ISO 23162:2021

NORME ISO
INTERNATIONALE 23162
Première édition
2021-07
Analyse de base du sperme —
Spécifications et méthodologie
analytique
Basic semen examination — Specification and test methods
Numéro de référence
©
ISO 2021
DOCUMENT PROTÉGÉ PAR COPYRIGHT
© ISO 2021
Tous droits réservés. Sauf prescription différente ou nécessité dans le contexte de sa mise en œuvre, aucune partie de cette
publication ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun procédé, électronique ou mécanique,
y compris la photocopie, ou la diffusion sur l’internet ou sur un intranet, sans autorisation écrite préalable. Une autorisation peut
être demandée à l’ISO à l’adresse ci-après ou au comité membre de l’ISO dans le pays du demandeur.
ISO copyright office
Case postale 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Genève
Tél.: +41 22 749 01 11
E-mail: copyright@iso.org
Web: www.iso.org
Publié en Suisse
ii © ISO 2021 – Tous droits réservés

Sommaire Page
Avant-propos .v
Introduction .vi
1 Domaine d’application . 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions . 1
4 Formation et compétence du personnel . 4
4.1 Aspects généraux . 4
4.2 Formation . 4
4.2.1 Généralités . 4
4.2.2 Formation aux évaluations quantitatives . 4
4.2.3 Formation aux évaluations qualitatives . 5
4.2.4 Formation à l’évaluation du pH . 5
4.3 Maintien de la compétence . 5
5 Caractéristiques, échantillonnage et manipulation préanalytique du sperme .5
5.1 Caractéristiques générales. 5
5.2 Caractéristiques physiques et chimiques . . 5
5.3 Collecte et manipulation initiale de l’échantillon. 5
5.4 Informations à communiquer au patient et collecte des données . 6
5.4.1 Informations à fournir aux patients . 6
5.4.2 Collecte des données auprès du patient . 6
5.5 Manipulation initiale de l’échantillon . 7
5.6 Essai de toxicité sur les spermatozoïdes . 8
6 Analyses . 8
6.1 Équipements exigés . 8
6.2 Réactifs préparés en interne . 9
6.3 Évaluations . 9
6.3.1 Lancement des évaluations . 9
6.3.2 Évaluation macroscopique . 9
6.3.3 Microscopie directe de la préparation «fraîche» .10
6.3.4 Évaluation de la motilité des spermatozoïdes.10
6.3.5 Évaluation de la concentration des spermatozoïdes .11
6.3.6 Évaluation de l’absence de spermatozoïdes .11
6.3.7 Évaluation de la vitalité des spermatozoïdes .11
6.3.8 Évaluation de la morphologie des spermatozoïdes .12
7 Traitement post-analytique et compte rendu d’essai .12
7.1 Généralités .12
7.2 Calculs et présentation des résultats .12
7.2.1 Quantité totale dans l’éjaculat .12
7.2.2 Autres calculs .12
7.3 Présentation des résultats .13
7.3.1 Généralités .13
7.3.2 Contenu du compte rendu d’analyse du sperme .13
7.4 Aspects pratiques d’assurance de la qualité .14
7.4.1 Contrôle interne de qualité .14
7.4.2 Comparaisons intralaboratoires.15
7.4.3 Comparaisons interlaboratoires .15
Annexe A (informative) Base statistique pour la détermination de l’absence de spermatozoïde .16
Annexe B (informative) Champ à fort grossissement .17
Annexe C (informative) Formation à l’évaluation de la motilité .18
Annexe D (informative) Diluant pour l’évaluation de la concentration des spermatozoïdes .21
Annexe E (informative) Estimation de la dilution adéquate pour l’évaluation de la
concentration des spermatozoïdes .22
Annexe F (informative) Vérification par comparaison de la concordance des évaluations de
deux doublons fournissant des pourcentages .23
Annexe G (informative) Vérification par comparaison de la concordance des comptages de
concentration des spermatozoïdes de deux doublons .25
Annexe H (informative) Évaluation de la vitalité des spermatozoïdes .28
Annexe I (informative) Évaluation de la morphologie des spermatozoïdes .30
Bibliographie .33
iv © ISO 2021 – Tous droits réservés

Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui
concerne la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise à jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www
.iso .org/ directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant
les références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de
l’élaboration du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de
brevets reçues par l’ISO (voir www .iso .org/ brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données
pour information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un
engagement.
Pour une explication de la nature volontaire des normes, la signification des termes et expressions
spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion
de l’ISO aux principes de l’Organisation mondiale du commerce (OMC) concernant les obstacles
techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: www .iso .org/ iso/ fr/ avant -propos.
Le présent document a été élaboré par le Comité technique ISO/TC 212, Laboratoires de biologie médicale
et systèmes de diagnostic in vitro.
Il convient que l’utilisateur adresse tout retour d’information ou toute question concernant le présent
document à l’organisme national de normalisation de son pays. Une liste exhaustive desdits organismes
se trouve à l’adresse www .iso .org/ fr/ members .html.
Introduction
Le présent document a été élaboré afin de répondre au besoin international de normes pour une
analyse fiable du sperme humain. Les cinq éditions d’un guide de laboratoire sur l’analyse du sperme
humain publiées par l’OMS entre 1980 et 2010 ont donné des recommandations générales pour des
procédures de laboratoire adaptées. Toutefois, même la dernière édition (Organisation mondiale de la
[16]
santé 2010 ) ne constitue pas une Norme technique adéquate pour une utilisation selon l’ISO 15189.
Une Norme technique, établie sur la base des preuves scientifiques les plus pertinentes disponibles et
sur la base d’un consensus mondial sur les procédures de laboratoire les plus susceptibles de donner des
résultats fiables facilitera les démarches pour tout laboratoire cherchant à obtenir une accréditation
pour l’analyse du sperme humain. Les patients, et la science biomédicale en général, pourraient profiter
d’une diminution du nombre de facteurs aléatoires ayant un impact sur l’exactitude des résultats. Sur le
plan clinique, cela pourrait permettre de formuler de meilleurs diagnostics et fournir des principes plus
objectifs de choix entre les différentes stratégies de gestion possibles ou entre les différentes modalités
de traitement possibles. En outre, ces techniques normalisées peuvent servir de méthodes de référence
pour encadrer l’évaluation et la validation de nouvelles méthodes visant à améliorer le diagnostic et le
traitement de l’infertilité.
La préparation préanalytique du sperme humain n’est pas seulement importante pour l’analyse manuelle
de base du sperme, mais l’est aussi pour l’analyse assistée par ordinateur du sperme (CASA, de l’anglais
«Computer-Aided Sperm Analysis»). Une manipulation et une préparation normalisées d’échantillons
de sperme sont essentielles pour la qualité des données obtenues.
vi © ISO 2021 – Tous droits réservés

NORME INTERNATIONALE ISO 23162:2021(F)
Analyse de base du sperme — Spécifications et
méthodologie analytique
1 Domaine d’application
Le présent document spécifie les exigences minimales applicables aux équipements et aux points
critiques des méthodes d’essai pour de bonnes pratiques dans les laboratoires réalisant une analyse de
base du sperme humain obtenu par éjaculation.
Le présent document est applicable à l’ensemble du processus d’analyse de base du sperme, mais aussi à
la préparation de l’échantillon en vue d’une analyse assistée par ordinateur du sperme (CASA).
Le présent document ne s’applique pas aux évaluations post-vasectomie.
NOTE Du fait des implications médico-légales entourant l’évaluation des éjaculats post-vasectomie, la
méthodologie du présent document est selon toute vraisemblance inadéquate pour établir qu’un éjaculat est
totalement «exempt de spermatozoïde» (c’est-à-dire aucun spermatozoïde dans l’éjaculat).
2 Références normatives
Les documents suivants sont cités dans le texte de sorte qu’ils constituent, pour tout ou partie de leur
contenu, des exigences du présent document. Pour les références datées, seule l’édition citée s’applique.
Pour les références non datées, la dernière édition du document de référence s’applique (y compris les
éventuels amendements).
ISO 15189, Laboratoires de biologie médicale — Exigences concernant la qualité et la compétence
ISO/TS 20914, Laboratoires de biologie médicale — Recommandations pratiques pour l’estimation de
l’incertitude de mesure
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s’appliquent.
L’ISO et l’IEC tiennent à jour des bases de données terminologiques destinées à être utilisées en
normalisation, consultables aux adresses suivantes:
— ISO Online browsing platform: disponible à l’adresse https:// www .iso .org/ obp;
— IEC Electropedia: disponible à l’adresse https:// www .electropedia .org/ .
