ISO/TR 17623:2015

RAPPORT ISO/TR
TECHNIQUE 17623
Première édition
2015-05-01
Analyse moléculaire de
biomarqueurs — Méthode d’analyse
SSR sur le maïs
Molecular biomarker analysis — SSR analysis of maize
Numéro de référence
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ISO 2015
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Publié en Suisse
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Sommaire Page
Avant-propos .iv
Introduction .v
1 Domaine d’application . 1
2 Principe . 1
3 Consommables et équipements . 1
4 Mode opératoire. 1
4.1 Préparation d’échantillons . 1
4.2 Extraction et quantification d’ADN . 1
4.3 Amplification par PCR. 2
5 Liste des marqueurs SSR du maïs validés par une étude intralaboratoire au GEVES .2
5.1 Caractéristiques des SSR . 2
5.2 Séquences d’amorces des SSR . 4
5.3 Profils SSR observés sur les lignées de maïs . 5
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d’organismes
nationaux de normalisation (comités membres de l’ISO). L’élaboration des Normes internationales est
en général confiée aux comités techniques de l’ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude
a le droit de faire partie du comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales,
gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec l’ISO participent également aux travaux.
L’ISO collabore étroitement avec la Commission électrotechnique internationale (IEC) en ce qui concerne
la normalisation électrotechnique.
Les procédures utilisées pour élaborer le présent document et celles destinées à sa mise jour sont
décrites dans les Directives ISO/IEC, Partie 1. Il convient, en particulier, de prendre note des différents
critères d’approbation requis pour les différents types de documents ISO. Le présent document a été
rédigé conformément aux règles de rédaction données dans les Directives ISO/IEC, Partie 2 (voir www.
iso.org/directives).
L’attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l’objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L’ISO ne saurait être tenue pour responsable
de ne pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence. Les détails concernant les
références aux droits de propriété intellectuelle ou autres droits analogues identifiés lors de l’élaboration
du document sont indiqués dans l’Introduction et/ou dans la liste des déclarations de brevets reçues par
l’ISO (voir www.iso.org/brevets).
Les appellations commerciales éventuellement mentionnées dans le présent document sont données pour
information, par souci de commodité, à l’intention des utilisateurs et ne sauraient constituer un engagement.
Pour une explication de la signification des termes et expressions spécifiques de l’ISO liés à l’évaluation
de la conformité, ou pour toute information au sujet de l’adhésion de l’ISO aux principes de l’OMC
concernant les obstacles techniques au commerce (OTC), voir le lien suivant: Avant-propos – Informations
supplémentaires.
Le comité chargé de l’élaboration de ce document est l’ISO/TC 34, Produits alimentaires, Sous-comité
SC 16, Méthodes horizontales pour l’analyse des biomarqueurs moléculaires.
iv © ISO 2015 – Tous droits réservés

Introduction
Les essais d’identification variétale exigent des marqueurs de grande qualité permettant d’obtenir des
données reproductibles à l’aide de différents équipements, produits chimiques et réactifs. En conséquence,
le présent Rapport technique ne traite que des méthodes d’amplification spécifiques pour le maïs.
Le présent Rapport technique vise à fournir une liste de marqueurs SSR (répétition de séquences
simples) et des méthodes d’analyse applicables au maïs. Le jeu de marqueurs SSR a été validé par
une étude intralaboratoire au GEVES (Laboratoire BioGEVES, Domaine du Magneraud, BP.52, 17700
SURGERES). Les propriétés et les séquences de ces marqueurs SSR sont accessibles au public sur le site
www.maizegdb.org.
Le présent Rapport technique est associé à l’analyse ISO 13495 qui répertorie les différentes étapes de
validation de la méthode et définit les critères d’acceptation.
RAPPORT TECHNIQUE ISO/TR 17623:2015(F)
Analyse moléculaire de biomarqueurs — Méthode
d’analyse SSR sur le maïs
1 Domaine d’application
La méthode et les marqueurs SSR figurant dans le présent Rapport technique sont destinés aux
applications telles que le test de conformité d’hybrides, la caractérisation moléculaire des variétés et le
contrôle d’identité variétale.
2 Principe
L’analyse SSR repose sur l’amplification et la visualisation du polymorphisme dû à la variation du nombre
de séquences répétées d’un motif de 2 à 5 paires de bases dit microsatellite. La procédure d’analyse SSR
comprend les étapes suivantes:
a) préparation de l’échantillon;
b) extraction d’ADN;
c) amplification PCR;
d) séparation;
e) révélation des produits PCR.
3 Consommables et équipements
— Microplaque à 96 ou 384 puits
— Réactifs pour PCR (ADN polymérase), tampon, MgCl , dNTP, amorces, etc.)
— réactifs d’électrophorèse capillaire
— broyeur
— centrifugeuse pour microplaques
— micropipettes à volume variable
— micro-centrifugeuse pour micro-tubes
— système d’électrophorèse capillaire avec détection de fluorescence
— thermocycleur
4 Mode opératoire
4.1 Préparation d’échantillons
Pour chaque échantillon, des semences, prises individuellement ou en mélange, selon le contexte, sont
broyées à l’aide d’un broyeur approprié (par exemple, IKA A10 ou Retsch MM301).
4.2 Extraction et quantification d’ADN
a) Prélever une aliquote de chaque broyat homogène. La quantité nécessaire dépend du pro
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