ISO 23349:2020

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 23349
First edition
2020-01
Animal and vegetable fats and oils —
Determination of sterols and stanols
in foods and dietary supplements
containing added phytosterols
Corps gras d'origines végétale et animale — Dosage des stérols et des
stanols dans les aliments et les compléments alimentaires contenant
des phytostérols ajoutés
Reference number
©
ISO 2020
© ISO 2020
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be reproduced or utilized otherwise in any form or by any means, electronic or mechanical, including photocopying, or posting
on the internet or an intranet, without prior written permission. Permission can be requested from either ISO at the address
below or ISO’s member body in the country of the requester.
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Published in Switzerland
ii © ISO 2020 – All rights reserved

Contents Page
Foreword .iv
Introduction .v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions . 1
4 Principle . 1
5 Reagents . 1
6 Apparatus . 2
7 Sampling . 4
8 Test portion . 4
9 Procedure. 4
9.1 Selection of analysis protocol . 4
9.2 Dilute and shoot protocol . 4
9.3 15 min and 120 min alkaline protocols . 5
9.4 45 min acid/15 min alkaline protocol . 5
10 Gas chromatography . 6
11 Peak identification . 6
12 Calculations. 7
13 Quality control/quality assurance . 8
14 Precision . 8
Annex A (normative) Reference gas chromatograms . 9
Annex B (informative) Results of the interlaboratory test .13
Bibliography .30
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards
bodies (ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out
through ISO technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical
committee has been established has the right to be represented on that committee. International
organizations, governmental and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work.
ISO collaborates closely with the International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of
electrotechnical standardization.
The procedures used to develop this document and those intended for its further maintenance are
described in the ISO/IEC Directives, Part 1. In particular, the different approval criteria needed for the
different types of ISO documents should be noted. This document was drafted in accordance with the
editorial rules of the ISO/IEC Directives, Part 2 (see www .iso .org/ directives).
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of
patent rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights. Details of
any patent rights identified during the development of the document will be in the Introduction and/or
on the ISO list of patent declarations received (see www .iso .org/ patents).
Any trade name used in this document is information given for the convenience of users and does not
constitute an endorsement.
For an explanation of the voluntary nature of standards, the meaning of ISO specific terms and
expressions related to conformity assessment, as well as information about ISO's adherence to the
World Trade Organization (WTO) principles in the Technical Barriers to Trade (TBT), see www .iso .org/
iso/ foreword .html.
This document was prepared by Technical Committee ISO/TC 34, Food products, Subcommittee SC 11,
Animal and vegetable fats and oils.
Any feedback or questions on this document should be directed to the user’s national standards body. A
complete listing of these bodies can be found at www .iso .org/ members .html.
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Introduction
Plant sterols and plant stanols, collectively referred to as phytosterols, are increasingly recognized
for their role in reducing the risk of coronary heart disease by lowering serum total and low-density
lipoprotein cholesterol. Because of these potential health benefits, health claim regulations authorizing
the addition of phytosterols and phytosterol esters to foods and dietary supplements now exist in
countries throughout Europe, North and South America, Asia, New Zealand and Australia.
This document was developed in response to the worldwide demand for a reference method for
quantifying total and individual phytosterols in foods and dietary supplements containing added
phytosterols, and in the phytosterol food additive concentrates used to prepare such products. This
[1]
reference method is based on the single-laboratory validated methods of Clement et al. and Srigley
[2]
and Haile for the preparation and gas chromatographic separation of phytosterol trimethylsilyl ether
derivatives, respectively.
In 2016 to 2017, an international collaborative study co-organized by the United States Food and Drug
Administration (FDA), Cargill (USA) and the American Oil Chemists’ Society (AOCS) was carried out to
evaluate the performance of this method for the determination of total and individual phytosterols in
[3]
foods, dietary supplements and phytosterol concentrates. A total of 14 laboratories from 6 countries
successfully completed the analysis of 18 test materials, upon which the method was approved as AOCS
[4]
Official Method Ce 12-16 .
This reference method is appropriate for the determination of the five major phytosterols (i.e.
campesterol, campestanol, stigmasterol, β-sitosterol and sitostanol) that are the subject of FDA’s health
[5]
claim regulation for phytosterols and the reduced risk of coronary heart disease .