3.1
pipette automatique
pipette de laboratoire courante dotée d’un embout jetable dans laquelle le volume aspiré est déterminé
par le déplacement d’un volume équivalent d’air à l’intérieur d’un espace fermé au sein du corps de la
pipette
Note 1 à l'article: Une pipette automatique ne peut donner des volumes exacts que pour des liquides dont la
viscosité est proche de celle de l’eau.
3.2
azoospermie
absence totale de spermatozoïde dans l’éjaculat (3.4)
Note 1 à l'article: Le terme «azoospermie» ne désigne pas un diagnostic clinique mais est une description d’un
résultat de laboratoire. Il est difficile de définir l’absence totale de spermatozoïde de manière générale. Étant
donné que seules des parties d’un éjaculat (3.4) peuvent être analysées, la définition moderne repose sur des
calculs de probabilité réalisés à partir des données obtenues lors d’études d’aliquotes aléatoires d’un éjaculat
(3.4) (voir Annexe A).
3.3
CASA
analyse assistée par ordinateur du sperme
analyse automatisée d’éjaculats (3.4) à l’aide d’un équipement utilisant une technologie d’imagerie
Note 1 à l'article: Analyse basée sur l’analyse d’images de séquences vidéo permettant d’obtenir des informations
sur la concentration des spermatozoïdes (3.18) et la motilité des spermatozoïdes, et plus rarement sur la
morphologie des spermatozoïdes.
Note 2 à l'article: Des systèmes CASA sont disponibles dans le commerce, mais il n’existe pas de norme commune
concernant la validation, l’évaluation, la fiabilité des analyses ou les contenus des comptes rendus. Le présent
document ne vise pas à fournir une norme pour l’analyse CASA, bien que les aspects préanalytiques puissent être
également utiles aux développeurs, fabricants et utilisateurs des équipements CASA.
3.4
éjaculat
échantillon de sperme, qui est un mélange de spermatozoïdes et de sécrétions, provenant principalement
des vésicules séminales, de la prostate et des épididymes
Note 1 à l'article: L’éjaculat peut être obtenu de différentes façons, notamment par masturbation, rapport sexuel,
stimulation via des vibrations ou par électro-éjaculation.
3.5
viscosité de l’éjaculat
propriété d’un éjaculat (3.4) décrivant sa résistance à s’écouler comme l’eau après liquéfaction (3.10)
Note 1 à l'article: Le sperme incomplètement liquéfié n’est pas un liquide homogène du fait des teneurs en
structures gélatineuses dans le fluide d’éjaculat.
3.6
champ à fort grossissement
surface d’une lame qui est visible au microscope sous un fort grossissement (x400)
Note 1 à l'article: Il ne s’agit pas d’une surface standard car la taille varie selon le type d’oculaires utilisés
(par exemple, standard ou à large champ) (voir Annexe B).
3.7
immobilité
absence totale de mouvement du flagelle
3.8
comparaison interlaboratoires
organisation, exécution et évaluation de mesurages ou d’essais sur la même entité ou sur des entités
similaires par deux laboratoires ou plus selon des conditions prédéterminées
[SOURCE: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]
3.9
spermatozoïde idéal
spermatozoïde présentant une morphologie caractéristique des spermatozoïdes capables de pénétrer
et de progresser dans la glaire cervicale et d’atteindre le site de fécondation
[9] [10]
[SOURCE: Menkveld, et al., 1991, Menkveld et Kruger, 1995 ]
2 © ISO 2021 – Tous droits réservés

3.10
liquéfaction
processus de changement de consistance de l’éjaculat (3.4) qui passe d’une consistance de type gel ou
coagulum à une phase liquide
Note 1 à l'article: La liquéfaction se produit du fait d’une dégradation de la propriété de type gel ou coagulum par
une action enzymatique sur les macromolécules.
3.11
motilité des spermatozoïdes sans progression
mouvements du flagelle assurant une propagation du spermatozoïde de moins de 5 µm/s environ
Note 1 à l'article: La longueur normale de la tête est d’environ 5 μm.
3.12
pipette automatique à piston
pipette de laboratoire courante fonctionnant grâce au déplacement d’air assuré par le piston au sein
d’un capillaire, et non par déplacement d’air au sein d’un espace fermé
Note 1 à l'article: Le piston dans l’embout de pipette est en contact direct avec l’échantillon primaire liquide.
Note 2 à l'article: Elle permet d’éviter les erreurs de volume conséquentes avec les liquides visqueux tels que le
sperme.
3.13
motilité des spermatozoïdes avec progression
motilité vers l’avant d’un spermatozoïde d’au moins 5 µm/s
Note 1 à l'article: Voir également motilité des spermatozoïdes à progression lente (3.16) et motilité des
spermatozoïdes à progression rapide (3.14).
Note 2 à l'article: Les spermatozoïdes se déplaçant selon des trajectoires circulaires sont identifiés comme
progressifs selon l’espace parcouru.
3.14
motilité des spermatozoïdes à progression rapide
motilité vers l’avant d’un spermatozoïde d’au moins 25 µm/s
3.15
abstinence sexuelle
période entre la collecte de l’éjaculat (3.4) pour analyse et la dernière éjaculation avant la collecte
Note 1 à l'article: Exprimée en jours ou en heures selon ce qui est approprié par rapport à l’utilisation prévue.
3.16
motilité des spermatozoïdes à progression lente
motilité vers l’avant d’un spermatozoïde d’au moins 5 µm/s mais inférieure à 25 µm/s
3.17
réceptacle de collecte d’échantillon primaire
récipient utilisé pour recueillir des échantillons primaires
Note 1 à l'article: Le réceptacle de collecte d’échantillon primaire ne doit pas être toxique pour les spermatozoïdes.
Note 2 à l'article: Si un éjaculat (3.4) ne peut être collecté que lors d’un rapport sexuel, un préservatif en Silastic™
non toxique peut être utilisé. L’éjaculat (3.4) doit être transféré dans un réceptacle d’échantillon d’éjaculat dès sa
réception par le laboratoire et cela doit être consigné dans le formulaire de compte rendu.
3.18
concentration des spermatozoïdes
nombre de spermatozoïdes par unité de volume
Note 1 à l'article: La concentration des spermatozoïdes est exprimée en millions ou milliers de spermatozoïdes
par millilitre.
Note 2 à l'article: Elle ne doit pas être confondue avec la masse volumique (masse/volume) du sperme.
3.19
vitalité des spermatozoïdes
pourcentage de spermatozoïdes ayant une bonne vivacité, indépendamment de leur aptitude à se
mouvoir
3.20
nombre total de spermatozoïdes
nombre total de spermatozoïdes dans l’éjaculat (3.4) déterminé par calcul
Note 1 à l'article: Le nombre total de spermatozoïdes est le produit de la concentration des spermatozoïdes (3.18)
et du volume de l’éjaculat (3.4).
Note 2 à l'article: Le nombre total de spermatozoïdes et la concentration des spermatozoïdes (3.18) sont deux
choses différentes.
3.21
critères stricts de Tygerberg
critères de morphologie des spermatozoïdes fondés sur la morphologie des spermatozoïdes capables de
pénétrer et de progresser dans la glaire cervicale
3.22
indice de tératozoospermie
TZI (de l’anglais «teratozoospermia index»)
nombre moyen de régions présentant une anomalie (tête, base de la tête/pièce intermédiaire, flagelle
et/ou gouttelette cytoplasmique) dans les spermatozoïdes anormaux
Note 1 à l'article: Cet indice, par définition, ne se situe jamais en dehors de l’intervalle de [1,00; 4,00].
4 Formation et compétence du personnel
4.1 Aspects généraux
Les exigences générales relatives à la formation et à la compétence du personnel sont traitées dans
l’ISO 15189. La façon d’appliquer ces exigences à l’analyse du sperme humain est couverte par le présent
document.
4.2 Formation
4.2.1 Généralités
L’analyse du sperme implique de nombreuses étapes analytiques qui exigent que l’opérateur ait reçu une
[7]
formation lui permettant de réduire sa subjectivité de sorte à fournir des résultats fiables et exacts
[12][1]
.
4.2.2 Formation aux évaluations quantitatives
Tous les évaluateurs amenés à réaliser des évaluations de la motilité des spermatozoïdes, de la
concentration des spermatozoïdes, de la vitalité des spermatozoïdes et/ou de la morphologie des
spermatozoïdes doivent se former sur des matériaux de référence validés du commerce, internes
ou issus d’une évaluation externe de la qualité pour garantir que leurs résultats soient conformes
4 © ISO 2021 – Tous droits réservés

aux limites d’erreur de mesure prédéterminées du laboratoire. Si le personnel ne reçoit pas cette
formation, il ne peut pas fournir des résultats fiables pour de telles évaluations, et la participation à des
programmes d’évaluation externe de la qualité serait sans intérêt.
