SIST ISO 3496:1995

INTERNATIONAL
ISO
STANDARD
Second edition
1994-09-01
Meat and meat products - Determination
of hydroxyproline content
Viandes et produits a base de viande - Determination de Ia teneur en
h ydroxyproline
Reference number
ISO 3496: 1994(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide
federation of national Standards bodies (ISO member bodies). The work
of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Esch member body interested in a subject for
which a technical committee has been established has the right to be
represented on that committee. International organizations, governmental
and non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO
collaborates closely with the International Electrotechnical Commission
(1 EC) on all matters of electrotechnical standardization.
Draft International Standards adopted by the technical committees are
circulated to the member bodies for voting. Publication as an International
Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting
a vote.
International Standard ISO 3496 was prepared by Technical Committee
ISO/TC 34, Agricultural food products, Subcommittee SC 6, Meat and
mea t products.
This second edition cancels and replaces the first edition
(ISO 3496:1978), which has been technically revised.
Annex A of this International Standard is for information only.
0 ISO 1994
All rights reserved. Unless otherwise specified, no part of this publication may be reproduced
or utilized in any form or by any means, electronie or mechanical, including photocopying and
microfilm, without Permission in writing from the publisher.
International Organization for Standardization
Case Postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 l Switzerland
Printed in Switzerland
ii
INTERNATIONAL STANDARD 0 ISO ISO 3496: 1994(E)
Determination of
Meat and meat products -
hydroxyproline content
trated sulfuric acid (pZO = 1,84 g/ml). Cool to room
1 Scope
temperature and make up to the mark with water.
This International Standard specifies a method for the
4.2 Buffer solution, pH = 6,8, consisting of:
determination of the hydroxyproline content of all
kinds of meat and meat products, including poultry.
26,0 g of citric acid monohydrate (C,H,O,.H,O);
lt is applicable to meat and meat products containing
less than 0,5 % (m/m) hydroxyproline. 14,0 g of sodium hydroxide;
sodium acetate
78,0 g of anhydrous
2 Definition
[NaKH,CO,)].
For the purposes of this International Standard, the
Dissolve the reagents in 500 ml of water and transfer
following definition applies.
quantitatively into a 1 litre one-mark volumetric flask.
Add 250 ml of propan-1-01 and make up to the mark
2.1 hydroxyproline content of meat and meat
with water.
products: Content of hydroxyproline determined ac-
When stored at 4 “C in the dark, this Solution is stable
cording to the procedure specified in this International
for several weeks.
Standard.
The content is expressed as a percentage by mass.
4.3 Chloramine-T reagent
Dissolve 1,41 g of sodium N-chloro-p-toluene-
3 Principle
sulfonamide trihydrate (Chloramine-T) in 100 ml of the
buffer Solution (4.2).
Hydrolysis of a test Portion in sulfuric acid at 105 “C.
Filtration and dilution of the hydrolysate. Oxidation of
Prepare this Solution immediately before use.
the hydroxyproline by Chloramine-T, followed by the
formation of a red compound with pdimethyl-
4.4 Colour reagent
aminobenzaldehyde. Photometric measurement at a
wavelength of 558 nm.
Dissolve IO,0 g of pdimethylaminobenzaldehyde in
35 ml of perchloric acid Solution [60 % (m/m)] and
then slowly add 65 ml of propan-2-01.
4 Reagents
Prepare this Solution on the day of use.
Use only reagents of recognized analytical quality and
distilled or demineralized water or water of equivalent
If purification of pdimethylaminobenzaldehyde is
purity. necessary (see note 3 in 8.4), proceed as follows.
Prepare a saturated Solution of pdimethyl-
aminobenzaldehyde in hot 70 % (WV) ethanol. Cool,
4.1 Sulfuric acid soiution, c(H,SO,) z 3 mol/l.
first at room temperature and finally in a refrigerator.
Add 750 ml of water to a 2 litre one-mark volumetric After about 12 h, filter on a Buchner funnel. Wash
with a little 70 % (Vi ethanol. Again dissolve in hot
flask. Add slowly, with agitation, 320 ml of concen-
0 ISO
ISO 3496: 1994(E)
70 % (VW) ethanol. Add cold water and agitate thor- 5.11 Volumetric flasks, of capacity 250 ml.
oughly. Repeat this procedure until a sufficient quan-
tity of milk-white crystals has been formed. Place in
5.12 Watch glasses, of diameter 5 cm to 6 cm.
the refrigerator overnight. Filter on the Buchner fun-
nel. Wash with 50 % (VW) ethanol and vacuum dry
over phosphorus(V) Oxide.
