’oxydase, par exemple Aeromonas spp, les colonies présomptives doivent être
confirmées par une réaction négative à l’oxydase.
Comptage des colonies positives pour la β-D-galactosidase et la β-D-glucuronidase (couleur bleu foncé à
violet) en tant qu’E. coli.
Les bactéries coliformes totales sont la somme des colonies négatives à l’oxydase de couleur rose à rouge
et de toutes les colonies de couleur bleu foncé à violet.
5 Appareillage et verrerie
Matériel de laboratoire de microbiologie habituel, et en particulier:
5.1 Appareil adapté pour la stérilisation à la vapeur (autoclave), conformément aux instructions
de l’ISO 8199.
5.2 Incubateur, contrôlé par thermostat à (36 ± 2) °C.
5.3 pH-mètre, avec une exactitude de ± 0,1 unité entre 20 °C et 25 °C.
5.4 Appareil de filtration sur membrane.
5.5 Membranes filtrantes, composées d’esters de cellulose ou d’autres matériaux appropriés,
généralement d’environ 47 mm ou 50 mm de diamètre, présentant des caractéristiques de filtration
équivalentes à une porosité nominale de 0,45 µm, munies, de préférence, avec un quadrillage.
Les membranes filtres doivent être exemptes de propriétés susceptibles d’inhiber ou au contraire de
favoriser la croissance bactérienne, et l’encre avec laquelle la grille est imprimée ne doit pas affecter la
flore bactérienne. Si elles ne sont pas livrées stériles, elles doivent être stérilisées conformément aux
instructions du fabricant. Chaque lot de membranes filtrantes doit être soumis à essai conformément à
l’ISO 7704 quant à son aptitude à l’essai, étant donné que l’utilisation de différentes marques de membranes
filtrantes peut entraîner des différences de récupération et de développement de la coloration.
5.6 Pinces désinfectées, pour la manipulation des membranes filtrantes.
2 © ISO 2014 – Tous droits réservés
6 Milieux de culture et réactifs
Pour la préparation des milieux de culture et des réactifs, voir l’ISO 8199 et l’ISO 11133. Utiliser des
ingrédients de qualité homogène et des produits chimiques de qualité analytique reconnue (voir la
Note); suivre les instructions données dans l’Annexe B. Il est également possible d’utiliser des milieux
et réactifs disponibles dans le commerce, respectant les compositions données dans l’Anne
...
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ISO
СТАНДАРТ 9308-1
Третье издание
2014-09-15
Качество воды. Подсчет количества
кишечных палочек Escherichia coli и
колиформных бактерий.
Часть 1.
Метод мембранной фильтрации для
воды с низким содержанием
бактериальной флоры
Water quality —Enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria —
Part 1:
Membrane filtration method for waters with low bacterial background flora
Ответственность за подготовку русской версии несёт GOST R
(Российская Федерация) в соответствии со статьёй 18.1 Устава ISO
Ссылочный номер
©
ISO 2014
Отказ от ответственности при работе в PDF
Настоящий файл PDF может содержать интегрированные шрифты. В соответствии с условиями лицензирования, принятыми
фирмой Adobe, этот файл можно распечатать или смотреть на экране, но его нельзя изменить, пока не будет получена лицензия на
установку интегрированных шрифтов в компьютере, на котором ведется редактирование. В случае загрузки настоящего файла
заинтересованные стороны принимают на себя ответственность за соблюдение лицензионных условий фирмы Adobe.
Центральный секретариат ISO не несет никакой ответственности в этом отношении.
Adobe - торговый знак фирмы Adobe Systems Incorporated.
Подробности, относящиеся к программным продуктам, использованным для создания настоящего файла PDF, можно найти в
рубрике General Info файла; параметры создания PDF были оптимизированы для печати. Были приняты во внимание все меры
предосторожности с тем, чтобы обеспечить пригодность настоящего файла для использования комитетами-членами ISO. В редких
случаях возникновения проблемы, связанной со сказанным выше, просьба проинформировать Центральный секретариат по
адресу, приведенному ниже.
ДОКУМЕНТ ЗАЩИЩЕН АВТОРСКИМ ПРАВОМ
© ISO 2014
Все права сохраняются. Если не указано иное, никакую часть настоящей публикации нельзя копировать или использовать в какой-
либо форме или каким-либо электронным или механическим способом, включая фотокопии и микрофильмы, без предварительного
письменного согласия ISO, которое должно быть получено после запроса о разрешении, направленного по адресу, приведенному
ниже, или в комитет-член ISO в стране запрашивающей стороны.