NOTE Des procédures de formation itératives axées sur l’objectif efficaces pour ces évaluations ont été
[12][14]
publiées ; une plage d’erreur de mesure de ± 10 % est attendue entre les novices terminant leur formation
et le personnel expérimenté du laboratoire (voir également Annexe C).
4.2.3 Formation aux évaluations qualitatives
La formation aux évaluations qualitatives, telles que les évaluations de viscosité et de cellules rondes,
doit permettre d’atteindre une concordance dans au moins 90 % des cas entre la personne formée et
une personne experte.
4.2.4 Formation à l’évaluation du pH
L’aptitude des évaluateurs à lire des bandelettes d’analyse par comparaison à l’échelle de référence doit
être vérifiée.
4.3 Maintien de la compétence
Une vérification régulière de la compétence de tous les membres du personnel réalisant ces évaluations
doit être effectuée à la fréquence définie dans le cadre de la politique qualité du laboratoire.
NOTE Conformément à 4.2, la même plage d’erreur de mesure de ± 10 % est attendue pour la vérification
régulière de la compétence de tout le personnel formé réalisant ces évaluations.
5 Caractéristiques, échantillonnage et manipulation préanalytique du sperme
5.1 Caractéristiques générales
L’analyse de l’éjaculat diffère sur certains aspects importants des analyses réalisées sur d’autres fluides
corporels humains. Le patient est présumé accomplir la collecte de l’éjaculat. Les résultats dépendent
de la fréquence d’éjaculation avant la collecte, ainsi que de la durée de la période avant le lancement
des analyses et de la température pendant cette période. Dans le cadre d’un diagnostic d’infertilité, il
n’existe pas de limites de référence claires du fait que le résultat attendu dépend de la situation clinique
particulière de chaque couple cherchant à procréer.
5.2 Caractéristiques physiques et chimiques
Il n’existe pas de contrôle homéostatique interne dans un éjaculat collecté dans un réceptacle pour
collecte de sperme. La totalité de l’éjaculat est dans un premier temps incorporée dans un coagulum
de type gel qui est progressivement dégradé (liquéfaction) en un liquide toujours visqueux mais ayant
une fluidité plus proche de celle de l’eau. Au cours de ce processus, du dioxyde de carbone se dégage, ce
qui provoque une modification du pH. La dégradation enzymatique des composants du gel induit une
augmentation significative des propriétés osmotiques du liquide entourant les spermatozoïdes, ce qui a
un impact sur la performance des spermatozoïdes.
5.3 Collecte et manipulation initiale de l’échantillon
La collecte de l’échantillon doit, sauf pour certains hommes comme les hommes souffrant d’une paralysie
des membres, d’une lésion de la moelle épinière ou de paraplégie, toujours être réalisée par le patient.
Si nécessaire, le ou la partenaire du patient peut aider à la collecte de l’échantillon. Pour les patients
1)
refusant de se masturber pour des questions éthiques ou religieuses, un préservatif (Silastic™ ) non
1) Silastic™ est un exemple de produit adapté disponible dans le commerce. Cette information est donnée
à l’intention des utilisateurs du présent document et ne signifie nullement que l’ISO approuve ou recommande
l’emploi exclusif de ce produit.
spermotoxique peut être utilisé pour collecter un éjaculat pendant un rapport. Toutefois, cette méthode
de collecte entraînera une certaine perte de l’échantillon puisqu’il est ensuite récupéré à partir du
préservatif. La collecte de l’éjaculat par interruption du coït («retrait») n’est pas recommandée car la
première fraction riche en spermatozoïdes de l’éjaculat est souvent perdue. L’utilisation de lubrifiants
peut être nécessaire pour certains patients; ces produits doivent être validés comme étant non toxiques
[13]
pour les spermatozoïdes .
Après éjaculation, l’échantillon doit être conservé à une température aussi proche que possible de 37 °C
sans jamais la dépasser; un refroidissement ou un réchauffement peuvent provoquer des artefacts et
une altération des spermatozoïdes. En raison de tous les changements survenant après l’éjaculation,
les analyses doivent débuter aussi vite que possible après la liquéfaction, qui généralement s’achève
dans les 30 min qui suivent l’éjaculation. Une liquéfaction incomplète 60 min après l’éjaculation indique
une anomalie. Il est plus facile d’initier les analyses après achèvement de la liquéfaction si l’éjaculat
est collecté à proximité du laboratoire. La durée et le niveau d’excitation sexuelle du patient ayant une
influence sur l’éjaculation, la collecte d’échantillon pourrait être améliorée dans un lieu choisi par le
patient en cas de difficultés majeures. Lorsqu’un éjaculat est collecté en dehors de l’environnement
du laboratoire, il doit être remis au laboratoire, de préférence dans les 30 min, mais au moins dans
les 60 min qui suivent l’éjaculation (les modalités de la collecte et du transport de l’éjaculat doivent
être consignées dans le compte rendu). Néanmoins, la durée de la période précédant l’analyse et la
température pendant cette période sont toujours des facteurs importants à prendre en compte pour la
qualité et la robustesse de l’analyse.
5.4 Informations à communiquer au patient et collecte des données
5.4.1 Informations à fournir aux patients
Les informations suivantes doivent être communiquées au patient sous forme écrite en employant un
langage compréhensible pour le patient et doivent inclure les points suivants:
a) informations générales:
— les coordonnées du laboratoire;
— le motif de l’analyse s’il a été donné par le prescripteur;
— une description de ce qui sera étudié;
— la façon dont les résultats des analyses du laboratoire seront communiqués au patient;
b) collecte, manipulation et transport de l’éjaculat:
— la façon de collecter l’éjaculat;
— les conséquences d’un délai entre la collecte d’échantillon et le lancement des analyses;
— l’importance d’éviter un refroidissement ou un réchauffement de l’éjaculat;
— l’importance d’indiquer une durée d’abstinence sexuelle correcte;
— l’importance de signaler toute perte lors de la collecte d’échantillon.
5.4.2 Collecte des données auprès du patient
a) Informations exigées
Chaque patient doit être interrogé de sorte à obtenir les informations suivantes devant être enregistrées
par le laboratoire:
— identifiant personnel fiable (au moins deux identifiants uniques attribuables au patient et précisés
par l'organisme);
6 © ISO 2021 – Tous droits réservés

— durée d’abstinence sexuelle;
— heure de la collecte de l’échantillon;
— il convient d’éviter de transporter l’éjaculat mais dans l’éventualité où il ne serait pas collecté dans
les locaux du laboratoire: confirmation du fait que l’échantillon primaire a été protégé contre des
températures extrêmes pendant le transport;
— concernant le caractère complet de la collecte d’échantillon: en cas de collecte incomplète, précision
des parties de la séquence d’éjaculation qui ont été perdues lors de la collecte.
b) Informations complémentaires
Les informations suivantes sont importantes pour l’interprétation clinique et peuvent être obtenues
lorsque le patient se rend au laboratoire, mais leur recueil ne fait pas partie de la prestation du
laboratoire.
— Antécédents médicaux, lesquels peuvent inclure:
— tout épisode de processus inflammatoire sévère dans les trois derniers mois;
— toute intervention chirurgicale antérieure (hernie inguinale, varicocèle, cryptorchidie ou autres
problèmes associés à la sphère urogénitale) ou tout traitement antérieur par chimiothérapie,
prise de cytostatiques ou irradiation des organes urogénitaux;
— toute absorption de substances médicamenteuses à l’exception d’une brève prise de médicaments
délivrables sans ordonnance (par exemple, analgésiques et antiallergiques).
— Toute prise de drogues récréatives, de stéroïdes anabolisants ou autres compléments alimentaires
visant à améliorer les performances (comme les poudres protéinées).
5.5 Manipulation initiale de l’échantillon
— Il convient de considérer chaque éjaculat comme étant potentiellement infectieux et de le manipuler
en conséquence (voir ISO 15190:2020, Annexe B).
— Les informations fournies par le patient doivent être enregistrées.
— Le réceptacle de collecte d’échantillon primaire doit être un récipient à usage unique non toxique et
propre.
— Il convient de préférence de peser le réceptacle de collecte d’échantillon primaire avant la collecte
de l’échantillon et d’enregistrer sa masse en grammes avec deux décimales.
— Il convient de préférence de déterminer le volume d’éjaculat par pesée. Si tel est le cas, le réceptacle
de collecte d’échantillon primaire est pesé avant et après la collecte de l’échantillon et la différence
de masse sert de mesure du volume, en prenant pour hypothèse que 1,0 g d’éjaculat est égal à
[3]
1,0 ml d’éjaculat . Si une pipette sérologique étalonnée est utilisée pour le mesurage du volume
d’échantillon, une certaine quantité de sperme sera systématiquement perdue dans le réceptacle de
collecte d’échantillon primaire, ainsi que dans la pipette après avoir réalisé le mesurage. Il convient
que le laboratoire soit conscient des différences entre les deux méthodes. Le volume d’éjaculat doit
être consigné en ml avec une décimale.
