ISO 18416:2007

INTERNATIONAL ISO
STANDARD 18416
First edition
2007-07-15

Cosmetics — Microbiology — Detection
of Candida albicans
Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Candida albicans





Reference number
ISO 18416:2007(E)
©
ISO 2007

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ISO 18416:2007(E)
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Published in Switzerland

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ISO 18416:2007(E)
Contents Page
Foreword. iv
Introduction . v
1 Scope . 1
2 Normative references . 1
3 Terms and definitions. 1
4 Principle. 2
5 Diluents and culture media. 2
5.1 General. 2
5.2 Diluent for the yeast suspension (tryptone sodium chloride solution) . 3
5.3 Culture media . 3
6 Apparatus and glassware . 5
7 Strains of microorganisms . 5
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples . 6
9 Procedure . 6
9.1 General recommendation . 6
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth . 6
9.3 Incubation of the inoculated enrichment broth . 7
9.4 Detection and identification of Candida albicans . 7
10 Expression of the results (detection of Candida albicans) . 8
11 Neutralization of the antimicrobial properties of the product. 8
11.1 General. 8
11.2 Preparation of inoculum . 8
11.3 Validation of the detection method. 9
12 Test report . 9
Annex A (informative) Other media . 11
Annex B (informative) Neutralizers of antimicrobial activity of preservatives and rinsing liquids . 15
Bibliography . 16

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ISO 18416:2007(E)
Foreword
ISO (the International Organization for Standardization) is a worldwide federation of national standards bodies
(ISO member bodies). The work of preparing International Standards is normally carried out through ISO
technical committees. Each member body interested in a subject for which a technical committee has been
established has the right to be represented on that committee. International organizations, governmental and
non-governmental, in liaison with ISO, also take part in the work. ISO collaborates closely with the
International Electrotechnical Commission (IEC) on all matters of electrotechnical standardization.
International Standards are drafted in accordance with the rules given in the ISO/IEC Directives, Part 2.
The main task of technical committees is to prepare International Standards. Draft International Standards
adopted by the technical committees are circulated to the member bodies for voting. Publication as an
International Standard requires approval by at least 75 % of the member bodies casting a vote.
Attention is drawn to the possibility that some of the elements of this document may be the subject of patent
rights. ISO shall not be held responsible for identifying any or all such patent rights.
ISO 18416 was prepared by Technical Committee ISO/TC 217, Cosmetics.
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ISO 18416:2007(E)
Introduction
Microbiological examinations of cosmetic products are carried out according to an appropriate microbiological
risk analysis in order to ensure their quality and safety for consumers.
Microbiological risk analysis depends on several parameters such as:
⎯ potential alteration of cosmetic products;
⎯ pathogenicity of microorganisms;
⎯ site of application of the cosmetic product (hair, skin, eyes, mucous membranes);
⎯ type of user (adults, children, including under 3 years).
For cosmetics and other topical products, the detection of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
and Candida albicans may be relevant because they can cause skin or eye infections. The detection of other
kinds of microorganism might be of interest since those microorganisms (including indicators of faecal
contamination, e.g. Escherichia coli) suggest hygienic failure during the manufacturing process.

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INTERNATIONAL STANDARD ISO 18416:2007(E)

Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans
1 Scope
This International Standard gives general guidelines for the detection and identification of the specified
microorganism Candida albicans in cosmetic products. Microorganisms considered as specified in this
International Standard might differ from country to country according to national practices or regulations.
In order to ensure product quality and safety for consumers, it is advisable to perform an appropriate
microbiological risk analysis so as to determine the types of cosmetic product to which this International
Standard is applicable. Products considered to present a low microbiological risk include those with low water
activity, hydro-alcoholic products, those with extreme pH values, etc.
The method described in this International Standard is based on the detection of Candida albicans in a non-
selective liquid medium (enrichment broth), followed by isolation on a selective agar medium. Other methods
may be appropriate dependent on the level of detection required.
NOTE For the detection of Candida albicans, subcultures can be performed on non-selective culture media followed
by suitable identification steps (e.g. using identification kits).
Because of the large variety of cosmetic products within this field of application, this method might not be
suited in every detail to some products (e.g. certain water-immiscible products). Other International Standards
(e.g. ISO 18415) might be appropriate. Other methods (e.g. automated) can be substituted for the test
presented here provided that their equivalence has been demonstrated or the method has been otherwise
validated.
2 Normative references
The following referenced documents are indispensable for the application of this document. For dated
references, only the edition cited applies. For undated references, the latest edition of the referenced
document (including any amendments) applies.
ISO 21148:2005, Cosmetics — Microbiology — General instructions for microbiological examination
EN 12353, Chemical disinfectants and antiseptics — Preservation of test organisms used for the
determination of bactericidal, mycobactericidal, sporicidal and fungicidal activity
3 Terms and definitions
For the purposes of this document, the following terms and definitions apply.
3.1
product
portion of an identified cosmetic product received in the laboratory for testing
3.2
sample
portion of the product (at least 1 g or 1 ml) that is used in the test to prepare the initial suspension
© ISO 2007 – All rights reserved 1