6 Sampling
4.5 Hydroxyproline, Standard solutions.
lt is important that the laboratory receive a Sample
which is truly representative and has not been dam-
Prepare a stock Solution by dissolving 50 mg of
aged or changed during transport or storage.
4-hydroxypyrrolidine-a-carbonic acid (hydroxyproline)
in water in a 100 ml one-mark volumetric flask. Add
Sampling is not part of the method specified in this
1 drop of the sulfuric acid Solution (4.1) and make up
International Standard. A recommended sampling
to the mark with water. This Solution is stable for at
method is given in ISO 3100-1.
least 1 month at 4 “C.
Proceed from a representative Sample of at least
On the day of use, transfer 5 ml of the stock Solution
200 g.
to a 500 ml one-mark volumetric flask and make up
to the mark with water. Then prepare four Standard
Store the Sample in such a way that deterioration and
solutions by diluting 10 ml, 20 ml, 30 ml and 40 ml
Change in composition are prevented.
of this Solution to 100 ml with water to obtain
hydroxyproline concentrations of 0,5 pg/ml, 1 pg/ml,
1,5 pg/ml and 2 pg/ml respectively.
7 Preparation of test Sample
5 Apparatus
7.1 Raw meat and meat products
Usual laboratory apparatus and, in particular, the fol-
Reduce intact meat into small cubes (approx.
lowing.
0,5 cm3, i.e. sides of length approx. 8 mm) by cutting
it while it is cold (just below 0 “C), using a sharp knife.
5.1 Electric meat mincer, with horizontal blades,
capable of rotating at high Speed.
Either place the Sample in a Container and seal the
latter hermetically, or vacuum-pack the Sample in
5.2 Round- or flat-bottomed hydrolysis flasks, of
heat-resistant plastic film. Then heat the Container and
capacity about 200 ml, wide-necked.
Sample so as to maintain a temperature of at least
70 “C for at least 30 min. Cool and proceed as in 7.2.
5.3 Drying oven, capable of being operated at
During the remaining stages of preparation of the test
105 ”c+l “C
-
Sample and the weighing out of the test portions,
ensure that the Sample is kept weil mixed and, in
5.4 Filter Paper discs, of diameter 12,5 cm.
particular, that any fat or fluid is kept evenly distrib-
u
...

NORME
ISO
INTERNATIONALE
Deuxiéme édition
1994-09-01
Viandes et produits à base de viande -
Détermination de la teneur en
hydroxyproline
\
Meat and meat products - De termina tien of hydroxyproline content
Numéro de référence
ISO 34969 994(F)
ISO 3496: 1994(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’elaboration des Normes internationales est en général confiee aux
comites techniques de I’ISO. Chaque comité membre interesse par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 3496 a été élaborée par le comité technique
ISO/K 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 6, Viande et
produits à base de viande.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition
(ISO 3496:1978), qui a fait l’objet d’une revision technique.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
a titre d’information.
a3 ISO 1994
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
ISO 3496: 1994(F)
NORME INTERNATIONALE 0 ISO
- Détermination
Viandes et produits à base de viande
de la teneur en hydroxyproline
4.1 Acide sulfurique, solution c(H,SO,) x 3 mol/l.
1 Domaine d’application
Ajouter 750 ml d’eau dans une fiole jaugée de 2 1.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
Ajouter lentement, en agitant, 320 ml d’acide sulfuri-
thode pour la determination de la teneur en hydroxy-
que concentre (~2~ = 1,84 g/ml). Refroidir a tempéra-
proline de toutes sortes de viandes et produits a base
ture ambiante et compléter au trait repère avec de
de viande, y compris la volaille.
l’eau.
La méthode est applicable aux viandes et produits a
base de viande ne contenant pas plus de
4.2 Solution tampon, pH = 6,8, composée de
0,5 % (m/m) d’hydroxyproline. ‘\
d’acide citrique monohydraté
260 g
(C,H,O,,H,O);
2 Définition
14,0 g d’hydroxyde de sodium;
Pour les besoins de la présente Norme internationale,
d’acetate de sodium anhydre
7810 g
la définition suivante s’applique.
[NaKH,CO,)].
2.1 teneur en hydroxyproline des viandes et
Dissoudre les réactifs dans 500 ml d’eau, et les
produits à base de viande: Teneur en hydroxyproline
transférer quantitativement dans une fiole jaugée de
déterminée selon le mode opératoire décrit dans la
1 1. Ajouter 250 ml de propanol-1 et ajuster au trait
présente Norme internationale.
avec de l’eau.
Elle est exprimée en pourcentage en masse.
Cette solution reste stable durant plusieurs semaines,
si elle est conservée a 4 “C a l’abri de la lumiere.