— Tous les documents ainsi que le réceptacle de collecte d’échantillon primaire doivent être étiquetés
avec au moins deux identifiants uniques.
— Le plus rapidement possible après la collecte, le réceptacle de collecte d’échantillon primaire doit
être conservé à une température comprise entre 35 °C et 37 °C afin de faciliter la liquéfaction et
de préparer l’évaluation de motilité à la température normalisée, et de préférence sur un plateau
mobile de sorte à améliorer le mélange pendant la liquéfaction (si un tel plateau n’est pas disponible,
une agitation manuelle fréquente est exigée).
Les spermatozoïdes subissent l’effet de la pesanteur et sédimentent au fond de tout réceptacle
(«géotaxie») même s’ils sont mobiles. Par conséquent, lors de l’échantillonnage d’un éjaculat, ce dernier
doit être bien mélangé pour garantir une répartition homogène des spermatozoïdes et des autres
éléments de l’éjaculat. Toute période de repos même courte conduira à une répartition non homogène
des éléments cellulaires de l’éjaculat. Il est donc important de mélanger l’éjaculat doucement et
minutieusement avant tout prélèvement d’aliquote pour l’analyse. Il est à noter qu’un agitateur type
vortex ne doit pas être utilisé.
5.6 Essai de toxicité sur les spermatozoïdes
Afin de garantir que les matériaux en contact avec les éjaculats (réceptacle de collecte d’échantillon
primaire, embouts de pipette) ne sont pas toxiques pour les spermatozoïdes, un essai de toxicité de
base doit être réalisé sur chaque nouveau lot de matériau. Le principe est de comparer la motilité des
spermatozoïdes exposés au matériau utilisé jusque-là à celle des spermatozoïdes exposés au nouveau
[6]
matériau . La durée d’exposition doit être au moins le double de la durée attendue d’exposition des
spermatozoïdes au matériau (pour les embouts de pipette, une exposition de quelques secondes et pour
les réceptacles de collecte d’échantillon, une exposition de 30 min à 60 min).
6 Analyses
6.1 Équipements exigés
La motilité des spermatozoïdes, en particulier leur vitesse, est fortement influencée par la température
ambiante. L’utilisation d’une climatisation permet de réduire l’influence des écarts de température.
Les équipements suivants sont exigés:
— balance de laboratoire, avec une plage de pesée allant de 0,00 g à 50,00 g (précision de pesée à deux
décimales);
— incubateur ou plaque chauffante pouvant maintenir l’éjaculat à la température corporelle humaine,
incluant de préférence un plateau mobile (agitateur orbital);
— microscope optique droit à optique de contraste de phase (objectifs recommandés: 10 × , 20 × et
40 × ) et de champ clair (objectif haute résolution à immersion 100 × ), avec oculaires 10 × et
oculaire micrométrique (ou un réticule ou un quadrillage d’oculaire étalonné avec un micromètre-
objet), ainsi qu’un dispositif permettant de maintenir les préparations «fraîches» à la température
corporelle (par exemple, platine chauffée);
— pipette automatique à piston pour l’évaluation de la concentration des spermatozoïdes, d’une
capacité de 0 µl à 50 μl ou de 0 µl à 100 μl;
— pipettes automatiques (d’une capacité de 1 µl à 20 μl, de 20 µl à 200 μl et de 200 µl à 1 000 μl) pour
dilution, préparations «fraîches» et autres préparations;
— équipements de coloration et de montage des lames de morphologie et de vitalité (supports à lame,
cuves de coloration, pipettes jetables pour le prélèvement du milieu de montage);
TM
— centrifugeuse (par exemple, pour microtubes de centrifugation coniques (Eppendorf ) de 15 ml),
un godet oscillant étant conseillé pour une meilleure séparation des culots, et soit des godets
hermétiques, soit un rotor hermétique pour protéger les opérateurs d’une possible contamination
par des aérosols si un tube se brise pendant la centrifugation;
— hémocytomètres avec cellule de numération Neubauer améliorée (d’une profondeur de 100 µm);
NOTE 1 La majorité des experts internationaux recommandent d’utiliser des hémocytomètres avec cellule de
[12][14][16]
numération Neubauer améliorée . D’autres types d’hémocytomètres peuvent être utilisés sous réserve
d’employer des facteurs de calcul corrects.
8 © ISO 2021 – Tous droits réservés

NOTE 2 Les hémocytomètres réutilisables nécessitent d’être contrôlés régulièrement pour vérifier que l’usure
ne modifie pas la profondeur de la cellule. Les hémocytomètres jetables peuvent être utilisés sous réserve de les
[5]
avoir convenablement validés et évalués .
[17]
NOTE 3 Les cellules de Makler offrent une moins bonne exactitude que les hémocytomètres .
NOTE 4 Certaines cellules de numération jetables destinées à l’analyse d’urine offrent une exactitude
[17]
insuffisante à cette fin .
NOTE 5 Les cellules à profondeur fixe reposant sur le pouvoir capillaire sont sujettes à l’effet de Segré-
[4]
Silberberg et auront donc une erreur variable .
— chambre «fraîche» de sédimentation des spermatozoïdes dans les hémocytomètres;
— agitateur type vortex (pour agiter les suspensions de sperme fixé pour l’évaluation de la
concentration).
6.2 Réactifs préparés en interne
Un diluant est nécessaire pour l’évaluation de la concentration des spermatozoïdes et peut être préparé
en interne (voir Annexe D). Il vise à immobiliser (tuer) les spermatozoïdes pour rendre la numération
plus fiable. Pour la facilité et la fiabilité de l’évaluation, il est également avantageux de pouvoir empêcher
la croissance des micro-organismes.
6.3 Évaluations
6.3.1 Lancement des évaluations
Pour une évaluation fiable des caractéristiques de l’éjaculat, la liquéfaction doit être totale. Pour la
plupart des éjaculats, une liquéfaction totale est obtenue en 30 min si l’éjaculat est conservé à 37 °C après
sa collecte. Si la liquéfaction est incomplète, l’échantillon peut être laissé dans l’incubateur pendant une
période supplémentaire (d’au maximum 30 min, auquel cas la motilité peut être évaluée dans les 60 min
qui suivent la collecte), après quoi les évaluations doivent être initiées. En cas de liquéfaction incomplète
au moment du lancement de l’analyse, cela doit être consigné dans le compte rendu, ainsi que la durée
de la période entre la collecte de l’échantillon et le lancement de l’évaluation de la préparation «fraîche».
6.3.2 Évaluation macroscopique
En l’absence de normes métrologiques sur les caractéristiques physiques du sperme humain, il est
impossible d’avoir une normalisation correcte des méthodes ou d’établir une incertitude de mesure.
Toutefois, certaines observations concernant la couleur ou la perception de son odeur peuvent
présenter un intérêt sur le plan clinique en ce qui concerne la provenance de l’échantillon primaire ou
l’état de santé du patient. Par conséquent, toute remarque à ce sujet incluse dans le compte rendu est
envisagée comme le signalement d’une exception, c’est-à-dire comme des tentatives de description des
observations de caractéristiques qui vont au-delà de ce qui est attendu.
a) Aspect visuel:
1) couleur (normale: une large palette de blancs grisâtres opalescents, parfois légèrement voire
fortement jaunâtres; anormale: rougeâtre ou rouge, transparent; jaune soutenu);
2) liquéfaction (il convient qu’elle soit totale dans les 30 min qui suivent l’éjaculation à 37 °C;
anormale: persistance d’amas de gel).
b) Autres observations physiques:
1) viscosité, mesurée en laissant le sperme s’écouler lentement sous l’effet de la pesanteur hors
d’une pipette à large orifice (par exemple, une pipette sérologique de 5 ml ou une pipette
Pasteur en verre ou en plastique non toxique). Normale: gouttelettes séparées formant des
«filets» de < 2 cm;
2) odeur (il n’y a pas d’odeur «normale» pour le sperme et la perception de son odeur est très
subjective. Toutefois, une odeur fortement putrescente est souvent révélatrice d’une infection
active; une odeur légèrement putrescente pourrait être le signe d’une abstinence prolongée ou
une forte odeur d’urine pourrait indiquer une contamination du sperme par de l’urine);
3) pH du sperme, mesuré en déposant une aliquote de sperme liquéfié sur une bandelette de
pH validée dans les 30 min qui suivent la collecte de l’éjaculat, au moins en cas d’absence de
spermatozoïdes et de faible volume de sperme.