INTERNATIONAL STANDARD ISO 23349:2020(E)
Animal and vegetable fats and oils — Determination of
sterols and stanols in foods and dietary supplements
containing added phytosterols
1 Scope
This document specifies a reference method for the determination of free sterols/stanols and steryl/
stanol esters (0,1 % to 97 % mass fraction) in foods and dietary supplements containing added
phytosterols and in phytosterol food additive concentrates.
Milk and milk products (or fat coming from milk and milk products) are excluded from the scope of this
document. This method does not apply to matrices that contain rice bran oil at concentrations of more
than 20 % due to possible interferences in the gas chromatogram.
2 Normative references
There are no normative references in this document.
3 Terms and definitions
No terms and definitions are listed in this document.
ISO and IEC maintain terminological databases for use in standardization at the following addresses:
— ISO Online browsing platform: available at https:// www .iso .org/ obp
— IEC Electropedia: available at http:// www .electropedia .org/
4 Principle
Free sterols/stanols and saponified steryl/stanol esters are derivatized to phytosterol trimethylsilyl
(TMS) ethers and separated on a capillary gas chromatography column.
5 Reagents
Use only reagents of recognized analytical grade.
WARNING — Attention is drawn to regulations that specify the handling of hazardous substances.
Technical, organizational and personal safety measures shall be followed. A chemical fume hood
shall be used for the work.
5.1 Pyridine.
5.2 N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide +1 % trimethylchlorosilane (BSTFA).
5.3 Internal standard dissolving solvent, toluene (recommended) or ethyl acetate.
5.4 Methanol.
5.5 Sodium hydroxide, pellets, of purity ≥ 97 %.
5.6 Sodium hydroxide solution, 2,3 N.
Weigh 92 g of sodium hydroxide (5.5) into a 1 000 ml volumetric flask (6.14). Add a stir bar (6.20) and
750 ml of methanol (5.4). Place the flask on a magnetic stirrer (6.21) to disperse. Dilute to the mark
with methanol, and invert to mix. The sodium hydroxide solution shall be stirred each time before use
because it will settle out with time.
5.7 Hydrochloric acid, 3,0 N.
5.8 Epicoprostanol (5β-cholestan-3α-ol), of purity > 95 %.
5.9 Epicoprostanol internal standard (IS) solution, 5 mg/ml.
Accurately weigh 5,0 g of epicoprostanol (5.8) into a glass weighing scoop (6.8). Transfer the
epicoprostanol to a 1 000 ml volumetric flask (6.14). Rinse the scoop with internal standard dissolving
solvent (5.3) into the flask. Dilute to the mark with toluene or ethyl acetate and invert to mix. The
epicoprostanol IS solution of concentration 5 mg/ml is used for sterol/stanol concentrates, steryl/
stanol ester concentrates and some dietary supplements.
5.10 Epicoprostanol internal standard (IS) solution, 2 mg/ml.
Accurately weigh 2,0 g of epicoprostanol (5.8) into a glass weighing scoop (6.8). Transfer the
epicoprostanol to a 1 000 ml volumetric flask (6.14). Rinse the scoop with internal standard dissolving
solvent (5.3) into the flask. Dilute to the mark with toluene or ethyl acetate and invert to mix. The
epicoprostanol IS solution of concentration 2 mg/ml is used for analysis of foods and some dietary
supplements.
5.11 Phytosterols, mixture of soya sterols, gas chromatography reference standard.
5.12 Sodium sulfate, anhydrous, granular, of purity ≥ 99 %.
5.13 Sodium chloride, crystalline, of purity ≥ 99 %.
5.14 Sodium chloride solution, saturated.
Weigh approximately 400 g of sodium chloride (5.13) into a storage bottle (6.15). Dilute with 1 000 ml
of deionized water.
6 Apparatus
Usual laboratory apparatus and, in particular, the following.
6.1 Gas-liquid chromatograph, equipped with flame ionization detector and capillary split
injection system.
6.2 Carrier gas, hydrogen (recommended) or helium, of purity ≥ 99,99 % pure or better, gas
chromatography quality, dried, oxygen removed by suitable filters (< 0,1 mg/kg), free from organic
impurities.
6.3 Other gases, nitrogen, hydrogen and synthetic air, of gas chromatography quality and
purity ≥ 99,99 %.