3 Principe
4.3 Réactif à la chloramine T
Hydrolyse d’une prise d’essai par l’acide sulfurique a
Dissoudre 1,41 g de A/-chlore-p-toluène sulfonamide,
105 “C. Filtration, puis dilution de I’hydrolysat. Oxyda-
sel de sodium trihydraté (chloramine T) dans 100 ml
tion de I’hydroxyproline par la chloramine T, puis for-
de la solution tampon (4.2).
mation d’un compose de couleur rouge avec le
pdiméthylaminobenzaldéhyde. Mesurage photomé-
Cette solution doit être préparée immédiatement
trique a la longueur d’onde de 558 nm.
avant utilisation.
4.4 Réactif calorimétrique
4 Réactifs
Dissoudre 10,O g de pdiméthylaminobenzaldéhyde
Utiliser uniquement des reactifs de qualité analytique dans 35 ml d’une solution d’acide perchlorique
reconnue et de l’eau distillee ou démineralisée ou de [60 % (m/m)], puis verser lentement 65 ml de
l’eau de pureté au moins équivalente. propanol-2.
63 ISO
60 3496: 1994(F)
Cette solution doit être préparée le jour de son utili- 5.6 Feuilles d’aluminium ou de plastique
sation. opaques.
S’il est nécessaire de purifier le pdiméthylamino-
5.7 Bain d’eau, réglable a 60 “C + 0,5 “C.
benzaldéhyde (voir note 3 en 8.4), opérer comme suit.
Préparer, a chaud, une solution saturee de
5.8 Spectromètre, permettant des mesurages a
pdiméthylaminobenzaldéhyde dans de I’éthanol a
une longueur d’onde de 558 nm + 2 nm, ou colori-
70 % (WV). Refroidir d’abord a la température am-
d’un filtre
mètre photoélectrique, équipé
biante et enfin dans un réfrigérateur. Après environ
interferentiel avec absorption maximale à
12 h, filtrer sur un entonnoir de Buchner. Laver avec
558 nm + 2 nm.
-
un peu d’éthanol a 70 % (VYV). Dissoudre de nouveau
à chaud, dans de I’éthanol à 70 % (WV). Ajouter de
5.9 Cuves en verre, de 10 mm de parcours optique.
l’eau glacée et agiter soigneusement. Poursuivre ces
opérations jusqu’à l’obtention d’une quantité suffi-
5.10 Balance analytique, précise a + 0,001 g près.
sante de cristaux blanc laiteux. Laisser une nuit au
réfrigérateur. Filtrer sur l’entonnoir de Buchner, laver
5.11 Fioles jaugées, de 250 ml de capacité.
avec de I’éthanol à 50 % (WV), puis sécher sous
pression réduite en présence d’oxyde de
5.12 Verres de montre, de 5 cm a 6 cm de diamè-
phosphore(V).
tre.
4.5 Hydroxyproline, solutions étalons,
6 Échantillonnage
Dans une fiole jaugée de 100 ml, préparer une solu-
mère en dissolvant 50 mg d’acide
tion
II est important que le laboratoire reçoive un echan-
hydroxypyrrolidine-a-carbonique (hydroxyproline) dans
tillon réellement représentatif, non endommagé ou
de l’eau. Ajouter 1 goutte de la solution d’acide sul-
modifié lors du transport et de l’entreposage.
furique (4.1) et compléter au trait repère avec de l’eau.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode
Cette solution reste stable durant au moins 1 mois à
spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
4 “C.
méthode d’échantillonnage recommandée est donnée
Le jour de l’emploi, introduire dans une fiole jaugée
dans I’ISO 3100-I.
de 500 ml, 5 ml de la solution mère et complét r au
f
Opérer sur un échantillon représentatif d’au moins
trait repère avec de l’eau. Préparer ensuite quatre so-
200 g.
lutions étalons en prélevant 10 ml, 20 ml, 30 ml et
40 ml de cette solution et en complétant à 100 ml
Conserver l’échantillon de façon à éviter toute dété-
avec de l’eau, afin d’obtenir respectivement des
rioration et tout changement dans sa composition.
concentrations en hydroxyproline de 0,5 pg/ml,
1 pg/ml, 1,5 pg/ml et 2 pg/ml.
7 Préparation de l’échantillon pour essai
5 Appareillage
7.1 Viandes crues et produits à base de
viande crue
Matériel courant de laboratoire, et en particulier ce qui
suit.
Au moyen d’un couteau bien aiguisé, découper la
.