6.3.3 Microscopie directe de la préparation «fraîche»
Une préparation «fraîche» doit être réalisée en plaçant une aliquote de 10 μl de sperme bien
homogénéisé sur une lame de microscope préchauffée étiquetée et en la recouvrant d’une lamelle
couvre-objet préchauffée de 22 mm × 22 mm (épaisseur n° 11/2 ou n° 2 pour perme
...

NORMA ISO
INTERNACIONAL 23162
Traducción oficial
Primera edición
2021-07
Official translation
Traduction officielle
Análisis básico de semen —
Especificación y métodos de análisis
Basic semen examination — Specification and test methods
Analyse de base du sperme — Spécifications et méthodologie
analytique
Publicado por la Secretaría Central de ISO en Ginebra, Suiza, como
traducción oficial en español avalada por el Grupo de Trabajo Spanish
Translation Task Force (STTF), que ha certificado la conformidad en
relación con las versiones inglesa y francesa.
Número de referencia
DOCUMENTO PROTEGIDO POR COPYRIGHT
© ISO 2021
Reservados los derechos de reproducción. Salvo prescripción diferente, no podrá reproducirse ni utilizarse ninguna parte de
esta publicación bajo ninguna forma y por ningún medio, electrónico o mecánico, incluidos el fotocopiado, o la publicación en
Internet o una Intranet, sin la autorización previa por escrito. La autorización puede solicitarse a ISO en la siguiente dirección o al
organismo miembro de ISO en el país solicitante.
ISO copyright office
CP 401 • Ch. de Blandonnet 8
CH-1214 Vernier, Geneva
Phone: +41 22 749 01 11
Email: copyright@iso.org
Website: www.iso.org
Publicado en Suiza
Version espanola publicada en 2022
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
ii
Índice Página
Prólogo .v
Prólogo de la versión en español. vi
Introducción .vii
1 Objeto y campo de aplicación . 1
2 Referencias normativas . 1
3 Términos y definiciones .1
4 Entrenamiento y competencia del personal . 4
4.1 Aspectos generales . 4
4.2 Entrenamiento . 4
4.2.1 Generalidades . 4
4.2.2 Entrenamiento para evaluaciones cuantitativas. 4
4.2.3 Entrenamiento para evaluaciones cualitativas . 5
4.2.4 Entrenamiento para evaluación del pH . 5
4.3 Mantenimiento de la competencia . 5
5 Características, toma de muestra y manipulación del semen en la etapa preanalítica.5
5.1 Características generales . 5
5.2 Características físicas y químicas . 5
5.3 Toma de muestra y manipulación inicial . 5
5.4 Información para el paciente y recopilación de datos . 6
5.4.1 Información proporcionada a los pacientes . 6
5.4.2 Recopilación de datos del paciente . 6
5.5 Manipulación inicial de la muestra. 7
5.6 Ensayos de toxicidad de los espermatozoides . 8
6 Etapa analítica . 8
6.1 Equipamiento requerido . 8
6.2 Reactivos preparados en el laboratorio . 9
6.3 Evaluaciones . 9
6.3.1 Comienzo de las evaluaciones . 9
6.3.2 Evaluación macroscópica. 9
6.3.3 Examen microscópico de la muestra en fresco . 10
6.3.4 Evaluación de la motilidad de los espermatozoides . 10
6.3.5 Evaluación de la concentración espermática . 11
6.3.6 Evaluación de la ausencia de espermatozoides . 11
6.3.7 Evaluación de la vitalidad de los espermatozoides . 11
6.3.8 Evaluación de la morfología espermática . 11
7 Etapa posanalítica e informe .12
7.1 Generalidades .12
7.2 Cálculos y presentación de los resultados .12
7.2.1 Cantidad total en el eyaculado .12
7.2.2 Otros cálculos .12
7.3 Presentación de los resultados .13
7.3.1 Generalidades .13
7.3.2 Contenido del informe del análisis de semen .13
7.4 Aspectos prácticos del aseguramiento de la calidad . 14
7.4.1 Control de calidad interno . 14
7.4.2 Comparaciones intralaboratorios . 14
7.4.3 Comparaciones interlaboratorios . 15
Anexo A (informativo) Bases estadísticas para la determinación de la ausencia de
espermatozoides .16
Anexo B (informativo) Campo de alto aumento .17
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
iii
Anexo C (informativo) Entrenamiento en evaluación de la motilidad .18
Anexo D (informativo) Diluyente para la evaluación de la concentración espermática .22
Anexo E (informativo) Estimación de la dilución adecuada para la evaluación de
concentración espermática .23
Anexo F (informativo) Comparación de la concordancia entre dos evaluaciones replicadas
informadas en porcentajes .24
Anexo G (informativo) Comparación de la concordancia entre dos replicados de recuento
de concentración espermática .26
Anexo H (informativo) Evaluación de la vitalidad de los espermatozoides .29
Anexo I (informativo) Evaluación de la morfología espermática .30
Bibliografía.33
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
iv
Prólogo
ISO (Organización Internacional de Normalización) es una federación mundial de organismos
nacionales de normalización (organismos miembros de ISO). El trabajo de elaboración de las Normas
Internacionales se lleva a cabo normalmente a través de los comités técnicos de ISO. Cada organismo
miembro interesado en una materia para la cual se haya establecido un comité técnico, tiene el derecho
de estar representado en dicho comité. Las organizaciones internacionales, gubernamentales y no
gubernamentales, vinculadas con ISO, también participan en el trabajo. ISO colabora estrechamente
con la Comisión Electrotécnica Internacional (IEC) en todos los temas de normalización electrotécnica.
En la Parte 1 de las Directivas ISO/IEC se describen los procedimientos utilizados para desarrollar este
documento y aquellos previstos para su mantenimiento posterior. En particular debería tomarse nota
de los diferentes criterios de aprobación necesarios para los distintos tipos de documentos ISO. Este
documento ha sido redactado de acuerdo con las reglas editoriales de la Parte 2 de las Directivas ISO/
IEC (véase www.iso.org/directives).
Se llama la atención sobre la posibilidad de que algunos de los elementos de este documento puedan
estar sujetos a derechos de patente. ISO no asume la responsabilidad por la identificación de alguno
o todos los derechos de patente. Los detalles sobre cualquier derecho de patente identificado durante
el desarrollo de este documento se indicarán en la Introducción y/o en la lista ISO de declaraciones de
patente recibidas (véase www.iso.org/patents).
Cualquier nombre comercial utilizado en este documento es información que se proporciona para
comodidad del usuario y no constituye una recomendación.
Para una explicación de la naturaleza voluntaria de las normas, el significado de los términos específicos
de ISO y las expresiones relacionadas con la evaluación de la conformidad, así como la información
acerca de la adhesión de ISO a los principios de la Organización Mundial del Comercio (OMC) respecto a
los Obstáculos Técnicos al Comercio (OTC), véase www.iso.org/iso/foreword.html.
Este documento ha sido elaborado por el Comité Técnico ISO/TC 212, Ensayos clínicos de laboratorio y
sistemas de análisis de diagnóstico in-vitro.
Cualquier comentario o pregunta sobre este documento deberían dirigirse al organismo nacional de
normalización del usuario. En www.iso.org/members.html se puede encontrar un listado completo de
estos organismos.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
v
Prólogo de la versión en español
Este documento ha sido traducido por el Grupo de Trabajo Spanish Translation Task Force (STTF) del
Comité Técnico ISO/TC 212 Ensayos clínicos de laboratorio y sistemas de análisis de diagnóstico in-vitro,
en el que participan representantes de los organismos nacionales de normalización y representantes
del sector empresarial de los siguientes países:
Argentina, Colombia, Costa Rica, Cuba, El Salvador, España, Guatemala, México, Panamá, Perú, Reino
Unido y Uruguay.
Esta traducción es parte del resultado del trabajo que el Grupo ISO/TC 212/STTF, viene desarrollando
desde su creación en el año 2020 para lograr la unificación de la terminología en lengua española en el
ámbito de la gestión de los riesgos y de la seguridad en laboratorios.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
vi
Introducción
Este documento fue desarrollado en respuesta a la demanda mundial de normas para el análisis
confiable del semen humano. Las cinco ediciones del manual de laboratorio para el análisis de semen
humano publicado por la OMS entre 1980 y 2010 han proporcionado recomendaciones generales para
procedimientos de laboratorio adecuados, pero incluso la última edición (Organización Mundial de la
[16]
Salud 2010 ) no constituye una norma técnica adecuada para utilizar según la Norma ISO 15189.