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6.4 Capillary column, with a stationary phase that has b
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 23349
Première édition
2020-01
Corps gras d'origines végétale et
animale — Dosage des stérols et
des stanols dans les aliments et les
compléments alimentaires contenant
des phytostérols ajoutés
Animal and vegetable fats and oils — Determination of sterols
and stanols in foods and dietary supplements containing added
phytosterols
Numéro de référence
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ISO 2020
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
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Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
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Web: www.iso.org
Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 1
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 4
8 Prise d’essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Sélection du protocole d’analyse . 4
9.2 Protocole de dilution et d’injection . 5
9.3 Protocoles alcalins de 15 min et 120 min . 5
9.4 Protocole acide de 45 min/alcalin de 15 min . 6
10 Chromatographie en phase gazeuse . 6
11 Identification des pics . 7
12 Calculs . 8
13 Contrôle qualité/assurance qualité . 8
14 Fidélité . 9
Annexe A (normative) Chromatogrammes en phase gazeuse de référence .10
Annexe B (informative) Résultats de l’essai interlaboratoires .14
Bibliographie .32
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés

Introduction
Les stérols et stanols végétaux, collectivement désignés phytostérols, jouissent d’une reconnaissance
croissante pour leur rôle dans la réduction du risque de maladie coronarienne en diminuant le
cholestérol total sérique et le cholestérol à lipoprotéines de basse densité. Ces bienfaits potentiels sur la
santé ont contribué à l’émergence de réglementations relatives aux allégations de santé qui autorisent
l’ajout de phytostérols et d’esters de phytostérols aux aliments et compléments alimentaires dans
des pays à travers l’Europe, l’Amérique du Nord et du Sud et l’Asie, ainsi qu’en Nouvelle-Zélande et en
Australie.
Le présent document a été élaboré en réponse à la demande mondiale d’une méthode de référence
pour la quantification des phytostérols totaux et individuels dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés ainsi que les additifs alimentaires concentrés en
phytostérols utilisés dans la préparation de ces produits. Cette méthode de référence s’appuie sur
[1] [2]
les méthodes validées dans un seul laboratoire de Clement et al. et de Srigley et Haile pour la
préparation et la séparation par chromatographie en phase gazeuse des dérivés de triméthylsilyléthers
de phytostérols, respectivement.
En 2016–2017, une étude interlaboratoires internationale, co-organisée par la United States Food et
Drug Administration (FDA), Cargill (USA), et l’American Oil Chemists’ Society (AOCS), a été menée
pour évaluer les performances de cette méthode pour le dosage des phytostérols totaux et individuels
[3]
dans les aliments et les compléments alimentaires ainsi que les concentrés de phytostérols. Au total,
14 laboratoires de six pays ont procédé avec succès à l’analyse de 18 matériaux d’essai, à la suite de quoi
[4]
la méthode a été approuvée comme méthode officielle Ce 12-16 de l’AOCS .
Cette méthode de référence convient pour le dosage de cinq phytostérols majeurs (à savoir le
campestérol, le campestanol, le stigmastérol, le β-sitostérol et le sitostanol) qui sont soumis à la
réglementation de la FDA relative aux allégations de santé impliquant les phytostérols et le risque
[5]
réduit de maladie coronarienne .
NORME INTERNATIONALE ISO 23349:2020(F)
Corps gras d'origines végétale et animale — Dosage des
stérols et des stanols dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de référence pour le dosage des stérols/stanols libres et
des esters de stérols/stanols (0,1 % à 97 % de fraction massique) dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés et dans les additifs alimentaires concentrés en
phytostérols.
Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du
domaine d’application du présent document. Cette méthode ne s’applique pas aux matrices d’une teneur
supérieure à 20 % en huile de son de riz en raison des interférences éventuelles dans le chromatogramme
en phase gazeuse.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/ .
4 Principe
Les stérols/stanols libres et les esters de stérols/stanols saponifiés sont dérivés en triméthylsilyléthers
de phytostérols (TMS) et séparés à l’aide d’une colonne capillaire de chromatographie en phase gazeuse.
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
AVERTISSEMENT — L’attention est attirée sur les règlements qui régissent la manipulation des
substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et du
personnel doivent être suivies. Une hotte de chimie doit être utilisée pour les travaux.
5.1 Pyridine
5.2 N,O-Bis(triméthylsilyl)trifluoroacétamide +1 % triméthylchlorosilane (BSTFA).
5.3 Solvant de dissolution pour l’étalon interne, toluène (recommandé) ou acétate d’éthyle.
5.4 Méthanol.
5.5 Hydroxyde de sodium, granules, d’une pureté ≥ 97 %.
5.6 Solution d’hydroxyde de sodium, 2,3 N.
Peser 92 g d’hydroxyde de sodium (5.5) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Ajouter un barreau
d’agitation (6.20) et 750 ml de méthanol (5.4). Placer la fiole sur un agitateur magnétique (6.21) pour
procéder à la dispersion. Diluer jusqu’au volume avec du méthanol et retourner la fiole pour mélanger.