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ISO 18416:2007(E)
3.3
initial suspension
suspension (or solution) of the sample in a defined volume of an appropriate enrichment broth
3.4
sample dilution
dilution of the initial suspension
3.5
specified microorganisms
aerobic mesophilic bacteria or yeast that is undesirable in a cosmetic product because it can cause skin or
eye infections or is an indication of hygienic failure
3.6
Candida albicans
yeast that form white to beige, creamy and convex colonies on the surface of a selective medium
NOTE The main characteristic for identification is the production of germ tube and/or pseudomycelium and
chlamydospore when the test is performed following the method specified in this International Standard.
3.7
enrichment broth
non-selective liquid medium containing suitable neutralizers and/or dispersing agents and validated for the
product under test
4 Principle
The first step of the procedure is to perform an enrichment by using a non-selective broth medium to increase
the number of microorganisms without the risk of inhibition by the selective ingredients that are present in
selective/differential growth media.
The second step (isolation) of the test is performed on a selective medium followed by identification tests.
To prevent the possible inhibition of microbial growth by the sample it shall be neutralized to allow the
[1]
detection of viable microorganisms . In all cases and whatever the methodology, the neutralization of the
[2], [3], [4]
antimicrobial properties of the product shall be checked and validated .
5 Diluents and culture media
5.1 General
General instructions are given in ISO 21148. When water is mentioned in this International Standard, use
distilled water or purified water as specified in ISO 21148.
The enrichment broth is used to disperse the sample and to increase the initial microbial population. It may
contain neutralizers if the specimen to be tested has antimicrobial properties. The efficacy of the neutralization
shall be demonstrated (see Clause 11). Information relative to suitable neutralizers is given in Annex B.
The enrichment broth (5.3.3.1), or any of the ones listed in Annex A, is suitable for checking the presence of
Candida albicans in accordance with this International Standard provided that it is validated in accordance
with Clause 11.
Other diluents and culture media may be used if it has been demonstrated that they are suitable for use.
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ISO 18416:2007(E)
5.2 Diluent for the yeast suspension (tryptone sodium chloride solution)
5.2.1 General
The diluent is used for the preparation of yeast suspension used for the validation procedure (see Clause 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, pancreatic digest of casein 1,0 g
⎯ sodium chloride 8,5 g
⎯ water 1 000 ml
5.2.3 Preparation
Dissolve the components in water by mixing whilst heating. Dispense into suitable containers. Sterilize in the
autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling of the solution, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3 Culture media
5.3.1 General
Culture media may be prepared using the descriptions provided below or from dehydrated culture media in
accordance with the manufacturer's instructions. The instructions provided by the supplier of the media should
be followed.
NOTE Ready-to-use media may be used when their composition and/or growth yields are comparable to those of the
formulae given herein.
5.3.2 Agar medium for validation
5.3.2.1 Sabouraud dextrose agar (SDA)
5.3.2.1.1 Composition
⎯ dextrose 40,0 g
⎯ peptic digest of animal tissue 5,0 g
⎯ pancreatic digest of casein 5,0 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.2.1.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by heating. Dispense the medium
into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization the pH shall be
equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
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ISO 18416:2007(E)
5.3.2.2 Other agar media for validation
Other agar media for validation may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.3 Enrichment broth