Una norma técnica basada en la mejor evidencia disponible y en el consenso global con respecto
a los procedimientos de laboratorio, permitirá a los laboratorios obtener resultados confiables y les
facilitará acceder a la acreditación del análisis del semen humano. Los individuos y la ciencia biomédica
en general se beneficiarán por la disminución de factores aleatorios que afecten a la exactitud de los
resultados. Clínicamente, esto respaldará mejores diagnósticos y proporcionará bases más objetivas
para elegir entre posibles estrategias de gestión o alternativas de tratamiento. Además, estas técnicas
estandarizadas pueden servir como métodos de referencia para apoyar la evaluación y validación de
nuevos métodos para mejorar el diagnóstico y el tratamiento de la infertilidad.
La etapa preanalítica para el análisis del semen humano es importante no solo en el análisis básico
manual de semen, sino también en el Análisis de semen asistido por Computadora (CASA, por sus siglas
en inglés, Computer-Aided Sperm Analysis). La estandarización de la manipulación y preparación de las
muestras de semen es fundamental para la calidad de los datos obtenidos.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
vii
NORMA INTERNACIONAL ISO 23162:2021 (traducción oficial)
Análisis básico de semen — Especificación y métodos de
análisis
1 Objeto y campo de aplicación
Este documento especifica los requisitos mínimos para el equipamiento y los aspectos críticos de los
métodos de análisis para las buenas prácticas en los laboratorios que realizan análisis básicos de semen
humano obtenido mediante eyaculación.
Este documento es aplicable a todo el proceso de análisis básico manual de semen y también a la
preparación de muestras para el análisis de semen asistido por computadora (CASA, por sus siglas en
inglés, Computer-Aided Sperm Analysis).
Este documento no es aplicable a las evaluaciones posteriores a la vasectomía.
NOTA Dadas las implicaciones médicolegales que rodean la evaluación de los eyaculados posvasectomía, la
metodología descrita en este documento sea, muy probablemente, inadecuada para establecer que un eyaculado
está completamente “limpio” (es decir, que el eyaculado no presenta espermatozoides).
2 Referencias normativas
En el texto se hace referencia a los siguientes documentos de manera que parte o la totalidad de su
contenido constituyen requisitos de este documento. Para las referencias con fecha, solo se aplica la
edición citada. Para las referencias sin fecha se aplica la última edición (incluida cualquier modificación
de esta).
ISO 15189, Medical laboratories — Requirements for quality and competence
ISO/TS 20914, Medical laboratories — Practical guidance for the estimation of measurement uncertainty
3 Términos y definiciones
Para los fines de este documento, se aplican los términos y definiciones siguientes.
ISO e IEC mantienen bases de datos terminológicas para su utilización en normalización en las siguientes
direcciones:
— Plataforma de búsqueda en línea de ISO: disponible en https:// www .iso .org/ obp
— Electropedia de IEC: disponible en https:// www .electropedia .org/
3.1
pipeta de desplazamiento de aire
pipeta de uso común en el laboratorio con puntas descartables donde el volumen aspirado se controla
mediante el desplazamiento de un volumen equivalente de aire dentro de una cámara cerrada en el
interior del mango de la pipeta
Nota 1 a la entrada: Una pipeta de desplazamiento de aire solo puede proporcionar volúmenes exactos para
líquidos con una viscosidad cercana a la del agua.
Nota a la versión en español: Las denominaciones: descartable, desechable, de único uso o para usar una única
vez, son expresiones que tienen el mismo significado.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
3.2
azoospermia
ausencia completa de espermatozoides en el eyaculado (3.4)
Nota 1 a la entrada: El término azoospermia no es un diagnóstico clínico sino una descripción de un hallazgo
de laboratorio. La falta total de espermatozoides es difícil de determinar en términos absolutos. Dado que solo
se pueden examinar partes de un eyaculado (3.4). La definición moderna se basa en cálculos de probabilidad
derivados de datos obtenidos de analizar alícuotas aleatorias de un eyaculado (3.4) (véase el Anexo A).
3.3
análisis de semen asistido por computadora
CASA (por sus siglas en inglés, Computer-Aided Sperm Analysis)
análisis automatizado de eyaculados (3.4) con equipos que utilizan tecnología de imágenes
Nota 1 a la entrada: Análisis basado en la evaluación de secuencias de imágenes de video para obtener información
sobre la concentración espermática (3.18) y motilidad. Se utiliza con menor frecuencia para la evaluación de la
morfología espermática.
Nota 2 a la entrada: Existen sistemas CASA disponibles comercialmente, pero no hay un único estándar para la
validación, evaluación, confiabilidad en los análisis o del contenido de los informes. El alcance de este documento
no es proporcionar un estándar para los CASA, sin embargo, los aspectos preanalíticos pueden ser también útiles
para los desarrolladores, fabricantes y usuarios de equipos CASA.
3.4
eyaculado
muestra de semen, la cual es una mezcla de espermatozoides y secreciones, principalmente obtenida de
vesículas seminales, próstata y epidídimo
Nota 1 a la entrada: La eyaculación se puede obtener mediante varios métodos, tales como la masturbación,
relación sexual, la estimulación vibratoria o la electroeyaculación.
3.5
viscosidad de la eyaculación
propiedad de un eyaculado (3.4) que describe su resistencia a fluir como agua después de la licuefacción
(3.10)
Nota 1 a la entrada: El semen con licuefacción incompleta no es un líquido homogéneo debido al contenido de
estructuras gelatinosas en el fluido eyaculado.
3.6
campo de alto aumento
área de un portaobjetos que es visible en el microscopio con gran aumento (400×)
Nota 1 a la entrada: Esta no es un área de campo estándar ya que el tamaño varía según el tipo de oculares
utilizados (por ejemplo, campo estándar o amplio) (véase el Anexo B).
3.7
inmóvil
ausencia de movimientos activos de la cola del espermatozoide
3.8
comparación interlaboratorio
organización, desempeño y evaluación de las mediciones o análisis sobre el mismo ítem o ítems
similares por dos o más laboratorios de acuerdo con unas condiciones predeterminadas
[FUENTE: ISO/IEC 17043:2010, 3.4]
3.9
espermatozoide ideal
espermatozoide con morfología típica de los espermatozoides capaces de penetrar y migrar dentro del
moco cervical y llegar al lugar de la fecundación
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
Nota a la versión en español: Se define morfología típica a la que anteriormente se denominaba morfología
normal.
[9] [10]
[FUENTE: Menkveld, et al., 1991 , Menkveld and Kruger, 1995 ]
3.10
licuefacción
proceso de cambio en la consistencia del eyaculado (3.4) de aspecto de gel o coágulo a fase líquida
Nota 1 a la entrada: La licuefacción se produce debido a la degradación del gel o coágulo, por acción enzimática
sobre las macromoléculas.
3.11
motilidad no progresiva de los espermatozoides
movimientos activos de la cola que conducen a una propagación del espermatozoide una velocidad
menor que 5 µm/s aproximadamente
Nota 1 a la entrada: Una longitud normal de la cabeza es aproximadamente 5 μm.
3.12
pipeta de desplazamiento positivo
pipeta de uso común de laboratorio que trabaja por desplazamiento de un pistón dentro de un capilar,
no por desplazamiento de aire dentro de una cámara cerrada
Nota 1 a la entrada: El pistón de la punta de la pipeta está en contacto directo con la muestra líquida.
Nota 2 a la entrada: Se utiliza para evitar errores importantes de volumen con líquidos viscosos como el semen.
3.13
motilidad progresiva de los espermatozoides
motilidad hacia delante de un espermatozoide de al menos 5 µm/s
Nota 1 a la entrada: Véase también motilidad progresiva lenta de los espermatozoides (3.16) y motilidad progresiva
rápida de los espermatozoides (3.14).
Nota 2 a la entrada: Los espermatozoides que se mueven en trayectorias circulares se consideran progresivos
dada la ganancia de espacio.
3.14
motilidad progresiva rápida de los espermatozoides
motilidad hacia delante de un espermatozoide de al menos 25 µm/s
3.15
abstinencia sexual
tiempo entre la toma de muestra del eyaculado (3.4) para el análisis y la eyaculación previa más reciente
Nota 1 a la entrada: Expresada en días u horas, según corresponda dado el uso previsto.
3.16
motilidad progresiva lenta de los espermatozoides
motilidad hacia delante de un espermatozoide está comprendida entre 5 µm/s y 25 µm/s
3.17
recipiente para la obtención de la muestra
contenedor utilizado para colocar la muestra primaria
Nota 1 a la entrada: El recipiente para la obtención de muestras no debe ser tóxico para los espermatozoides.