La solution d’hydroxyde de sodium doit être agitée à nouveau avant emploi, car elle se décante au fil
du temps.
5.7 Acide chlorhydrique, 3,0 N.
5.8 Épicoprostanol (5β-cholestan-3α-ol), d’une pureté > 95 %.
5.9 Solution d’étalon interne (EI) d’épicoprostanol, 5 mg/ml.
Peser précisément 5,0 g d’épicoprostanol (5.8) dans une nacelle de pesée en verre (6.8). Transférer
l’épicoprostanol dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Rincer la nacelle avec du solvant de dissolution
pour l’étalon interne (5.3) et verser dans la fiole. Diluer jusqu’au volume avec du toluène ou de l’acétate
d’éthyle et retourner la fiole pour mélanger. La solution d’EI d’épicoprostanol d’une concentration de
5 mg/ml est utilisée pour l’analyse des concentrés de stérols/stanols, des concentrés d’esters de stérols/
stanols et de certains compléments alimentaires.
5.10 Solution d’étalon interne (EI) d’épicoprostanol, 2 mg/ml.
Peser précisément 2,0 g d’épicoprostanol (5.8) dans une nacelle de pesée en verre (6.8). Transférer
l’épicoprostanol dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Rincer la nacelle
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 23349
Première édition
2020-01
Corps gras d'origines végétale et
animale — Dosage des stérols et
des stanols dans les aliments et les
compléments alimentaires contenant
des phytostérols ajoutés
Animal and vegetable fats and oils — Determination of sterols
and stanols in foods and dietary supplements containing added
phytosterols
Numéro de référence
©
ISO 2020
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2020
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
Fax: +41 22 749 09 47
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Principe . 1
5 Réactifs . 1
6 Appareillage . 2
7 Échantillonnage . 4
8 Prise d’essai . 4
9 Mode opératoire. 4
9.1 Sélection du protocole d’analyse . 4
9.2 Protocole de dilution et d’injection . 5
9.3 Protocoles alcalins de 15 min et 120 min . 5
9.4 Protocole acide de 45 min/alcalin de 15 min . 6
10 Chromatographie en phase gazeuse . 6
11 Identification des pics . 7
12 Calculs . 8
13 Contrôle qualité/assurance qualité . 8
14 Fidélité . 9
Annexe A (normative) Chromatogrammes en phase gazeuse de référence .10
Annexe B (informative) Résultats de l’essai interlaboratoires .14
Bibliographie .32
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux.
L'ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d'approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L'attention est attirée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l'élaboration du document sont indiqués dans l'Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l'ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l'ISO liés à l'évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l'adhésion
de l'ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir www .iso .org/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le comité technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-
comité SC 11, Corps gras d’origines animale et végétale.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
iv © ISO 2020 – Tous droits réservés

Introduction
Les stérols et stanols végétaux, collectivement désignés phytostérols, jouissent d’une reconnaissance
croissante pour leur rôle dans la réduction du risque de maladie coronarienne en diminuant le
cholestérol total sérique et le cholestérol à lipoprotéines de basse densité. Ces bienfaits potentiels sur la
santé ont contribué à l’émergence de réglementations relatives aux allégations de santé qui autorisent
l’ajout de phytostérols et d’esters de phytostérols aux aliments et compléments alimentaires dans
des pays à travers l’Europe, l’Amérique du Nord et du Sud et l’Asie, ainsi qu’en Nouvelle-Zélande et en
Australie.
Le présent document a été élaboré en réponse à la demande mondiale d’une méthode de référence
pour la quantification des phytostérols totaux et individuels dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés ainsi que les additifs alimentaires concentrés en
phytostérols utilisés dans la préparation de ces produits. Cette méthode de référence s’appuie sur
[1] [2]
les méthodes validées dans un seul laboratoire de Clement et al. et de Srigley et Haile pour la
préparation et la séparation par chromatographie en phase gazeuse des dérivés de triméthylsilyléthers
de phytostérols, respectivement.