5.3.3.1 Eugon LT 100 broth
5.3.3.1.1 General
This medium contains ingredients which neutralize inhibitory substances present in the sample: lecithin and
polysorbate 80, and dispersing agent octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ pancreatic digest of casein 15,0 g
⎯ papaic digest of soybean meal 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ sodium chloride 4,0 g
⎯ sodium sulfite 0,2 g
⎯ glucose 5,5 g
⎯ egg lecithin 1,0 g
⎯ polysorbate 80 5,0 g
⎯ octoxynol 9 1,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.3.1.3 Preparation
Dissolve the components polysorbate 80, octoxynol 9 and egg lecithin one after another in boiling water to
complete dissolution. Dissolve the other components by mixing whilst heating. Dispense the medium into
suitable containers. Sterilize in the autoclave at 121 °C for 15 min.
After sterilization and cooling of the solution, the pH shall be equivalent to 7,0 ± 0,2 when measured at room
temperature.
5.3.3.2 Other enrichment broths
Other enrichment broths may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.4 Selective agar medium for isolation of Candida albicans
5.3.4.1 Sabouraud dextrose chloramphenicol agar
5.3.4.1.1 Composition
⎯ dextrose 40,0 g
⎯ peptic digest of animal tissue 5,0 g
⎯ pancreatic digest of casein 5,0 g
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ISO 18416:2007(E)
⎯ chloramphenicol 0,050 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.4.1.2 Preparation
Dissolve the components (including the chloramphenicol) or the dehydrated complete medium in the water by
mixing while heating. Dispense the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for
15 min. After sterilization the pH shall be equivalent to 5,6 ± 0,2 when measured at room temperature.
5.3.4.2 Other selective agar media
Other selective agar media may be used as appropriate (see Annex A).
5.3.5 Corn meal agar with 1 % polysorbate 80
5.3.5.1 Composition
⎯ infusion from corn meal 50,0 g
⎯ agar 15,0 g
⎯ polysorbate 80 10,0 g
⎯ water 1 000 ml
5.3.5.2 Preparation
Dissolve the components or the dehydrated complete medium in the water by mixing while heating. Dispense
the medium into suitable containers. Sterilize in an autoclave at 121 °C for 15 min. After sterilization the pH
shall be equivalent to 6,0 ± 0,2 when measured at room temperature.
6 Apparatus and glassware
The laboratory equipment, apparatus and glassware shall be as described in ISO 21148.
7 Strains of microorganisms
For the validation of the test conditions, the following representative strain is used:
1) 2) 3) 4)
Candida albicans ATCC 10231 or equivalent strain: IP 48.72 or NCPF 3179 or NBRC 1594 or
5)
KCTC 17205, or other equivalent national collection strain.
The culture should be reconstituted according to the procedures provided by the supplier of the reference
strain.

1) American Type Culture Collection.
2) Institute Pasteur.
3) National Collection of Pathogenic Fungi.
4) National Biological Resource Center.
5) Korean Collection for Type Culture.
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ISO 18416:2007(E)
The strain can be kept in the laboratory in accordance with EN 12353.
8 Handling of cosmetic products and laboratory samples
If necessary, store products to be tested at room temperature.
Do not incubate, refrigerate or freeze products (3.1) and samples (3.2) before or after analysis.
Sampling of cosmetic products to be analysed should be carried out as described in ISO 21148. Analyse
samples as described in ISO 21148 and according to the procedure given in Clause 9.
9 Procedure
9.1 General recommendation
Use sterile material, equipment and aseptic techniques to prepare the sample, initial suspension and dilutions.
In the case of preparation of the initial suspension in an appropriate solubilizing agent, the time that elapses
between the end of the preparation and the moment the inoculum comes into contact with the enrichment
broth shall not exceed 45 min, unless specifically mentioned in the established protocols or documents.
9.2 Preparation of the initial suspension in the enrichment broth
9.2.1 General
The enrichment is prepared from a sample of at least 1 g or 1 ml of the
...