Nota 2 a la entrada: Si un eyaculado (3.4) solo se puede obtener durante las relaciones sexuales, se puede usar un
preservativo Silastic™ no tóxico. Cuando el laboratorio lo reciba debe transferir el eyaculado (3.4) a un recipiente;
esta forma de obtención debe registrarse en el informe.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
3.18
concentración espermática
número de espermatozoides por unidad de volumen
Nota 1 a la entrada: La concentración espermática se expresa en millones o miles/mililitros.
Nota 2 a la entrada: No debe confundirse con la densidad del esperma (masa/volumen).
3.19
vitalidad de los espermatozoides
porcentaje de espermatozoides vivos, independientemente de su capacidad para moverse
3.20
número total de espermatozoides
número total de espermatozoides calculados en el eyaculado (3.4)
Nota 1 a la entrada: El número total de espermatozoides es la concentración espermática (3.18) multiplicada por
el volumen de eyaculado (3.4).
Nota 2 a la entrada: El número total de espermatozoides no es lo mismo que la concentración espermática (3.18).
3.21
criterio estricto de Tygerberg
criterio de la morfología espermática basado en la morfología de los espermatozoides capaces de
penetrar y migrar dentro del moco cervical
3.22
índice de Teratozoospermia
TZI (por sus siglas en inglés, Teratozoospermia Index)
número promedio de regiones defectuosas (cabeza, cuello/pieza intermedia, cola y/o gota citoplásmica)
en espermatozoides anormales
Nota 1 a la entrada: Este índice, por definición, nunca está fuera del intervalo [1.00;4.00].
4 Entrenamiento y competencia del personal
4.1 Aspectos generales
Los requisitos generales para el entrenamiento y la competencia del personal están cubiertos por la
Norma ISO 15189. En este documento se establece cómo estos requisitos se aplican al análisis del semen
humano.
4.2 Entrenamiento
4.2.1 Generalidades
El análisis del semen implica muchas etapas analíticas que requieren operadores entrenados para
[7][12][1]
minimizar la subjetividad con el fin de proporcionar resultados exactos y confiables .
4.2.2 Entrenamiento para evaluaciones cuantitativas
Todos los operadores que realizan evaluaciones de la motilidad, concentración, vitalidad y/o
morfología espermática, deben recibir entrenamiento utilizando materiales de referencia validados,
ya sea comerciales, internos (en inglés denominados in-house) o derivados de Programas de Evaluación
Externa de la Calidad (EQA, por sus siglas en inglés, External Quality Assurance), para garantizar que
sus resultados se ajustan a los límites de error de medición predeterminados por el laboratorio. Sin
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
dicho entrenamiento, no se puede esperar que el personal pueda proporcionar resultados exactos o
confiables para estas evaluaciones, y la participación en los EQA no tendrá sentido.
NOTA Se han publicado procedimientos efectivos de reentrenamiento orientados a objetivos para estas
[12][14]
evaluaciones. Al completar su entrenamiento se espera un intervalo de error de medición de ± 10 % entre
los principiantes y el personal experimentado del laboratorio (véase también el Anexo C).
4.2.3 Entrenamiento para evaluaciones cualitativas
El entrenamiento de competencias para evaluaciones cualitativas, como la viscosidad y las células
redondas, debe lograr un acuerdo entre el personal en entrenamiento y el experto como mínimo en el
90 % de los casos.
4.2.4 Entrenamiento para evaluación del pH
Se debe verificar la capacidad de los operadores para leer las tiras reactivas frente a la escala
comparativa.
4.3 Mantenimiento de la competencia
Se debe demostrar la verificación continua de la competencia de todo el personal que realice estas
evaluaciones, a intervalos regulares, según se define en el marco de referencia de calidad del laboratorio.
NOTA De acuerdo con el apartado 4.2, se espera el mismo rango de error de medición de ± 10 % para la
verificación continua de la competencia por parte de todo el personal entrenado que realiza estas evaluaciones.
5 Características, toma de muestra y manipulación del semen en la etapa
preanalítica
5.1 Características generales
El análisis del eyaculado es, en algunos aspectos importantes, diferente del análisis de otros fluidos
corporales humanos. Se espera que el paciente tome la muestra del eyaculado. Los resultados dependen
de la frecuencia de eyaculaciones previas a la toma de muestra, así como del tiempo y la temperatura
previos al comienzo del análisis. En cuanto al diagnóstico de infertilidad, faltan límites de referencia
claros debido a que el resultado depende de la situación clínica particular de cada pareja que intenta
lograr un embarazo.
5.2 Características físicas y químicas
No hay control homeostático interno en un eyaculado recolectado en un recipiente para la toma
de muestra. Inicialmente el eyaculado completo se incorpora en el gel coagulado que se degrada
gradualmente (licuefacción) en un líquido aún viscoso, pero más parecido al agua. Durante este proceso,
el dióxido de carbono se evapora provocando un cambio en el pH. La degradación enzimática de los
componentes del gel provoca un aumento significativo de las propiedades osmóticas del líquido que
rodea a los espermatozoides, lo que a su vez afecta las características funcionales del esperma.
5.3 Toma de muestra y manipulación inicial
La recolección de la muestra siempre debe realizarla el paciente, salvo aquellos hombres con, por
ejemplo, discapacidad de miembros, lesión de la médula espinal o paraplejía. Si es necesario, la pareja
puede ayudar con la recolección de la muestra. Los pacientes con objeciones éticas o religiosas
1)
respecto de la masturbación pueden usar un preservativo no espermotóxico (Silastic™ ) para obtener
el eyaculado durante la relación sexual. Sin embargo, este método de recolección producirá alguna
1) Silastic™ es un ejemplo de un producto adecuado disponible comercialmente. Esta información se
proporciona para la conveniencia de los usuarios de este documento y no constituye una aprobación por parte de
ISO de este producto.
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
pérdida de la muestra completa ya que se recupera del preservativo. No se recomienda la recolección de
eyaculados por “coitus interruptus” (coito interrumpido) ya que la primera fracción del eyaculado, rica
en espermatozoides generalmente se pierde. Algunos pacientes pueden necesitar el uso de lubricantes;
[13]
estos productos se deben validar como no tóxicos para los espermatozoides .
Después de la eyaculación, la muestra debe mantenerse a una temperatura cercana a los 37 °C y
nunca más alta; el enfriamiento o el calentamiento pueden causar artefactos y disfunción de los
espermatozoides. Debido a todos los cambios que ocurren después de la eyaculación, los análisis
deben comenzar tan pronto como sea posible después de la licuefacción, que generalmente se completa
dentro de los 30 min posteriores a la eyaculación. La licuefacción incompleta a los 60 min después de la
eyaculación indica una anomalía. El inicio de los análisis después de la finalización de la licuefacción se
logra mejor si el eyaculado se recolecta cerca del laboratorio. Dado que la duración y el nivel de excitación
sexual experimentada por el paciente afectará la eyaculación, la recolección de muestras se podría
realizar mejor en un lugar elegido por el paciente en el caso de una dificultad importante. Si se obtiene
el eyaculado fuera del ambiente del laboratorio, debe entregarse al laboratorio, preferentemente dentro
de los 30 min, o como máximo dentro de los 60 min (las condiciones de recolección y el transporte del
eyaculado deben registrarse en el informe). No obstante, las consideraciones de temperatura y tiempo
para el análisis siguen siendo importantes para la calidad y robustez del análisis.
5.4 Información para el paciente y recopilación de datos
5.4.1 Información proporcionada a los pacientes
La información siguiente se debe proporcionar al paciente por escrito en un lenguaje comprensible para
él y debe incluir lo siguiente:
a) Información general:
— Información de contacto del laboratorio;
— El motivo del análisis, si el solicitante lo proporciona;
— Un resumen de lo que se analizará;
— Cómo se comunicarán al paciente los resultados de los análisis del laboratorio.
b) Toma de muestra, manipulación y transporte del eyaculado:
— Cómo obtener el eyaculado;
— Efecto del retraso entre la toma de muestra y el comienzo de las evaluaciones;
— Importancia de evitar el enfriamiento o calentamiento del eyaculado;
— Importancia de informar el tiempo correcto de abstinencia sexual;
— Importancia de informar sobre cualquier pérdida de muestra.