.
viande en petits cubes (d’environ 0,5 cm3 de volume,
5.1 Hachoir électrique à viande, à lames horizon-
c’est-à-dire d’environ 8 mm de côté) alors qu’elle est
tales à rotation rapide.
encore froide (trés légèrement en dessous de 0 OC).
5.2 Ballon à hydrolyse, à fond rond ou à fond plat, Placer l’échantillon dans un récipient que l’on bou-
à col large, d’environ 200 ml de capacité. chera hermétiquement, ou bien l’emballer sous pres-
sion réduite dans un sac en plastique thermorésistant.
Chauffer ensuite le récipient et l’échanti
...

NORME
ISO
INTERNATIONALE
Deuxiéme édition
1994-09-01
Viandes et produits à base de viande -
Détermination de la teneur en
hydroxyproline
\
Meat and meat products - De termina tien of hydroxyproline content
Numéro de référence
ISO 34969 994(F)
ISO 3496: 1994(F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération
mondiale d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de
I’ISO). L’elaboration des Normes internationales est en général confiee aux
comites techniques de I’ISO. Chaque comité membre interesse par une
étude a le droit de faire partie du comite technique cree a cet effet. Les
organisations internationales, gouvernementales et non gouvernemen-
tales, en liaison avec I’ISO participent également aux travaux. L’ISO colla-
bore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (CEI)
en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les projets de Normes internationales adoptes par les comités techniques
sont soumis aux comites membres pour vote. Leur publication comme
Normes internationales requiert l’approbation de 75 % au moins des co-
mites membres votants.
La Norme internationale ISO 3496 a été élaborée par le comité technique
ISO/K 34, Produits agricoles alimentaires, sous-comité SC 6, Viande et
produits à base de viande.
Cette deuxième édition annule et remplace la première édition
(ISO 3496:1978), qui a fait l’objet d’une revision technique.
L’annexe A de la présente Norme internationale est donnée uniquement
a titre d’information.
a3 ISO 1994
Droits de reproduction réservés. Sauf prescription différente, aucune partie de cette publi-
cation ne peut être reproduite ni utilisée sous quelque forme que ce soit et par aucun pro-
cédé, électronique ou mécanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans l’accord
écrit de l’éditeur.
Organisation internationale de normalisation
Case Postale 56 l CH-l 211 Geneve 20 l Suisse
Imprimé en Suisse
ii
ISO 3496: 1994(F)
NORME INTERNATIONALE 0 ISO
- Détermination
Viandes et produits à base de viande
de la teneur en hydroxyproline
4.1 Acide sulfurique, solution c(H,SO,) x 3 mol/l.
1 Domaine d’application
Ajouter 750 ml d’eau dans une fiole jaugée de 2 1.
La présente Norme internationale prescrit une mé-
Ajouter lentement, en agitant, 320 ml d’acide sulfuri-
thode pour la determination de la teneur en hydroxy-
que concentre (~2~ = 1,84 g/ml). Refroidir a tempéra-
proline de toutes sortes de viandes et produits a base
ture ambiante et compléter au trait repère avec de
de viande, y compris la volaille.
l’eau.
La méthode est applicable aux viandes et produits a
base de viande ne contenant pas plus de
4.2 Solution tampon, pH = 6,8, composée de
0,5 % (m/m) d’hydroxyproline. ‘\
d’acide citrique monohydraté
260 g
(C,H,O,,H,O);
2 Définition
14,0 g d’hydroxyde de sodium;
Pour les besoins de la présente Norme internationale,
d’acetate de sodium anhydre
7810 g
la définition suivante s’applique.
[NaKH,CO,)].
2.1 teneur en hydroxyproline des viandes et
Dissoudre les réactifs dans 500 ml d’eau, et les
produits à base de viande: Teneur en hydroxyproline
transférer quantitativement dans une fiole jaugée de
déterminée selon le mode opératoire décrit dans la
1 1. Ajouter 250 ml de propanol-1 et ajuster au trait
présente Norme internationale.
avec de l’eau.
Elle est exprimée en pourcentage en masse.
Cette solution reste stable durant plusieurs semaines,
si elle est conservée a 4 “C a l’abri de la lumiere.
3 Principe
4.3 Réactif à la chloramine T
Hydrolyse d’une prise d’essai par l’acide sulfurique à
Dissoudre 1,41 g de A/-chlore-p-toluène sulfonamide,
105 “C. Filtration, puis dilution de I’hydrolysat. Oxyda-
sel de sodium trihydraté (chloramine T) dans 100 ml
tion de I’hydroxyproline par la chloramine T, puis for-
de la solution tampon (4.2).
mation d’un compose de couleur rouge avec le
pdiméthylaminobenzaldéhyde. Mesurage photomé-
Cette solution doit être préparée immédiatement
trique a la longueur d’onde de 558 nm.
avant utilisation.