NORME ISO
INTERNATIONALE 18416
Première édition
2007-07-15

Cosmétiques — Microbiologie —
Détection de Candida albicans
Cosmetics — Microbiology — Detection of Candida albicans





Numéro de référence
ISO 18416:2007(F)
©
ISO 2007

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ISO 18416:2007(F)
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Publié en Suisse

ii © ISO 2007 – Tous droits réservés

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ISO 18416:2007(F)
Sommaire Page
Avant-propos. iv
Introduction . v
1 Domaine d'application. 1
2 Références normatives . 1
3 Termes et définitions. 1
4 Principe. 2
5 Diluants et milieux de culture. 2
5.1 Généralités . 2
5.2 Diluant pour la suspension de levure (solution de tryptone et de chlorure de sodium) . 3
5.3 Milieux de culture. 3
6 Appareillage et verrerie. 5
7 Souches de microorganismes. 6
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire . 6
9 Mode opératoire . 6
9.1 Recommandations générales. 6
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement. 6
9.3 Incubation du milieu liquide d'enrichissement ensemencé. 7
9.4 Isolement et identification de Candida albicans . 7
10 Expression des résultats (recherche de Candida albicans) . 8
11 Neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit . 9
11.1 Généralités . 9
11.2 Préparation de l'inoculum. 9
11.3 Validation de la méthode de recherche. 9
12 Rapport d'essai . 10
Annexe A (informative) Autres milieux . 11
Annexe B (informative) Neutralisants de l'activité antimicrobienne des conservateurs et des
liquides de rinçage . 15
Bibliographie . 16

© ISO 2007 – Tous droits réservés iii

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ISO 18416:2007(F)
Avant-propos
L'ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale d'organismes nationaux de
normalisation (comités membres de l'ISO). L'élaboration des Normes internationales est en général confiée
aux comités techniques de l'ISO. Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du
comité technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, en liaison avec l'ISO participent également aux travaux. L'ISO collabore étroitement avec
la Commission électrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation électrotechnique.
Les Normes internationales sont rédigées conformément aux règles données dans les Directives ISO/CEI,
Partie 2.
La tâche principale des comités techniques est d'élaborer les Normes internationales. Les projets de Normes
internationales adoptés par les comités techniques sont soumis aux comités membres pour vote. Leur
publication comme Normes internationales requiert l'approbation de 75 % au moins des comités membres
votants.
L'attention est appelée sur le fait que certains des éléments du présent document peuvent faire l'objet de
droits de propriété intellectuelle ou de droits analogues. L'ISO ne saurait être tenue pour responsable de ne
pas avoir identifié de tels droits de propriété et averti de leur existence.
L'ISO 18416 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 217, Cosmétiques.
iv © ISO 2007 – Tous droits réservés

---------------------- Page: 4 ----------------------
ISO 18416:2007(F)
Introduction
Les examens microbiologiques des produits cosmétiques doivent être réalisés selon une analyse de risque
microbiologique appropriée afin de garantir leur qualité et la sécurité des consommateurs.
L'analyse de risque microbiologique dépend de plusieurs paramètres tels que
⎯ l'altération potentielle des produits cosmétiques,
⎯ le caractère pathogène des microorganismes,
⎯ le site d'application du produit cosmétique (cheveux, peau, yeux, muqueuses),
⎯ la catégorie d'utilisateurs (adultes, enfants de moins de 3 ans).
Pour les cosmétiques et les autres produits topiques, la détection de Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa et Candida albicans peut être justifiée car ceux-ci peuvent engendrer des infections cutanées ou
oculaires. La recherche d'autres sortes de microorganismes peut aussi présenter un intérêt car ceux-ci
(y compris des indicateurs de contamination fécale, par exemple Escherichia coli) laissent penser à une
défaillance de l'hygiène au cours du processus de fabrication.