En 2016–2017, une étude interlaboratoires internationale, co-organisée par la United States Food et
Drug Administration (FDA), Cargill (USA), et l’American Oil Chemists’ Society (AOCS), a été menée
pour évaluer les performances de cette méthode pour le dosage des phytostérols totaux et individuels
[3]
dans les aliments et les compléments alimentaires ainsi que les concentrés de phytostérols. Au total,
14 laboratoires de six pays ont procédé avec succès à l’analyse de 18 matériaux d’essai, à la suite de quoi
[4]
la méthode a été approuvée comme méthode officielle Ce 12-16 de l’AOCS .
Cette méthode de référence convient pour le dosage de cinq phytostérols majeurs (à savoir le
campestérol, le campestanol, le stigmastérol, le β-sitostérol et le sitostanol) qui sont soumis à la
réglementation de la FDA relative aux allégations de santé impliquant les phytostérols et le risque
[5]
réduit de maladie coronarienne .
NORME INTERNATIONALE ISO 23349:2020(F)
Corps gras d'origines végétale et animale — Dosage des
stérols et des stanols dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie une méthode de référence pour le dosage des stérols/stanols libres et
des esters de stérols/stanols (0,1 % à 97 % de fraction massique) dans les aliments et les compléments
alimentaires contenant des phytostérols ajoutés et dans les additifs alimentaires concentrés en
phytostérols.
Le lait et les produits laitiers (ou les corps gras issus du lait et des produits laitiers) sont exclus du
domaine d’application du présent document. Cette méthode ne s’applique pas aux matrices d’une teneur
supérieure à 20 % en huile de son de riz en raison des interférences éventuelles dans le chromatogramme
en phase gazeuse.
2 Références normatives
Le présent document ne contient aucune référence normative.
3 Termes et définitions
Aucun terme n’est défini dans le présent document.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse http:// www .electropedia .org/ .
4 Principe
Les stérols/stanols libres et les esters de stérols/stanols saponifiés sont dérivés en triméthylsilyléthers
de phytostérols (TMS) et séparés à l’aide d’une colonne capillaire de chromatographie en phase gazeuse.
5 Réactifs
Utiliser uniquement des réactifs de qualité analytique reconnue.
AVERTISSEMENT — L’attention est attirée sur les règlements qui régissent la manipulation des
substances dangereuses. Les mesures de sécurité sur les plans technique, organisationnel et du
personnel doivent être suivies. Une hotte de chimie doit être utilisée pour les travaux.
5.1 Pyridine
5.2 N,O-Bis(triméthylsilyl)trifluoroacétamide +1 % triméthylchlorosilane (BSTFA).
5.3 Solvant de dissolution pour l’étalon interne, toluène (recommandé) ou acétate d’éthyle.
5.4 Méthanol.
5.5 Hydroxyde de sodium, granules, d’une pureté ≥ 97 %.
5.6 Solution d’hydroxyde de sodium, 2,3 N.
Peser 92 g d’hydroxyde de sodium (5.5) dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Ajouter un barreau
d’agitation (6.20) et 750 ml de méthanol (5.4). Placer la fiole sur un agitateur magnétique (6.21) pour
procéder à la dispersion. Diluer jusqu’au volume avec du méthanol et retourner la fiole pour mélanger.
La solution d’hydroxyde de sodium doit être agitée à nouveau avant emploi, car elle se décante au fil
du temps.
5.7 Acide chlorhydrique, 3,0 N.
5.8 Épicoprostanol (5β-cholestan-3α-ol), d’une pureté > 95 %.
5.9 Solution d’étalon interne (EI) d’épicoprostanol, 5 mg/ml.
Peser précisément 5,0 g d’épicoprostanol (5.8) dans une nacelle de pesée en verre (6.8). Transférer
l’épicoprostanol dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Rincer la nacelle avec du solvant de dissolution
pour l’étalon interne (5.3) et verser dans la fiole. Diluer jusqu’au volume avec du toluène ou de l’acétate
d’éthyle et retourner la fiole pour mélanger. La solution d’EI d’épicoprostanol d’une concentration de
5 mg/ml est utilisée pour l’analyse des concentrés de stérols/stanols, des concentrés d’esters de stérols/
stanols et de certains compléments alimentaires.
5.10 Solution d’étalon interne (EI) d’épicoprostanol, 2 mg/ml.
Peser précisément 2,0 g d’épicoprostanol (5.8) dans une nacelle de pesée en verre (6.8). Transférer
l’épicoprostanol dans une fiole jaugée de 1 000 ml (6.14). Rincer la nacelle
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