ISO copyright office
Case postale 56 • CH-1211 Geneva 20
Tel. + 41 22 749 01 11
Fax + 41 22 749 09 47
E-mail copyright@iso.org
Web www.iso.org
Опубликовано в Швейцарии
ii © ISO 2014 – Все права сохраняются
Содержание Страница
Предисловие.iv
Введение .v
1 Область применения.1
2 Нормативные ссылки .1
3 Термины и определения .2
4 Сущность метода.2
5 Приборы и стеклянная посуда.2
6 Культуральные среды и реактивы .3
7 Отбор проб.3
8 Процедура .3
8.1 Подготовка пробы .3
8.2 Фильтрация.3
8.3 Инкубация и дифференциация.3
9 Выражение результатов .4
10 Протокол испытания.4
11 Обеспечение качества .4
11.1 Общие вопросы .4
11.2 Испытание рабочих характеристик хромогенного агара для колиформных бактерий
(CCA) .5
11.3 Испытание рабочих характеристик оксидазного теста.5
Приложение А (информативное) Дополнительная микробиологическая информация о
колиформных бактериях .6
Приложение B (нормативное) Состав и приготовление культуральных сред и реактивов .7
Приложение С (информативное) Рабочие характеристики.9
Библиография .10
Предисловие
Международная организация по стандартизации (ISO) является Всемирной федерацией национальных
организаций по стандартизации (комитетов-членов ISO). Разработка международных стандартов обычно
осуществляется техническими комитетами ISO. Каждый комитет-член, заинтересованный в деятельности,
для которой был создан технический комитет, имеет право быть представленным в этом комитете.
Международные правительственные и неправительственные организации, имеющие связи с ISO, также
принимают участие в работах. Что касается стандартизации в области электротехники, ISO работает в
тесном сотрудничестве с Международной электротехнической комиссией (IEC).
Процедуры, используемые для разработки этого документа и для его дальнейшего ведения, описаны в
Директивах ISO/IEC, Часть 1. В частности, следует отметить различные критерии, необходимые для
одобрения различных типов документов ISO. Настоящий документ был подготовлен в соответствии с
редакционными правилами, указанными в Директивах ISO/IEC, Часть 2 (see www.iso.org/directives).
Обращается внимание на то, что некоторые элементы данного документа могут быть объектом патентных
прав. ISO не несет ответственности за идентификацию какого-либо одного или всех таких патентных прав.
Детали любых патентных прав, идентифицированных при разработке настоящего документа, будут указаны
во введении и/или в списке патентных заявок, полученных ISO (см. www.iso.org/patents).
Любое фирменное название, используемое в этом документе, указывается только как информация для
удобства пользователей и не является рекомендацией.
Объяснение значения специфических терминов ISO и выражений, относящихся к оценке соответствия, а
также информацию о строгом соблюдении ISO принципов WTO относительно Технических барьеров в
торговле (ТВТ) см. по URL: Foreword - Supplementary information (Предисловие – Дополнительная
информация)
ISO 9308-1 был разработан Техническим Комитетом ISO/TC 147, Качество воды, Подкомитетом SC 4,
Микробиологические методы.
Настоящее третье издание отменяет и заменяет второе издание (ISO 9308-1:2000), которое было
технически пересмотрено.
Оно также включает исправление Corrigendum ISO 9308-1:2000/Cor.1:2007
Международный стандарт ISO 9308, имеющий общее название Качество воды. Подсчет количества
кишечных палочек Escherichia coli и колиформных бактерий, состоит из следующих частей:
⎯ Часть 1. Метод мембранной фильтрации для воды с низким содержанием бактериальной флоры
⎯ Часть 2. Метод наиболее вероятного количества
⎯ Часть 3. Миниатюризированный метод выявления и оценки E. coli в поверхностных и сточных водах
(Метод наиболее вероятного количества (МНВК).
iv © ISO 2014 – Все права сохраняются
Введение
Наличие и степень фекальных загрязнений является важным фактором в оценке качества воды и риска
инфекционных заболеваний для человека. В результате анализа водных проб на присутствие кишечной
палочки Escherichia coli (E. coli), которая обычно обитает в кишечнике человека и других теплокровных
животных, получают показатель такого загрязнения. Анализ на присутствие колиформных бактерий
вызывает больше трудностей для интерпретации, так как некоторые колиформные бактерии живут в почве
и поверхностных пресных водах и не всегда имеют кишечное происхождение. Поэтому присутствие
колиформных бактерий, хотя и не является доказательством фекального загрязнения, может указывать на
нарушения обработки, хранения или распределения.
МЕЖДУНАРОДНЫЙ СТАНДАРТ ISO 9308-1:2014(R)
Качество воды. Подсчет количества кишечных палочек
Escherichia coli и колиформных бактерий.
Часть 1.
Метод мембранной фильтрации для воды с низким
содержанием бактериальной флоры
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ — Лица, использующие этот международный стандарт, должны быть знакомы с
нормальной лабораторной практикой. В настоящем международном стандарте не
предусматривается рассмотрение всех проблем безопасности, если таковые имеются, связанных с
его использованием. Пользователь сам должен установить надлежащие нормативы по технике
безопасности и защите здоровья и обеспечить их соответствие условиям национального
регулирования.
ВАЖНО — Необходимо, чтобы испытания согласно этому документу проводились соответственно
обученным персоналом.