© ISO 2007 – Tous droits réservés v

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NORME INTERNATIONALE ISO 18416:2007(F)

Cosmétiques — Microbiologie — Détection de Candida albicans
1 Domaine d'application
La présente Norme internationale donne des lignes directrices générales pour la détection et l'identification du
microorganisme spécifié Candida albicans dans les produits cosmétiques. Les microorganismes considérés
comme spécifiés dans la présente Norme internationale peuvent différer d'un pays à l'autre suivant les
pratiques ou les réglementations nationales.
Pour garantir la qualité du produit et la sécurité des consommateurs, il est préférable d'effectuer une analyse
appropriée du risque microbiologique de façon à déterminer les types de produits cosmétiques qui relèvent de
la présente Norme internationale. Les produits considérés comme présentant un faible risque microbiologique
comprennent ceux ayant une faible activité de l'eau, les produits hydroalcooliques, ceux ayant des valeurs de
pH extrêmes, etc.
La méthode décrite dans la présente Norme internationale repose d'abord sur la détection de Candida
albicans dans un milieu liquide non sélectif (milieu liquide d'enrichissement), puis sur l'isolement dudit
microorganisme sur un milieu gélosé sélectif. D'autres méthodes peuvent être appropriées en fonction du
niveau de détection exigé.
NOTE Pour la recherche de Candida albicans, il est possible de réaliser des subcultures sur des milieux de culture
non sélectifs, puis de procéder aux étapes appropriées d'identification (par exemple en utilisant des kits d'identification).
En raison de la grande variété de produits cosmétiques relevant de ce domaine d'application, il se peut que
cette méthode ne soit pas adaptée en tous points à certains produits (par exemple aux produits non miscibles
à l'eau). Une autre Norme internationale (par exemple l'ISO 18415) peut être appropriée. Il est possible de
remplacer l'essai présenté ici par d'autres méthodes (par exemple des méthodes automatisées) sous réserve
que leur équivalence a été démontrée ou que la méthode a été validée par ailleurs.
2 Références normatives
Les documents de référence suivants sont indispensables pour l'application du présent document. Pour les
références datées, seule l'édition citée s'applique. Pour les références non datées, la dernière édition du
document de référence s'applique (y compris les éventuels amendements).
ISO 21148:2005, Cosmétiques — Microbiologie — Instructions générales pour les examens microbiologiques
EN 12353, Antiseptiques et désinfectants chimiques — Conservation des microorganismes d'essai utilisés
pour la détermination de l'activité bactéricide, mycobactéricide, sporicide et fongicide
3 Termes et définitions
Pour les besoins du présent document, les termes et définitions suivants s'appliquent.
3.1
produit
portion d'un produit cosmétique identifié reçue au laboratoire pour essais
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ISO 18416:2007(F)
3.2
échantillon
portion du produit (au moins 1 g ou 1 ml) utilisée lors de l'essai pour préparer la suspension initiale (solution
mère)
3.3
suspension initiale
suspension (ou solution mère) de l'échantillon dans un volume défini d'un milieu liquide d'enrichissement
approprié
3.4
dilution de l'échantillon
dilution de la suspension initiale
3.5
microorganisme spécifié
bactérie aérobie mésophile ou levure dont la présence dans un produit cosmétique est indésirable parce
qu'elle est susceptible de provoquer une infection cutanée ou ophtalmique ou qu'elle indique une défaillance
de l'hygiène
3.6
Candida albicans
levure qui forme des colonies convexes et crémeuses, de couleur blanche à beige, à la surface d'un milieu
sélectif
NOTE La principale caractéristique pour son identification est la production de filaments et/ou de pseudo-mycélium
et de chlamydopores lorsque l'essai est réalisé conformément à la méthode spécifiée dans la présente Norme
internationale.
3.7
milieu liquide d'enrichissement
milieu liquide non sélectif contenant des neutralisants et/ou des agents dispersants appropriés, validé pour le
produit soumis à essai
4 Principe
La première étape du mode opératoire est une phase d'enrichissement utilisant un milieu liquide non sélectif
afin d'augmenter le nombre de microorganismes sans risque d'inhibition par les ingrédients sélectifs qui sont
présents dans les milieux de culture sélectifs/différentiels.
La seconde étape (isolement) de l'essai est réalisée sur un milieu sélectif et elle est suivie d'essais
d'identification.
L'inhibition potentielle de la croissance microbienne par l'échantillon doit être neutralisée pour permettre la
[1]
recherche des microorganismes viables . Dans tous les cas et quelle que soit la méthode employée, la
[2],[3],[4]
neutralisation des propriétés antimicrobiennes du produit doit être vérifiée et validée .
5 Diluants et milieux de culture
5.1 Généralités
Des instructions générales sont données dans l'ISO 21148. Lorsque la présente Norme internationale
mentionne l'emploi d'eau, il faut utiliser de l'eau distillée ou de l'eau purifiée comme spécifié dans l'ISO 21148.
Le milieu liquide d'enrichissement (5.3.3.1), ou l'un de ceux donnés dans l'Annexe A, est utilisé pour disperser
l'échantillon et pour augmenter la population microbienne initiale. La présence de neutralisants dans le milieu
liquide d'enrichissement est admise si l'échantillon à soumettre à essai possède des propriétés
2 © ISO 2007 – Tous droits réservés