5.4.2 Recopilación de datos del paciente
a) Información requerida
A cada paciente se le debe solicitar que proporcione la información siguiente para que el laboratorio la
registre:
— Identificación personal unívoca (como mínimo dos identificaciones únicas atribuibles al paciente y
especificada por la organización);
— Duración de la abstinencia sexual;
— Hora de recolección de la muestra;
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
— Se debería evitar el transporte de los eyaculados, pero si no se obtiene en las instalaciones del
laboratorio: confirmar que durante el transporte al laboratorio la muestra estuvo protegida de las
temperaturas extremas;
— Cantidad completa de la recolección de la muestra; en caso de recolección incompleta, se incluye
información de qué partes de la secuencia de eyaculación han sido omitidas en la recolección.
b) Información adicional
Información de importancia para la interpretación clínica y cuya obtención puede resultar práctica
cuando el paciente acude al laboratorio. La obtención de esta información, sin embargo, no forma parte
del trabajo del laboratorio:
— Historia clínica, la cual puede incluir:
— Cualquier episodio inflamatorio severo en los últimos tres meses;
— Cualquier cirugía previa (hernia inguinal, varicocele, criptorquidia u otros problemas
relacionados con el sistema genitourinario) o tratamiento con quimioterapia, citostáticos o
radiación de los órganos urogenitales;
— Cualquier uso de medicamentos, excepto la utilización a corto plazo de medicamentos sin receta
(por ejemplo, analgésicos y antialérgicos).
— Cualquier uso de drogas recreativas, esteroides anabólicos u otros suplementos alimenticios que
mejoran el desempeño (como proteínas en polvo).
5.5 Manipulación inicial de la muestra
— Todos los eyaculados se deberían considerar potencialmente infecciosos y se deberían manipular en
consecuencia (véase la Norma ISO 15190:2020, Anexo B).
— Se debe registrar la información proporcionada por el paciente.
— El recipiente para la recolección de la muestra debe estar limpio, no ser tóxico y descartable.
— El recipiente para la recolección de la muestra se debería pesar preferiblemente antes de la
recolección de la muestra y registrar su masa en gramos con dos cifras decimales.
— El volumen del eyaculado se debería determinar preferiblemente mediante pesada. En este caso,
el recipiente de recolección de la muestra se pesa (registrando su masa en gramos con dos cifras
decimales) antes y después de la recolección de la muestra y la diferencia de masa se expresa como
[3]
un volumen suponiendo que 1,0 g de eyaculado equivale a 1,0 ml de eyaculado. Si se utiliza una
pipeta serológica calibrada, siempre se perderá algo de semen en el recipiente de recolección de la
muestra y dentro de la pipeta después de efectuar la medición. El laboratorio debería ser consciente
de la diferencia de ambos métodos. El volumen de eyaculado se debe registrar en el informe en ml
con una cifra decimal.
— Todos los documentos y el recipiente para la recolección de la muestra deben estar etiquetados
como mínimo con dos identificadores únicos.
— Tan pronto como sea posible después de la recolección, el recipiente con la muestra se debe mantener
a una temperatura entre 35 °C y 37 °C para facilitar la licuefacción y preparar la evaluación de
la motilidad a temperatura estandarizada, preferentemente en una bandeja móvil para favorecer
la mezcla durante la licuefacción (cuando no está disponible la bandeja móvil se requiere realizar
agitación manual frecuente).
Los espermatozoides se ven afectados por la gravedad de la tierra y sedimentan en el fondo de
cualquier recipiente ("geotaxis"), incluso si son móviles. En consecuencia, al tomar muestras de un
eyaculado, este debe estar bien homogeneizado para que los espermatozoides y otros elementos estén
uniformemente distribuidos. Incluso dejar reposar el semen por un corto período de tiempo resultará
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
en una distribución desigual de los elementos celulares del eyaculado. Por lo tanto, es importante
mezclar cuidadosamente el eyaculado antes de tomar cualquier alícuota para el análisis, teniendo en
cuenta que no se debe utilizar un agitador tipo vórtex.
5.6 Ensayos de toxicidad de los espermatozoides
Para garantizar que los materiales en contacto con los eyaculados (recipiente para la recolección de la
muestra, puntas de pipeta) no sean tóxicos para los espermatozoides, se debe realizar un ensayo básico
de toxicidad en cada nuevo lote de material. El principio se basa en la comparación de la motilidad de los
[6]
espermatozoides expuestos al material existente y al nuevo material. El tiempo de exposición debe
ser como mínimo el doble del que se expondrá a los espermatozoides al material – segundos para las
puntas de pipeta y de 30 min a 60 min para los recipientes para la recolección de la muestra.
6 Etapa analítica
6.1 Equipamiento requerido
La motilidad de los espermatozoides depende en gran medida de la temperatura ambiente,
especialmente en lo que respecta a la velocidad. El uso de equipamiento de temperatura controlada
reduce la influencia de la variabilidad de la temperatura ambiente.
Se requiere el equipamiento siguiente:
— Balanza de laboratorio, de intervalo 0,00 g a 50,00 g (lectura con dos decimales);
— Incubador o placa termostatizada que pueda mantener el eyaculado a la temperatura del cuerpo
humano, preferentemente que incluya una bandeja móvil (mezclador orbital);
— Microscopio óptico vertical con contraste de fases (se recomiendan objetivos de 10×, 20× y 40×)
y óptica de campo claro (objetivo de inmersión en aceite de 100×, objetivo de alta resolución) y
oculares de 10×, un micrómetro ocular (o un retículo o rejilla ocular calibrada con un micrómetro
de platina) y equipamiento para mantener muestra en fresco a temperatura corporal (por ejemplo,
platina termostatizada);
— Pipeta de desplazamiento positivo para la evaluación de la concentración espermática, de 0 µl a
50 µl o de 0 µl a 100 µl de capacidad;
— Pipetas de desplazamiento de aire (de 1 µl a 20 µl, 20 µl a 200 µl y 200 µl a 1 000 µl) para el diluyente,
preparaciones húmedas y otras preparaciones;
— Equipamiento para teñir y montar extendidos para morfología y vitalidad (portaobjetos, frascos de
tinción, pipetas descartables para el medio de montaje);
— Centrífuga (por ejemplo, para tubos cónicos de centrífuga de 15 ml) – se prefiere un rotor basculante
por producir mejores sedimentos – ya sea con recipientes sellados para tubos o con rotor sellado
para proteger a los operadores de una posible contaminación por aerosoles debido a la rotura de
tubos durante la centrifugación;
— Cámara de Neubauer con cuadrícula mejorada (100 µm de profundidad).
NOTA 1 La mayoría de los expertos internacionales recomiendan el uso de cámaras de Neubauer con
[12][14][16]
cuadrícula mejorada. Se pueden utilizar otros modelos de hemocitómetros siempre que se empleen los
factores de cálculo correctos.
NOTA 2 Es necesario controlar periódicamente que el desgaste no cambie la profundidad de la cámara
de los hemocitómetros no descartables. Pueden utilizarse hemocitómetros descartables siempre que estén
[5]
debidamente validados y evaluados .
[17]
NOTA 3 Las cámaras de Makler tienen menor exactitud que los hemocitómetros .
Traducción oficial/Official translation/Traduction officielle
NOTA 4 Algunas cámaras de recuento de un único uso utilizadas en el análisis de orina no tienen la precisión
[17]
suficiente para este propósito .
NOTA 5 Las cámaras de profundidad fija que se cargan por capilaridad están sujetas al efecto Segré-Silberberg
[4]
y, por lo tanto, tendrán un error variable .
— Cámara húmeda para la sedimentación de los espermatozoides en los hemocitómetros
— Mezclador tipo vórtex (para agitar suspensiones de semen fijadas para la evaluación de la
concentración)
6.2 Reactivos preparados en el laboratorio
Un diluyente para la evaluación de la concentración espermática es esencial y puede prepararse en
el laboratorio (véase el Anexo D). El propósito es inmovilizar (matar) los espermatozoides para que
el recuento sea más confiable. Para facilitar y mejorar la confiabilidad de la evaluación es también
conveniente prevenir cualquier crecimiento de microorganismos.
6.3 Evaluaciones
6.3.1 Comienzo de las evaluaciones
Para una evaluación confiable de las características del eyaculado, la licuefacción debe ser completa.
Para la mayoría de los eyaculados, esto se logra en 30 min si se mantiene a 37 °C después de la toma de
muestra. Si no se completa la licuefacción, la muestra se puede dejar en la incubadora por un período
de tiempo adicional (máximo 30 min, de modo que se pueda evaluar la motilidad dentro de los 60 min
posteriores a la recolección), después del cual se debe iniciar la evaluación. La licuefacción incompleta
al comienzo del análisis debe registrarse en el informe, así como el tiempo entre la recolección de la
muestra y el comienzo de la evaluación de la muestra en fresco.
6.3.2 Evaluación macroscópica
Dada la ausencia de estándares metrológicos para las características físicas del semen humano, no
es posible lograr una estandarización adecuada de los métodos o establecer una incertidumbre de
medición. Sin embargo, algunas observaciones sobre el color o la percepción de su olor pueden tener
relevancia clínica respecto de la procedencia de la muestra o del estado clínico del paciente. En
consecuencia, cualquier comentario incluido en el informe se considera informado excepcionalmente,
es decir, como un intento de describir características observadas que e
...