1 Область применения
В данной части ISO 9308 устанавливается метод для подсчета кишечных палочек Escherichia coli (E. coli) и
колиформных бактерий. Метод основан на мембранной фильтрации, последующем культивировании на
хромогенной агаровой среде для колиформных бактерий и подсчете числа целевых организмов в пробе.
Из-за низкой селективности дифференциальной агаровой среды фоновый рост может отрицательно влиять
на надежный подсчет E. coli и колиформных бактерий, например, в поверхностных водах или неглубоких
колодцах. Для этих типов воды настоящий метод не годится.
Настоящая часть ISO 9308 главным образом применима для типов воды с низким микробным числом,
обуславливающим образование менее 100 общего числа колоний на хромогенном агаре для колиформных
бактерий (CCA). Это может быть питьевая вода, дезинфицированная вода бассейнов или обработанная
питьевая вода из водоочистных станций.
Некоторые штаммы E. coli, являющиеся β-D-глюкуронидазоотрицательными, такие как Escherichia
coli O157, не будут обнаруживаться как E. coli. Они относятся к β-D-галактосидазоположительным штаммам
и проявляются как колиформные бактерии на этом хромогенном агаре.
2 Нормативные ссылки
ISO 3696, Вода, предназначенная для использования в аналитических лабораторных целях. Технические
требования и методы испытаний
ISO 7704, Качество воды. Оценка мембранных фильтров, используемых для микробиологических анализов
ISO 8199, Качество воды. Общее руководство по подсчету микроорганизмов, выращенных методом
посева на питательной среде
ISO 11133, Микробиология пищевых продуктов, кормов для животных и воды. Приготовление,
производство, хранение и испытания для определения рабочих характеристик питательных сред
ISO 19458, Качество воды. Обор проб для микробиологического анализа
3 Термины и определения
Применительно к настоящему документу используются определения, данные в руководящих указаниях
ISO/IEC Guide 2, и следующие.
3.1
колиформные бактерии
coliform bacteria
представители семейства энтеробактерий (Enterobacteriaceae), которые активируют β-D-галактосидазу
3.2
кишечные палочки Escherichia coli
Escherichia coli
E. coli
представители семейства энтеробактерий (Enterobacteriaceae), которые активируют β-D-галактосидазу и β-
D-глюкуронидазу
4 Сущность метода
Фильтрация испытательного образца через мембранный фильтр, который удерживает организмы, и
помещение мембранного фильтра на пластинку хромогенного агара для колиформных бактерий.
Инкубация мембранного фильтра при (36 ± 2) °C в течение (21 ± 3) ч.
Подсчет β-D-галактосидазопозитивных колоний (от розовых до красных) как презумптивных колиформных
бактерий, которые не являются E. coli. Для избежания ложноположительных результатов, обусловленных
оксидазопозитивными бактериями, например, Aeromonas spp, презумптивные колонии должны быть
подтверждены отрицательной реакцией на оксидазу.
Подсчет β-D-галактосидазо- и β-D-глюкуронидазопозитивных колоний (от темно-синих до фиолетовых) как
E. coli.
Общее количество колиформных бактерий является суммой оксидазонегативных колоний от розовых до
красных и всех колоний от темно-синего до фиолетового цвета
5 Приборы и стеклянная посуда
Ниже приводится обычное микробиологическое лабораторное оборудование.
5.1 Аппарат для паровой стерилизации (автоклав), соответствующий инструкциям, указанным в ISO
8199.
5.2 Инкубатор, с термостатическим регулированием при (36 ± 2) °C.
5.3 pH метр, с точностью ±0,1 при 20 °C до 25 °C.
5.4 Оборудование для мембранной фильтрации.
5.5 Мембранные фильтры, изготовленные из эфиров целлюлозы или другого подходящего материала,
диаметром обычно около 47 мм или 50 мм, с характеристиками фильтрации, соответствующими
номинальному диаметру пор 0,45 мкм, и, предпочтительно, с нанесенной сеткой.
Мембранные фильтры не должны обладать свойствами, ингибирующими или стимулирующими рост
микроорганизмов, и чернила, используемые для нанесения сетки, не должны оказывать влияние на рост
бактерий. Если мембранные фильтры поставляются нестерильными, их следует стерилизовать согласно
инструкциям изготовителя. Каждая партия мембранных фильтров должна быть проверена на пригодность
2 © ISO 2014 – Все права сохраняются
для испытания согласно ISO 7704, особенно в связи с тем, что использование мембранных фильтров
различных торговых марок может привести к различиям в формировании колоний и их окраски.
5.6 Дезинфицированный пинцет для работы с мембранными фильтрами
6 Культуральные среды и реактивы
Культуральные среды и реактивы готовят согласно ISO 8199 и ISO 11133. Используются ингредиенты
однородного качества и хим
...
Questions, Comments and Discussion
Ask us and Technical Secretary will try to provide an answer. You can facilitate discussion about the standard in here.
Loading comments...