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ISO 18416:2007(F)
antimicrobiennes. L'efficacité de la neutralisation doit être démontrée (voir Article 11). L'Annexe B fournit des
informations relatives aux neutralisants appropriés.
Le milieu liquide d'enrichissement ci-après peut être utilisé pour vérifier la présence de Candida albicans
conformément à la présente Norme internationale à condition d'avoir été validé conformément à l'Article 11.
D'autres diluants et milieux de culture sont utilisables s'il a été démontré que leur emploi convient.
5.2 Diluant pour la suspension de levure (solution de tryptone et de chlorure de sodium)
5.2.1 Généralités
Le diluant est utilisé pour préparer la suspension de levure utilisée pour la validation (voir Article 11).
5.2.2 Composition
⎯ tryptone, digesté pancréatique de caséine 1,0 g
⎯ chlorure de sodium 8,5 g
⎯ eau 1 000 ml
5.2.3 Préparation
Dissoudre les composants dans l'eau en mélangeant tout en chauffant. Répartir dans des récipients
appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3 Milieux de culture
5.3.1 Généralités
Les milieux de culture peuvent être préparés suivant les modes opératoires ci-dessous ou à partir de milieux
de culture déshydratés conformément aux instructions du fabricant. Il convient de se conformer aux
instructions données par le fournisseur des milieux.
NOTE Il est possible d'utiliser des milieux prêts à l'emploi quand leur composition et/ou leurs performances de
croissance sont comparables à celles des formules indiquées ci-après.
5.3.2 Milieux gélosés pour validation
5.3.2.1 Gélose Sabouraud au dextrose (SDA)
5.3.2.1.1 Composition
⎯ Dextrose 40,0 g
⎯ Digesté pancréatique de tissus animaux 5,0 g
⎯ Digesté pancréatique de caséine 5,0 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
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ISO 18416:2007(F)
5.3.2.1.2 Préparation
Dissoudre les composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en chauffant. Répartir le milieu dans
des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être
de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.
5.3.2.2 Autre milieu gélosé pour validation
L'emploi d'un autre milieu gélosé pour validation est admis s'il est approprié (voir Annexe A).
5.3.3 Milieux liquides d'enrichissement
5.3.3.1 Bouillon Eugon LT 100
5.3.3.1.1 Généralités
Ce milieu contient des ingrédients qui neutralisent les substances inhibitrices présentes dans l'échantillon,
telles que la lécithine et le polysorbate 80 ainsi qu'un agent dispersant comme l'octoxynol 9.
5.3.3.1.2 Composition
⎯ Digesté pancréatique de caséine 15,0 g
⎯ Digesté papaïque de soja 5,0 g
⎯ L-cystine 0,7 g
⎯ Chlorure de sodium 4,0 g
⎯ Sulfite de sodium 0,2 g
⎯ Dextrose 5,5 g
⎯ Lécithine d'œuf 1,0 g
⎯ Polysorbate 80 5,0 g
⎯ Octoxynol 9 1,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.3.1.3 Préparation
Dissoudre successivement dans l'eau bouillante le polysorbate 80, l'octoxynol 9 et la lécithine d'œuf jusqu'à
dissolution complète. Dissoudre les autres composants en mélangeant tout en chauffant. Répartir le milieu
dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min.
Après stérilisation et refroidissement, le pH doit être de 7,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température
ambiante.
5.3.3.2 Autres milieux liquides d'enrichissement
D'autres milieux liquides d'enrichissement peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
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5.3.4 Milieu gélosé sélectif pour l'isolement de Candida albicans
5.3.4.1 Gélose Sabouraud au dextrose chloramphénicol
5.3.4.1.1 Composition
⎯ Dextrose 40,0 g
⎯ Digesté de tissus animaux 5,0 g
⎯ Digesté pancréatique de caséine 5,0 g
⎯ Chloramphénicol 0,050 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.4.1.2 Préparation
Dissoudre ces composants (y compris le chloramphénicol) ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en
mélangeant tout en chauffant. Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à
121 °C pendant 15 min. Après stérilisation, le pH doit être de 5,6 ± 0,2, le mesurage étant effectué à
température ambiante.
5.3.4.2 Autre milieu gélosé sélectif
D'autres milieux gélosés sélectifs peuvent être utilisés s'ils sont appropriés (voir Annexe A).
5.3.5 Gélose à la farine de maïs avec 1 % de polysorbate 80
5.3.5.1 Composition
⎯ Infusion de farine de maïs 50,0 g
⎯ Gélose 15,0 g
⎯ Polysorbate 80 10,0 g
⎯ Eau 1 000 ml
5.3.5.2 Préparation
Dissoudre ces composants ou le milieu complet déshydraté dans l'eau en mélangeant tout en chauffant.
Répartir le milieu dans des récipients appropriés. Stériliser à l'autoclave à 121 °C pendant 15 min. Après
stérilisation, le pH doit être de 6,0 ± 0,2, le mesurage étant effectué à température ambiante.
6 Appareillage et verrerie
L'équipement de laboratoire, l'appareillage et la verrerie doivent être tels que décrits dans l'ISO 21148.
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7 Souches de microorganismes
Pour la validation des conditions d'essai, on utilise la souche représentative suivante:
1) 2) 3) 4)
Candida albicans ATCC 10231 ou souche équivalente: IP 48.72 ou NCPF 3179 ou NBRC 1594 ou
5)
KCTC 17205, ou encore toute autre souche équivalente provenant d'une collection nationale.
Il convient de reconstituer la culture conformément aux méthodes indiquées par le fournisseur de la souche
de référence.
La souche peut être conservée au laboratoire conformément à la EN 12353.
8 Manipulation des produits cosmétiques et des échantillons de laboratoire
Si nécessaire, stocker les produits à soumettre à essai à température ambiante.
Ne pas incuber, réfrigérer ou congeler les produits (3.1) et les échantillons (3.2) avant ou après l'analyse.
Il convient d'effectuer l'échantillonnage des produits cosmétiques à analyser conformément à la description
donnée dans l'ISO 21148. Analyser les échantillons selon la description donnée dans l'ISO 21148 et
conformément au mode opératoire indiqué à l'Article 9.
9 Mode opératoire
9.1 Recommandations générales
Utiliser du matériel et un équipement stériles ainsi que des techniques aseptiques pour préparer l'échantillon,
la suspension initiale et les dilutions. En cas de préparation de la suspension initiale dans un agent
solubilisant approprié, le temps écoulé entre la fin de la préparation et le moment où l'inoculum entre en
contact avec le milieu d'enrichissement liquide ne doit pas dépasser 45 min, sauf indications particulières
mentionnées dans la documentation ou les protocoles établis.
9.2 Préparation de la suspension initiale dans le milieu liquide d'enrichissement
9.2.1 Généralités
L'enrichissement est préparé à partir d'un échanti
...