4.4 Réactif calorimétrique
4 Réactifs
Dissoudre 10,O g de pdiméthylaminobenzaldéhyde
Utiliser uniquement des reactifs de qualité analytique dans 35 ml d’une solution d’acide perchlorique
reconnue et de l’eau distillee ou démineralisée ou de [60 % (m/m)], puis verser lentement 65 ml de
l’eau de pureté au moins équivalente. propanol-2.
63 ISO
60 3496: 1994(F)
Cette solution doit être préparée le jour de son utili- 5.6 Feuilles d’aluminium ou de plastique
sation. opaques.
S’il est nécessaire de purifier le pdiméthylamino-
5.7 Bain d’eau, réglable a 60 “C + 0,5 “C.
benzaldéhyde (voir note 3 en 8.4), opérer comme suit.
Préparer, a chaud, une solution saturee de
5.8 Spectromètre, permettant des mesurages a
pdiméthylaminobenzaldéhyde dans de I’éthanol a
une longueur d’onde de 558 nm + 2 nm, ou colori-
70 % (WV). Refroidir d’abord a la température am-
d’un filtre
mètre photoélectrique, équipé
biante et enfin dans un réfrigérateur. Après environ
interferentiel avec absorption maximale à
12 h, filtrer sur un entonnoir de Buchner. Laver avec
558 nm + 2 nm.
-
un peu d’éthanol a 70 % (VYV). Dissoudre de nouveau
à chaud, dans de I’éthanol à 70 % (WV). Ajouter de
5.9 Cuves en verre, de 10 mm de parcours optique.
l’eau glacée et agiter soigneusement. Poursuivre ces
opérations jusqu’à l’obtention d’une quantité suffi-
5.10 Balance analytique, précise a + 0,001 g près.
sante de cristaux blanc laiteux. Laisser une nuit au
réfrigérateur. Filtrer sur l’entonnoir de Buchner, laver
5.11 Fioles jaugées, de 250 ml de capacité.
avec de I’éthanol à 50 % (WV), puis sécher sous
pression réduite en présence d’oxyde de
5.12 Verres de montre, de 5 cm a 6 cm de diamè-
phosphore(V).
tre.
4.5 Hydroxyproline, solutions étalons,
6 Échantillonnage
Dans une fiole jaugée de 100 ml, préparer une solu-
mère en dissolvant 50 mg d’acide
tion
II est important que le laboratoire reçoive un echan-
hydroxypyrrolidine-a-carbonique (hydroxyproline) dans
tillon réellement représentatif, non endommagé ou
de l’eau. Ajouter 1 goutte de la solution d’acide sul-
modifié lors du transport et de l’entreposage.
furique (4.1) et compléter au trait repère avec de l’eau.
L’échantillonnage ne fait pas partie de la méthode
Cette solution reste stable durant au moins 1 mois à
spécifiée dans la présente Norme internationale. Une
4 “C.
méthode d’échantillonnage recommandée est donnée
Le jour de l’emploi, introduire dans une fiole jaugée
dans I’ISO 3100-I.
de 500 ml, 5 ml de la solution mère et complét r au
f
Opérer sur un échantillon représentatif d’au moins
trait repère avec de l’eau. Préparer ensuite quatre so-
200 g.
lutions étalons en prélevant 10 ml, 20 ml, 30 ml et
40 ml de cette solution et en complétant à 100 ml
Conserver l’échantillon de façon à éviter toute dété-
avec de l’eau, afin d’obtenir respectivement des
rioration et tout changement dans sa composition.
concentrations en hydroxyproline de 0,5 pg/ml,
1 pg/ml, 1,5 pg/ml et 2 pg/ml.
7 Préparation de l’échantillon pour essai
5 Appareillage
7.1 Viandes crues et produits à base de
viande crue
Matériel courant de laboratoire, et en particulier ce qui
suit.
Au moyen d’un couteau bien aiguisé, découper la
.
.
viande en petits cubes (d’environ 0,5 cm3 de volume,
5.1 Hachoir électrique à viande, à lames horizon-
c’est-à-dire d’environ 8 mm de côté) alors qu’elle est
tales à rotation rapide.
encore froide (trés légèrement en dessous de 0 OC).
5.2 Ballon à hydrolyse, à fond rond ou à fond plat, Placer l’échantillon dans un récipient que l’on bou-
à col large, d’environ 200 ml de capacité. chera hermétiquement, ou bien l’emballer sous pres-
sion réduite dans un sac en plastique thermorésistant.
Chauffer ensuite le récipient et l’échanti
...